Prader-Willi综合征分子分型诊断方法的初步研究

 【目的】探讨Prader—Willi综合征（PWS）的短串联重复序列（STR）连锁分析诊断方法，为遗传咨询提供相关信息。【方法】对一例临床疑似病例经甲基化特异性PCR（MS—PCR）确诊为PWS后．应用15号染色体特定区域的STR进行家系连锁分析，探讨其在PWS分子缺陷类型诊断方面的可行性。【结果】STR连锁分析结果显示该患者为父源缺失型PWS。【结论】STR连锁分析是一种可准确诊断PWS并明确其分子缺陷类型的好方法：国人相关区域的STR位点及其多态信息等有待进一步研究．以完善并最终建立该方法。     

Prader-Willi综合征的分子遗传学诊断与机制研究

目的 探讨Prader-Willi综合征(PWS)高效、特异的检测方法 ,分析其遗传学发生机制. 方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSPCR)及多重连接探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术对疑似20例Prader-Willi综合征患儿的DNA样本进行基因分析. 结果 MSPCR结果 提示2例阳性患儿均存在父源15q11-13区域的缺失,母源15q11-13区域存在.MLPA结果 提示病例1的发病原因为父源15q11-13区域的缺失,病例2为母源同源二倍体. 结论 Prader-Willi综合征与父源15q11-13印迹基因功能异常相关,MSPCR可以作为一种高效特异的方法 检测PWS患儿,应用MLPA技术可以判别阳性病例是由于基因缺陷或单亲二体所致,为临床诊治提供科学依据.     

Prader-Willi综合征分子遗传学诊断

目的为临床怀疑Prader-Willi综合征（PWS）的患者建立快速准确的分子诊断方法,有利于早期治疗。方法对门诊以肥胖和智力落后就诊的1例患者根据1993年Holm等提出的临床诊断标准,高度怀疑Prader-Willi综合征,采用盐析法提取基因组DNA并经亚硫酸盐修饰,应用甲基化特异性PCR,扩增产物以琼脂糖凝胶电泳分离。结果正常对照显示父源（P）和母源（M）2条带,而患者显示母源（M）1条带。该患者确诊为Prader-Willi综合征。结论甲基化方法结果与临床诊断吻合度高。在临床高度怀疑PWS时,建议用甲基化方法快速确诊,以使患儿能得到及时治疗。     

DNA分析法快速诊断21三体综合征

目的：建立适合于快速诊断21三体的DNA分析方法。方法：用PCR法扩增21号染色体上2个串联重复序列D21S1435和D21S2055基因座，聚丙烯酰胺凝胶电泳，传染分型，根据谱带的条数和浓度判断是否为21三体，根据谱带的位置，与父母的基因型比对，判断三体的亲代来源。结果：应用此法检出所有核型分析确诊和游离型21三体，能准确地判断出三体的亲代来源。结论：该法无须细胞培养，适用于含一定DNA的各种有核细胞样本，检测过程简便，快速，较传统方法省时，省力，适于大范围的21三体综合征筛查。     

肿瘤中微卫星不稳定的发生机制及研究意义

微卫星（microsatellite，MS）是由1～6个核苷酸组成单元串联重复排列而成的DNA序列，故又称短串联重复序列（short tandem repeats，STRs）、简单重复顺序（simple sequences repeats，SSRs）。MS广泛分布于原核和真核生物基因组中，在人类基因组DNA序列中，平均约隔6kb便含有一个MS，约占人基因组的10％，多位于基因之间的间隔区域及内含子、启动子中，也有一些基因的外显子中含有MS。由于MS呈高度多态且按孟德尔共显性方式稳定遗传，自发性突变率很低（10^-5～10^-4），序列一般较短，易于扩增，所以在连锁分析、人类进化研究、个体识别、亲子鉴定、基因定位作图等方面得到了广泛的应用。     

两种烟曲霉基因分型方法的比较研究

目的 筛选一种操作简单、分辨率高的烟曲霉基因分型方法.方法 选取分离自14例慢性肺曲霉病(CPA)患者的31株烟曲霉,同时用两种基于串联重复序列[改良烟曲霉短串联重复序列(改良STRAf)和表面蛋白编码基因外显子的串联重复序列(TRESP)]的方法进行基因分型,用NCSS 11软件绘制树状图,比较两种方法的分型效果.结...     

22q11.2微缺失综合征快速分子诊断方法的建立

目的:探索一种快速、经济和准确地检测22q11.2微缺失综合征的分子诊断方法.方法:随机采集2004年1月至2005年1月在我科住院的无血缘关系的江苏地区汉人群室间隔缺损(ventricular septal defect,VSD)患儿50例外周血标本及其双亲100例口腔拭子,选取3个高信息量的短串联重复序列多态(short tandem repeat polymorphic,STRP)位点(D22S944和本研究选取的22D_4_2,22D_4_3)进行STRP分析和荧光原位杂交(fluorescentin situ hybridization,FISH)检测.结果:22D_4_2,22D_4_3位点基因的电泳条带清晰,检测简便迅速;3个STRP位点均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,在江苏地区汉人群中具有较高的多态性;50例VSD患儿中5例由STRP分析检出有微缺失,均经FISH检测证实. 结论:选取3个高信息量的位点(D22S944、22D_4_2、 22D_4_3)进行STRP初筛分析,必要时结合FISH检测是一种有效可行、值得推广的检测22q11.2微缺失的诊断方法.     

应用短串联重复序列快速产前诊断唐氏综合征

目的:采用聚合酶链反应技术(PCR),对短串联重复序列(short tandem repeat,STR)进行分析,探讨应用短串联重复序列信息进行21三体产前诊断的可行性。方法:选取21号染色体核心区域21q22.1-22.3及其附近的三个STR(D21S1409,D21S1433,D21S1444),用聚合酶链技术,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,硝酸银染色技术,对30例正常人外周血及40例羊水样品进行分析。结果:30例正常人在三个STR位点均没有发现三条带。40例羊水样品中检测到三例21三体胎儿,两例与细胞染色体分析结果相符,染色体核型均为"47,XY,+21"。一例为21号染色体关键区域微片段重复,细胞染色体分析结果为"46,XY"。三例21三体和部分21三体多余的染色体和部分片段均来自母亲。其余37例羊水样品检测结果为阴性,细胞染色体分析结果也是阴性。D21S1409、D21S1433、D21S1444三个基因座的杂合度分别为:0.75、0.80、0.78。结论:三个STR均具有高度多态性,在21三体的产前诊断中有较高的应用价值。     

21号染色体STR多态与Down's综合征基因诊断的研究

目的:探讨应用短串联重复序列(short tandem repeat,STR)进行Down's综合征诊断的可行性,同时对Down's综合征患儿双亲进行分析,找寻该病的遗传规律.方法:选择21号染色体上D21S11和D21s1414 2个STR基因座,应用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(8%)、硝酸银染色技术分别对100例Down's综合征患儿及20例患儿父母的基因组进行分析.结果:(1)正常人在1个STR基因座上的基因型有2种情况:①2个不同等位基因构成的杂合子,凝胶电泳上表现为粗细一样的2条带.②2个相同等位基因构成的纯合子,凝胶上是2条相同等位基因条带的重叠,其宽度和浓度约为单个等位基因条带的2倍.(2)Down's综合征患儿的等位基因数目和(或)条带浓度有3种特征性改变:①3个不同的等位基因,电泳图上为浓度相同的3条带.②3个等位基因中的2个相同,电泳图上为2条带,其中1条的浓度是另外1条的2倍.③3个相同的等位基因,电泳图上为1条带,这条带的浓度和宽度约为正常对照条带的3倍.(3)20例Down's综合征双亲分析显示,Down's综合征患儿电泳条带包含了母亲的全部电泳条带,而与父亲的电泳条带只有部分相同.结论:(1)利用21号染色体STR位点作为遗传标记,采用PCR扩增技术结合变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色技术,可用于诊断和筛查Down's综合征.(2)Down's综合征患儿与双亲比对电泳结果表明,Down's综合征发病与父母的核型无关,多余的1条21号染色体一般来自于母亲.     

应用短串联重复序列诊断唐氏综合征

目的:探讨联合应用6个短串联重复序列(STR)为标记,结合聚合酶链反应(PCR),单链构象多态性分析(SS-CP)诊断唐氏综合征的可行性。方法:选择21号染色体上的D21S1414、D21S1413、D21S1432、D21S1437、D21S1446、D21S2054,6个高杂合度的STR基因座扩增,对扩增产物用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染技术分析,通过观察DNA电泳的带型特征诊断唐氏综合征。结果:82例患儿经STR-PCR分析确认31例为唐氏综合征。结论:该方法可以直观、简便、快速地诊断唐氏综合征,为基因诊断唐氏综合征提供实验依据,有利于对唐氏综合征大规模产前诊断的开展。     

天麻简单重复序列反应体系的初步研究

目的: 探讨兰科药用植物天麻(Gastrodia elata Bl.)简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)PCR循环中退火温度及反应体系中各主要成分对反应的影响.方法: 根据Genebank登录的天麻微卫星序列设计引物, 并对反应体系中各影响因素进行优化.结果: 所设计引物可扩增出预期的条带,并构建了清晰稳定的SSR指纹图谱,最终建立的25 μl反应体系为:Taq DNA酶1U、Mg2 1.2～1.6 mmol/L、引物各0.4～0.6 μmol/L、模板DNA 40～60 mg/L和dNTPs 0.20 mmol/L.结论: 首次初步确立了适合天麻SSR的最佳退火温度及反应体系中各主要成分的最佳浓度,为天麻的SSR分子标记及遗传多态性分析奠定了一定基础.     

DNA分析法快速诊断21三体综合征

目的　建立适合于快速诊断 2 1三体的 DNA分析方法。方法　用 PCR法扩增 2 1号染色体上 2个串联重复序列 D2 1S1435和 D2 1S2 0 5 5基因座 ,聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,银染分型。根据谱带的条数和浓度判断是否为2 1三体 ,根据谱带的位置 ,与父母的基因型比对 ,判断三体的亲代来源。结果　应用此法检出所有核型分析确诊的游离型 2 1三体 ,能准确地判断出三体的亲代来源。结论　该法无须细胞培养 ,适于含一定 DNA的各种有核细胞样本 ,检测过程简便、快速 ,较传统方法省时、省力 ,适于大范围的 2 1三体综合征筛查     

Precise Microdeletion Detection of Prader-Willi Syndrome with Array Comparative Genome Hybridization

Objective Prader-Willi Sydrome （PWS） is a human disorder related to genomic imprinting defect on 15ql 1-13. It is characterized by a series of classic features such as hypotonia, hyperphagia, obesity, osteoporosis, typical facial and body dysmorphosis, hypogonadism, mental and behaviour disorders. Our study was designed to precisely detect the microdeletions, which accounts for 65%-70% of the PWS. Methods Physical and laboratory examinations were firstly performed to diagnose PWS clinically, and to discover novel clinical features. Then the patient was screened with bisulfite-specific sequencing and precisely delineated through high-density array CGH. Results With the bisulfite-specific sequencing, the detected CpG island in the PWS critical region was found homozygously hypermethylated. Then with array CGH, a 2.22 Mb type II microdeletion was detected, covering a region from MKRN3, MAGEL2, NDN, PWRN2, PWRN1, Cl2orf2, SNURF-SNRPN, C/D snoRNAs, to distal of UBE3A. Conclusions Array CGH, after the fast screening of Bisulfite-specific sequencing, is a feasible and precise method to detect microdeletions in PWS patients. A novel feature of metacarpophalangeal joint rigidity was also presented, which is the first time reported in PWS.     

Dystrophin基因内部四个STR位点多态性与DMD基因携带者检出

应用PCR技术分别体外扩增dystraphin基因内部四个STR位点的(CA)n重复序列,聚丙烯酰胺凝胶电泳、硝酸银染色检测扩增产物,分析STR位点的多态性,所得STR-44、STR-45、STR-49和STR-50各位点的多态信息量分别为0.864、0.892、0.906和0.713。并利用这些位点多态性连锁分析检测5个DMD家系中8名女性亲属,检出其中6名为DMA基因携带者。为非缺失型DMD/BMD基因诊断及其家系中携带者检出提供有效手段     

应用多重连接探针扩增法简便高效检测Prader-Willi综合征的基因缺失

Objective: Prader-Willi syndrome (PWS) is characterized by severe hypotonia and feeding difficulties in early infancy, followed by excessive eating and gradual development of morbid obesity in later infancy or early childhood. Patients with PWS are often too young to manifest sufficient features or have atypical findings, making genetic testing important to confirm the diagnosis of PWS. Approximately 99% of patients with PWS have a diagnostic abnormality in the parent - specific methylation imprint with in the Prader-Willi critical region (PWCR) at chromosome 15q11.2-q12.0.Of them,70% have a paternaldeletion;25% have a maternal uniparental disomy(UPD);and＜5% have a mutation in the imprinting center. Methods: Current techniques can identify a diagnostic abnormality, such as paternal deletion or maternal UPD for most of patients with PWS, but they are labor-intensive and cost - expensive. Multiplex ligation-dependent probe amplification(MLPA)ys a novel,simple,and cost-ettective technique for analysis of relative quantification in a single assay,which has recently been applied for the detection of genomic deletions, duplications, and amplifications in a variety of genes.Results: Six out of 20 patients referred for genetic diagnosis of PWS were found to have a deletion by MLPA,confirmed by FISH and DNA methylation analysis with 100% concordance. Conclusion: MLPA‘ s high sensitivity and specificity for deletion detection is the same as FISH or Southern blot based analysis. Additional collaborative effort for developing and validating the complete MLPA-PWS assay, for not only detecting deletion but also identifying methylation abnormality, is on going.     

甘肃地区一遗传痉挛性截瘫家系致病基因的定位

目的：对中国甘肃地区一个常染色体显性遗传痉挛性截瘫家系致病基因的初步定位研究．方法：用常见的常染色体显性遗传痉挛性截瘫的3个基因区域内的10个微卫星位点D14S264、D14S75、D14S69、D14S266、D14S66、D2S2347、D2S2255、D2S2351，D15S128、GABRB3对该家系致病基因进行等位基因共享分析及连锁分析．结果：该家系致病基因在SPG4基因区域的D2S2351位点连锁(θ=0，最大LOD值为2．71)．结论：该家系致病基因在SPG4基因座，疾病基因是spastin．     

Preliminary Research on Syndrome Types of Chinese Medicine in Children with Primary Nephrotic Syndrome

Objective

To provide an objective reference for the syndrome types of Chinese medicine (CM) associated with pediatric primary nephrotic syndrome (PNS).

Methods

A cross-sectional study was performed. Data on clinical symptoms, CM syndrome types, biochemical indices, and medications used were collected from 98 children with PNS. Then, the correlation between CM syndromes and biochemical indices, as well as medications used, was analyzed.

Results

The four most common symptoms in children with PNS were brown urine, red tongue, excessive sweating, and swelling of the face and limbs. The syndromes of qi deficiency of Fei (Lung) and Shen (Kidney) (FSQD) and yin deficiency of Gan (Liver) and Shen (GSYD) were the most common main CM syndrome types. FSQD syndrome score correlated significantly with the total cholesterol level, urine protein/creatinine ratio, and urine IgG and albumin levels (P<0.01 or P<0.05). The use of maintenance glucocorticoids combined with immunosuppressive agents correlated with FSQD syndrome, and the use of maintenance glucocorticoids alone correlated with GSYD syndrome (P<0.05).

Conclusion

Two of the most common CM syndrome types were FSQD and GSYD syndromes. FSQD syndrome may be caused by some factors related to lipid levels, protein loss, and the use of immunosuppressive agents. The use of maintenance glucocorticoids may cause GSYD syndrome

     

肺癌证素研究

以证素辨别为核心的辨证体系,揭示了辨证的基本原理和普遍规律.应用临床流行病学研究方法 ,收集431例肺癌病例,采用SPSS统计软件,进行聚类分析和主成分分析,对肺癌证素分布规律、组合规律进行分析研究.