应用PCR对维持性血液透析病人丙肝病毒感染状况的研究

应用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ法）对１４８例维持性血液透析病人进行了血清丙肝病毒（ＨＣＶ）感染标志物ＨＣｖＲＮＡ检测，同时应用ＥＬＩＳＡ法检测了血清抗ＨＣＶ，结果显示：１４８例血透病人共检出ＨＣＶＲＮＡ２１例，阳性率１４．２％，抗ＨＣＶ１５例，阳性率１０．１％。并对年龄、性别和透析时间各不相同的血透病人所检测出的丙肝病毒标志物ＨＣＶＲＮＡ阳性结果进行分析，结果发现丙肝病毒感染的发生率与血透病人的性别、年龄无关，与血透时间密切相关，提示透析时间越长感染丙肝病毒危险性越大。     

丙型肝炎病人外周血单个核细胞中HCVRNA的检测及临床意义

为了解感染丙型肝炎病毒后的外周血单个核细胞中是有丙肝病毒的存在及其意义。采用逆转录套式聚合酶链反应对２８例丙型肝炎病毒感染血清、外周血单个核细胞及其末次洗液中的ＨＣＶＲＮＡ进行了检测。结果表明：２８例血清的ＨＣＶＲＮＡ全部阳性；２６例外血单个核的ＨＣＶＲＮＡ为阳性；２８例末次洗液的ＨＣＶＲＮＡ全部为阴性。ＨＣＶ可以感染外周血单个核细胞。提示外周血单个细胞中存在的ＨＣＶＲＮＡ在丙肝传播、复发、慢性化     

聚合酶链反应研究血液透析患者丙型肝炎

目的：探讨维持性血液透析患者ＨＣＶ感染的临床与流行病学问题。方法：采用聚合酶链反应方法（ＰＣＲ），检测２０例丙肝病毒抗体（抗－ＨＣＶ）阳性的维持性血液透析患者血清和透后的透析液中丙型肝炎病毒ＲＮＡ。结果：血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性者为６例（３０％），而透后透析液ＨＣＶ－ＲＮＡ均为阴性。结论：血透患者ＨＣＶ感染与透析液污染之间未发现直接相关性依据。     

聚合酶链反应研究血液透析患者丙型肝炎

目的：探讨维持性血液透析患者ＨＣＶ感染的临床与流行病学问题。方法：采用聚合酶链反应方法（ＰＣＲ），检测２０例丙肝病毒抗体（抗－ＨＣＶ）阳性的维持性血液透析患者血清和透后的透析液中丙型肝炎病毒ＲＮＡ。结果：血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性者为６例（３０％），而透后透析液ＨＣＶ－ＲＮＡ均为阴性。结论：血透患者ＨＣＶ感染与透析液污染之间未发现直接相关性依据。     

丙型肝炎病人外周血单个核细胞中HCV RNA的检测及临床意义

为了解感染丙型肝炎病毒后的外周血单个核细胞中是否有丙肝病毒的存在及其意义。采用逆转录套式聚合酶链反应对２８例丙型肝炎病毒感染者血清、外周血单个核细胞及其末次洗液中的ＨＣＶＲＮＡ进行了检测。结果表明：２８例血清的ＨＣＶＲＮＡ全部阳性；２６例外周血单个核细胞的ＨＣＶＲＮＡ为阳性；２８例末次洗液的ＨＣＶＲＮＡ全部为阴性。ＨＣＶ可以感染外周血单个核细胞。提示外周血单个核细胞中存在的ＨＣＶＲＮＡ在丙肝传播、复发、慢性化及抗病毒治疗方面有重大意义。     

铜陵地区特定人群庚型肝炎病毒感染状况的调查

目的 调查铜陵地区特定人群ＧＢＶ－Ｃ／Ｇ型病毒性肝炎（简称庚型肝炎）病毒（ＨＧＶ）感染状况,加强特定人群ＨＧＶ的检测,以阻断庚型肝炎的流行。方法 聚合酶链反应检测血清ＨＧＶ ＲＮＡ。结果 自愿血员ＨＧＶ ＲＮＡ阳性率１．７７％（４／２２６）,职业献血员ＨＧＶ ＲＮＡ阳性率６．４２％（２８／４３６）,职业献血员ＨＧＶ ＲＮＡ阳性率明显高于自愿献血员（Ｐ〈０．０１）。甲型肝炎、慢乙肝、慢丙肝、非甲～戊     

慢性丙型肝炎患者混合感染庚型肝炎病毒的临床研究

目的 研究庚型肝炎病毒（HGV）混合感染对慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）临床、病毒复制及干扰素抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）疗效的影响及ＨＧＶ对干扰素治疗的反应。方法 以逆转录套式降合酶链反应（ＲＴ－nested PCR）检测９０例ＣＨＣ患者血清ＨＧＶ ＲＮＡ，比较ＨＧＶ ＲＮＡ阳性及阴性两组９０例ＣＨＣ患者的临床资料和对干扰素治疗的反应。结果 ＨＧＶ ＲＮＡ阳性１８例，阳性率２０％，ＨＧＶ ＲＮＡ阳性及阴性两组ＣＨＣ患者在性别、年龄、病程、丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）水平、ＨＣＶ ＲＮＡ水平和对干扰素治疗的反应等方面无明显差异。５例ＨＧＶ ＲＮＡ阳性ＣＨＣ患者接受干扰素治疗过程中，ＨＧＶ ＲＮＡ均转为阴性，停止治疗后１年，３例ＨＧＶ ＲＮＡ恢复治疗前水平。结论 混合感染ＨＧＶ对ＣＨＣ的临床、病毒复制及干扰素抗ＨＣＶ疗效无明显影响。ＨＧＶ对干扰素敏感，但停药后易复发。     

克隆乙型肝炎病毒DNA在肝与肾细胞中复制与表达的研究

对比研究在外细胞培养系统中乙型肝炎病毒在肝,紧名的复制与表达。方法髟克隆ＨＢＶＤＮＡ分别转染ＨｅｐＧ２与２９３细胞系;ｐ１７７ｔｎ与ｐ３．８Ⅱ还转染了原代人胚肾细胞。培养后收集转染细胞培养上清液,用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ与ＨＢｅＡｇ;提取转染细胞的ＤＮＡ与ＲＮＡ,进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ与Ｎｏｒｈｅｒｎ印迹杂交检测细胞内ＨＢＶＤＮＡ与ＨＢＶＲＮＡ。结果转染ＨｅｐＧ２细胞,ＨＢｓＡｇ与ＨＢｅＡｇ均有     

逆转录病毒介导的人肝癌特异性HSV－tk／ACV的体外抗肝癌作用

目的：建立肝癌特异性前药转换基因治疗的方法。方法和结果：构建携带单纯疮疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）的人肝癌特异性逆转录病毒载体，经过ＰＡ３１７细胞包装及病毒滴度测定后，感染肝癌ＨｅｐＧ２和ＳＭＭＣ７７２１细胞，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法证明ＨＳＶ－ｔｋ基因在ＡＦＰ高分泌的ＨｅｐＧ２细胞中得到特异转录，以阿昔洛韦（ＡＣＶ）为前药攻击转基因的肝癌细胞显示对ＨｅｐＧ２有相对选择性杀伤作用。结论：该ＡＦＰｅ／ＨＳＶ－ｔｋ／前药转换疗法为肝癌特异性基因治疗提供了有价值的资料。     

HCV侵染患者外周血单个核细胞后对细胞免疫功能的影响

目的 探讨丙型病毒性肝炎（丙肝）患者外周血单个核细胞（ＰＢＦＭＣ）ＨＣＶ－ＲＮＡ（＋）后对其细胞免疫功能的影响及其在丙肝发病机制中的作用。方法 以ＲＴ－ＰＣＲ法检测１３５例丙肝患者ＰＢＭＣ内ＨＣＶ－ＲＮＡ,同时用生物素－链霉亲和素（ＢＳＡ）系统检测其Ｔ细胞亚群及经ＰＨＡ诱导前后膜白介素－２受体（ｍＩＬ－２Ｒ）的表达水平。结果 丙肝患者与正常对照相比,ＣＤ＾＋３,ＣＤ＾＋４及ｍＩＬ－２Ｒ表达水平降低     

丙型肝炎阳性血清直接感染HepG2细胞的初步研究

目的 :用丙型肝炎 (丙肝 )阳性血清 (抗HCV阳性及HCVRNART PCR阳性 )感染HepG2细胞 ,以期建立稳定的HCV感染的细胞模型。方法 :采用丙肝阳性血清连续感染法感染HepG2细胞 ,用逆转录多聚酶链反应检测传代HepG2细胞内HCVRNA正链和负链 ,电镜观察感染后的细胞内的病毒颗粒 ,免疫组化方法检测感染后的细胞内丙肝病毒蛋白抗原 (HCVNS5、HCVcapsid)的存在。结果 :感染后传代的第一代至第三代细胞内检出HCVRNA正链及负链 ;在感染后传代的细胞内发现球形、密集分布的类丙肝病毒颗粒 ,直径为 30～ 6 0nm ;免疫金银染色发现部分细胞内有聚集的银染颗粒 ;免疫电镜检查在细胞胞浆的囊泡样结构中发现聚集的金颗粒。结论 :HCV可在HepG2细胞内复制 ,可形成病毒颗粒 ,可随细胞传代。本研究初步建立了用丙肝阳性血清感染HepG2细胞的丙肝病毒感染细胞模型     

In Vitro Expression of Hepatitis C Virus Non-structure 5 Antigen in the HepG2 Cell Line

ItisofgreatsignificancetoestablishasensitivepropagationsystemofHCVinvitroforstudyingthefeaturesofHCV,pathogenesisofHepatitisC,thetreatmentofanti--virusandstudyofvaccine.Wede-tectedthepositiveandnegativelineofHCVinTlymphcellsofhumaninndroinpreviousstudyLI],andpresentedinthispaPeristhefurtherstudyoninvljroexpressionofHCV.lMATERMisANDMETHODS1'1PositiveInocuIumsofHCVRNATheserumofHCVRNAwith1evelof2X10'copy/mlwasselected,anddefinedbyfluorescentquantificationmethed(Thereagentkitwa…     

In vitro expression of hepatitis C virus non-structure 5 antigen in the HepG2 cell line

Summary To establish a cell line as a model system for HCV infection and propagationin vitro, a human HepG2 cell line was incubated with a HCV RNA positive serum. The sABC immunological techniques and gold-labeled colloid electron microscopy method were employed to examine the viral proteins in those cells. The HCV non-structure 5 antigen was first detected in the HepG2 cells 72 h after incubation. The antigen was continuously observed in the cytoplasm as well on the membrane of the HepG2 cells even after 1, 2, 3 and 4 weeks after incubation. The observation of HCV non-structure 5 antigen continuously expressed in the HepG2 cells strongly indicates that the cells may have been infected by HCV virus. Therefore, the HepG2 cell line may serve as a potential host for establishment of HCV infection and propagationin vitro. This project was supported by a grant of the National Educational Committee for return scholars (No.)     

急慢性丙型肝炎患者ALT、抗-HCV与HCVRNA关系的分析

对 4 0例丙型肝炎患者的血清 AL T、抗 - HCV及 HCVRNA进行了检测。结果显示 :在急慢性丙型肝炎中 ,抗 - HCV阳性率分别为 83.3%、93.8% ,HCVRNA阳性率分别为 50 %、6 8.8% ,有 4例抗 - HCV阴性急性患者 HCVRNA阳性。抗 - HCV阳性者中有 51.4 % HCVRNA阳性。HCVRNA的检出在 AL T异常情况下较正常明显高 (P<0 .0 5)。提示 HCVRNA早期诊断意义较抗 - HCV大 ,抗 - HCV在一定程度上能反映 HCVRNA的情况 ,而 AL T高低亦可间接反映 HCV的复制状态。     

丙型肝炎病毒感染细胞模型的实验研究

目的 建立接近体内自然感染状态并能长期复制的丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞模型．方法 用HCV阳性血清感染人肝癌细胞株HepG2、SMMC 7721及胎肝细胞株L02，继续培养60d，用巢式逆转录-聚合酶链反应(nested RT-PCR)检测培养细胞及上清中正、负链HCV RNA。结果 HepG2、SMMC 772l在感染后第2-30d，L02在感染后第3-30d细胞中可以间断检出HCV正链RNA；3株细胞的细胞内HCV负链RNA均在感染后第3-30d可以间断检出，检出率与正链RNA接近。3株细胞以HepG2细胞中HCV RNA正、负链检出率较高，并在第3l—60d仍可间断检出，但复制程度逐渐减弱。3株细胞的培养上清中HCV正链RNA感染后也呈间断阳性，检出率与细胞内正链RNA基本一致。培养上清中均末检出HCV负链RNA。结论 HePG2、SMMC772l及L02细胞均对HCV易感，并能支持HCV长期复制。而HePG2细胞是较为理想的HCV体外感染细胞模型。     

Extrahepatic and Intrahepatic Replication and Expression of Hepatitis C Virus

HepatitisCvirus(HCV)isthemajorpathogenofpost--transfusionalhepatitiswithachroniccourseinupto60%ofindividuals,leadingtocirrhosisandeventuallytohepatocellularcarcinomain20%ofindividuals[1'2].HCVcontainsasingleplusstrandRNAwhichissimilartopestivirusandflavivirusingenomestructures.HCVRNAcanbedetectedinsera,livertissues,peripheralbloodmononuclearcells(PBMCs)andsalivaglandsbypolymerasechainreaction(PCR)assay['-'j.Inthisstudy,theinsituhybridizationandimmunohistochemicaltechniqueusingdigoxinla…     

重组丙型肝炎病毒在7721细胞中的复制

目的 探讨构建的重组丙型肝炎病毒(HCV)能否在易感细胞系中复制和表达。方法 用人工构建的HCV感染易感细胞系7721，培养72h后利用RT-PCR检测HCV的RNA表达，并应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察免疫荧光标记的HCV核心抗原和胞膜抗原EI在细胞中的表达。结果 人工构建的HCV感染7721细胞72h后、RT-PCR检测细胞内可检出HCV正链及负链RNA，细胞培养上清中可检出HCV正链RNA，CLSM检测HCV核心抗原和E1抗原在细胞内的分布呈胞浆型。结论 构建的HCV72h内可以在易感细胞系7721中复制和表达。     

血液透析患者丙型肝炎病毒感染的研究

作者用ＥＬＩＳＡ法和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对４５例血液透析（ＨＤ）患者的血清丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）和丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ）进行了检测，发现１３例抗－ＨＣＶ阳性，１５例ＨＣＶＲＮＡ阳性，共１７例患者（３７．８％）ＨＣＶ标志物（抗－ＨＣＶ和／或ＨＣＶＲＮＡ）阳性。将这１７例ＨＣＶ标志物阳性患者与２８倒闭性患者作了比较，结果表明，ＨＣＶ标志物阳性患者的透析时间、输血次数和输血量均明显高于阴性患者（Ｐ＜０．０１）。对１５例ＨＣＶＲＮＡ阳性患者的ＨＣＶ基因型的分析表明，１３例为Ⅱ型，Ⅲ例为Ⅲ型。本研究表明，ＨＤ患者丙型肝炎的感染率很高，这与血液透析时多次接触血液、血液透析器具以及输血次数和输血量密切相关。     

原发性肝细胞癌与HCV分型的关系

目的：了解原发性肝细胞癌（HCC）患者HCV基因型分布现状及其关系。方法：选择山西省肿瘤医院1996年间住院的HCVRNA阳性，临床上确诊的HCC患者血清标本13份，非肝癌癌症患者血清标本15份，1996年－1997年HCVRNA阳性的公共场所从业人员血清标本15份，用型特异性引物进行RT－PCR基因分型。结果：13例HCVRNA阳性的HCC患者，除1例未能分型外，其余12例均为HCV 1b型（100％）。15例非肝癌癌症患者，除13酌（86．67％）为1b型感染者外，其余均为2a型（13．33％）。15例从业人员中，不仅检出了12b型感染（86．67％），还检出2a型，1／2混合型各1例。所有标本中1b,2a型，1b/2a混合型的构成分别为38／42（90．48％），3／42（7．14％），1／42（2．38％），以1b型的比例最高，未检出1a,2b和3a型。结论：HCVRNA1b型与HCC的关系较为密切，同时也是山西地区HCV的感染优势株。     

重组丙型肝炎病毒在7721细胞中的复制

目的 探讨构建的重组丙型肝炎病毒(HCV)能否在易感细胞系中复制和表达。方法 用人工构建的HCV感染易感细胞系7721,培养72h后利用RT-PCR检测HCV的RNA表达,并应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察免疫荧光标记的HCV核心抗原和胞膜抗原E1在细胞中的表达。结果 人工构建的HCV感染7721细胞72h后,RT-PCR检测细胞内可检出HCV正链及负链RNA,细胞培养上清中可检出HCV正链RNA,CLSM检测HCV核心抗原和E1抗原在细胞内的分布呈胞浆型。结论 构建的HCV72h内可以在易感细胞系7721中复制和表达。