STAT1 ASON对肺纤维化大鼠BALF细胞因子和肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的:观察信号转导子与转录活化子1(STAT1)反义寡核苷酸(ASON)雾化吸入对博莱霉素(BLM)致肺纤维化大鼠肺泡灌洗液(BALF)PDGF-BB(血小板衍生生长因子-BB)、 TNF-α(肿瘤坏死因子-α )、 TGF-β1(转化生长因子-β1)、 IFN-γ(干扰素-γ)表达及肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响.方法:取45只健康雌性Wistar大鼠随机分成ASON组、 BLM组和生理盐水(NS)组各15只, 气管内分别灌注BLM(ASON组、 BLM组)和NS(NS组)复制肺纤维化模型和空白对照, ASON组于第0、 2、 4、 6天雾化吸入STAT1 ASON, BLM组和NS组雾化吸入NS, 各组分别于第7、 14、 28天均处死动物5只.观察肺泡炎和肺纤维化改变;收集BALF测定PDGF-BB、 TNF-α、 IFN-γ、 TGF-β1的水平;测定肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达.结果:ASON组第7、 14、 28天肺泡炎和肺纤维化程度明显低于同时间点BLM组( P <0.05).BLM组各时间点BALF中PDGF-BB、 TNF-α、 TGF-β1表达水平较NS组升高( P <0.05), ASON组较BLM组各时间点均降低( P <0.05);BLM组BALF中IFN-γ表达水平各时间点均低于NS组( P <0.05) , 但ASON组各时间点均较BLM组高( P <0.05).ASON组和BLM组第7、 14、 28天Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达高于NS组( P <0.05);ASON组第7、 14、 28天Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达均较同时间点BLM组降低( P <0.05).结论:STAT1 ASON雾化吸入能够减轻BLM诱导的肺泡炎和肺纤维化程度, 其机制可能与抑制BALF中TGF-β1、 PDGF-BB、 TNF-α的表达, 抑制IFN-γ下降而减少肺组织胶原的沉积有关.     

人脐带血干细胞抑制大鼠肺纤维化及肺巨噬细胞TGF-β1的表达

目的 研究人脐血间充质干细胞对博来霉素所致的大鼠肺纤维化及TGF-β1的影响.方法 取清洁级健康雄性SD大鼠60只随机分为博来霉素组(P组)、干细胞治疗组(M组)、地塞米松治疗组(D组)和阴性对照组(N组),取第2代人脐血间充质干细胞培养至第4代;P组、M组和D组分别经气管注入博来霉素制造肺纤维化模型,M组造模后立即经鼠尾静脉注入5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的干细胞,D组造模后第2天开始连续7d腹腔注射地塞米松,N组经气管注入等量生理盐水,在第7、14、28天处死各组大鼠,行HE、Masson染色,免疫组织化学法观察TGF-β1表达及标记细胞情况.结果 M组第7、14、28天肺组织均可见标记的干细胞;HE及Masson染色后观察,与N组相比,P组7d时肺泡炎最明显,28 d肺纤维化程度最重,M、D组较P组轻且病理切片可见M组较D组肺泡炎及纤维化程度稍轻;肺组织中TGF-β1在P组7d时最高,M、D组明显少于P组,M组减少更明显,组间差异有统计学意义.结论 人脐血间充质干细胞可以定植于肺组织中,在肺纤维化早期通过抑制TGF-β1的表达,可能减轻肺泡炎及肺纤维化.     

甘草甜素减轻博莱霉素致大鼠肺纤维化

目的探讨甘草甜素减轻博莱霉素致大鼠肺纤维化的机制。方法将大鼠随机分成对照组、博莱霉素致大鼠肺纤维化模型组、地塞米松(DXM)、甘草甜素低、中及高剂量治疗组。注博莱霉素后第28天,连续14 d同一时间段腹腔注射。第15天取左肺下叶供免疫组化检测TGF-β1、IFN-γ表达;右肺下叶供病理组织观察。用ELISA双抗体夹心法测定各组大鼠血清IL-4、IFN-γ含量。结果 (1)模型组大鼠肺组织成纤维细胞反应增强,TGF-β1染色及定量表达增强;而甘草甜素各组、DXM组减轻明显(P<0.01);(2)模型组大鼠血清IL-4含量较高,IFN-γ含量较低;甘草甜素各组及DXM组则相反(P<0.05)。(3)甘草甜素各组、DXM组肺组织IFN-γ染色及定量表达增强,甘草甜素低剂量组较其他组增强(P<0.01)。结论甘草甜素通过降低肺组织TGF-β1表达和血清IL-4含量,上调IFN-γ表达,提高血清IFN-γ含量,从而减轻肺纤维化程度。     

三氧化二砷对博莱霉素致大鼠肺纤维化的影响及其作用机制

目的:观察三氧化二砷对博莱霉素致大鼠肺纤维化的影响及可能的作用机制。方法:SD大鼠气管内滴注博莱霉素诱导肺纤维化,腹腔内分别注射三氧化二砷(治疗组)、地塞米松(激素组)、生理盐水(模型组)进行干预。各组动物再按造模后开始干预的时间不同分为14d和28d开始干预2个亚组,每个亚组再按观察时间不同分为14d、28d和56d3个观察组。观察大鼠中位生存时间、肺组织羟脯氨酸含量、肺泡炎和肺纤维化程度(HE染色)、肺组织胶原定量分析(Masson染色)等指标来评价药物干预效果,并采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)检测肺组织凋亡指数。同时对肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、干扰素-γ(IFN-γ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)免疫组化染色结果进行定量分析。结果:(1)生存时间观察:造模后14d开始干预的模型组、治疗组和激素组的中位生存时间分别为30d、57d和19d(P0.01);而造模后28d开始干预的各组的中位生存时间为40d、58d和34d(P0.05)。(2)肺纤维化的比较:各治疗组大鼠的羟脯氨酸含量与模型组相比均有下降趋势。各治疗组的肺泡炎和肺纤维化程度均轻于模型组。与模型组相比,各治疗组的胶原面积均小于模型组。(3)肺组织凋亡指数的比较:与模型组相比,14d开始干预并观察14d、28d组和28d开始干预并观察14d组的治疗组大鼠凋亡指数明显升高。(4)14d开始干预的各组的细胞因子比较:各治疗组的肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)免疫组化染色的平均光密度均低于相应模型组。治疗组中观察28d和56d小组的肺组织中干扰素-γ(IFN-γ)免疫组化染色的平均光密度均高于模型组。各治疗组的肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)免疫组化染色平均光密度与模型组区别不明显。与模型组比较,各治疗组的肺组织中金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)免疫组化染色平均光密度明显降低。结论:三氧化二砷能够减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,其机制可能与诱导肺组织细胞凋亡增加有关。     

博来霉素致大鼠肺纤维化模型肺组织的动态病理变化及其发生机制

目的： 了解博来霉素（BLM）致大鼠肺纤维化模型肺组织的动态病理变化,探讨BLM致肺纤维化的作用机制。方法：60只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为正常对照组（N组）和肺纤维化模型组（B3、B7、B14、B28、B56组）,每组10只。除N组外,其余各组采用气管内注入BLM致大鼠肺纤维化模型, 分别于3、7、14、28、56 d处死各组大鼠,右肺行苏木精-依红（HE）、Masson胶原及天狼猩红染色,测定左肺羟脯氨酸（HYP）的含量。 RT-PCR法半定量测定转化生长因子-1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）mRNA在肺内的表达。免疫组化法观察TGF-β1、MMP-9及TIMP-1蛋白在大鼠肺组织的表达。结果：(1) 模型组大鼠肺组织HYP含量显著高于N组（P<0.05）,模型组大鼠肺组织肺泡炎症的程度也明显重于N组,B14、B28和B56组大鼠肺纤维化的程度明显重于N组,大鼠在灌注BLM后不同时点其肺组织有着不同的病理变化。 (2) TGF-β1、MMP-9及TIMP-1在正常组大鼠肺脏中即有表达,但表达较弱,灌注BLM后它们的表达均增强,不同时点它们在肺组织内的分布有不同的特点。结论：给予后不同时点大鼠肺组织有着不同的病理变化特点,TGF-β1、MMP-9和TIMP-1在BLM诱导的肺纤维化形成过程中起着重要的调节作用。     

大黄酸通过抑制miR-21而干预TGF-β1/Smad通路并减轻博莱霉素所致大鼠肺纤维化

目的:观察大黄酸(rhein,RH)对博莱霉素所致肺纤维化大鼠微小RNA-21(miR-21)表达以及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad通路的影响。方法:博莱霉素一次性气管内注射复制大鼠肺纤维化模型,随机分为RH低、中、高剂量组及模型(model)组;正常对照组大鼠气管内注射生理盐水。用药28 d后,HE染色观察各组大鼠肺组织形态学的变化;测定肺系数、肺组织羟脯氨酸含量;real-time PCR检测肺组织中miR-21和TGF-β1/Smad7m RNA表达;Western blot法分析TGF-β1和Smad7蛋白的表达。结果:与model组相比,RH用药组大鼠的肺泡炎及肺纤维化程度有明显降低,肺系数及肺组织羟脯氨酸含量也显著减少,肺组织中miR-21表达下降,TGF-β1的m RNA和蛋白表达水平也明显下降,Smad7的mRNA及蛋白表达水平明显增高(P0.05)。结论:RH抗肺纤维化的作用可能与抑制miR-21的表达,从而干预TGF-β1/Smad信号通路,减少细胞外基质沉积有关。     

肺纤维化前期肺组织中ICAM-1、TGF-β、CTGF的表达及其镜下形态改变的动态观察

目的动态观察博莱霉素诱发大鼠肺纤维化模型从肺损伤到肺纤维化前期肺组织中细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)水平的变化,探讨肺纤维化前期的发病机制。方法雌性SD大鼠108只,随机分为肺纤维化模型组、内毒素组、空白对照组(每组36只),并于干预后第3、7、14天取各组肺组织进行免疫组化SABC法观察。结果造模后各组TGF-β、ICAM-1、CTGF的表达依次为空白对照组内毒素组肺纤维化模型组。肺纤维化模型组显著高于空白对照组及内毒素组(P0.05)。光镜下观察空白对照组中肺组织结构正常;肺纤维化模型组第7天未见明显肺纤维化改变,第14天VG染色可见少量胶原纤维形成;内毒素组第7天有轻度肺泡炎,第14天肺泡炎消失。结论肺纤维化前期纤维化的发生与TGF-β、ICAM-1、CTGF三种细胞因子均有密切关系,三者可能起协同作用。     

层黏连蛋白受体1单克隆抗体抑制博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化

目的 研究层黏连蛋白受体1(LAMRl)单克隆抗体(mAb)干预博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化.方法 雄性SD大鼠72只,随机分为LAMRl mAb组(L)、对照组(C)和模型组(M)3组,气管内滴入博莱霉素(5 mg/kg体质量)制备肺纤维化模型.3组分别给予LAMRl mAb、地塞米松、生理盐水3次/周,腹腔注射,于第7、14、28天处死8只大鼠.HE染色观察肺纤维化程度;免疫组化方法检测肺组织中表面活性物质A(SP-A)的含量;ELISA测定血清中羟脯氨酸(Hyp)的含量;PCR方法检测肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)及转化生长因子β1(TGF-β1) mRNA的含量.结果 各时间段,M组肺纤维化程度及Hyp含量均高于C组和L组,SP-A的含量均低于其余两组,M组肺组织的MMP-9和TGF-β1的mRNA的含量明显高于其余两组.结论 LAMRl mAb可明显减轻博莱霉素诱导的肺纤维化程度.     

苦参碱对肺纤维化鼠肝细胞生长因子表达的影响

目的探讨苦参碱对博莱霉素诱导肺纤维化大鼠肺组织肝细胞生长因子表达的影响。方法选取SD大鼠72只,随机分为空白对照组、模型对照组、苦参碱处理组,每组各24只。各组动物于7、14、28d随机处死8只,取肺组织采用苏木精-伊红染色,Masson胶原染色及测定羟脯氨酸（HYP）浓度来评价治疗效果,用原位杂交的方法检测肝细胞生长因子（HGF）mRNA的表达,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测HGF蛋白在大鼠肺组织的含量。结果苦参碱组肺泡炎和肺纤维化程度及羟脯氨酸浓度低于同时期模型对照组,有统计学意义;模型组肺组织HGF mRNA表达及蛋白含量在第7d达高峰,之后下降,第14d,第28d低于正常对照组（P〈0.01）,苦参碱组HGF mRNA表达及蛋白含量变化趋势与模型组同,但其表达均高于同时间段模型组（P〈0.05）。结论在博来霉素诱导肺纤维化形成阶段应用苦参碱干预能减轻肺纤维化的程度,其可能机制为通过促进HGF的表达而实现。     

γ干扰素与甲强龙合用对人胚肺成纤维细胞的影响

目的：观察γ干扰素(IFN-γ)与甲强龙(M-pred)联合应用对人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖、胶原合成及转化生长因子β1 mRNA与蛋白表达的影响。方法：噻唑蓝（MTT）法观察HELF的生长抑制率，免疫细胞化学方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）表达，碱水解法测定羟脯氨酸含量，半定量RT-PCR法、Western印迹技术检测TGF-β1 mRNA、蛋白变化。结果： M-pred与不同浓度IFN-γ单独或联合应用均具有抑制HELF增殖、降低PCNA、羟脯氨酸、TGF-β1 mRNA及蛋白表达作用， IFN-γ的作用随其浓度增加而增强（P<0.05）。析因分析表明IFN-γ与M-pred联合应用具有协同作用（P<0.05）。结论：IFN-γ与M-pred联合应用治疗肺纤维化时可增强疗效，减少各自用药量，可能成为治疗肺纤维化的理想方法。     

替普瑞酮诱导肺纤维化大鼠肺HSP70表达及干预肺纤维化的研究

目的:研究替普瑞酮(GGA)对博莱霉素(BLM)诱导的肺纤维化大鼠肺组织HSP70表达的影响及对大鼠肺纤维化的干预作用。方法:SD大鼠30只,随机分为假手术组(SO)、模型组(M)和替普瑞酮组(GGA)。M组和GGA组大鼠气管内一次性注射BLM 5 mg/kg,SO组大鼠气管内注射等体积的生理盐水。造模后第1天开始隔天灌胃给予GGA,持续到处死动物的前1天,模型组灌服等体积的生理盐水。记录大鼠每日体重,造模后第28天时处死大鼠,测定肺纤维化大鼠的肺系数、肺组织内HSP70表达及羟脯氨酸(HYP)的含量,观察肺组织病理改变。结果:GGA能提高博莱霉素处理后大鼠肺组织HSP70的表达(P<0.01);与M组相比,大鼠体重下降得到明显恢复(P<0.01),而肺组织的肺系数和羟脯氨酸(HYP)含量则明显降低(P<0.05),病理结果显示肺泡内结构完整,未出现类似M组肺组织实变现象,肺纤维化程度较轻。结论:替普瑞酮能诱导BLM肺纤维化模型大鼠肺组织HSP70表达,减轻肺纤维化程度。     

黄芪对肺纤维化大鼠Th1/Th2型细胞因子平衡及自由基代谢的影响

目的 研究黄芪水提物、黄芪皂苷对博莱霉素(BLM)所致肺纤维化大鼠Th1/Th2型细胞因子平衡、NO、SOD、MDA及肺组织病理结构的影响,探索黄芪阻抑肺纤维化的效应及其机制.方法 Wister大鼠随机分为空白组、BLM模型组、地塞米松组、黄芪水提物组、黄芪皂苷组;气管内注入BLM制作大鼠肺纤维化模型,造模后第2天开始药物干预,14、28 d各取6只大鼠,分别检测血IFN-γ、IL-4、NO水平,肺组织SOD、MDA水平及肺组织病理结构的动态变化.结果 与空白组比较,模型组大鼠IFN-γ、IFN-γ/IL-4比值、SOD含量降低,IL-4、NO、MDA的含量明显升高,肺组织发生明显的肺泡炎及纤维化改变(P＜0.05);与模璎组比较,黄芪水提物组、黄芪皂苷组、地寒米松组使大鼠血IFN-γ、IFN-γ/IL-4比值、SOD含量明显升高,NO、MDA含量明显降低,肺组织的肺泡炎及纤维化程度明显降低(P＜0.05);黄芪水提物组、黄芪皂苷组与地塞米松组比较,各指标均无统计学差异(P＞0.05).结论黄芪水提物、黄芪皂苷对肺纤维化大鼠肺组织均具有保护作用,调节Th1/Th2型细胞因子的平衡及NO代谢、及提高抗氧化能力可能是其阻抑肺纤维化发生的机理之一.     

黄芪对肺纤维化大鼠血清细胞因子及肺超微结构的影响

目的：研究黄芪水提物、黄芪皂苷对博莱霉素（BLM）所致肺纤维化大鼠血Th1/Th2型细胞因子平衡、TNF-α表达的调节作用及对肺上皮细胞超微结构的影响,探讨黄芪阻抑肺纤维化的效应机制。方法：Wistar大鼠随机分为空白组、BLM模型组、地塞米松组、黄芪水提物组、黄芪皂苷组；气管内注入BLM复制大鼠肺纤维化模型,造模后第2天开始药物干预,14天采用酶联免疫吸附法测定血IFN-γ、IL-4、TNF-α的含量,14天、28天观察肺上皮细胞超微结构变化情况。结果：模型组大鼠血IFN-γ含量降低,IL-4、TNF-α的含量升高（均P〈0.05）；与模型组比较,黄芪水提物组、黄芪皂苷组、地塞米松组使大鼠血IFN-γ含量明显升高（P〈0.05）,IL-4、TNF-α含量明显降低（P〈0.05）；黄芪水提物组、黄芪皂苷组与地塞米松组比较,上述指标均无统计学差异（P〉0.05）,超微结构观察,模型组肺泡Ⅱ型上皮细胞数量减少,细胞微绒毛稀少,核不规则,核染色质凝集粗块状,板层小体减少空泡样变,线粒体明显肿胀,肺泡间隔成纤维细胞增生明显,胞质内胶原纤维增多；各治疗组均可改善肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的异常改变。结论：黄芪水提物、黄芪皂苷对肺纤维化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构具有保护作用,调节Th1/Th2型细胞因子的平衡及TNF-α含量可能是其阻抑肺纤维化发生的机理之一。     

芪丹颗粒剂对大鼠肺纤维化模型的干预作用及对TGF-β1、TNF-α表达的影响

目的：探讨芪丹颗粒剂对博莱霉素A5所致大鼠肺纤维化的干预作用及可能的机制。 方法： SD大鼠经气管内一次性灌注博莱霉素A5(5 mg/kg)诱导肺纤维化，随后分别每日给予芪丹颗粒剂灌胃（芪丹组，3 125 mg/kg）、氢化可的松腹腔注射（氢可组，25 mg/kg）进行干预。对照组气管内灌注和灌胃均用生理盐水。各组动物均于药物干预后第7、14、28 d分别处死。用苏木素-伊红（HE）评价肺组织病理学变化、免疫组化（SABC法）测定肺组织TGF-β1、TNF-α蛋白的表达。 结果： 芪丹组肺泡炎及肺纤维化程度均明显轻于模型组和氢可组，TGF-β1、TNF-α蛋白的表达亦显著低于模型组和氢可组（P<0.01）。 结论： 芪丹颗粒剂可明显减轻博莱霉素A5诱导的大鼠肺纤维化的程度, 其作用机制可能部分通过降低TGF-β1、TNF-α蛋白的表达而实现。     

复方三七饮对博莱霉素致大鼠肺纤维化TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 探讨复方三七饮(CPNG)对博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化的干预作用及其机制.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为6组:正常组、模型组、醋酸泼尼松组、CPNG大、中、小剂量组[CPNG(H、M、L)],每组10只.经气管内注入BLM(5mg/kg)制备大鼠肺纤维化模型.造模第2天,治疗组分别灌服醋酸泼尼松3.33 mg/(kg ·d)、CPNG大、中、小剂量(100、50、25) mg/(kg·d),正常组和模型组大鼠灌服等体积的蒸馏水,1次/d.28 d后处死大鼠,HE染色和Masson染色进行肺组织病理学观察;碱水法测定肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量;Western blot法检测TGF-β1、Smad2、Smad7蛋白的表达水平.结果 与模型组大鼠比较,肺组织的病理组织学HE和Masson染色显示CPNG能明显减轻大鼠肺泡炎和肺纤维化程度(P＜0.01);CPNG各剂量组大鼠肺组织中HYP降低(P ＜0.01);CPNG各剂量组TGF-β1、Smad2蛋白的表达水平降低(P＜0.01),Smad7蛋白表达水平升高(P＜0.01).结论 复方三七饮对博莱霉素致大鼠肺纤维化具有一定的防治作用,可能与调节TGF-β1/Smads信号通路有关.     

布地奈德对肺纤维化大鼠Smad4、PDGF-A及PAI-1表达的影响

目的:探讨布地奈德(BUD)对肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍化生长因子-A(PDGF-A)、抗生物皮肤生长因子同源物4母体(Smad4)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)表达的影响。方法:取健康雌性Wistar大鼠随机分成博莱霉素(BLM)组、生理盐水(NS)组和BUD组,每组15只。NS组气管内灌注NS,BUD组、BLM组气管内灌注BLM,继之0～6 d每天雾化1次,BLM组和NS组雾化吸入NS,BUD组雾化吸入BUD,分别于第7、14、28天处死3组大鼠各5只。用HE、Masson染色观察肺泡炎症和纤维化改变;免疫组化法测定肺组织中TGF-β1、PDGF-A、Smad4、PAI-1的表达。结果:第7、14天,BUD组肺泡炎程度较BLM组减轻(P<0.05);第7、14、28天,BUD组肺纤维化程度均较BLM组减轻(P<0.05)。第7、14、28天,BUD组肺组织中TGF-β1、PDGF-A、Smad4、PAI-1表达较BLM组明显降低(P<0.05)。结论:BUD雾化吸入可降低肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1、PDGF-A、Smad4、PAI-1的表达,同时亦可减轻其肺泡炎及肺纤维化程度。     

维甲酸治疗博莱霉素诱发大鼠肺间质纤维化

观察维甲酸（RA）的抗纤维化作用并初步探讨其作用机理。RA治疗博莱霉所致肺纤维化大鼠28天后,病理观察及形态定量分析示肺纤维化程度明显减轻,肺组织胶原蛋白含量较同期纤维化对照组（BLM组）减少（113．86±13．86mg/glung;152．40±11．00mg／glung,P＜0．01）。RA组支气管肺泡灌洗液中转化因子β1（TGF-β1）含量在第7、14天时则较同期BLM组显著下降（P均＜0.01）。RA治疗后,肺组织原胶原α1（Ⅰ）．（Ⅲ）及TGF-β1．mRNA水平也有明显的降低。RA能有效阻止实验性肺间质纤维化的发生和发展。RA抑制肺组织TGFβ1的表达是其抗纤维化作用的重要机制之一。     

甘草酸对博莱霉素诱导的实验性肺纤维化的干预作用

目的:探讨甘草酸(GA)对博莱霉素(BLM)诱导的小鼠肺纤维化的干预作用及其可能机制。方法:将160只雄性C57BL/6J小鼠随机分为生理盐水(NS)组、BLM组、BLM+NS组和BLM+GA组。通过口咽气管吸入法吸入博莱霉素(2.5 mg/kg)建立实验性肺纤维化模型,BLM+GA组及BLM+NS组每天给予40 mg/kg甘草酸或等体积的生理盐水灌胃,于术后第3、7、14、21天取材。采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理学变化及纤维化程度,采用流式细胞术检测循环单核细胞和肺泡巨噬细胞的亚群比例变化,采用RT-qPCR检测肺组织中转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的表达水平,采用碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量。结果:与NS组相比,BLM组和BLM+NS组肺组织的炎症浸润及胶原含量明显增多,实验性肺纤维化模型制备成功。与BLM+NS组相比:BLM+GA组肺组织的炎症细胞浸润及胶原纤维沉积较少;第3、7天的Ly6C~(hi)单核细胞亚群比例和第7、14天肺泡巨噬细胞M2表型比例显著降低(P0.01);肺组织TGF-β1 mRNA表达量和HYP含量显著降低(P0.01)。结论:GA可以减轻博莱霉素诱导的小鼠肺组织的炎症反应和胶原纤维沉积,可能与GA对单核巨噬细胞的表型偏移和调控以及肺组织TGF-β1的表达下调有关。     

丹参联合川芎嗪对肺纤维化大鼠血清、支气管肺泡灌洗液中TNF-α和TGF-β1水平的影响

目的观察丹参联合川芎嗪腹腔注射对博来霉素(BLM)致肺纤维化大鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、TGF-β1水平的影响。方法将90只健康雄性SD大鼠,随机分为生理盐水(NS)组、BLM组、地塞米松(DXM)组、不同剂量中药联合干预组(即C1组:小剂量、C2组:中剂量、C3组:大剂量)6组。NS组大鼠气管内灌注NS,其余各组大鼠气管内灌注BLM造模,每天给予NS(NS组、BLM组)、DXM(DXM组)或不同剂量中药联合(C1、C2、C3组)腹腔注射,各组分别于气管内灌注药物后第7、14、28天处死大鼠各5只。肺组织HE染色和Masson染色观察肺泡炎和肺纤维化改变;ELISA检测血清和BALF中TNF-α、TGF-β1的水平。结果与NS组相比,BLM组第7天时肺泡炎较明显,第14天时有所减轻,出现肺纤维化,第28天时肺泡炎继续减轻,肺纤维化程度加重;DXM组不同时间点肺泡炎及肺纤维化程度均较BLM组减轻;C1组与BLM组相比,肺纤维化程度没有明显减轻;C2组和C3组大鼠第14天时肺泡炎及肺纤维化程度较BLM组明显减轻;C2组和C3组大鼠第28天时肺纤维化程度较BLM组明显减轻。与NS组比较,各组大鼠血清和BALF中TNF-α、TGF-β1水平均明显增加;与BLM组比较,DXM组和C2组、C3组不同时间点大鼠血清和BALF中TNF-α、TGF-β1水平均降低;与DXM组比较,不同剂量中药联合干预组不同时间点大鼠血清和BALF中TNF-α、TGF-β1表达均降低;以上比较差异均有统计学意义(P<0.05);C2组和C3组不同时间点血清和BALF中TNF-α、TGF-β1水平差异无统计学意义(P>0.05)。各组大鼠血清和BALF中TNF-α、TGF-β1的水平呈高度一致性。结论中、大剂量丹参联合川芎嗪腹腔注射可减轻BLM致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化程度,其机制可能与降低血清和BALF中TNF-α、TGF-β1的表达水平有关。     

肺纤维化大鼠中基质金属蛋白酶-2的表达

目的：研究基质金属蛋白酶－2（MMP2）在肺纤维化中的作用。方法：（1）用免疫组织化学方法（ABC法）观察博莱霉素所诱导的实验性大鼠纤维化肺组织内MMP2表达的动态变化;（2）用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）观察博莱霉素所诱导的肺纤维化不同时期间质成纤维细胞MMP2 mRNA的动态变化。（3）用Northern印迹杂交和免疫细胞化学方法观察转化生长因子β1（TGFβ1）对体外培养的大鼠肺成纤维细胞MMP2mRNA和蛋白表达的影响。结果：（1）诱导纤维化组1－7d,病灶内浸润的单核巨噬细胞及肺泡间质细胞数量增多,MMP2免疫组织化学染色阳性,14d以后,阳性单核巨噬细胞减少,用博莱霉素28d时,阳性间质细胞亦减少。（2）博莱霉素作用后1d,肺成纤维细胞MMP2基因转录即明显增强,为对照组的2．05倍,28d时下降。（3）TGFβ1作用后,大鼠肺成纤维细胞MMP2mRNA及其蛋白表达增强。结论：肺组织内MMP2的过度表达,可能是肺纤维化启动的重要原因。