牙髓干细胞的研究与应用

牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）是牙髓组织中高度增殖、具有自我更新能力和多向分化潜能的一类成体干细胞,在牙齿、骨和神经的修复、再生以及组织工程相关研究中具有重要作用。本文主要从 DPSCs 的生物学特性、分化潜能以及组织工程应用等方面综合分析了 DPSCs 研究的进展。     

牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化过程中基因表达研究

目的：分离培养来源于人成体牙髓组织的干细胞(dental pulp stem cells，DPSC)，分析研究其在未分化状态及在矿化诱导液中基因表型的变化：方法：采用胶原酶消化法获得人牙髓组织的单细胞悬液，14 d后挑取细胞克隆，分别在普通培养基和矿化诱导培养基中进行培养，利用RT-PCR，图像分析检测细胞基因表型变化。结果。未诱导的DPSC不表达牙本质特异性蛋白(dentin phosphprotein,DSPP)及骨涎蛋白(Bone sialoprotein，BSP)，表达部分成骨(osteocalcin,OCN alkaline phsphatase,ALP)相关表型，低表达转录因子核心结合因子(Cbfa-1)；与末诱导的DPSCs相比较，在成骨诱导中DPSCs表达DSPP和BSP，骨相关基因表达也相应上调。结论：DPsCs在矿化诱导液的作用下向成牙本质样细胞分化，其过程有可能是通过谱系特异表犁的表达或表达上调实现的。     

小檗碱对牙髓干细胞MAPK/ERK信号通路及成牙本质向分化的影响研究

目的 探讨小檗碱对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成牙本质向分化及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的影响.方法 采用酶消化法提取DPSCs,将培养鉴定的DPSCs传代培养至第3～5代,用于以下实验.实验分为对照组(正常培养DPSCs)、矿化...     

牙髓干细胞在周围神经损伤修复中的研究进展

周围神经损伤(peripheral nerves injury,PNI)是口腔临床常见病,极易造成患者功能丧失和美观异常,牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)结合组织工程在PNI修复中的应用是目前研究热点.DPSCs具有来源丰富、提取简单、免疫原性低以及体外增殖率高等优点,其可分化成雪...     

牙髓、牙周膜及脐带间充质干细胞三系分化能力的体外比较研究

目的:比较牙髓、牙周膜和脐带三种不同来源间充质干细胞的(Mesenchymal stem cells,MSCs)三系分化潜能.方法:培养分离人脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)、牙髓干细胞(Dental pulp stem cells,DPSCs)和牙周膜干细胞(Periodontal ligament stem cells,PDLSCs);倒置显微镜观察细胞形态,体外诱导这3种MSCs向成骨、成脂和成软骨方向分化,通过茜素红染色、油红O染色、阿尔辛蓝染色分别鉴定细胞成骨、成脂和成软骨分化能力,进一步实时荧光定量PCR检测比较3种细胞成骨相关基因OCN和RUNX2及成脂相关基因PPAR-γ的表达水平.结果:这3种MSCs细胞形态略有不同,三者均可向成骨、成脂和成软骨方向分化,但其分化潜能有所差异,DPSCs成骨和成脂向分化能力强,UCMSCs则更适于成脂和成软骨向分化,而PDLSCs成软骨向分化较具优势.结论:DPSCs,PDLSCs和UCMSCs三系分化潜能不同,本研究为干细胞临床转化中选择理想细胞来源提供实验依据.     

转化生长因子-β3诱导牙髓干细胞的应用进展

转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)是一个具有多种生物学功能的多肽生长因子家族,TGF-β基因家族具有调控细胞分化、转移和分裂等多种功能,日益受到人们的关注。牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)是一种间充质来源的口腔成体干细胞,具有自我更新的有丝分裂活动和向几种特殊细胞类型分化的能力,如可分化成软骨细胞、脂肪细胞、成牙本质细胞等特殊细胞。现就转化因子生长β₃(transforming growth factor-β₃,TGF-β₃)诱导牙髓干细胞生成各种不同组织在再生医学中的应用作一综述。     

牙髓干细胞修复再生同质异体大鼠牙髓牙本质复合体的研究

目的:观察第3代同质异体牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSCs) 定植于冠髓被摘除的大鼠髓腔后,再生修复牙髓牙本质复合体的能力。方法:18只SD大鼠随机分为实验组和对照组,两组均全麻下摘除大鼠上颌双侧第一磨牙冠髓,实验组同期髓腔定植体外培养的同质异体大鼠牙髓干细胞,对照组冠髓摘除后不进行任何处理,术后均使用光固化树脂充填封闭髓腔。两组动物均于术后2、4、6周处死,取其上颌骨进行大体观察,X线观察,组织学观察,牙本质的厚度测量。结果:实验组4周时,肉眼可见牙髓充血减少;6周时,X线显示牙本质厚度增加,根尖孔闭合;6周时,光镜下显示明显新生牙本质形成,成牙本质细胞栅栏状排列;牙本质厚度测量结果显示,实验组牙本质厚度2周时增厚,4周增厚更明显,持续至6周,优于对照组(P<0.05)。结论:牙髓干细胞髓腔内定植,可以促进牙髓牙本质复合体修复再生,具有潜在的临床应用价值。     

组蛋白去甲基化酶Jmjd3对牙髓干细胞成牙本质向分化的影响研究

目的研究组蛋白去甲基化酶Jmjd3对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成牙本质向分化的影响。方法原代分离培养DPSCs,用流式细胞术和茜素红染色鉴定DPSCs。体外诱导DPSCs成牙本质向分化不同时间(0、3、5、7、14 d),qRT-PCR检测Jmjd3及成牙本质细胞标志物牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,DMP1)的表达情况。用不同浓度(0、1、10μmol/L)的Jmjd3抑制剂GSK-J4处理DPSCs 14 d,q RT-PCR检测DSPP、DMP1的表达情况。结果原代培养的DPSCs表达间充质干细胞表面标记物CD44、CD29、CD146,体外诱导培养具有成骨分化潜能。DPSCs成牙本质向分化过程中,Jmjd3、DSPP、DMP1表达水平均上调(P<0.05),且可能具有时间依赖性。10μmol/L GSK-J4处理DPSCs可明显抑制DSPP、DMP1的表达(P<0.05)。结论Jmjd3在DPSCs成牙本质向分化过程中发挥正调节作用,且与其去甲基化酶活性相关。     

人牙髓干细胞及非牙髓干细胞中微小RNA表达谱比较研究

目的 比较微小RNA（miRNAs）在人牙髓干细胞（dental pulp stem cells, DPSCs）及非DPSCs中的表达差异,探讨其在维持DPSCs干性状态中的作用。方法 本研究于2013年1—10月在福建医科大学附属口腔医院完成。 原代培养人牙髓细胞,利用结合了STRO-1特异性抗体的免疫磁珠分选获得DPSCs,并进行成牙本质样细胞的诱导分化,检测碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OC）值以及进行von Kossa染色,鉴定其分化能力。采用miRNA基因芯片技术,检测DPSCs和非DPSCs中miRNAs的表达,筛选出差异表达的miRNAs。结果 与非DPSCs相比,DPSCs中表达上调超过2倍的miRNAs有11个,表达下调超过2倍的miRNAs有3个。结论 miRNAs表达谱的变化可能与DPSCs干性状态的维持相关。     

牙髓干细胞、外胚间充质干细胞生物学特陛比较研究

目的：以骨髓间充质干细胞BMSC为参照,从形态学和生长增殖活性等方面对牙髓干细胞DPSC、外胚间充质干细胞EMSC进行观察分析,研究二者的关系,为牙组织工程研究中种子细胞的筛选提供细胞学依据。方法：通过观察原代培养DPSC、EMSC、BMSC的生长情况和细胞形态,检测细胞克隆形成能力,绘制生长曲线,测定细胞增殖率,测定增殖周期等观察比较DPSC,EMSC生物学特性。结果：原代培养的DPSC细胞组成相对单一,EMSC包含有多种间充质类型细胞：EMSC体外增殖形成克隆的能力高于DPSC和BMSC,DPSC的增殖能力较BMSC强,EMSC生长增殖能力较强;DPSC、EMSC处于G1的细胞含量较低,而处于S期的细胞含量较高,细胞处于增殖分化的活跃期。结论：DP—SC、EMSC具有与BMSC相似的间充质干细胞形态;EMSC有可能作为口腔颌面部问充质干细胞的来源,包含有多种间充质类型细胞,细胞增殖能力较强。DPSC作为组织中的专能干细胞,细胞形态均一,细胞增殖能力弱于EMSC。     

Dental stem cells: Progress and perspectives

Dental pulp stem cells (DPSCs) are thought to contribute to reparative dentin formation, and that they may correspond to heterogenous populations of precursor cells or represent distinct differentiation stages along the odontoblastic lineage. DPSCs share many similarities with mesenchymal stem cells of the bone marrow (BMSCs). It appears that the distribution of tissue stem cells is not random and, within the dental pulp, there are potentially several distinct niches of stem/progenitor cells. In addition to DPSCs, other dental stem cell populations have been isolated. As for DPSCs, further studies are still needed to evaluate their potential of differentiation and their regenerative activity. Up today, (1) the formal demonstration that pulpal resident stem cells are actually the reparative dentin-forming cells recruited in response to injury is still lacking; and (2) the origin, localization and precise identity of odontogenic stem cells remain largely unknown. Dental clonal cell lines may represent valuable tool to answer some fontamental questions concerning the dental stem cell biology. Altogether, the presence of dental cell populations displaying stem cell properties has opened new paths for considering regenerative therapies. This might be a prerequisite to design alternative strategies for capping and endodontic treatment, using stem cells.     

牙髓培养细胞特性与牙髓干细胞定位

目的 比较人牙根髓与冠髓培养细胞的特性，探讨牙髓干细胞在牙髓中的定位。方法：用组织块法分别培养人根髓、冠髓细胞，观察并比较两者的培养成功率、细胞贴壁率、细胞活性、增殖特性、细胞形态以及细胞诱导矿化能力，以探讨牙髓干细胞在牙髓组织中的定位。结果：培养的根髓细胞比冠髓细胞具有较高的成功率和贴壁率、较强的细胞活性以及相同的增殖活性，根髓细胞比冠髓细胞的形态更具有原始性，根髓比冠髓更易诱导矿化。结论：牙髓干细胞可能存在于全部牙髓之中，在根髓中比冠髓中具有更高的密度．     

牙髓干细胞分化过程中L型钙离子通道羧基末端的表达

目的:探讨牙髓干细胞(DPSCs)分化过程中L型钙离子通道羧基末端的表达。方法:利用酶消化法体外分离、培养大鼠牙髓干细胞;吉姆萨染色法检测大鼠牙髓干细胞的克隆形成能力;神经诱导体系下诱导牙髓干细胞向神经样细胞分化,免疫荧光染色检测细胞分化后胶质纤维酸蛋白(glial fibrillary acidic pro-tein,GFAP)的表达和细胞分化前后L型钙离子通道Cav 1.2及羧基末端的表达。结果:牙髓干细胞的克隆形成能力为每1 000个细胞形成2～17个克隆;免疫荧光染色检测诱导后细胞GFAP表达阳性;免疫荧光染色检测显示:牙髓干细胞分化前L型钙离子通道Cav 1.2羧基末端表达于细胞膜上,细胞分化后羧基末端同时表达于细胞膜上和细胞核中。结论:L型钙离子通道Cav 1.2羧基末端在牙髓干细胞分化过程中发生核转位,羧基末端可能在牙髓干细胞的分化过程中发挥着一定的作用。     

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目的 比较微小RNA（miRNAs）在人牙髓干细胞（dental pulp stem cells, DPSCs）及非DPSCs中的表达差异,探讨其在维持DPSCs干性状态中的作用。方法 本研究于2013年1—10月在福建医科大学附属口腔医院完成。 原代培养人牙髓细胞,利用结合了STRO-1特异性抗体的免疫磁珠分选获得DPSCs,并进行成牙本质样细胞的诱导分化,检测碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OC）值以及进行von Kossa染色,鉴定其分化能力。采用miRNA基因芯片技术,检测DPSCs和非DPSCs中miRNAs的表达,筛选出差异表达的miRNAs。结果 与非DPSCs相比,DPSCs中表达上调超过2倍的miRNAs有11个,表达下调超过2倍的miRNAs有3个。结论 miRNAs表达谱的变化可能与DPSCs干性状态的维持相关。     

Oct4调节成体干细胞多能性的研究进展

成体干细胞是存在于人和哺乳动物特定组织中的具有自我更新和一定分化潜能的未成熟细胞,参与成体组织的更新和创伤修复.牙髓干细胞是牙髓损伤修复的潜能所在,如何调控其生物学行为以促进牙髓修复再生是当前的研究热点.Oct4 在干细胞发育的基因调控网络中居核心地位,近年研究显示Oct4 具有维持成体干细胞多能性的功能.本文通过阐述Oct4 的结构和功能,揭示其在成体干细胞中的调节作用,为研究Oct4 对牙髓干细胞的调节作用提供理论基础.     

牙髓干细胞的研究

牙髓干细胞是存在于牙髓组织中的一种成体干细胞，具有高度增殖、自我更新的能力和多向分化的潜能。牙髓干细胞的研究对牙组织工程和牙齿的再生将产生重要的意义。本文就牙髓干细胞的研究现状作一综述，并对其应用前景以及目前存在的问题进行讨论。     

人乳牙牙髓干细胞和成人牙髓干细胞研究进展

近年来,成体干细胞不断地从不同的组织中被分离出来,该类细胞具有多向分化潜能、较强的增殖能力和持久的自我更新能力,具备充当组织工程种子细胞的天然优势。2000年和2003年,研究者先后从成人牙髓组织和人乳牙牙髓组织中分离出具有干细胞特征的细胞,这两种细胞的发现对牙组织工程将产生重要的意义。现就这两种成体干细胞的研究进展做一综述,并展望其应用前景。     

牙髓干细胞在组织工程领域的研究进展

种子细胞的获得、培养与分化是组织工程的前提和基础,将干细胞作为种子细胞用于组织工程的构建受到越来越多学者的关注。牙髓干细胞（DPSCs）是存在于牙髓组织中的一种成体干细胞,是一种新兴的组织工程种子细胞,对于组织器官的再生具有重要的意义。本文就牙髓干细胞在组织工程的研究现状作一综述,并对其临床应用前景进行讨论。