TLR4在肝脏损伤中的作用研究进展

Toll样受体4(TLR4)是能被某些病原微生物保守分子激活的一种模式识别受体,其配体主要是细菌脂多糖(LPS)。作为细胞膜上LPS的信号传递分子,TLR4通过信号转导参与LPS介导的细胞及组织损伤。LPS介导的TLR4胞内信号转导途径有两条:MyD88依赖途径和非MyD88依赖途径,几种调节蛋白(ST2、IRAK-M、Irak2c、Irak2d和Triad3A)参与信号负调节。TLR4在肝脏各种疾病,包括HBV感染、乙醇性肝损害、肝脏纤维化、肝脏缺血/再灌注损伤中有着重要作用。     

TLR4信号促进前列腺癌PC3细胞VEGF/IL-8分泌及相关信号机制

目的研究TLR4在人前列腺癌PC3细胞中的表达意义及相关胞内信号机制。方法利用TLR4特异性配体脂多糖(LPS)刺激人前列腺癌PC3细胞,分别于LPS刺激0、2、6、12、24、48 h后收集细胞和上清,通过RT-PCR和蛋白质印迹方法检测TLR4在基因和蛋白水平的表达变化,通过RT-PCR方法检测胞内TGF-β、VEGF、IL-8、COX-2和MMP3的mRNA表达变化和ELISA方法检测上清VEGF、IL-8蛋白的表达变化;为了进一步研究相关信号通路,分别采用MAPK和NF-κB信号通路抑制剂预处理PC3细胞,然后利用同等浓度的LPS刺激,分别于4 h和24 h后收集上清,通过RT-PCR和ELISA方法重复上述细胞因子的检测。结果在LPS刺激后,人前列腺癌PC3细胞的TLR4功能性表达上调,引起胞内TGF-β、VEGF、IL-8、COX-2和MMP3的mRNA表达升高和上清中VEGF、IL-8的分泌增多(P<0.05);进一步研究表明胞内p38 MAPK和NF-κB信号通路参与了此过程。结论TLR4信号通过p38 MAPK和NF-κB信号通路促进VEGF和IL-8的分泌。     

TLR4在脂多糖诱导肾小管上皮细胞MAPK信号通路中的作用及其机制

目的:研究Toll样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱导肾小管上皮细胞炎症反应中的作用及其可能的分子机制。方法:雄性SD大鼠8只,随机分为假手术组(Sham组)和盲肠结扎穿孔组(CLP组),各4只。CLP组大鼠采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒血症动物模型,Sham组除不行盲肠结扎穿孔外,其余处理同脓毒血症组,造模后24h处死大鼠取肾组织。体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),以1μg/ml LPS刺激不同时间(5,15,30,60min),采用免疫荧光、Western blot法检测大鼠肾组织及肾小管上皮细胞TLR4的表达及分布,Western blot法检测细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路(包含p38、JNK两条主要通路)及Iκ-B磷酸化情况。TLR4抑制剂TAK-242(5mol/L)及MAPK通路抑制剂SB202190(10μmol/L)、SP600125(25μmol/L)预处理NRK-52E后,分别检测TLR4蛋白表达、MAPK信号蛋白及I-κB磷酸化水平。结果:1免疫荧光结果显示TLR4主要表达在大鼠肾小管上皮细胞;正常肾小管上皮细胞TLR4主要分布于细胞质。2Western blot结果显示随LPS刺激时间的增加,肾小管上皮细胞TLR4表达显著升高(P<0.05)。3NRK-52E细胞在受到LPS刺激后其p38、JNK MAPK蛋白及I-κB蛋白磷酸化水平增加(P<0.05)。4TLR4抑制剂预处理NRK-52E细胞,可显著降低LPS诱导的p38、JNK MAPK信号通路活化及I-κB磷酸化水平(P<0.05)。5SB202190、SP600125分别预处理NRK-52E细胞,均可显著降低LPS诱导的I-κB磷酸化(P<0.05)。结论:TLR4通过p38、JNK MAPK信号通路介导LPS诱导的肾小管上皮细胞炎症反应。     

内毒素诱导的TLR4信号转导通路研究进展

TLR4是内毒素(LPS)激活信号转导的受体。LPS首先与LPS结合蛋白(LBP)结合，再传递给CD14分子，形成LPS-LBP-CD14复合物，该复合物与TLR4-MD2相互作用，通过激活细胞内的信号通路而最终导致核因子-κB(NF-κB)、活化蛋白-1(AP-1)等核转录因子的活化，从而诱导炎症细胞因子包括TNF-α、IL-1、IL-6、NO等的大量表达引发脓毒症。对TLR4的研究使我们可以从阻断TLR4信号通路中发挥毒性作用的环节来预防和治疗脓毒性休克。     

白介素4对脂多糖刺激后小胶质细胞表型改变及其机制

目的 研究IL-4对LPS刺激后小胶质细胞表型改变作用及其机制。方法 以原代小胶质细胞研究对象,在脂多糖(LPS)和白介素4(IL-4)的刺激下,通过免疫荧光、蛋白印记技术、实时定量PCR检测细胞的表型改变、炎性因子表达和信号通路活化情况。结果 在LPS作用后,小胶质细胞形态由静息状态下的长分支状变为具有短分支的阿米巴样,M1型小胶质细胞标记iNOS以及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路相关蛋白表达上调,细胞向M1型转化。加入IL-4后,iNOS以及NF-κB的磷酸化水平下降,M2型标记蛋白Arg1以及STAT6磷酸化表达显著上调,细胞从M1 型向M2转化。抑制IL-4及其下游信号通路 STAT6后,IL-4对小胶质细胞TLR4及其下游信号通路的抑制作用及M2表型转化功能均被抑制。结论 IL-4可以通过上调STAT6磷酸化水平抑制LPS介导的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路活化,从而抑制下游的炎性因子表达,促进细胞表型由M1向M2型转变。     

PPAR-γ激动剂干预TLR4/PI3K通路对脂多糖诱导人冠状动脉血管内皮细胞Cx43表达的影响

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(RRAR-γ)激动剂罗格列酮干预Toll样受体"磷脂酰肌醇3-激酶(TLR4/PI3K)信号通路对脂多糖(LPS)诱导人冠状动脉血管内皮细胞(HCAEC)缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响.方法:用LPS诱导建立HCAEC炎症模型,将细胞分为模型组、TLR4激动剂KLA组、P...     

青心酮对脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞Toll样受体4表达及其相关信号转导的影响

目的 观察青心酮对脂多糖(LPS)诱导的脐静脉内皮细胞的Toll样受体4(TLR4)及其下游分子核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨青心酮治疗子痫前期等病理性妊娠的药理作用机制及TLR4信号系统在病理妊娠中的可能作用.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测脐静脉内皮细胞TLR4 mRNA的表达,免疫印迹法检测TLR4、抑制性κB(IκBα)蛋白的表达.结果 10-7、10-6、10-5 mol/L青心酮可显著降低LPS诱导的内皮细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达(P＜0.05),抑制IκBα蛋白的降解(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论 青心酮能够抑制LPS诱导的内皮细胞TLR4表达及其相关信号转导,这可能是青心酮治疗子痫前期等病理性妊娠时活血化淤药理作用的通路之一.TLR4信号通路可能参与妊娠期高血压病的发病.     

桂枝挥发油干预LPS致大鼠急性肺炎模型肺Toll样受体2、4和MYD88基因表达的研究

目的:研究桂枝挥发油(VORC)对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺炎模型肺Toll样受体2(111R2)、Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路髓样分化蛋白88(MyD88))mRNA的影响;方法:VORC(0.1 mL/kg、0.05 mL/kg、0.0025 mL/kg)灌胃(ig)给药5天,末次给药后1 h用LPS(1mg/kg)大鼠尾静脉注射制备急性肺炎模型,注射后6 h无菌取肺,实时荧光定量PCR方法检测,TLR2、TLR4和MYD88 mRNA的表达;结果:LPS尾静脉注射6 h,模型组TLR2、TLR4和MYD88 mRNA较空白组表达相对增高了6.41、6.50、4.89倍;VORC各剂量组TLR2、111R4和MYD88 mRNA均较模型组表达显著降低;结论:桂枝挥发油抗炎的药效学作用可能与抑制TLR2、TLR4和MYD88 mRNA表达,继而抑制其下游信号通路有关.     

Toll样受体4活化增强乳腺癌细胞株MCF-7侵袭力的研究

目的:研究Toll样受体4(TLR4)在人类乳腺癌MCF-7细胞株中的表达及在肿瘤增殖和转移中的作用?方法:脂多糖(LPS) 刺激MCF-7细胞株,RT-PCR?Real-time PCR?FCS 和 Western blotting 检测TLR4在mRNA和蛋白水平表达变化;MTT检测细胞增殖;RT-PCR 和 real-time PCR检测基质金属蛋白酶(MMP-2)?MMP-9 和血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达并用ELISA检测培养上清中其蛋白表达水平;Western blot检测TLR4信号传导通路下游蛋白MyD88的表达;CBA测定细胞培养上清的炎性细胞因子;划痕实验检测癌细胞的生物学侵袭力?结果:实验表明,LPS刺激MCF-7细胞株能明显上调TLR4 mRNA和蛋白表达(P < 0.05)?MTT结果显示,LPS对癌细胞增殖没有影响?LPS激活TLR4后,MMP-2?MMP-9和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达均明显上调 (P < 0.05)?划痕实验表明,LPS能显著增强MCF-7细胞株的划痕愈合能力?此外,LPS能诱导TLR4信号通路下游MyD88蛋白表达的显著上调(P < 0.05),IL-6的分泌增多(P < 0.05)?结论:LPS能明显增强MCF-7细胞株TLR4的表达,增强癌细胞的侵袭力?     

地塞米松对脂多糖激活的核因子-κB信号通路作用机制研究进展

脂多糖（LPS）是重要的炎症诱导因子,可通过与炎症相关细胞膜表面的Toll样受体4（TLR4）结合入胞并激活下游信号通路,促使核因子（NF）-κB进行核转位从而启动目标基因的转录,合成促炎因子推动炎症反应的进行。地塞米松作为强效的糖皮质激素可通过一系列"基因组效应"调控LPS-TLR4/NF-κB信号通路中的多个组分,影响炎症因子的合成,改变炎症转归。文章综述了LPS通过TLR4激活NF-κB通路的机制以及地塞米松对LPS-TLR4/NF-κB通路的作用机制相关研究进展,并列举了影响地塞米松对该通路作用的因素。该方面研究的深入可能有望指导地塞米松临床应用的安全剂量范围并为脓毒症等疾病提供新的治疗思路。     

脂多糖相关受体及其介导的信号转导通路

脂多糖(LPS)的识别与跨膜信号转导需要一系列分子的参与,如LPS结合蛋白、杀菌性/通透性增加蛋白、CD14、Toll样受体4等,是引起细胞炎性效应的关键,这一转导过程也是导致感染性休克、全身炎性反应综合征和多器官功能衰竭等疾病的重要机制。Toll样受体4与LPS结合后,活化髓样分化因子88依赖性和非依赖性两条信号途径。前者活化丝裂原激活的蛋白激酶和核因子κB信号通路,后者活化核因子κB和干扰素调节因子3信号通路。研究通路中的信号传递分子和信号转导环节可以为临床治疗寻找"新靶点"。     

何首乌醇提物对脂多糖诱导大鼠肝TLR4/TRIF/IRF-3信号通路的影响

目的：研究大鼠经革兰阴性菌外膜成分脂多糖（LPS）诱导后,何首乌醇提物（PMT）对大鼠的肝毒性,并探讨其肝损伤机制与固有免疫炎症信号通路Toll样受体4（TLR4）-干扰素调节因子3（IRF-3）的关系。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照组、对乙酰氨基酚（APAP,625 mg/kg）组、PMT 6 g/kg（PMT-L）和12 g/kg（PMT-H）组、脂多糖（LPS,4 g/L）组、（LPS+APAP）和（LPS+PMT-L/-H）组。后4组经尾静脉注射LPS 4 mg/kg,2 h后各实验组分别灌胃给予相应药物每日1次,连续7 d。观察每日大鼠体质量变化,分别在给药结束后2 h、14 h、5 d和8 d经HE染色检测大鼠组织形态变化,采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法及Western印迹法检测肝细胞中TLR4信号通路干扰素TIR结构域衔接蛋白（TRIF）、IRF-3的表达情况。结果大鼠尾静脉注射LPS诱导后2 h,肝实质出现微小肉芽肿,其后,LPS组大鼠肝损伤逐渐恢复。诱导第8天时,LPS组大鼠肝组织结构清晰完整,LPS+APAP组和LPS+PMT各剂量组肝细胞灶状坏死,伴炎细胞浸润。RT-qPCR检测法和Western印迹法检测结果显示,单独灌胃何首乌醇提物的大鼠肝细胞中TLR4、TRIF和IRF-3的mRNA和蛋白表达水平与正常组相比无显著差异,而经LPS诱导的大鼠肝细胞TLR4、TRIF和IRF-3 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常对照组,与LPS组相比有显著性差异（P＜0.05）,但PMT各剂量组间相比无显著差异。结论何首乌醇提物经LPS诱导能引起肝损伤,其引起的肝毒性与正性调控TLR4/IRF-3信号通路的表达有关,其肝损伤程度与给药剂量无关,提示TLR4/IRF-3信号通路的激活是LPS诱导何首乌醇提物肝损伤的作用机制之一。     

Toll样受体4与人体纤维化疾病的关系

Toll样受体4(TLR4)是脂多糖的天然受体,在调节急性炎症反应、细胞信号转导和细胞凋亡中起重要作用.在急性炎性反应和纤维化组织中TLR4表达增高,提示可能在组织的急性炎性反应,以及之后的纤维化过程中起重要作用.目前,TLR4在肝硬化、急性肺损伤和肺纤维化的发病机制以及治疗方面的研究取得了一定的进展,有望成为该类疾病治疗的新靶点.文章就TLR4在肝硬化和肺纤维化等疾病中的研究现状和发展前景作一综述.     

阿托伐他汀对人脐静脉内皮细胞TLR4及下游MyD88依赖性信号转导通路的影响

目的研究阿托伐他汀(ATV)对Toll样受体4(TLR4)及其下游信号转导通路主要元件下游髓样分化因子88(MyD88)及肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)表达的影响,探讨ATV防治动脉粥样硬化(AS)的机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用脂多糖(LPS)刺激并加入ATV干预24h,收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4、MyD88及TRAF-6mRNA表达;用Western blotting法测定TLR4、MyD88及TRAF-6蛋白表达。结果用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4、MyD88和TRAF-6的高表达(与空白对照组比较差异有统计学意义,P<0.01),用ATV干预以后显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6的表达(与模型组比较差异有统计学意义,P<0.01)。结论 ATV可阻断TLR4高表达,同时阻断TLR4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,这可能是ATV抗AS的作用机制之一。     

LPS信号转导分子TLR4表达与小鼠肝损伤的关系

目的 :探讨脂多糖 (lipopolysaccharide ,LPS)信号转导分子TLR4(Toll likereceptor 4 ,TLR4)与肝脏损伤的关系。方法 :小鼠腹腔注射LPS后不同时间点取肝脏组织 ,HE染色观察病理改变 ,RT PCR法检测肝组织TLR4mRNA的表达。结果 :腹腔注射LPS后 2 4h小鼠肝脏出现明显炎性浸润、坏死 ,肝组织TLR4mRNA的表达在注射LPS后 6 ,1 2h明显抑制 ,2 4h则基本恢复。结论 :LPS致肝损伤呈时间依从性 ;LPS信号转导分子TLR4在介导LPS肝损伤中起重要作用     

LPS信号转导分子TLR4表达与小鼠肝损伤的关系

目的：探讨脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)信号转导分子，TLR4(Toil-like receptor 4,TLR4)与肝脏损伤的关系。方法：小鼠腹腔注射LPS后不同时间点取肝脏组织，HE染色观察病理改变，RT-PCR法检测肝组织，TLR4 mRNA的表达。结果：腹腔注射LPS后24h小鼠肝脏出现明显炎性浸润、坏死，肝组织TLR4 mRNA的表达在注射LPS后6，12h明显抑制，24h则基本恢复。结论：LPS致肝损伤呈时间依从性；LPS信号转导分子TLR4在介导LPS肝损伤中起重要作用。。     

Toll样受体4与人体纤维化疾病的关系

Toll样受体4（TLR4）是脂多糖的天然受体,在调节急性炎症反应、细胞信号转导和细胞凋亡中起重要作用。在急性炎性反应和纤维化组织中TLR4表达增高,提示可能在组织的急性炎性反应,以及之后的纤维化过程中起重要作用。目前,TLR4在肝硬化、急性肺损伤和肺纤维化的发病机制以及治疗方面的研究取得了一定的进展,有望成为该类疾病治疗的新靶点。文章就TLR4在肝硬化和肺纤维化等疾病中的研究现状和发展前景作一综述。     

三磷酸腺苷对脂多糖诱导内皮祖细胞表达炎症因子的影响及其机制

目的：分析三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导内皮祖细胞 (endothelial progenitor cells,EPCs)表达炎症细胞因子的影响,并探讨其机制。方法：采用密度梯度离心法分离人脐 血单个核细胞,用RT-PCR检测LPS(1 mg/mL)诱导EPCs表达炎症细胞因子的情况,低浓度的ATP(5 μmol/L)对LPS诱 导EPCs表达细胞炎症因子的影响,不同浓度(5,50 μmol/L)的ATP对EPCs中TLR4,MyD88和CD14 mRNA表达的影 响;Western印迹检测LPS(1 mg/mL)对EPCs表达TLR4调节蛋白MyD88和CD14的影响以及信号通路的活化情况,低浓 度ATP(1,5 μmol/L)对LPS诱导EPCs表达TLR4,MyD88和CD14的影响以及信号通路的活化情况。结果：EPCs高表达 TLR4,其配体LPS(1 mg/mL)显著上调IL-1β,MCP-1和ICAM-1的mRNA表达(均P<0.01),并呈时间依赖性上调MyD88和 CD14蛋白的表达,同时活化ERK和NF-κB信号通路。低浓度ATP抑制LPS诱导的IL-1β,MCP-1和ICAM-1 mRNA的表达 (均P<0.05),同时也下调LPS诱导的TLR4,MyD88和CD14蛋白的表达(P<0.01或P<0.05),并抑制LPS诱导的NF-κB信号 通路的活化(P<0.05)。结论：ATP在低浓度时通过负性调节TLR4信号通路而抑制LPS诱导的炎症细胞因子在EPCs中的 表达。     

健脾活血方对酒精复合内毒素脂多糖诱导的肝损伤大鼠库普弗细胞活化信号通路的干预

目的:观察健脾活血方对酒精复合内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肝损伤大鼠库普弗细胞活化信号通路的影响。方法:采用Lieber-Decarli酒精饮料饲养6周诱导的酒精性肝损伤模型,分设正常组,无酒精饮料组,酒精饮料组和酒精饮料加健脾活血方组,造模第3周起灌胃给药或蒸馏水至第6周末,各组再以LPS 10 mg/kg一次性灌胃,3.5 h后取材。检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)活性和肝组织甘油三酯(triglyceride,TG)含量;HE染色观察大鼠肝组织病理改变;CD68免疫组化观察库普弗细胞活化状态;ELISA法检测门脉血浆肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;Western-blotting方法检测肝组织TNF-α、磷酸化的IκB(phosphorylation-IκB,P-IκB)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、CD68蛋白表达。结果:经健脾活血方干预后,大鼠肝脏组织病理损伤减轻,肝组织TG含量以及血清ALT活性和门脉血浆TNF-α含量下降;同时,大鼠肝脏TNF-α、P-IκB、TLR4和CD68蛋白表达明显减轻。结论:健脾活血方对酒精复合LPS诱导的肝损伤大鼠CD68、TLR4、P-IκB和TNF-α具明显抑制作用。