白念珠菌基因多态性与耐药性关系

 【目的】探讨耐氟康唑白念珠菌基因多态性与其耐药性是否相关。【方法】收集48株敏感白念珠菌和10株耐氟康唑白念珠菌,其中包括2株体外诱导的耐氟康唑白念珠菌。选择1个随机引物(引物1251),采用任意引物PCR方法基因分型,将电泳图谱扫描入计算机后采用Labwork4.0软件转化为数值图表,利用SPSS11.5进行聚类分析。【结果】引物1251的PCR指纹图带型稳定,多态性丰富,可以作为分型引物。聚类分析结果提示8株临床耐药菌的PCR指纹图相似系数为71.7%,而其中7株的耐药菌相似系数高达86.7%,远高于58株菌的平均相似系数(47.3%)。2株体外诱导的耐药菌诱导前后基因型未发生变化。【结论】基因分型的结果未提示耐氟康唑白念珠菌存在一定的特殊电泳条带,但提示了特定的PCR指纹图可能与耐药性有一定相关性。     

白念珠菌的应激反应与耐药性

白念珠菌是临床最常见的条件致病真菌,可以导致黏膜和系统感染。临床上广泛使用的抗真菌药物数量有限,长期广泛应用于临床所导致白念珠菌的耐药现象越来越普遍,耐药程度也越来越高。白念珠菌对抗真菌药物的高适应性导致了耐药性的产生,同时也是白念珠菌对环境应激的一种体现。本文对应激反应通路作了总结,并着重从应激反应角度阐述了白念珠菌的耐药性问题。     

白念珠菌耐药性与细胞周期及凋亡的关系

近年来,念珠菌的耐药问题日显突出,文献报道[1]念珠菌耐药表型由相关基因控制.本研究对凋亡及耐药这两种基因调控的过程是否有某种相关性这一问题进行了初步探索,现将结果报告如下.     

生物膜中白念珠菌的耐药性研究

针对生物膜中白念珠菌的耐药性研究和分析对于相关工作的进展有着重大的意义,文章将针对这一方面的内容展开论述,详细的探析白念珠菌的耐药性。     

白念珠菌分泌性蛋白酶活力与其对氟康唑耐药性之间关系的研究

目的研究白念珠菌分泌性蛋白酶（Sap）活力与其对氟康唑耐药性之间的关系。方法将对氟康唑敏感的白念珠菌培养在含氟康唑浓度逐渐增加的液体培养基中，体外诱导为氟康唑耐药株；运用牛血清白蛋白培养基（BSA）的方法测定了对氟康唑敏感的白念珠菌和对氟康唑耐药的白念珠菌的分泌性蛋白酶活力。结果40株对氟康唑敏感的白念珠菌均在体外被成功的诱导成为对氟康唑耐药的耐药株。耐药株的分泌性蛋白酶活力明显强于敏感株（P〈0．001）。结论白念珠菌Sap活力的增加与其对氟康唑耐药性增加是一致的。     

白念珠菌CDR1基因上游调控序列与氟康唑耐药的关系初探

目的探讨白念珠菌耐药基因CDR1基因上游调控序列对氟康唑耐药的影响。方法分别抽提氟康唑耐药／敏感配对菌株DNA,通过特异性合成CDR1基因上游调控序列引物,分析该序列在氟康唑耐药／敏感配对菌株中是否存在基因突变。结果白念珠菌氟康唑耐药／敏感配对菌株中的CDR1基因上游调控序列未出现任何碱基突变和缺失。结论白念珠菌氟康唑耐药与CDR1基因上游调控序列是否突变无关。     

随机分离致病性白念珠菌17例的基因分型

目的研究白念珠菌不同基因型的同源性,以及在菌株群中分布的特征,为白念珠菌的分子流行病学研究找到一个方法。方法扩增出白念菌株CDC3(保守基因)的部分片段并测序,应用Vector-NTI软件包进行比较。结果17株菌株被分为9个基因型,有8株菌株的基因型高度同源,有9株的基因同源性较高,这9株菌株的基因型在样本分布中占优势;高度同源的8株菌株与其它菌株的主要区别在于,在第195—205位缺少TTTCTTCTT,在第338—345位多了TAAGTAAG。结论菌株3等9个菌株的基因型在样本分布中占优势,可能是进化过程中为适应宿主的结果。     

白念珠菌CDR1基因表达与氟康唑耐药的关系

目的了解在白念珠菌氟康唑耐药或敏感菌株中CDR1基因的表达情况。方法抽提氟康唑耐药／敏感菌株的RNA,采用Northern blot技术观察CDR1基因的表达。结果白念珠菌耐药菌株CDR1基因的表达量明显高于对应的敏感菌株。结论白念珠菌CDR1基因的高表达与氟康唑耐药有关。     

Relationship between antifungal resistance of fluconazole resistant Candida albicans and mutations in ERG11 gene

Background The cytochrome P450 lanosterol 14a-demethylase （Ergllp） encoded by ERG11 gene is the primary target for azole antifungals. Changes in azole affinity of this enzyme caused by amino acid substitutions have been reported as a mechanism of azole antifungal resistance. This study aimed to investigate the relationship between amino acid substitutions in Erg11 p from fluconazole resistant Candida a/bicans （C. albicans） isolates and their cross-resistance to azoles. Methods Mutations in ERG11 gene were screened in 10 clinical isolates of fluconazole resistant C. albicans strains. DNA sequence of ERG11 was determined by PCR based DNA sequencing. Results In the 10 isolates, 19 types of amino acid substitutions were found, of which 10 substitutions （F72S, F103L, F1451, F198L, G206D, G227D, N349S, F416S, F422L and T482A） have not been reported previously. Mutations in ERG11 gene were detected in 9 isolates of fluconazole resistant C. albicans, but were not detected in 1 isolate. Conclusions Although no definite correlation was found between the type of amino acid substitutions in Ergllp and the phenotype of cross-resistance to azoles, the substitutions F72S, F1451 and G227D in our study may be highly associated with resistance to azoles because of their special location in Erg11p.     

白色念珠菌的耐药性和随机扩增DNA多态性分型研究

采用Etest药敏试验方法检测 30株临床分离白色念珠菌对 5种抗真菌药物的敏感性 ,并用随机扩增DNA多态性 (RAPD)分型方法对这些菌株进行基因分型。结果发现有两株对氟康唑耐药 ,且它们的RAPD带型有着高度相似性 ,提示RAPD带型可能与耐氟康唑基因有关。     

白念球功对氟康唑耐药性的研究

目的 探讨白念球菌对氟康唑耐药性的产生是否有适应性突变的因素。方法 选择对氟康唑敏感的白球菌野生Ｙ０１０９株,将其估含８μｇ／ｍｌ氟康唑的沙堡固体培养基上进行漂移试验诱导培养,计数其生长出的菌落并根据Ｃａｉｒｎｓ的理论进行曲线拟合。结果和结论：拟合出的曲线基本符合Ｐｏｉｓｓｏｎ曲线分布特点,根据Ｃａｉｒｎｓ的适应性突变理论及判定方法,初步证实白念球菌对氟康唑耐药主要是因药物本身的后天诱导作用,使该     

白假丝酵母ERG11基因突变分析

目的 探讨白假丝酵母氟康唑作用的靶酶编码基因（ERG11）突变与氟康唑耐药性的关系。方法选择从尿道、阴道、口咽部、呼吸道、血液和前列腺液分离的10株氟康唑耐药白假丝酵母菌和3株敏感菌株，以抽提的白假丝酵母菌基因组DNA为模板．对ERG11基因序列进行PCR扩增，PCR产物直接DNA序列测定，最后应用BLAST和ClustalW软件对测序结果进行比较。结果13侏白假丝酵母菌的ERG11基因序列（以已知序列第1个ATG起始密码的A作为第1个记数单位）共有21个位点发生突变，其中17个同义突变位点和4个错义突变位点；在第348bp位点和第383bp位点．耐药菌株和药物敏感株均可发生D116E和K128T变异；在靶酶活性中心血色素结合区和疏水端螺旋区的对应基因片段．耐药株在第1309bp位点可致V437I变化；在第1320bp位点耐药菌株发生碱基突变．形成A、C基因杂合子，有可能导致N440K变化。结论（1）ERG11基因的D116E和K128T位点变异可能与白假丝酵母菌耐药无关；（2）ERG11基因的V437I和N440K位点的改变．可能与耐药形成有关。     

白假丝酵母ERG11基因突变分析

目的 探讨白假丝酵母氟康唑作用的靶酶编码基因(ERG11)突变与氟康唑耐药性的关系。方法 选择从尿道、阴道、口咽部、呼吸道、血液和前列腺液分离的10株氟康唑耐药白假丝酵母菌和3株敏感菌株,以抽提的白假丝酵母菌基因组DNA为模板,对ERG11基因序列进行PCR扩增,PCR产物直接DNA序列测定,最后应用BLAST和ClustalW软件对测序结果进行比较。结果 13株白假丝酵母菌的ERG11基因序列(以已知序列第1个ATG起始密码的A作为第1个记数单位)共有21个位点发生突变,其中17个同义突变位点和4个错义突变位点;在第348bp位点和第383bp位点,耐药菌株和药物敏感株均可发生D116E和K128T变异;在靶酶活性中心血色素结合区和疏水端螺旋区的对应基因片段,耐药株在第1309bp位点可致V437I变化;在第1320bp位点耐药菌株发生碱基突变,形成A、C基因杂合子,有可能导致N440K变化。结论 (1)ERG11基因的D116E和K128T位点变异可能与白假丝酵母菌耐药无关;(2)ERG11基因的V437I和N440K位点的改变,可能与耐药形成有关。     

Analysis of genital Candida albicans infection by rapid microsatellite markers genotyping

Background Candida albicans （C. albicans） infection, often occurring in genital candidiasis, has increased dramatically recently. Developing an efficient C. albicans typing method may contribute to understanding its epidemiological characteristics and guiding efficient treatment. We used rapid microsatellite genotyping assay for interstrain differentiation of C. albicans isolates and explored some characteristics of its spread. Methods DNA was extracted from C. albicans isolates from gentalia, recta and mouths of 39 female cases and 27 male cases of genital candidiasis. Three fluorescent primers for the microsatellite markers in conserved genes （CDC3, EF3 and HIS3） of Co albicans were used to amplify the isolates DNA by PCR. Fluorescent signals were read with an automatic sequencer and analyzed with GeneScan software. Results Analysis of the three microsatellites markers showed 18 gene allelic associations in genital C. albicans infected patients： 10 allelic associations in female and 11 allelic associations in male, of which 3 allelic associations shared by both genders covered 71% of infections. The most dominant allele association of pathogenic strains for both genders was 116：124, 122：131,160：200 that covered about 50% of infection. Gentalia and recta shared the same strains in 80% of female patients, but in only 3.8% of male patients. There were 2.7% female patients, but no males, with same strain in both gentalia and mouths. Five of seven genital Co albicans infected couples had the same allelic associations of which 4 were the dominant pathogenic C. albicans susceptible for both genders. Conclusions The predominant allelic association of the pathogenic strain in genital C. albicans infection is 116：124, 122：131, 160：200. Vaginal pathogenic strains are probably maintained from the rectal reservoir. Pathogenic strains of male patients are probably from frequent sexual intercourse. The aggressiveness of some strains varies with gender.     

贵州省幽门螺杆菌CagA基因表达与甲硝唑耐药性

目的:探讨贵州地区上消化道疾病患者幽门螺杆菌(H pylori)细胞毒素相关蛋白(CagA)基因的表达及其与甲硝唑(MTZ)耐药的相关性。方法:从上消化道疾病患者胃黏膜分离50株H pylori,经聚合酶链反应(PCR)检测CagA基因,E-test法检测MTZ耐药情况,测序并应用BLAST分析MTZ敏感株(MTZS)与耐药株(MTZR)CagA基因的分子差异。结果:50株H pylori中有92%的菌株表达CagA,其阳性表达率在消化性溃疡患者与慢性胃炎患者无差异;50株H pylori对MTZ总耐药率为54%,CagA阳性及阴性菌株耐药率分别为54.3%及50.0%(P>0.05);基因测序结果显示MTZS及MTZR两组间CagA基因突变无统计学差异。结论:贵州地区CagA阳性菌株与上消化道疾病密切相关,但与疾病的严重程度无明显关系,CagA基因表达及基因变异与MTZ耐药性之间无明显关系。