人胚神经干细胞的体外分离培养和长期冻存

目的建立从脑组织中分离人胚神经干细胞的方法和体外长期培养的稳定体系，为细胞治疗提供基础。方法采用机械酶学法从胎脑中获得神经干细胞，这些细胞在合成纤维细胞生长因子和上皮细胞生长因子的无血清培养基中生长，血清刺激诱导分化，程序冷冻法保存细胞。结果这些细胞可在体外持续增殖，并被诱导分化成神经元和神经胶质细胞，可以长期冷冻保存。结论人胚神经干细胞分离培养体系和冻存方法的成功建立为神经损伤、退行性疾病以及其他疾病的细胞治疗提供了潜在的细胞资源。     

体外肝细胞培养技术新进展

肝细胞体外培养技术为肝病及相关学科的研究提供了重要的实验基础 ,促进了肝脏疾病的研究进展。近年 ,肝炎病毒的感染机制、生物人工肝支持系统等临床基础和应用研究已初见成效 ,这一可喜成果与肝细胞体外培养技术的研究进展密切相关 ,本文就近年相关文献综述如下。1　肝细胞的体外分离Ｓｅｇｌｅｎ二步分离法目前最为经典 ,此法分离出的肝细胞形态完整、活性好、功能佳 ,不足之处在于操作复杂、所需胶原酶量大、成本高 ,且需有一定的设备 ,故限制了在国内实验室的推广。我国学者根据自己的情况建立了许多操作简便、成本低廉、不需复杂设备…     

人胚肝细胞分离培养研究

目的　探讨体外优化培养人胚肝细胞的方法。方法　采用胰蛋白酶和聚乙烯吡咯烷酮(pvp) ,胶原酶,胶原酶和pvp消化法分离人胚肝细胞,并比较3种方法对分离人胚肝细胞的效果。结果　运用这三种方法均能成功地培养出原代肝细胞,并能够传代;但胶原酶和pvp消化法分离细胞效果最好,细胞贴壁生长能力强。三种消化方法其细胞存活率从高到低依次为胶原酶和pvp消化法、胶原酶消化法、胰蛋白酶和pvp消化法。结论　人胚肝细胞的分离首选胶原酶和pvp消化法,使用该法在体外培养的人胚肝细胞生长良好,可用于肝细胞移植和生物人工肝等方面的研究。     

肝细胞体外培养研究进展

肝脏疾病是多发病 ,当发生急性肝功能衰竭时 ,只有 1 5 %～ 2 5 %的病人得以生存[1 ] 。原位肝移植被认为是目前最有效的治疗方法 ,但也面临着许多问题 ,如供肝来源短缺、手术创伤大及术后长期应用免疫抑制剂等。因此 ,肝细胞移植及人工肝的研究越来越受到人们的重视[2～ 4] ,其可使病人的肝功能得以恢复或作为肝移植的桥梁。本文就肝细胞体外培养的研究进展作一综述。1　肝细胞的来源治疗急性肝功能衰竭需要有一定数量及生理功能的肝细胞 ,使之能有效地清除水溶性的毒性物质 ,以及和白蛋白结合的毒性物质 ,合成血浆蛋白 ,调控ｐＨ值 ,并提…     

不同取材来源肝细胞体外培养的比较

目的：比较体外培养正常成年大鼠,大鼠乳鼠及人胎肝细胞的生物学性能,方法：采用不同的分离方法获取肝细胞进行体外培养,台盼蓝染色法测定细胞活率,MTT法检测细胞增殖活力,通过检测白蛋白分泌反映肝细胞的功能,结果：人胎肝细胞生长活力和蛋白合成功能最佳,乳鼠肝细胞次之,乳鼠肝细胞较人胎肝细胞易传代,成年大鼠肝细胞分离操作方便,但在体外存活时间较短。结论：不同取材来源的肝细胞体外培养性能有显著性差异（P＜0．05）。     

体外培养人胚胎肝上皮细胞方法探讨

采用组织块培养法培养的人胚胎肝上皮细胞于培养后第３－９天即在贴壁组织块周围长出，并可在体外较长期进行培养；传至第８代时仍能分泌甲胎蛋白（ＡＦＰ），含量为１５－４０μｇ／Ｌ。组织块培养法不失为一种较为简单、实用、经济和有效的方法，为探索人胚细胞体外培养方法提供了参考、借鉴的途径。实验还发现人胚胎肝新生细胞长出与组织块贴壁率密切相关。     

人胚胎骨髓间充质干细胞的体外培养

目的 摸索体外培养人胚胎骨髓间充质干细胞的方法.方法 采用含5%胎牛血清的MEM(modified Eagle's medium)培养基培养人胚胎骨髓间充质干细胞,用流式细胞仪检测培养获得的细胞中人胚胎骨髓间充质干细胞含量.结果 培养获得的细胞中人胚胎骨髓间充质干细胞含量达93%.结论 本研究方法培养获得的人胚胎骨髓间充质干细胞纯度高,细胞活性好.     

人胚胎肝细胞的体外培养及其生物学特性

报道人胚胎肝细胞体外培养的方法及所培养肝细胞的生物学特性。用胰蛋白酶消化人胚胎肝组织小块，可获７０％以上具有正常代谢活性的肝细胞。分离的肝细胞在ＤＭＥＭ培养基中生长良好，传代６次，历时５个月。将第２、３代细胞冻在于液氮中，３个月后复苏，６０％的细胞仍具有活性，能贴壁生长。收集培养物上清液作白蛋白和甲胎蛋白（ＡＦＰ）测定。结果显示：此种培养细胞具有分泌白蛋白和ＡＦＰ的功能，随着培养时间的延长和传次代数的增加ＡＦＰ含量逐渐减少。本研究为进一步探讨肝细胞的生物学特性及癌变机制提供了实验模型。     

组织块法体外培养人胚胎神经干细胞

目的：探讨体外分离、培养人胚胎脑组织神经干细胞的实用方法。方法：从人胚胎脑额叶皮层分离组织块，采用DMEM／F12＋N2无血清培养基，进行体外培养、传代。采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞和分化后的其他细胞表型。结果：从人胚胎脑额叶皮层分离的细胞具有增殖和多向分化潜能，可进行传代培养，获得的细胞中大部分为Nestin表达阳性的细胞。诱导分化后可以出现NSE、GFAP表达阳性的细胞。结论：用上述方法分离培养的细胞具有神经干细胞的特性，并表达Nestin蛋白，认为是神经干细胞。此方法是一种具有实用价值的体外培养人胚胎脑神经干细胞的技术。     

人胚胎视网膜色素上皮细胞的体外培养和吞噬作用

目的探讨人胚胎视网膜色素上皮（RPE）细胞分离培养的特性及其吞噬作用。方法取发育至13-15周的新鲜人胚胎眼球,显微解剖后采用机械胰酶消化法分离培养RPE细胞,应用免疫荧光法观察人胚胎RPE细胞吞噬视网膜光感受细胞外节膜盘。结果人胚胎发育至13-15周后,RPE细胞可应用标准的培养方法进行体外培养和传代。根据测定的人胚胎RPE细胞生长曲线,取2—6代细胞用于实验培养的人胚胎RPE细胞具备吞噬功能。结论改进了人胚胎RPE细胞的培养方法,证明人胚胎RPE细胞在体外具有吞噬能力。     

小鼠胚胎神经干细胞体外培养及鉴定的实验研究

目的:探讨小鼠胚胎神经干细胞体外分离培养增殖及分化,为进一步的实验研究提供基础。方法:分离孕13～15d的小鼠胚胎脑组织,在加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮细胞生长因子(EGF)的B27无血清培养基中克隆培养,并用10%的胎牛血清诱导其贴壁分化,应用免疫荧光染色方法行巢蛋白(Nestin),β-微管蛋白(β-tublin),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)染色,对神经干细胞(NSCs)及其分化的细胞进行鉴定。结果:分离培养的细胞可形成典型的神经球,并传代。细胞表达神经巢蛋白,并可诱导分化为神经细胞和神经胶质细胞。结论:小鼠胚胎神经干细胞能够在体外适宜的条件下大量增殖,并且具有多向分化潜能。     

人胚神经干细胞的长期体外培养

目的：建立人胚神经千细胞（human Neural Stem Cells、hNSC）的体外培养体系。方法：选取3个月～4个月大的引产胎儿，分离原代人胚神经千细胞、添加碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、N2促进hNSC的增殖，使用免疫细胞化学方法与诱导分化实验鉴定其神经千细胞的特性。结果：成功培养出人胚神经干细胞、原代培养的hNSC悬浮生长，似桑椹状，表达巢蛋白（Nestin）抗原，诱导分化后可表达神经元与神经胶质细胞特异抗原βⅢ与神经胶质细胞特异抗原GFAP，并能自我增殖：目前已成功传代10余次（5月余）。结论：使用本方法可以获得大量纯化hNSC？为临床实验提供适合的移植材料。     

人胚神经干细胞的长期体外培养

目的:建立人胚神经干细胞(humanNeuralStemCells,hNSC)的体外培养体系。方法:选取3个月～4个月大的引产胎儿,分离原代人胚神经干细胞,添加碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、N2促进hNSC的增殖,使用免疫细胞化学方法与诱导分化实验鉴定其神经干细胞的特性。结果:成功培养出人胚神经干细胞,原代培养的hNSC悬浮生长,似桑椹状,表达巢蛋白(Nestin)抗原,诱导分化后可表达神经元与神经胶质细胞特异抗原βⅢ与神经胶质细胞特异抗原GFAP,并能自我增殖,目前已成功传代10余次(5月余)。结论:使用本方法可以获得大量纯化hNSC,为临床实验提供适合的移植材料。     

条件重编程培养技术体外长时程分离培养原代细胞的应用进展

条件重编程（conditional reprogramming,CR）培养可以从人源组织中扩增原代细胞,并使得原代细胞能够于体外永久传代培养。CR培养体系的建立的特征主要在于新鲜消化分离的人类正常细胞或肿瘤细胞和经过辐照的小鼠成纤维细胞3T3滋养细胞在含有Rho酶抑制剂（Y-27632）的培养基中共培养。CR细胞培养体系可用于多种应用,可用于再生医学、肿瘤基因表达谱、蛋白表达谱和对药物敏感性的分析,从而提高对疾病的分子机制的认识,以及精准指导药物个性化治疗。     

肝细胞球形聚集体培养研究进展

生物人工肝在治疗肝功能衰竭中起重要作用.球形聚集体培养作为肝细胞培养的主要方式之一,旨在达到高密度、维持长时间生物活性的目标.文章就近年来肝细胞球形聚集体培养的影响因素和培养方式作一综述.     

肝细胞球形聚集体培养研究进展

生物人工肝在治疗肝功能衰竭中起重要作用。球形聚集体培养作为肝细胞培养的主要方式之一，旨在达到高密度、维持长时间生物活性的目标。文章就近年来肝细胞球形聚集体培养的影响因素和培养方式作一综述。     

应用全胚胎体外培养技术检测高热的胚胎毒性

目的：研究高热对胚胎发育的影响。方法：采用全胚胎体外培养技术。结果：在一同作用时间,温度升至４０℃时,７０％ 胚胎出现畸形;４２℃时,１００％ 胚胎出现畸形。在同一温度条件下延长高温作用时间,对胚胎毒性作用增强。光镜观察可见神经上皮变薄,细胞排列紊乱,细胞数量减少等。结论：高热影响胚胎的生长发育,并与高温值和作用时间明显相关。     

角膜上皮细胞体外培养技术的研究进展

体外重建组织工程角膜并将其用于角膜移植是使角膜盲患者复明的惟一有效途径,其中角膜上皮种子细胞的来源成为急需解决的关键问题。由于体外生长的角膜上皮细胞生命周期短,因此通过改进体外培养技术来获得增殖能力强的细胞成为解决角膜上皮种子细胞来源问题的首要任务。本研究从角膜上皮细胞的体外培养技术包括培养方法和培养条件这两方面进行了综述。     

人胚细胞的体外培养

目的：为医学研究长期提供培养的人胚细胞。方法：体外培养人胚细胞，观察其生长特性、染色体数目以及冻存和复苏的条件。结果：培养的人胚肺、皮肤、肾、脾及脑组织中，肺和皮肤细胞在冻存前后增长速度较快而稳定，染色体数目为２ｎ＝４６，占８７％￣９１％；肾、脾细胞扩增缓慢；脑组织几乎不能扩增。结论：人胚肺和皮肤细胞可长期培养，可为医学研究提供二倍体细胞实验对象。     

大鼠膈肌细胞的体外培养

目的：探索体外培养大鼠膈肌细胞的可行性，观察体外培养的大鼠膈肌细胞的生长特点。方法：用胰蛋白酶消化的方法分离得到膈肌细胞的前体细胞——肌卫星细胞，在37℃、体积分数5％CO2恒温培养箱内培养，用相差显微镜观察培养细胞的生长过程。结果与结论：成功地培养出了大鼠膈肌细胞，体外培养膈肌细胞是可行的，其发生生长过程呈骨骼肌细胞发生生长特点。在体外培养条件下，细胞的发育成熟程度不易达到在体的水平。