ERK在LPS诱导大鼠雪旺氏细胞TNF-α表达中的作用

目的 研究细胞外信号调节激酶（ERK）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠雪旺氏细胞肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的作用。方法 采用Westernblot检测细胞中ERK激酶的活性；用ERK的特异性抑制剂（PD98059）预处理细胞后，ELISA检测细胞中TNF-α水平；RT-PCR检测细胞中TNF-α mRNA的表达；用免疫荧光双标法检测ERK的表达定位。结果 LPS可显著激活雪旺氏细胞中的ERK信号通路，其激活高峰在LPS刺激后30～45min，60min后ERK磷酸化水平开始逐渐下降；用PD98059预处理细胞后，可显著抑制细胞TNF-α以及TNF-α mRNA的产生；LPS刺激细胞后引起ERK磷酸化，PD98059可抑制该过程。结论 ERK信号通路的激活可能是LPS诱导TNF-α表达的前提。通过阻断细胞内信号转导通路来减少TNF-α及其他细胞因子的产生，为抑制周围神经损伤后的炎症以及免疫反应发生提供了一条新的思路。     

LPS对大鼠雪旺氏细胞iNOS表达的影响

目的：探讨内毒素脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）对大鼠雪旺氏细胞（Schwann cells,Scs）诱导型一氧化氮合酶（Inducible nitric-oxide synthase,iNOS）基因表达及一氧化氮（Nitric oxide,NO）生成的影响。方法：用不同浓度（1、10、100μg/ml）和同一浓度不同时间（1、2、4、6小时）的LPS刺激雪旺氏细胞,分别用RT-PCR和亚硝酸盐含量测定观察细胞iNOS mRNA的表达量和细胞培养液中亚硝酸盐的水平,同时用免疫荧光细胞化学染色检测iNOS的细胞定位。结果：用LPS10μg/ml刺激2小时后,iNOS mRNA的表达增加,4小时表达活性最高。细胞上清中的亚硝酸盐含量高峰在6小时。免疫细胞化学证明LPS诱导雪旺氏细胞iNOS的表达定位在胞浆。结论：LPS可在转录水平上诱导雪旺氏细胞iNOS mRNA表达,促进NO的合成,提示雪旺氏细胞在周围神经系统炎症过程中可能发挥免疫调节作用。     

雪旺氏细胞与神经再生的研究进展

<正> 显微外科技术的发展对周围神经损伤后的修复起了重要作用,也曾使很多病人受损肢体的功能得到了不同程度的恢复,有的甚至达到十分满意的程度。然而,由于对周围神经损伤后的修复机理了解甚少,所以精确度达到束膜缝合的显微外科技术也只能使术后优良率提高到80%左右~7。于是一些学者主张从基础研究着手,探讨影响神经再生的各种因素,并提出了再生微环境(Microenvironment)的概念~4。认为微环境的成分是决定受损神经形态和功能     

雪旺氏细胞对中枢神经轴突生长的支持和促进作用

胚胎大鼠脊髓植块接种于纯度〉９５％的单层人胎儿雪旺氏细胞表面进行培养，观察雪旺氏细胞对神经突起生长的支持作用，脊髓神经突起在雪旺氏细胞表面活跃生长，突起生长速度〉４５０μｍ／天，与对照组相比有显著性差异。将长于鼠尾胶上的雪旺氏细胞移植于成年大鼠脊髓损伤腔内，移植后２１天后，透射电镜观察，有髓或无髓纤维长人移植物中，移植后３０天，长入移植物中的轴突更丰富，而无细胞的胶原移植物中未见轴突长入。结果表明     

雪旺氏细胞的发育、存活及其调控机制

雪旺氏细胞 (schwann cells,SC)是周围神经系统的胶质细胞 ,在神经再生过程中起到至关重要的作用。本文阐述SC的发育、存活及其相关的调控因子 ,了解了 SC及其前体的生物学特性 ,轴突源性 Neuregulin和 SC自分泌调控的信号对其存活的调控 ,以及 SC凋亡的调控 ,以便在体外模拟体内环境大量扩增 SC,解决目前组织工程神经修复中的难点     

体外培养雪旺氏细胞纯化方法的探讨

本文比较了雪旺氏细胞体外培养的主要纯化方法,单纯酶消化法、阿糖胞苷抑制法、差速贴壁分离法、低浓度酶传代法、综合纯化法,以寻找有效的纯化方法。结果显示,综合纯化法获得的SCs纯度最高。     

体外培养人胎儿雪旺氏细胞的增殖及其细菌动力学研究

新鲜和液氮保存３个月的人胎儿雪旺氏细胞体外培养８天。细胞数量增加一倍，培养液中加入二丁基环磷酸腺苷和牛脑垂直体出液，细胞增倍时间缩短近一倍。流式细胞计测定结果显示，培养早期，Ｓ期，Ｇ２＋Ｍ期细胞所占比例〈５％，随着培养时间的处长，其比例逐渐增加，第６天达高峰，环磷酸腺苷和垂体浸出液作用３天，Ｓ期，Ｇ２期＋Ｍ期比例达１５％。     

巨噬细胞与雪旺氏细胞在周围神经再生中的相互调控

巨噬细胞与雪旺氏细胞在周围神经再生中的相互调控马向阳（于涯涛审校）（第一军医大学解剖学教研室，广州５１０５１５）周围神经的损伤与再生的研究虽已有百年以上的历史，但由于周围神经系统的特殊性和再生的复杂性，它仍是当前生物医学领域的一个重要课题。近年来，越...     

雪旺氏细胞的发育、存活及其调控机制

雪旺氏细胞（schwann cells,SC)是周围神经系统的胶质细胞，在神经再生过程中起到至关重要的作用。本阐述SC的发育，存活及其相关的调控因子。了解了SC及其前体的生物学特性。轴突源性Neuregulin和SC自分泌调控的信号对其存活的调控。以及SC凋亡的调控。以便在体外模拟体内环境大量扩增SC，解决目前组织工程神经修复中的难点。     

体外培养人胎儿雪旺氏细胞的增殖及其细胞动力学研究

新鲜和液氮保存3个月的人胎儿雪旺氏细胞体外培养8天,细胞数量增加一倍,培养液中加入二丁基环磷酸腺苷和牛脑垂体浸出液,细胞增倍时间缩短近一倍.流式细胞计测定结果显示,培养早期,S期、G2+M期细胞所占比例<5%,随着培养时间的延长,其比例逐渐增加,第6天达高峰,环磷酸腺苷和垂体浸出液作用3天,S期、G2期+M期比例达15%.实验结果表明:人胎儿雪旺氏细胞在体外增殖缓慢,环磷酸腺苷和垂体浸出液能刺激雪旺氏细胞分裂;冷冻复苏后的雪旺氏细胞其生长特征以及对环磷酸腺苷和垂体浸出液的反应与新鲜细胞相同.     

雪旺氏细胞植入桥接体修复周围神经缺损的研究进展

本文就用雪旺氏细胞植入周围神经桥接体修复周围神经缺损的理论依据、实验效果以及获取雪旺氏细胞的方法进行了综述。并且讨论了将雪旺氏细胞植入胎儿神经修复周围神经缺损的可能性。     

α-硫辛酸降低脂多糖诱导的Raw264.7细胞TNF-α的分泌

目的观察α-硫辛酸(ALA)对脂多糖(LPS)在体外诱导的Raw264.7细胞TNF-α释放及机制。方法用ALA或者ALA联合ERK或NF-κB的抑制剂或者激活剂预处理2 h,再用LPS(1 mg/L)体外刺激巨噬细胞Raw264.7;采用MTT法检测ALA对Raw264.7细胞活力影响,利用ELISA方法对Raw264.7释放在培养上清中的细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)的浓度,及用Western blot方法检测T-p ERK、p ERK和NF-κB的表达。结果 ALA可抑制LPS诱导的Raw264.7细胞TNF-α表达(P0.05),用ALA联合ERK或NF-κB的激活剂预处理后可减弱ALA产生的抑制效果(P0.05)。同时ALA抑制LPS诱导的Raw264.7细胞p ERK和NF-κB的表达(P0.05),用ALA联合ERK或NF-κB的抑制剂预处理后可加强ALA产生的抑制效果(P0.05)。结论 ALA可能通过抑制LPS诱导的Raw264.7细胞的ERK和NF-κB信号通路来抑制TNF-α释放。     

脊神经节来源的人胎儿雪旺氏细胞的体外培养研究

实验介绍一种简便快速的从人胎儿脊神经节中获得雪旺氏细胞的方法.取孕15～20周人胎儿腰部脊神经节,将其切成0.5mm~3大小,接种于涂有鼠尾胶的圆盖玻片上,为了消除成纤维细胞,每隔2～3天将组织块移种到新的盖玻片上,共2～3次,最后一次移种后,培养液中加入牛脑垂体浸出液(200μg/ml)培养7～10天以刺激细胞增殖,每个脊神经节可获细胞5×10~6,细胞传代培养生长良好.根据形态学以及抗S—100蛋白免疫细胞化学染色阳性标准计数,雪旺氏细胞的纯度超过96%.扫描电镜和透射电镜显示典型的雪旺氏细胞的形态学特征.     

简易雪旺氏细胞培养方法及用于凋亡实验的研究

目的：寻找一种快速简便的雪旺氏细胞培养方法以期获得研究神经再生的细胞材料并用于细胞凋亡的实验研究。方法：采用两次差速贴壁结合Ara-c法获得雪旺氏细胞,加入过氧化氢并经1％的碘化吡啶（PI）染色观察雪旺氏细胞凋亡的情况。结果;采用该法能获得较纯的雪旺氏细胞,加入过氧化氢后经1％的碘化(PI)杂色雪旺氏细胞有不同程度的凋亡。结论：过氧化氮产生的氧自由基能诱导细胞的凋亡,提示在神经组织的创伤过程中神经胶质细胞的凋亡可能与氧自由基损伤有关。     

雪旺氏细胞在周围神经损伤修复中的作用

雪旺氏细胞是周围神经系统特有的一种细胞，由Schwann氏(1839)首先发现并命名。多年研究表明，雪旺氏细胞在周围神经修复中起着功能性的角色，是周围神经微环境的重要成分，促进轴突生长的重要因素。Fansa等发现，将体外培养的雪旺氏细胞植入去细胞成分的骨路肌桥接鼠坐骨神经缺损，显促进了神经再生。wejdner等，实验证明将雪     

人胎儿雪旺氏细胞的体外培养及其纯化研究

本实验用酶消化法从孕１４～１９周人胎儿周围神经中分离培养雪旺氏细胞，结合差速贴壁和阿糖胞苷处理进行纯化，根据Ｓ－１００蛋白免疫细胞化学染色和形态学特征，分析不同时期雪旺氏细胞的纯化程度。实验结果显示：培养４ｄ，倒置相差显微镜下观察，雪旺氏细胞呈典型的双极或三极形，端对端或旋涡状排列，Ｓ－１００蛋白免疫细胞化学染色呈阳性反应，其比例约占９８％；在２～３周内，雪旺氏细胞的纯度维持在８５％～９０％；培养３５ｄ，雪旺氏细胞约占８０％；单纯采用阿糖胞苷或差速贴壁处理，培养３５ｄ，雪旺氏细胞约占７０％；原代培养９２ｄ，传代１１代细胞生长良好。实验结果表明，多种方法联合使用较单一方法所得的纯度高。本方法快速、简便，能为雪旺氏细胞作为移植材料提供足够的来源。     

天麻素对M1型小胶质细胞中TNF-α和CD86表达的影响

目的:研究天麻素(Gastrodin)对脂多糖(LPS)诱导激活的M1型小胶质细胞标记物肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和CD86表达的影响.方法:将BV2小胶质细胞随机分为对照组(control)、脂多糖组(LPS)和脂多糖+天麻素组(LPS+G),利用LPS诱导BV2细胞激活并向M1型转化,使用免疫荧光双标染色和We...     

胎儿神经加自体雪旺氏细胞桥接周围神经缺损的实验研究

目的 探讨自体雪旺氏细胞植入胎儿神经后修复周围神经缺损的效果,寻找替代自体神经移植的材料。方法 用Wistar大鼠80只切断左侧大腿坐骨神经,造成15mm缺损,分别用自体神经(A组),液氮冷冻胎儿神经(B组),液氮冷冻胎儿神经加自体雪旺氏细胞粗制品(C组)进行桥接。于术后4、12、24周取桥体、桥体远端坐骨神经,分别行电镜、光镜观察、图像分析和电生理检测,所得数据经单因素方差分析和q检验。结果 A组和C组间有髓纤维数目、无髓纤维数目、复合动作电位峰值恢复率、传导速度恢复率均无显著差异,两组神经再生效果相近,而B组的再生效果则不及A、C两组;B组与A组,B组与C组分别作两两比较,部分指标存在显著差异(P<0.01)。结论 作者认为植入自体雪旺氏细胞的胎儿神经桥接周围神经缺损优于单纯胎儿神经桥接,是一种良好的替代自体神经的桥接物,有进一步研究价值和临床应用前景。     

脂多糖调节TNF-α在细胞滋养细胞的表达及其临床意义

目的:探讨脂多糖对TNF-α在细胞滋养细胞表达的调节作用.方法:留取正常早孕绒毛,分离细胞滋养细胞,用无血清FD培养基培养,并给予不同浓度的脂多糖(0、25、50、100、200 ng/ml)作用24小时.然后,采用免疫荧光激光共聚焦技术和酶联免疫吸附实验检测TNF-α的表达情况.结果:脂多糖促进TNF-α在细胞滋养细胞的表达.荧光显微镜下见,脂多糖作用下的细胞滋养细胞内TNF-α的绿色荧光信号明显增强于未给予脂多糖的细胞滋养细胞.酶联免疫吸附实验证实脂多糖以剂量相关的模式促进TNF-α在细胞滋养细胞的表达.各浓度组TNF-α的含量分别为(179.95±35.58)、(334.75±74.09)、(390.36±79.14)、(447.72±27.81)和(482.37±39.14) pg/ml,各组间差异有统计学意义,P＜0.01.结论:脂多糖促进TNF-α在细胞滋养细胞的表达.