人卵巢癌细胞分泌转化生长因子－β对外周血单个核细胞增殖的影响

观察人卵巢癌细胞株ＣＯＣ＿１和ＣＯＣ＿２来源的患者癌性腹水（ＡＳ＿１，ＡＳ＿２）、癌细胞无血清条件培养液（ＳＦＣＭ＿１，ＳＦＣＭ＿２）及荷瘤裸鼠血清（ＮＳ＿１，ＮＳ＿２）对植物血凝素（ＰＩＩＡ）和白细胞介素－２（ＩＬ－２）诱导的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）增殖的作用，及与转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）的关系。结果：ＡＳ＿１和ＡＳ＿２对ＰＢＭＣ增殖有剂量依赖性抑制作用。ＳＦＣＭ和ＮＳ也具有明显抑制ＰＢＭＣ增殖的作用；但在浓度很低时，ＳＦＣＭ＿２对ＰＨＡ诱导，ＳＦＣＭ＿１、ＮＳ＿１和ＮＳ＿２对ＩＬ－２诱导的ＰＢＭＣ增殖，具有一定促进作用。上述作用特点与ＴＧＦ－β作用相似，并可被抗ＴＧＦ－β中和抗体部分阻断。提示：人卵巢癌细胞可通过产生ＴＧＦ－β，抑制宿主免疫。     

卵巢癌细胞分泌转化生长因子－β1的雌激素调节及其与细胞增殖的关系

目的：观察在不同浓度的雌激素作用下，卵巢癌细胞转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）的分泌调节及其与细胞增殖的关系。方法：利用Ｗｅｓｔｅｒｎ斑点杂交与３Ｈ－胸腺嘧啶核苷酸掺入率测定技术，检测体外不同浓度（１０－１３ｍｏｌ／Ｌ～１０－５ｍｏｌ／Ｌ）的１７－β雌二醇（Ｅ２）作用下，卵巢癌ＡＯ与３ＡＯ细胞株ＴＧＦ－β１的分泌量及其细胞增殖的情况。结果：ＡＯ细胞在Ｅ２的作用下，ＴＧＦ－β１的分泌量及细胞增殖状况均呈剂量浓度反应，在低浓度（１０－１３ｍｏｌ／Ｌ）和高浓度（１０－５ｍｏｌ／Ｌ）的Ｅ２作用下，ＴＧＦ－β１的分泌量明显增加，而细胞增殖明显受抑制，两者呈负相关。３ＡＯ细胞在同样处理下，ＴＧＦ－β１的分泌与对照组相比无明显改变，而细胞增殖则呈剂量浓度反应，两者无明显相关性。结论：ＡＯ细胞存在ＴＧＦ－β１的自分泌环调节机制，在体外受到雌激素的调节，该机制可能参与了细胞的增殖调节。而同样条件下，３ＡＯ细胞的ＴＧＦ－β１的自分泌不受雌激素的调节，且与细胞增殖调节无关     

卵巢癌细胞分泌转化生长因子—β1的雌激素调节及其与细胞…

目的：观察在不同浓度的雌激素作用下，卵巢癌细胞转化生长因子－β１（ＴＧＦ－β１）分泌调节及其与细胞增殖的关系。方法：ｅｓｔｅｒｎ斑眯杂交与＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷酸掺入率测定技术，检测体外不同深度（１０＾－１３ｍｏｌ／Ｌ－１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）的１７－β雌二醇（Ｅ２）作用下，卵巢癌ＡＯ与３ＡＯ细胞株ＴＧＦ－β１的分泌量及其细胞增殖的情况。结果：ＡＯ细胞在Ｅ２的作用下，ＴＧＦ－β１的分泌量及细胞增殖状况     

转化生长因子β1对人卵巢癌细胞系HO—8910凋亡的诱导作用

目的：进一步探讨转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）对人卵巢癌细胞的体外生长抑制作用的机理。方法：利用ＤＮＡ电泳、ＰＩ染色、末端酶缺口掺入及流式细胞术分析方法，观察了经ＴＧＦ－β１作用后，ＨＯ－８９１０细胞凋亡的现象，并利用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对细胞中ｃ－ｍｙｃ基因表达进行了相对定量动态分析。结果：ＴＧＦ－β１（２０ｎｇ／ｍｌ）作用３６小时后，细胞中ＤＮＡ出现缺口标记，４８小时后，被标记的细胞数达到７５．５５％，ＰＩ染色及流式细胞术分析结果也表明此时存在凋亡细胞小峰；６０小时后，ＤＮＡ电泳出现明显的梯状（ｌａｄｄｅｒ）条带；同时，自９小时始，细胞内ｃ－ｍｙｃ基因的表达开始下降。结论：ＴＧＦ－β１在体外能诱导ＨＯ－８９１０细胞产生凋亡，细胞凋亡可能发生于Ｇ０／Ｇ１期。同时提示ｃ－ｍｙｃ基因的表达抑制及ｃＡＭＰ含量的升高，对ＴＧＦ－β１作用后ＨＯ－８９１０细胞产生凋亡具有一定的促进作用。     

初乳中生长活性因子的研究

应用￣３Ｈ胸腺嘧啶掺入技术及一系列生化、分离鉴定手段，分析测定了人初乳中生长活性因子的组成与性质。结果：（１）初乳中含有丰富的生长因子，可促进体外培养的ＮＩＨ－３Ｔ＿３细胞的ＤＮＡ合成，且培养液在含０．５％（Ｖ／Ｖ）初乳时对细胞增殖的促进作用与含３．０％小牛血清相同。初乳每毫克蛋白促细胞ＤＮＡ合成的作用比牛血清高２０倍。（２）人初乳、成熟乳和牛初乳的生长活性因子比较，人初乳中生长活性因子最为丰富，含有两类生长活性因子，分别为初乳酸性生长因子（ＣＡＧＦ）和碱性生长因子（ＣＢＧＦ）。（３）上述两种因子对尿素和盐酸具稳定性，其中ＣＡＧＦ不能被巯基乙醇灭活，而ＣＢＧＦ可被巯基乙醇灭活。提示：ＣＡＧＦ为表皮生长因子样因子；ＣＢＧＦ为血小板源生长因子样因子。这两类生长活性因子均可促进和维持细胞的正常增殖与分化。     

粒细胞集落刺激因子对人卵巢癌细胞株生长的影响

了解粒细胞集落刺激因子对人卵巢癌细胞株生长的影响,方法采用ＸＴＴ比色法,检测Ｇ－ＣＳＦ对卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３、３ＡＯ及ＧＡＯＶ３生长的影响;对有影响的细胞株进行流式细胞仪检测和Ｇ－ＣＳＦ受体的检测,观察外源性Ｇ－ＣＳＦ对该细胞株的裸鼠皮下瘤生长的影响。结论Ｇ－ＣＳＦ对所检测的卵巢癌细胞株生长无显著影响。     

野生型p53基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用

目的：探讨野生型ｐ５３(ｗｔ ｐ５３)基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用。方法：利用脂质体介导，将含有人全长ｗｔ－ｐ５３基因ｃＤＮＡ的真核表达载体质粒ｐＣＥＰ４／ｐ５３和空载体质粒ｐＣＥＰ４分别转染卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞株，分别命名为ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４／ｐ５３细胞(C组)、ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４细胞(B组)，另设ＳＫＯＶ３细胞为正常对照组（Ａ组）。观察细胞体外生长情况和凋亡变化。结果：外源性ｐ５３基因在Ｃ组细胞中获表达，细胞生长曲线显示ｐ５３的导入使ＳＫＯＶ３细胞生长受到明显抑制，Ｃ组平均细胞集落数（１８．６±１．８个）少于Ａ组（２４．３±２．２个）和Ｂ组（２２．７±２．６），差异有显著性（Ｐ（005）。ＭＴＴ法检测C组细胞活力明显低于Ａ、Ｂ组。Ｃ组细胞Ｇ０～Ｇ１期百分比（５７．７９％）及凋亡细胞百分比（13．９1％）均高于Ｂ组（４６．０２％、２．０８％）和Ａ组（４３．６２％、０）。结论：ｗｔ－ｐ５３基因可介导ＳＫＯＶ３细胞Ｇ１期停滞和细胞凋亡，抑制细胞体外生长。     

甾体激素和血管活性物质ET／NO对培养的人子宫动脉平滑肌细胞增…

利用体外培养系统，通过＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入和ＭＴＴ法观察了甾体激素和血管活性物质内皮素（ＥＴ）与一氧化氮（ＮＯ）在培养的人子宫动脉平滑肌细胞（ＨＵＡＳＭＣ）增殖中的作用。结果：雌激素对ＨＵＡＳＭＣ的ＤＮＡ合成和细胞增殖无影响。孕激素和ＥＴ－１可促进ＨＵＡＳＭＣ ＤＮＡ合成和细胞增殖，其作用呈剂呈依赖性。孕激素可明显增强ＨＵＡＳＭＣ对ＥＴ－１的反应，ＮＯ供体硝普钠（ＳＮＰ）抑制ＨＵＡＳＭＣ ＤＮＡ合成     

雌激素对卵巢癌细胞株体外生长的影响

目的 探讨１７－β雌二醇（Ｅ２）对卵巢癌细胞株体外生长和细胞周期的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法和流式细胞术（ＦＣＭ）的方法,观察了卵巢癌细胞株ＣＡＯＶ３和ＯＣＶＡＲ３在加入含有不同浓度１７－β Ｅ２培养液后细胞活性和细胞周期的变化;同时采用免疫组化方法,测定癌细胞在加入１７－β Ｅ２前后雌激素受体表面的影响。结果 （１）浓度为０．２５～５．００ｎｍｏｌ／Ｌ的１７－β Ｅ２,可轻度     

c—erbB2反义核酸对卵巢癌细胞系生物学行为及药物敏感性的影响

目的：探讨ｃ－ｅｒｂＢ２反义核酸对卵巢癌细胞生物学行为及其化疗药物敏感性的影响。方法：应用ｐＵＣ－ｅｒｂＢ２和ｐＤＯＲ－ｎｅｏ质粒，构建了含反义ｅｒｂＢ２ｃＤＮＡ３．８ｋｂ的重组逆转录病毒表达载体ｐＤＯＲ－ｅｒｂＢ－ｎｅｏ，经脂质体转染ｅｒｂＢ２高表达的人卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３，再经Ｇ４１８（一种新霉素类似物）筛选得到新霉素抗性细胞，命名为ＳＫＯＶ３－Ａ２。结果：Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析表明，反义ｅｒｂＢ２３．８ｋｂ已完全整合到ＳＫＯＶ３细胞中，与亲本细胞及转染ｐＤＯＲ－ｎｅｏ的对照组细胞相比，ＳＫＯＶ３－Ａ２的生长和ＤＮＡ合成均受到抑制，且对５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）及顺铂（ＤＤＰ）的药物敏感性明显增加。结论：ｃ－ｅｒｂＢ２反义核酸在卵巢癌基因治疗中有一定作用；ｃ－ｅｒｂＢ２癌基因可能与卵巢癌细胞耐药有关。     

卵巢癌可溶性抗原和抗CD3单克隆抗体诱导细胞毒性T细胞抗人卵巢癌的实验研究

目的探讨卵巢癌过继细胞免疫治疗新方法。方法提取卵巢癌细胞（ＣＯＣ１和ＣＯＣ２ｎ）可溶性抗原（ＴＳＡ），用ＴＳＡ和抗ＣＤ３单克隆抗体（ＣＤ３ＭｃＡｂ）共同诱导正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ），用ＣＴＬ于体外杀伤ＣＯＣ１细胞和裸鼠体内抑制ＣＯＣ２ｎ移植瘤的生长，体外和淋巴因子激活杀伤细胞（ＬＡＫ）、淋巴因子和抗ＣＤ３单抗激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ）细胞进行比较，体内和ＣＤ３ＡＫ细胞进行比较。结果ＣＴＬ、ＣＤ３ＡＫ和ＬＡＫ对ＣＯＣ１细胞的细胞毒作用分别为７９．４％、５２．１％和５１．７％（Ｐ＜０．０１）。在体内，ＣＴＬ与ＣＤ３ＡＫ和未经处理的对照组比较，卵巢癌细胞移植到裸鼠体内的第９天，肿瘤平均体积分别为４４．４±２４．２ｍｍ３、１１８．８±４０．０ｍｍ３和４４３．０±１５８．７ｍｍ３（Ｐ＜０．０１），裸鼠平均生存期分别为２８．５天、２５．５天和１７天（Ｐ＜０．０１）。结论本方法诱导产生的ＣＴＬ，在体内、体外对卵巢癌细胞均有较高的细胞毒作用，能明显抑制肿瘤生长，为卵巢癌治疗提供了新的思路。     

羟甲基无环鸟苷对携有单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用

目的：观察羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）对携有Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因（ＨＳＶ１－ｔｋ）的人卵巢上皮癌ＡＯ细胞的体内杀伤效应。方法：于裸鼠背部左右两侧皮下分别接种ＡＯ细胞及携有ＨＳＶ１－ｔｋ基因的ＡＯ细胞（ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ），成瘤后每日腹腔注射ＧＣＶ。结果：经ＧＶＣ治疗后，裸鼠背部两侧肿瘤平均重量分别为：左侧ＡＯ肿瘤０．６８１ｇ；右侧ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ肿瘤０．０８７ｇ。经ＧＣＶ作用后仍然存活的多数ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ细胞胞浆呈肥大、坏死表现。但其核内染色质却多呈异染色质状态。结论：ＧＣＶ在裸鼠体内代谢后仍可高效杀伤携有ＨＳＶ１－ｔｋ基因的卵巢癌细胞，从而抑制肿瘤生长。但仍然存活的肿瘤细胞增殖活跃，如加用Ｓ期特异的化疗药物可能进一步提高远期疗效。     

钙离子浓度在转化生长因子α和β1诱导的体外人卵泡？…

探讨细胞内游离钙离子浓度与转化生长因子α和转化生长因子β１诱导的体外人卵泡膜细胞凋亡的关系。方法用ＴＧＦα和ＴＧＦβ１联合作诱导体外无血清培养的人卵泡膜细胞发生凋亡，利用光镜，电阄，琼脂糖凝胶电泳从形态学、生化指标方面进行凋亡和粘附细胞分析及筛选激光细胞仪观察细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度变化。     

卵巢癌可溶性抗原和抗CD3单克隆抗体诱导细胞毒性T细胞抗人 …

探讨卵巢癌过继细胞免疫治疗瓣方法。方法 提取卵巢癌细胞可溶性抗原,用ＴＳＡ和抗ＣＤ３单克隆抗体共同诱导正常人外周血单个核细胞产生细胞毒性Ｔ细胞,用ＣＴＬ于体外杀伤ＣＯＣ１细胞和裸鼠体内抑制ＣＯＣ２ｎ移植瘤的生长,体外和淋巴因子激活杀伤细胞,淋巴因子和抗ＣＤ３单抗激活的杀伤细胞细胞进行比较,体内和ＣＤ３－ＡＫ细胞进行比较。     

血清铁蛋白、β_2－微球蛋白和癌胚抗原放免测定对诊断卵巢恶性肿瘤的初步评价

目的探讨血清铁蛋白（ＳＦ）、β２－微球蛋白（β２－ＭＧ）和癌胚抗原（ＣＥＡ）在诊断卵巢恶性肿瘤中的价值。方法用放射免疫法测定卵巢肿瘤６１例和健康女性３５例的ＳＦ、β２－ＭＧｆｏＣＥＡ水平。结果卵巢恶性肿瘤患者的ＳＦ、β２－ＭＧ和ＣＥＡ均高于良性肿瘤组和正常对照组；Ⅲ～Ⅳ期者ＳＦ高于Ⅰ～Ⅱ期者；ＳＦ和β２－ＭＧ联合检测优于单项检测，Ⅰ～Ⅱ期患者的诊断敏感性达６３．６４％。结论ＳＦ和β２－ＭＧ测定简单易行，是卵巢恶性肿瘤的良好诊断指标。     

卵巢癌细胞浸润性的研究

目的：研究卵巢癌细胞的浸润性。方法：采用膜浸润培养系统（ＭｅｍｂｒａｎｅＩｎｖａ－ｓｉｏｎＣｕｌｔｕｒｅＳｙｓｔｅｍ．ＭＩＣＳ）及重建基底膜模式（ＲｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＢａｓｅｍｅｎｔＭｅｍｂｒａｎｅ）定量研究卵巢癌细胞的浸润性。用细胞外介质胶（ｍｅｔｒｉｇｅｌ）涂布微孔碳素膜构成重建基底膜形成酷似活体中癌细胞所处的环境，以真实定量地反映癌细胞的浸润力。结果：用以试验的６种卵巢癌细胞株Ｂｉｘｌｅｒ、Ｂｉｘ３、Ｂｉｘ２ＮＭＢ．Ｈｅｙ、ＤＫ２ＮＭＡ及ＳＫＯＶ－３浸润基底膜的能力不同，Ｂｉｘｌｅｒ浸润能力最强，为１０．４４％。Ｈｅｙ次之，为８％，Ｂｉｘ３最弱。仅为０．６３±０．０８％。卵巢癌细胞株的浸润性与尿激酶类纤溶激活因子（ｕＰＡ）的基因转录表达有关，与克隆刺激因子（ＣＳＦ－１）的基因转录表达高度相关，ｒ＝０．Ｐ＜０．０１。以外源性ＣＳＦ－１处理癌细胞。则ｕＰＡＲＮＡ转录及该细胞的浸润性均增加２倍，说明卵巢癌细胞的浸润性受ｕＰＡ介导及ＣＳＦ－１调控。外源性ｕＰＡ抗体处理使卵巢癌细胞株的浸润能力阻断５０％。结论：卵巢癌细胞具有分泌ｕＰＡ的能力，是其具有浸润性的重要机制，但不是全部机制。关键词     

脂质体-C-erbB_2反义寡核苷酸对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤的作用

目的：探讨经脂质体—硫代磷酸化修饰的Ｃ－ｅｒｂＢ２反义脱氧寡核苷酸（Ｃ－ｅｒｂＢ２ｓｕｌｆｉｄｅ－ＯＤＮｓ）作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下的成瘤能力及形态学变化。方法：利用离体途径将Ｃ－ｅｒｂＢ２ｓｕｌｆｉｄｅ－ＯＤＮｓ导入卵巢上皮癌细胞，然后接种于裸鼠皮下，观察肿瘤体积的变化，并计算抑瘤率。用透射电镜观察肿瘤形态变化。结果：经脂质体－Ｃ－ｅｒｂＢ２ｓｕｌｆｉｄｅ－ＯＤＮｓ作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低，最大抑瘤率可达４１．７％。超微结构显示实验组肿瘤细胞异染色质增多，分化增高。结论：Ｃ－ｅｒｂＢ２癌基因的反义调控能降低卵巢上皮癌的成瘤能力，抑制肿瘤生长，在卵巢上皮癌的基因治疗中有一定作用     

生长因子与卵巢功能调节

卵巢组织要产生ＩＧＦｓ，ＴＧＦ－βｓ、ＥＧＦ及ＴＧＦ－α，并存在其特异性受体，它们通过旁分泌和／或自分泌方式参与卵巢功能的调节。总的趋势是ＩＧＦｓ，ＥＧＦ和ＴＧＦ－α刺激卵巢颗粒细胞增生和分化，增加Ｅ２和Ｐ的合成及分泌，促进卵子成熟发育，ＴＧＦ－βｓ则主要表现为抑制作用。     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转染联合药物对卵巢癌细胞的杀伤效应

目的：探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ＴＫ）基因转染联合抗病毒药物羟基无环鸟苷（ＧＣＶ）对人卵巢癌细胞系的杀伤效应。方法：采用基因工程技术，将ＨＳＶ－ＴＫ基因的ＤＮＡ序列插入逆转录病毒载体ｐＬＮＳＸ的ＨｉｎｄⅢ位点，构建重组体ｐＬＮＳ／ＨＳＶ－ＴＫ，并采用磷酸钙介导贴壁细胞基因转染法将重组体导入ＰＡ３１７包装细胞，建立重组逆转录病毒载体分泌细胞株ＰＡ３１７／ＴＫ。并采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ系统对人类卵巢癌ＡＯ细胞系的生长抑制率。结果：重组逆转录病毒载体ｐＬＮＳ／ＨＳＶ－ＴＫ能有效地将ＨＳＶ－ＴＫ基因导入ＡＯ细胞系内并使其获得对ＧＣＶ的敏感性。当培养液内ＧＣＶ达４０μｍｏｌ时，其对转ＨＳＶ－ＴＫ基因后ＡＯ细胞的生长抑制率为９８．０％。结论：ＡＯ细胞转染ＨＳＶ－ＴＫ基因后，能有效地被ＧＣＶ杀灭。     

羟甲基无环鸟苷对携有单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激…

目的：观察羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）对携有Ｉ型单纯疱疹病毒胸腺嘧淀核苷激酶基因（ＨＳＶ１－ｔｋ）的人卵巢上皮癌ＡＯ细胞的体内杀伤效应，方法；于裸级部左右两侧皮下分别接种ＡＯ细胞及携有ＨＳＶ１－ｔｋ基因的ＡＯ细胞（ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ），成瘤后每日腹腔注射ＧＣＶ。结果：经ＧＶＣ治疗后，裸鼠背部两侧肿瘤平均重量分别为：左侧ＡＯ肿瘤０．６８１ｇ；右侧ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ肿瘤０．０８７ｇ。经ＧＣＶ作用后