周期性张应变对人牙髓细胞L型钙离子通道基因表达的影响

目的：研究机械张应变对人牙髓细胞L型钙离子通道基因表达的影响。方法：取新鲜拔除的健康恒牙牙髓,采用组织块贴壁法培养原代人牙髓细胞,通过Flexcell细胞应力培养系统,分别施加2％和8％的周期性张应变,加载时间分别为0．5、12、24h,观察机械牵张力对人牙髓细胞L型钙离子通道不同亚型表达的影响。结果：人牙髓细胞（HDPCs）主要表达L型钙离子通道仪1亚基C亚型（L type calcium channel α1 C subunit,Cav 1．2）和L型钙离子通道d1亚基D亚型（L type calcium channel α1 D subunit,Cav1．3）,未见L型钙离子通道仅1亚基S亚型（L type calcium channel α1 S subunit,Cav1．1）和L型钙离子通道α1亚基F亚型（L type calcium channel α1 F subunit,Cav1．4）的表达。在2％和8％张应变下,加载0．5h至12h Cav1．2和Cavl．3均有上调（P〈0．05）,而加载24h后2个亚型与对照组问均无明显差异（P〉0．05）。结论：人牙髓细胞主要表达Cav1．2和Cav1．3,应力和作用时间对L型钙离子通道表达量有明显影响。     

周期性张应力对人牙周膜细胞生物学活性的影响

目的:探讨周期性张应力对体外培养的人牙周膜细胞生物活性的影响。方法:对体外培养的人牙周膜细胞施加不同大小的周期性牵张力(6%、12%、20%细胞表面拉伸率),24h后检测其对细胞的总蛋白合成、ALP活性、Col-Ⅰ和OCN分泌的影响。实验结果用SPSS 13.0进行统计分析。结果:较小的牵张力对人牙周膜细胞生物活性无显著影响,随力值的增大,牵张力能够呈强度依赖性抑制人牙周膜细胞的活性,减少总蛋白合成及ALP活性,抑制Col-Ⅰ及OCN的分泌。结论:周期性张应力可以抑制人牙周膜细胞的生物学活性,并呈强度依赖性。     

周期性张应变对人牙周膜细胞迁移的影响

目的 探讨周期性张应变对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)迁移的影响及其相关机制,为进一步了解机械力对hPDLC功能的影响提供资料.方法 应用FX-4000T细胞应变加载系统,对体外培养的hPDLC施加周期性张应变,牵张幅度分别为10%和20%,加载时间为6 h和24 h,频率均为0.1 Hz,以未加载的静态细胞作为对照组,应用划痕法观察hPDLC的迁移,蛋白质印迹法检测hPDLC的基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)的表达变化;用细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的特异性抑制剂PD98059预处理hPDLC后,在0.1 Hz、10%幅度条件下,加载6 h,检测细胞p-ERK1/2和MMP-9表达的变化.用细胞迁移划痕法观察加载10%和20%幅度张应变,观察24 h后PD98059和MMP家族的抑制剂强力霉素(doxycycline,DOX)对hPDLC迁移的影响.结果 细胞迁移划痕实验结果显示,牵张幅度和加载时间均可显著促进细胞迁移.与静态组相比,施加牵张幅度分别为10%和20%的张应变6 h后,hPDLC迁移变化不明显,但加载24 h后,10%和20%幅度的张应变均显著促进了hPDLC迁移(P<0.05),细胞迁移率分别为(45 ±8)%和(66±14)%,且20%比10%幅度牵张对细胞迁移的促进作用更显著(P<0.05).蛋白印迹法结果显示,周期性张应变促进了hPDLC的MMP-9表达.牵张幅度对细胞MMP-9的表达有显著影响(P<0.05),但加载时间对细胞MMP-9的表达无显著影响.ERK1/2的抑制剂PD98059不仅可以明显抑制张应变诱导的p-ERK1/2活化,而且可通过ERK信号通路明显抑制张应变诱导的细胞MMP-9表达.细胞迁移划痕实验还证实,加载幅度分别10%和20%的张应变24 h后,抑制剂PD98059和DOX均能有效抑制周期性张应变诱导的hPDLC迁移.结论 周期性张应变可通过激活hPDLC的ERK信号通路,促进细胞的MMP-9表达,从而诱导体外培养的hPDLC迁移.     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓细胞生物学活性的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对体外培养的人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPCs)生物学活性的影响.方法:常规组织块培养法获得HDPCs,采用四唑盐比色(MTT)法、ALP活性检测法观察不同浓度bFGF(0.1、1、10、100 μg/L)对体外培养的HDPC粘附性、伸展性以及ALP活性的影响.结果:不同浓度bFGF均可提高HDPCs粘附性和伸展性,与对照组相比P＜0.05;不同浓度bFGF与HDPCs共同培养一定时间后,均能显著抑制其ALP活性(P＜0.05);并且浓度越高,抑制作用出现的时间越早,100 μg/L组在培养第1天时与对照组相比P＜0.05.结论:0.1 ～ 100 μg/L范围内不同浓度bFGF均能促进HDPCs的粘附性和伸展性,并可抑制HDPCs的ALP活性.     

周期性张应力对人牙周膜细胞Periostin表达的影响

目的:研究在机械力作用下人牙周膜细胞(h PDLCs)内Periositn(PN)m RNA和蛋白的表达变化。方法:采用组织块酶消化法培养h PDLCs,经鉴定后将第4代细胞随机分为4个实验组和1个对照组(非加力组),4个实验组分别采用Flexcell-5000 Tension System应力加载系统对h PDLCs加载6、12、24、48 h的周期性张应力;然后采用q RT-PCR、Western blot分别检测各组h PDLCs中PN m RNA和蛋白的表达变化。结果:在正常h PDLCs中表达PN m RNA和蛋白;与对照组相比,加力6 h后,PN m RNA和蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);加力12 h后,PN m RNA和蛋白的表达均逐渐升高,并持续至24 h达最高水平(P<0.05);而在加力48 h时,PN m RNA和蛋白表达均明显下降,并恢复至对照组的表达水平(P>0.05)。结论:机械力可诱导h PDLCs中PN的表达增强及活化,且具有时间依赖性;提示PN可能参与了细胞内生物力学信号的转导。     

五倍子水提取物对内毒素抑制人牙髓细胞活性的影响

目的：观察不同浓度及不同作用时间的五倍子水提取物对内毒素抑制人牙髓细胞活性的影响。方法：采用组织块法体外培养牙髓细胞,以不同浓度五倍子水提取物（1．25×10^3、2．5×10^3、5×10^3、10×10^3、20×10^3μg／L）和1×10^3μg／L内毒素作用于人牙髓细胞,用四唑盐比色试验（MTT法）检测细胞活性,采用单因素方差分析（完全随机设计）对实验数据进行统计学分析。结果：低浓度（1．25×10^3、2．5×10^3、5×10^3μg／L）五倍子水提取物能明显拮抗100μg／mL内毒素对细胞活性的抑制作用（P〈0．01）,2．5×10^3μg／L五倍子水提取物拮抗1×10^3μg／L内毒素对细胞活性的抑制作用第3天开始明显增加,并呈时间依赖性。结论：低浓度五倍子水提取物能够拮抗内毒素对人牙髓细胞活性的抑制作用。     

机械压应力刺激对人牙髓干细胞体外增殖矿化的影响

目的:研究不同大小的周期性机械压应力刺激对人牙髓干细胞(h DPSCs)体外增殖和矿化的影响。方法:用体外离心力加压模式,对各组h DPSCs施加30 min/d、大小分别为170、210、250 g的周期性机械压应力刺激,以不加力组作为对照。分别利用CCK-8试剂盒及碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测各组h DPSCs的增殖情况及ALP活性;茜素红染色检测各组h DPSCs的矿化能力;透射电镜观察各组h DPSCs的超微结构。结果:3种大小的机械压应力刺激均可显著抑制h DPSCs增殖、ALP活性显著下降(P<0.05);各加力组形成的矿化结节明显减少,且以250 g的应力刺激对矿化能力的抑制最为显著(P<0.05)。结论:一定大小、频率范围内的周期性机械压应力刺激可抑制人牙髓干细胞体外增殖和矿化,且对矿化的抑制作用与周期性机械压应力大小成正相关。     

NGF、bFGF对体外培养人牙髓细胞增殖与分化的作用

目的:研究NGF、bFGF及两者联合应用对体外培养人牙髓细胞(HDPC)的增殖与分化作用的影响。方法:用MTT和ALP活性检测法,观察对照组(10ml/L FBS的DMEM培养液)与实验组(10U/ml NGF、10μg/L bFGF、10U/ml NGF 10μg/L bFGF、5U/ml NGF 5μg/L bFGF、1U/ml NGF 1μg/L bFGF)对体外培养的第5~8代HDPC增殖与分化作用的影响。对实验数据行Dunnett-t检验。结果:与对照组相比,10U/ml的NGF可显著促进HDPC的增殖(P<0.05);对ALP的活性没有明显的增强作用(P>0.05);10μg/LbFGF可显著促进HDPC的增殖(P<0.05),但对HDPC的ALP活性,却有一定的抑制作用(P>0.05);10U/ml NGF 10μg/L bFGF和5U/ml NGF 5μg/L bFGF既可显著地促进HDPC增殖(P<0.05),又可增强HDPC的ALP活性(P<0.01)。结论:一定浓度的NGF与bFGF组合既可促进HDPC增殖,又可促进其分化,两者对HDPC有显著的功能放大性协同增强作用。     

内皮素促人牙髓细胞生长作用的体外研究

目的探讨不同浓度内皮素－１（ＥＴ－１）对人牙髓细胞的促增殖作用。方法采用人牙髓细胞体外培养技术和四唑盐（ＭＴＴ）显色分光光度法。结果不同浓度ＥＴ－１均有程度不同的促人牙髓细胞生长作用,并呈浓度依赖性。结论ＥＴ－１为促人牙髓细胞生长因子,可能对牙髓组织的再生修复起作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对人体外培养牙髓细胞增殖的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养的人牙髓细胞增殖和分化的影响.方法 以常规体外组织块培养法获得牙髓细胞,采用MTT比色测定bFGF对牙髓细胞的影响.结果 bFGF在1～100ng/ml浓度范围内,可促进人牙髓细胞的增殖,与对照组相比差异显著(P<0.01).bFGF最小显效浓度是1ng/ml,而10ng/ml的bFGF促增殖作用最强,与1ng/ml的bFGF相比差异显著(P<0.01),但与100ng/ml的bFGF无显著差异(P>0.05).从第3天起,与对照组相比bFGF对人牙髓细胞有显著的促增殖作用(P<0.01).结论 bFGF能明显促进人牙髓细胞的增殖,在牙髓组织康复治疗中起到重要作用.     

卵黄高磷蛋白对人牙髓细胞增殖的影响

目的研究卵黄高磷蛋白对体外培养的人牙髓细胞增殖的影响。方法 4个实验组分别采用1、10、100、1000ng/mL的卵黄高磷蛋白,对照组采用10%胎牛血清,分别作用于体外培养的第6代人牙髓细胞,每组8个标本,培养3、6day后分别对每组作MTT法检测,OD值进行t检验。实验组用100ng/mL卵黄高磷蛋白,对照组用10%胎牛血清作用上述人牙髓细胞,培养48h,常规消化,固定,经DNA荧光染色后,用流式细胞仪测定DNA含量。结果 1～100ng/mL卵黄高磷蛋白作用3、6day均促进人牙髓细胞增殖。10、100ng/mL卵黄高磷蛋白作用6day,对人牙髓细胞增殖的促进作用与对照组相比有显著差异(P<0.05)。1000ng/mL卵黄高磷蛋白作用3、6day均抑制人牙髓细胞增殖。100ng/mL卵黄高磷蛋白作用人牙髓细胞,与对照组相比DNA合成前期细胞比例明显降低,而DNA合成期细胞比例和细胞增殖指数均显著增高。结论卵黄高磷蛋白具有促进人牙髓细胞增殖和DNA合成的作用,可能主要通过促进处于合成前期的细胞进入合成期来实现的。     

碱性成纤维细胞生长因子对体外培养人牙髓细胞增殖和迁移的影响

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）对体外培养人牙髓细胞增殖、迁移活性的影响。方法以常规组织块培养法体外获得人牙髓细胞,实验组分别加入终浓度为1.0、5.0、10.0和50.0ng/ml的bFGF,对照组仅加入等量的空白培养基,采用CCK-8法分别测定450nm下各组光吸收度A值,研究bFGF对牙髓细胞增殖活性的影响;应用Transwell小室培养法,研究bFGF对牙髓细胞迁移活性的影响。结果与对照组相比,bFGF在1.0～50.0ng/ml浓度下可促进牙髓细胞的增殖（P〈0.05）,bFGF最低显效浓度为1.0ng/ml,最佳显效浓度为10.0ng/ml。bFGF在1.0～50.0ng/ml浓度下诱导细胞迁移（P〈0.05）。结论 bFGF可诱导体外培养人牙髓细胞的增殖和迁移,在牙髓牙本质复合体修复中可能发挥重要作用。     

Effect of ginsenoside Rg1 on proliferation and differentiation of human dental pulp cells in vitro

Background:  Human dental pulp cells (hDPCs) have the potency to proliferate and differentiate into odontoblasts and play an important role in dentine formation and reparation. The aim of the present study is to evaluate the effects of ginsenoside Rg1 on the proliferation and differentiation of hDPCs. Methods:  hDPCs were incubated with different concentrations of ginsenoside Rg1 (0.1, 0.5, 2.5, 5, 10 and 20 μmol/L). The effects of ginsenoside Rg1 on the proliferative ability of hDPCs were evaluated by a fibroblast colony forming test, MTT assay and flow cytometry for cell cycle. The control group, osteogenic induction group, ginsenoside Rg1 (5 μmol/L) group and combination group were designed, and alkaline phosphatase (ALP) activity and FQ‐PCR for gene expressions of dentine sialophosphoprotein (DSPP) and dentine matrix protein 1 (DMP1) were performed to evaluate the differentiation of hDPCs. Results:  The proliferative ability of hDPCs in ginsenoside Rg1 was significantly enhanced (p < 0.05), especially in the ginsenoside Rg1 (5 μmol/L) group. ALP activity and gene expressions of DSPP and DMP1 were increased in the induction group, ginsenoside Rg1 group, and their combination group compared with the control group (p < 0.05). Conclusions:  The results indicate that ginsenoside Rg1 promotes the proliferation and differentiation of hDPCs.     

成骨生长肽对体外人牙髓细胞增殖和矿化作用的影响

目的 观察成骨生长肽(OGP)对体外人牙髓细胞增殖和矿化作用的影响.方法 酶消化组织块法体外培养人牙髓细胞(hDPCs),倒置相差显微镜观察hDPCs的形态.CCK-8、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测筛选最佳浓度OGP;最佳浓度组、对照组、单纯矿化液组和含最佳浓度的矿化液组做茜素红、Von Kossa染色和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测.结果 酶消化组织块法可以良好的体外培养hDPCs;OGP浓度在10-7 ～ 10-11 mol/L均能促进hDPCs增殖和ALP活性:促增殖最佳浓度为10-10 mol/L,随时间延长,与10-9 mol/L浓度组间差异无统计学意义;OGP浓度为10-9 mol/L时能显著增强ALP活性.茜素红和Von Kossa染色观察第14、21天,四组均有钙化结节形成,联合组结节最大,数量最多;RT-PCR结果显示第7、14、21天,联合组的Ⅰ型胶原、牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨钙素(OCN)的mRNA表达量均高于其他各组(P ＜ 0.01).结论 OGP能促进体外hDPCs的增殖和分化,结合两者最优浓度为10-9 mol/L;茜素红和Von Kossa染色可以观察钙化结节形成过程;OGP联合矿化诱导液可以显著提高体外hDPCs的矿化.     

血小板血浆对人牙髓细胞增殖的影响

目的：观察血小板血浆及其细化成分对人牙髓细胞增殖的影响。方法：使用因正畸而拔除的人牙的牙髓细胞，用细胞定量测定试剂盒测定细胞增殖情况。结果：5％的多血小板血浆（platelet-rich plasma，PRP）、5％和10％的洗净血小板（washed platelet，WPLT）均明显地促进了人牙髓细胞的增殖，而且WPLT的作用较PRP更显著。乏血小板血浆（platelet-poor plasma，PPP）呈浓度依赖性地抑制了人牙髓细胞增殖，5％WPLT促进人牙髓细胞增殖的作用。结论：去除血浆成分的WPLT对培养的人牙髓细胞增殖有明显的促进作用；血浆中可能存在对抗血小板生长因子作用的因子。     

Quantification of lactate-dehydrogenase and cell viability in postmortem human dental pulp

Understanding pulp repair and regeneration requires being familiar with this tissue's behavior under extreme conditions, such as postmortem state where an abrupt interruption of tissue blood supply occurs. The purpose of this study was to quantify cell viability and the amount of lactate-dehydrogenase (LDH) expressed in human pulp tissue 6, 12, and 24 hours postmortem to establish how long dental pulp remains viable after death. Pulp samples were obtained from 14 unidentified corpses of people who had received lethal injuries in car accidents or from gunshot wounds; they had at least three caries- and restoration-free incisors. Half of each sample was used for determining cell viability at three different time intervals. The rest of each sample was used for quantifying LDH expression at the same time intervals. Another 14 pulp samples were obtained from live patients' healthy premolars where extraction was indicated for orthodontic reasons to assess normal LDH value in pulp tissue. The results showed cell viability decreasing from 89 to 68 to 41% measured 6, 12, and 24 hours postmortem, respectively. LDH expression in healthy pulps was 246 U/mg pulp weight. Expression increased after death from 249 U/mg at 6 hours to 337 U/mg at 12 hours. LDH expression decreased to 131 U/mg 24 hours postmortem. These findings are valuable in understanding dental pulp survival capability under extreme conditions that may have important clinical significance in terms of repair and regeneration.     

Effect of mineral trioxide aggregate on proliferation of cultured human dental pulp cells

AIM: To investigate the effect of mineral trioxide aggregate (MTA) on the proliferation of human dental pulp (HDP) cells ex-vivo. METHODOLOGY: Human dental pulp cells were cultured with MTA or calcium hydroxide-containing cement (Dycal) using culture plate inserts. Control cells were cultured with culture plate inserts only. Cell proliferation was measured for up to 14 days using a Cell Counting kit, and the concentration of calcium ions released from the tested materials was assessed using a Calcium E-test kit. To confirm that the effect of MTA was attributable to released calcium ions, cell proliferation was measured in the presence of exogenous calcium chloride as a source of calcium ions while in the absence of MTA. RESULTS: Mineral trioxide aggregate significantly stimulated cell proliferation after 12 days, whereas Dycal had no such effect. The number of calcium ions released from MTA was significantly higher than that released from Dycal. Following the addition of calcium chloride, cell proliferation increased in a dose-dependent manner after 12 days. Moreover, cell proliferation showed a similar pattern whether a given concentration of calcium ions was produced by calcium chloride or by release from MTA. CONCLUSIONS: In this ex-vivo study, the elution components such as calcium ions from MTA had higher proliferation ability of HDP cells than control and Dycal.     

Carisolv对人牙髓细胞的体外毒性研究

目的:对化学机械去腐材料-Carisolv进行体外生物学毒性评价。方法:利用原代培养的人牙髓细胞,采用琼脂覆盖法和四唑盐(MTT)比色法评价Carisolv的体外细胞毒性。结果:琼脂覆盖法中出现脱色区和部分细胞溶解,呈轻度细胞毒性;MTT法中A值和RGR随接触时间增加而逐渐减小,毒性逐渐增大,1 min和5 min组细胞毒性为1级,30 min组细胞毒性达到2级。结论:Carisolv有轻微的细胞毒性,临床操作时要注意对牙髓牙周等软组织的保护。