姜黄素联合多烯紫杉醇诱导PC-3细胞凋亡的实验研究

目的探讨姜黄素联合多烯紫杉醇对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将体外培养的PC-3细胞分为对照组(仅加培养基)、姜黄素组(5.0μmol/L姜黄素处理)、多烯紫杉醇组(2.5nmol/L多烯紫杉醇处理)及联合组(5.0μmol/L姜黄素与2.5nmol/L多烯紫杉醇联合处理),作用24h。用流式细胞仪分析PC-3细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测Bcl-2及Bax mRNA和蛋白的表达情况。结果姜黄素和多烯紫杉醇均可诱导PC-3细胞凋亡,二者联合用药组的细胞凋亡率明显高于单药组(P<0.05);RT-PCR及Western blot显示姜黄素和多烯紫杉醇都可明显下调Bcl-2mRNA和蛋白的表达率,而上调Bax mRNA和蛋白表达率,且联合组细胞Bax与Bcl-2表达的改变更明显。结论姜黄素和多烯紫杉醇可能通过下调Bcl-2,上调Bax的表达协同诱导PC-3细胞的凋亡。     

自然流产绒毛及蜕膜细胞凋亡的基因调控研究

目的应用流式细胞仪和免疫组织化学技术检测自然流产绒毛及蜕膜细胞凋亡及bax、bcl-2基因调控．探讨自然流产发病机制和基因调控机制,为进一步自然流产基因治疗研究提供理论依据。方法对20例自然流产病例和正常早孕吸宫流产病例的绒毛与蜕膜组织进行研究。常规光镜观察细胞形态学变化;DNA倍体分析检测细胞凋亡及其周期变化;免疫组化S-P法检测bcl-2／bax基因蛋白表达率比值。结果自然流产绒毛、蜕膜组织形态学结构均出现不同程度的退形性改变,自然流产中绒毛及蜕膜细胞凋亡率均较正常妊娠明显增高（P〈0．05）。蜕膜凋亡率尤其明显。自然流产的绒毛和蜕膜中抑凋亡基因bcl-2表达也较正常早孕时下降（P〈0．001）,而促凋亡基因bax表达自然流产中显著增高（P〈0．001）,结果与细胞凋亡的发生一致。结论细胞凋亡在胚胎的发育过程中起着重要作用,自然流产绒毛和蜕膜组织中大量的细胞凋亡是其形态学退变的重要原因,并进而阻碍了胚胎的发育。     

Bax基因在紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡过程中作用的研究

目的:观察bax基因在紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡过程中的表达。方法:将不同浓度的紫杉醇作用于HL-60细胞,用RT-PCR法检测药物孵育前后bax基因的表达水平。结果:在紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡过程中bax基因的表达水平上升,并显示剂量效应。结论:bax基因参与紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡的基因调控。     

紫杉醇对人卵巢癌细胞凋亡的影响

目的 :探讨紫杉醇 (PTX)对人卵巢细胞凋亡的影响。方法 :应用细胞形态观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪、活细胞视频观察和蛋白印迹免疫法进行检测和观察。结果 :癌细胞在PTX作用下 ,首先表现为G2 /M期阻滞 ,一定时间后出现细胞凋亡。凋亡细胞表现为细胞固缩 ,核染色质凝聚或断裂。细胞DNA裂解片段呈现典型的“阶梯状”排列的条带。凋亡抑制基因Bcl- 2在细胞凋亡过程中呈低表达并发生修饰反应 ,而调亡诱发基因Bax先呈高表达后表达降低。结论 :PTX诱发人卵巢癌细胞的凋亡与细胞分裂阻滞密切相关 ,Bcl- 2和Bax在PTX引起人卵巢癌细胞凋亡中可能起着重要的调控作用。     

OSTP增强紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用

目的 研究卵巢癌特异性结合肽（OSTP）及联合紫杉醇对卵巢癌A2780细胞生长及凋亡的影响.方法 体外培养卵巢癌A2780细胞,随机分为4组：溶剂对照组（1640和0.1％ DMSO组）、OSTP组、紫杉醇组、OSTP联合紫杉醇组.采用四甲基偶氮唑盐（MTT法）检测OSTP对A2780细胞生长的影响;用Annexin-V-FITC和PI双染法标记A2780细胞,通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 MTT法检测OSTP以不同浓度作用于卵巢癌A2780细胞时,可对该细胞的生长起到抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）.应用流式细胞技术检测细胞凋亡发现：不同浓度的OSTP（20、40、80、160、320μmol/L）对A2780细胞的凋亡率分别7.88％、8.348％、8.727％、9.393％和10.68％,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）,提示OSTP可诱导细胞凋亡.OSTP和紫杉醇联合应用,在不同的预处理组（加OSTP80μ mol/L 0、3、6、12h）后再加紫杉醇10μmol/L作用48h,结果发现细胞凋亡率分别是39.40％、53.09％、48.18％和45.62％,均高于OSTP和紫杉醇单独用药及两者的凋亡率相加值,且差异有统计学意义（P ＜0.001）.提示OSTP能增强紫杉醇诱导的卵巢癌A2780细胞凋亡作用.结论 OSTP对卵巢癌A2780细胞有生长抑制及凋亡作用,尤其是OSTP能增强紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用,对于探讨和开发OSTP作为靶向化疗增敏剂治疗卵巢癌有良好的应用前景.     

丹参诱导大鼠肝星状细胞凋亡作用的研究

目的 利用体外培养大鼠传代星状细胞为模型，观察丹参对星状细胞凋亡相关蛋白FasL、Fas、bax和bcl—2表达的调节作用，以进一步阐明丹参诱导星状细胞凋亡的机理。方法 大鼠星状细胞的分离采用胶原酶原位循环灌流法。星状细胞经20g／L丹参作用48h后，用免疫细胞化学法检测FasL、Fas、bax和bcl—2，用Western blot法检测bcl—2表达。结果 免疫细胞化学结果表明：星状细胞经丹参作用后FasL表达明显增强，Fas稍增加，bax明显增强，bcl—2减少；用Western blot法未能检出bcl—2。结论 丹参通过Fas途径及增加bax表达和减少bcl-2诱导肝星状细胞凋亡。     

腹腔热化疗对大鼠卵巢癌细胞凋亡的影响

目的 观察顺铂腹腔热化疗对卵巢癌大鼠的疗效,并且从细胞凋亡角度进一步探讨腹腔热化疗治疗卵巢癌的机制,为临床应用腹腔热化疗治疗卵巢癌提供实验依据.方法 体外培养近交系Fischer 344大鼠低分化上皮性卵巢癌细胞株NuTu-19,将一定数昔的培养细胞分别注入24只雌性近交系Fischer344大鼠腹腔中,建立卵巢癌腹腔转移瘤动物模型;实验动物随机分组后,应用顺铂及不同加热方式进行治疗;治疗结束后处死大鼠,提取腹腔积液中游离卵巢癌细胞,应用流式细胞仪、PI染色检测其细胞周期比率及细胞凋亡率;取卵巢癌腹腔转移瘤组织进行免疫组化分析,检测凋亡相关基冈bcl-2及bax的表达.结果 ①所有实验动物均表现出不同程度的血性腹腔积液及腹腔转移瘤微小结节病灶;②顺铂或加热治疗均町提高大鼠腹腔积液中卵巢癌细胞的凋亡率（P〈0.05）,顺铂与微波持续加热同时应用后细胞凋亡率进一步升高（P〈0.05）;③顺铂或一次性加热治疗可降低大鼠腹腔积液中游离卵巢癌细胞G0/G1期比率（P〈0.05）;微波持续加热治疗或与顺铂同时应用均可降低腹腔积液中卵巢癌细胞S期细胞比率（P〈0.05）;④顺铂或微波持续加热治疗的大鼠腹腔转移瘤组织中bcl-2基因表达降低（P〈0.05）,bax基因表达升高（P〈0.05）,两种疗法联合治疗具有正向协同作用（P〈0.05）.结论 ①顺铂及不同加热方式治疗可通过促进细胞凋亡或抑制细胞进入增殖期从而起到治疗卵巢癌的作用,且顺铂联合微波持续加热治疗效果最佳.②顺铂及微波持续加热治疗均可降低卵巢癌组织中bcl-2基因表达,增加bax基因表达,从而诱导卵巢癌细胞凋亡,并且两法同时应用效果更佳.     

紫杉醇诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇抑制ＨｅＬａ细胞生长的机制。方法；经荧光染色，电镜观察细胞形态，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ及流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：紫杉醇作用２４ｈ经荧光染色细胞呈不均一亮蓝色，作用４８ｈ细胞被染色红色，电镜观察可见细胞变小，染色质浓缩并产生凋亡小体，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ未见明显的梯形条带，流式细胞仪检测紫杉醇作用２４ｈ细胞凋亡。结论；紫杉醇可诱导细胞凋亡，也可直接杀伤ＨｅＬａ细胞，而且以后者为主     

细胞凋亡调控基因bcl-2和bax在肾上腺髓质增生大鼠肾上腺组织中的表达与意义

目的研究肾上腺髓质增生大鼠肾上腺组织细胞凋亡抑制基因bcl-2和促进基因bax在肾上腺髓质增生发病机制中的作用。方法用免疫组化SP法对肾上腺髓质增生大鼠和正常对照组大鼠的肾上腺组织细胞凋亡相关基因bcl-2和bax的表达进行检测。结果bcl-2的表达,肾上腺髓质增生大鼠组阳性细胞数为(89.3±10.86)个,正常对照组为(21.2±7.65)个(P<0.05)。bax的表达,肾上腺髓质增生大鼠组阳性细胞数为(16.1±4.62)个,正常对照组为(54.8±9.31)个(P<0.05)。结论细胞凋亡调控基因参与了肾上腺髓质增生的病理过程。在此调控网络中,bcl-2基因发挥了较为重要的作用,bax基因的表达减少。     

紫杉醇诱导食管癌细胞凋亡

目的：研究紫杉醇对食管细胞生长抑制及诱导凋亡的作用。方法：应用ＭＴＴ分析法，形态学观察，琼脂糖凝胶电泳，流式细胞术等方法对紫杉醇诱导的食管癌细胞系Ｅｃａ１０９进行了检测和观察。     

Paclitaxel Induced Apoptosis in Human Ovarian Cancer Cell Line COC 1

Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ,ａｎｅｗａｎｔｉｔｕｍｏｒａｇｅｎｔｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ,ｐｏｓｓｅｓｓｅｓｓｉｇ－ｎｉｆｉｃａｎｔａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｅｃｔｏｎｓｅｖｅｒａｌｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｓ,ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙｏｎａｄ...     

褪黑素对小鼠肝癌细胞凋亡及自然杀伤细胞活性的影响

目的 探讨褪黑素(MLT)在体内对H22肝癌细胞凋亡及免疫调节作用的影响及其机制。方法 应用免疫组织化学染色方法及原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)对Bc1-2、Bax的表达及凋亡细胞进行检酗，MTT比色法检测脾细胞NK杀伤活性。结果 实验发现MLT治疗组、预防组及5-Fu组Bcl-2和Bax的表达及凋亡细胞数明显高于生理盐水组(P＜0．01)。Bax／Bcl-2比例在MLT预防组最大。NK杀伤活性在MLT治疗组、预防组较其它组明显增高(P＜0．05)。结论 MLT在体内有促进肿瘤细胞凋亡的作用，且可使NK杀伤活性增高，推测Bcl-2、Bax和机体的免疫系统参与了褪黑素的抗肿瘤作用。     

bcl-XL与survivin在地塞米松拮抗紫杉醇诱导的卵巢癌细胞凋亡中的表达

目的 探讨bcl-XL与存活蛋白(survivin)在地塞米松拮抗紫杉醇诱导的卵巢癌细胞凋亡过程中的表达及地塞米松在抗凋亡中的作用.方法 应用MTT比色法检测地塞米松对紫杉醇抑制细胞增殖的影响,TUNEL法形态学观察细胞凋亡,RT-PCR检测抗凋亡相关基因survivin、bcl-2和bcl-XLLmRNA的表达.结果 浓度为0.001,0.01,0.1,μmol/L的地塞米松对紫杉醇抑制的SKOV-3细胞增殖有不同程度的拮抗作用,浓度越高拮抗作用越强.TUNEL结果表明地塞米松预处理能抑制紫杉醇诱导的SKOV-3细胞凋亡.半定量RT-PCR结果表明地塞米松预处理后再用紫杉醇组与单用紫杉醇组比较survivin和μmRNA的表达升高(P<0.01),而bcl-2mRNA的表达无显著差异(P>0.05).结论 地塞米松对紫杉醇抑制的人卵巢癌细胞株SKOV-3细胞增殖有拮抗作用,其作用机制可能与上调抗凋亡基因survivin和bcl-XL的表达有关.     

黄芩苷诱导人乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡作用的研究

目的:探讨植物雌激素结构类似物黄芩苷诱导人乳腺癌雌激素受体阴性细胞株MDA-MB-231(ER-)凋亡的作用.方法:MTT法测定不同剂量黄芩苷对MDA-MB-231细胞株增殖的抑制作用;透射电镜检测细胞凋亡及黄芩苷的作用;流式细胞术分析黄芩苷对MDA-MB-231细胞周期变化的影响;RT-PCR技术分析黄芩苷对MDA-MB-231细胞bcl-2、bax mRNA水平表达的影响.结果:在一定剂量范围内,黄芩苷对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用呈时效、量效关系,IC50为151 μmol/L;透射电镜结果显示黄芩苷作用细胞48 h后出现明显的凋亡现象,流式细胞仪检测结果显示细胞凋亡率随着黄芩苷的浓度增加而增大,并阻滞细胞于G2/M期;RT-PCR结果表明,黄芩苷作用细胞后bax mRNA水平的表达增加而bcl-2的表达降低. 结论:黄芩苷可以抑制MDA-MB-231细胞的增殖,诱导细胞凋亡的发生,可能是通过调节bcl-2、bax的表达和干涉细胞周期而发挥诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用.     

冷冻治疗对G422胶质瘤细胞凋亡的影响

目的 研究局部冷冻对G422胶质瘤细胞凋亡及其调控机制的影响。方法 建立小鼠脑胶质瘤动物模型,于冷冻治疗后6、12、24、48、72 h留取标本,用光镜、末端标记法(TUNEL)、DNA凝胶电泳检测细胞凋亡,用免疫组化技术检测凋亡相关基因bcl-2、bax的表达产物。结果G422胶质瘤经冷冻治疗后,冷冻灶中心区呈坏死改变,冷冻周边区出现凋亡的形态学改变,DNA呈“梯状”降解,冷冻后各时间点凋亡细胞数目均明显多于对照组(P<0.01)。bax表达阳性细胞数也多于对照组(P<0.05),而冷冻对bcl-2表达无明显影响。结论 除坏死外,诱导细胞凋亡可能是冷冻杀伤胶质瘤细胞的另一重要机制;这种细胞凋亡可能是通过上调bax基因的表达来实现。     

胆道肿瘤与细胞凋亡

探索ｂｃｌ－２和ｂａｘ基因产物在胆囊癌中的表达及其之间的关系。方法用免疫组化法对２１例胆囊癌、２５例胆管癌、２５例胆囊炎病理标本进行染色检查。结果ｂｃｌ－２在胆囊癌、胆管癌、胆囊炎上皮细胞中表达率分别为９／２１，１９／２５，６／２５。３组间差异显著（Ｐ＜０．０１）。ｂａｘ表达率分别为６／２１，５／２５，８／２５。３组间差异不显著。ｂｃｌ－２和ｂａｘ在表达上没有相关关系。结论ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因参与了胆道肿瘤的形成，但不能作为胆道肿瘤诊断和判断预后的唯一标准     

Paclitaxel-induced apoptosis in human ovarian cancer cell line COC1

Summary To elucidate the pattern of paclitaxel-induced apoptosis in human ovarian cancer cell line COC₁ and the role of paclitaxel in chemotherapy of ovarian cancer, apoptosis was investigatedin vitro by applying cytohistochemical techniques, DNA gel electrophoresis and flow cytometry. COC₁ cells manifested typical apoptotic morphologic features after exposure to paclitaxel. The rate of apoptosis was enhanced within the test concentration range in a concentration-dependent pattern. At low paclitaxel concentration, the rate of apoptosis were low and the levels of mitotic arrest were high. Whereas at higher paclitaxel concentration, the rate of apoptosis were higher and the levels of mitotic arrest were relatively lower. It is concluded that the antitumor effect of paclitaxel was correlated with druginduced apoptosis. Apoptosis induced by paclitaxel was concentration-dependent and was not significantly correlated with the mitotic arrest.     

雌、孕激素对人卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究雌、孕激素对人卵巢癌细胞株H08910细胞增值、凋亡的影响,从而为临床采用孕激素辅助治疗卵巢癌提供依据。方法体外培养卵巢癌细胞,分为孕激素、雌激素用药组,MTT比色法观察对细胞增殖的影响,流式细胞仪观察对细胞凋亡率的影响。结果随着孕激素浓度的增加,对卵巢癌细胞增值的抑制作用明显增强,而且细胞的凋亡率升高．而雌激素组药物对细胞凋亡及增殖无明显作用。结论孕激素能够抑制卵巢癌细胞的增殖,并能够诱导细胞凋亡,雌激素对细胞增殖及凋亡无明确作用。     

重组凋亡素真核表达载体诱导人卵巢癌细胞凋亡

目的 观察凋亡素基因（VP3）在卵巢癌细胞株CoCl中诱导凋亡的情况。方法 用Kpn Ⅰ、Xba Ⅰ分别双酶切pMD18-CAVP3和pcDNA3．1（＋），分别回收365bp和5．0kb大小的片断，然后常规行连接反应，构建重组凋亡素真核表达栽体pcDNA3．1-VP3。采用Lipofectamine^TM 2000介导的基因转染法，在体外将pcDNA3．1-VP3转染入卵巢癌细胞株CoCl中，RT—PCR检测凋亡素在细胞中的表达，用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 酶切鉴定及测序结果表明重组凋亡素真核表达载体pcDNA3．1-VP3构建成功。RT—PCR证实VP3基因在COCl中存在并在转录水平表达。转染pcDNA3．1-VP3细胞凋亡率明显高于转染空质粒组（P〈0．01）。结论 凋亡素可有效诱导卵巢癌细胞COCl凋亡。