慢病毒靶向携带survivin-siRNA抗肺腺癌裸鼠体内研究

目的探讨慢病毒载体介导survivin-siRNA对人肺腺癌裸鼠移植瘤的体内抑瘤活性。方法参考siRNA的设计策略,构建表达survivin-siRNA的慢病毒载体;于各BALB/C裸鼠右侧腋窝皮下接种人肺腺癌A549细胞悬液,构建人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,肿瘤组织局部注射survivin-siRNA的慢病毒载体,观察肿瘤的体积及随时间变化的生长曲线;通过碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染色检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化。结果慢病毒载体介导survivin-siRNA对裸鼠人肺腺癌A549的抑瘤率为46.07%;经过PI和Annexin-V染色区分凋亡早晚期的细胞为30%~35%,荧光显微镜下观察肿瘤细胞凋亡;G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例则明显减少。结论慢病毒载体介导的siRNA能有效抑制裸鼠移植人肺腺癌A549的survivin基因的表达,有效激发细胞凋亡。     

人胰腺癌裸鼠移植瘤浸润和转移方式的研究

为了探讨胰头癌浸润及转移规律，我们用自建的三株人胰头癌裸鼠移植瘤，接咱在鼠背部、腹腔及抓垫皮下。结果表明：三株移植瘤背部接种均以局部浸润为主，可经淋巴疲乏转移至局部淋巴结（ＰＣＴ－３转移率为３３％；ＰＣＴ－４为４０％；ＰＣＴ－５为３３％），无远处淋巴结和（或）脏器转移；腹腔接种及抓垫接种与背部皮下接种结果相似。肿瘤的生长速度和浸润及转移的能力与肿瘤分化程度有一定关系。     

小鼠H22肝癌细胞株淋巴结转移模型的构建

目的:使用H22肝癌细胞株建立小鼠自发淋巴道转移模型。方法:40只雄性昆明种小鼠随机分为4组(n=10),左后肢爪垫皮下接种H22肝癌细胞建立动物模型,各组小鼠接种细胞浓度分别为:1×106·只-1、5×105·只-1、2.5×105·只-1,对照组注射等体积PBS。接种后第27天解剖取小鼠爪垫原发灶肿瘤组织及腘窝部淋巴结,10%中性福尔马林液固定、HE染色后判断淋巴结转移情况,计算转移率。结果:高浓度组(1×106·只-1)转移率为100%,中浓度组(5×105·只-1)转移率为50%,低浓度组(2.5×105·只-1)转移率为40%。结论:小鼠爪垫皮下接种1×106的H22肝癌细胞株,可以建立100%腘窝部淋巴结转移模型。     

裸鼠皮下人肝癌移植瘤模型的建立

目的建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型。方法BLBA/c裸鼠颈背部皮下注射人肝癌SMMC-7721细胞悬液5×106个.0.2m l-1.只-1,观察肿瘤生长情况,45d处死。瘤组织作病理及电镜检查;取裸鼠周围血作甲胎蛋白(AFP)的检测;用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD)。结果该模型具有类似人原发性肝癌的形态学特征。结论成功建立了人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型。     

小鼠肝癌细胞H22在肿瘤淋巴道转移研究中的应用

目的：探讨小鼠肝癌细胞H22在肿瘤淋巴道转移研究中的应用。方法：将小鼠肝癌细胞株H22分别接种于Km小鼠左腹股沟部（A组）和左后肢爪垫皮下（B组）,于接种后分批处死小鼠。H-E染色观察A组移植瘤及B组胴淋巴结、腹股沟淋巴结;透射电镜下观察A组移植瘤内毛细淋巴管超微结构。结果：A组小鼠移植瘤周边区可见毛细淋巴管,其内皮细胞亚细胞结构发生改变。B组淋巴结发生癌转移的概率和程度与接种细胞数相关。结论：小鼠肝癌（H22）模型可作为一种重要的肿瘤移植性模型而在肿瘤的淋巴道转移研究中发挥作用。     

靶向敲低肿瘤转移相关基因1可减缓裸鼠喉鳞癌移植瘤生长并降低其转移能力

目的通过RNA干扰(RNAi)技术,观察肿瘤转移相关基因1(MTA1)对裸鼠喉鳞癌移植瘤生长和转移能力的影响。方法设计MTA1的短发夹RNA(shRNA)慢病毒干扰载体,进行包装与转染Hep-2细胞。将无关shRNA对照组和MTA1shRNA感染的Hep-2细胞接种于裸鼠爪垫,每组5只。复制人喉癌移植瘤淋巴转移模型,9周后处死裸鼠,取下肿瘤组织及腹股沟淋巴结,进行HE染色形态学观察,反转录PCR检测MTA1、β联蛋白(β-catenin)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)mRNA的水平,Western blot法检测MTA1、β-catenin、MMP-9、cyclin D1蛋白水平。结果慢病毒MTA1干扰载体筛选成功;2组人喉癌裸鼠爪垫移植瘤100%成瘤;MTA1 shRNA转染细胞裸鼠肿瘤体积在同一时间点均明显小于无关shRNA对照组;MTA1 shRNA转染细胞5只裸鼠爪垫肿瘤未发现淋巴结转移;无关shRNA对照组5只裸鼠腹股沟淋巴结切片均可见喉癌细胞;与无关shRNA对照组相比,MTA1 shRNA转染细胞MTA1、β-catenin、MMP-9、cyclin D1的mRNA和蛋白水平明显降低。结论抑制MTA1基因能够减缓裸鼠喉鳞癌的生长并降低其转移能力。     

在不同转移潜能人肺癌细胞移植瘤中血管性血友病因子的表达

目的探讨血管性血友病因子(vWF)在不同转移潜能人肺癌裸鼠移植瘤中的表达。方法体外培养低转移及高转移人肺癌细胞系A549和D95,Transwell小室法检测肿瘤细胞体外侵袭和迁移能力;10只Balb/c裸小鼠随机分为A549组和D95组(n=5)。0. 2 mL两种肿瘤细胞悬液(浓度约为1×10^7/mL)分别皮下注入A549组及D95组裸小鼠左上肢,构建人肺癌裸鼠移植瘤模型。观察vWF对裸小鼠移植瘤生长的影响;ELISA检测外周血vWF水平;免疫组化检测移植瘤vWF蛋白表达;免疫印记检测移植瘤、肺和肝vWF蛋白表达。结果 D95肺癌细胞体外侵袭和迁移细胞数多于A549肺癌细胞(P<0. 05);D95组裸小鼠于皮下接种后第5天全部出现瘤结节,A549组于第7天全部出现;与A549组相比,D95组裸小鼠移植瘤质量及肺转移瘤结节数显著增多(P<0. 05),D95组移植瘤、肺及肝组织vWF蛋白的表达显著高于A549组(P<0. 01)。结论 vWF与人肺癌细胞的转移潜能密切相关。     

靶向阻断LRP提高肺腺癌细胞对紫杉醇的敏感性

目的利用小干扰RNA(siRNA)技术沉默肺腺癌细胞肺耐药相关蛋白基因(LRP),探讨其对肺腺癌紫杉醇耐药株(A549/TXL20)紫杉醇(TXL)敏感性的影响。方法逐步增加药物浓度法建立A549紫杉醇耐药细胞株(A549/TXL20),用小干扰RNA技术沉默LRP在A549/TXL20细胞中的表达,以MTT法检测紫杉醇对A549/TXL20细胞的半数抑制浓度(IC50);以q PCR检测细胞中LRP mRNA的表达,Western blot检测细胞中LRP蛋白的水平,裸鼠腋窝皮下注射转染后的A549/TXL20细胞,建立裸鼠移植瘤模型,观察LRP靶向siRNA对人肺腺癌耐药细胞株A549/TXL20移植瘤耐药的影响。结果肺腺癌紫杉醇耐药株(A549/TXL20)对紫杉醇的敏感性明显增强(P0.01),A549/TXL20细胞中LRP mRNA及蛋白表达显著增加(P0.01);siRNA沉默A549/TXL20细胞LRP基因后,与空白组和空质粒组比较,LRP mRNA及蛋白表达均被抑制(P0.01);小干扰RNA可提高荷瘤裸鼠对紫杉醇的敏感性。结论 siRNA可有效沉默A549/TXL20肺腺癌耐药细胞株LRP基因的表达,提高耐药的肺腺癌细胞对紫杉醇的敏感性。     

人巨细胞肺癌裸鼠移植瘤中mts1和nm23-H1表达及其与肺癌淋巴结转移关系

目的 探讨肿瘤转移相关基因mts1和nm23-H1在人巨细胞肺癌裸鼠移植瘤中的表达及其与啼癌淋巴结转移的关系。方法 用高转移的人巨细胞肺癌瘤株PLA-801—D和低转移的人巨细胞肺癌瘤株PLA-801—C在裸鼠中建立转移模型,观察瘤细胞在裸鼠淋巴结及肺中的转移情况;原位杂交检测mts1和nm23-H1mRNA在移植瘤中的表达。结果 PLA-801—D在12只移植裸鼠中均有淋巴结转移,转移率100%,2只裸鼠中有肺转移,转移率17％;PLA-801—C在12只移植的裸鼠中均无淋巴结及肺转移。mts1mRNA在PLA-801—D、PLA-801-C裸鼠移植瘤中阳性表达分别为12例、2例;nm23-H1mRNA在PLA-801—D、PLA-801—C裸鼠移植瘤中阳性表达分别为12例、11例。结论 mts1 mRNA表达与人巨细胞啼癌裸鼠移植瘤淋巴结转移呈正相关,nm23-H1 mRNA表达与人巨细胞肺癌裸鼠移植瘤淋巴结转移不相关。     

鼻咽癌细胞裸鼠体内传代中转移及增殖动力学研究

目的：为研究鼻咽癌细胞在裸鼠体内演进中转移能力和增殖能力之间的关系。方法：将鼻咽癌单克隆细胞株（ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５）移植于裸鼠皮下，待裸鼠发生转移时，取其淋巴结和（或）肺转移灶癌细胞再次移植裸鼠皮下传代，如此用转移灶癌细胞重复传２～４个代后，观察各代裸鼠的转移率和转移途径，同时观察各代癌细胞生长曲线、增殖指数及移植瘤瘤重和体积倍增时间的变化。结果：随着鼻咽癌转移灶癌细胞裸鼠体内的演进，各代裸鼠的转移率增高，且转移途径更为单一，各代癌细胞的增殖能力不断增强。结论：鼻咽癌细胞在裸鼠体内演进中转移能力和增殖能力均不断增强，且二者关系密切。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.