青蒿素诱导K562细胞凋亡研究

[目的]研究青蒿素对体外培养的K562细胞的凋亡诱导作用及机制。[方法]MTT法测定药物对K562细胞生长的抑制作用；透射电镜观察药物对K562细胞形态学的影响；流式细胞仪检测经药物作用后的细胞凋亡率；用Rhodamine(Rhl23)染色法检测细胞线粒体跨膜电位(Δψm)的变化。[结果]青蒿素对K562细胞生长有明显的抑制作用，细胞经药物作用48小时后的IC50为26．51μmol／L；电镜观察细胞有典型的凋亡形态特征；细胞凋亡率在一定范围内与药物浓度正相关。给药后跨膜电位明显下降。[结论]青蒿素可抑制K562细胞的生长，诱导K562细胞跨膜电位下降而导致细胞凋亡。     

整合素信号转导通路对K562细胞凋亡的影响

目的探讨整合素介导的细胞凋亡抑制途径是否参与了慢性粒细胞白血病（CML）急变期细胞株K562细胞的凋亡耐受机制,以求为CML的治疗提供新思路。方法流式细胞术和丫啶橙双色荧光显微镜分析检测抗整合素α5β1单抗（Anti-α5β1）对K562细胞凋亡的影响,Western blot 技术和RT-PCR技术分析Anti-α5β1对K562细胞内凋亡相关因子PI3K、AKT和survivin表达的影响。结果Anti-α5β1可通过抑制K562细胞内PI3K和survivin mRNA的表达,下调AKT和PI3K蛋白表达水平及蛋白磷酸化水平诱导K562细胞凋亡。抗整合素α5β1抗体的促凋亡能力强于IFNα-2b,其原因可能与IFNα-2b不能显著降低PI3K和p-AKT表达水平有关。结论整合素α5β1介导的PI3K-AKT-survivin信号转导通路参与了K562细胞的凋亡耐受。     

微波和足叶乙甙诱导K562细胞的凋亡

目的：探讨微波和足叶乙甙体外诱导Ｋ５６２细胞凋亡和可能性及其机制。方法：将微波和足叶乙甙分别单位以及联合作用于正常骨髓细胞和Ｋ５６２细胞株,通过细胞凋亡率和ｂｃｌ－２和ｐ２１＾ｒａｓ蛋白阳性率的测定来评价细胞凋亡的程度并研究其机制。结果：微波和足叶乙甙各自都能诱导正常骨髓细胞和Ｋ５６２细胞的少量凋亡,两者联合作用所诱导的细胞凋亡率较之于足叶乙甙有显著性增加（Ｐ〈０．０５）,其中Ｋ５６２细胞凋亡率的     

白藜芦醇对MG132诱导K562细胞凋亡影响的研究

目的:研究白藜芦醇能否增加K562细胞对MG132的敏感性.方法:MG132单独及联合白藜芦醇作用于K562细胞,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测PARP剪切水平.结果:＞50 μmol/L白藜芦醇能够有效地抑制K562细胞的活力,P＜0.01;MG132单独处理K562细胞24 h,对细胞活力的抑制呈剂量依赖性,P＜0.01;而联合用药时,白藜芦醇呈剂量依赖性的对抗了MG132对K562细胞的毒性,并且5μmol/L白藜芦醇有效的降低了K562细胞凋亡率,P＜0.05.结论:白藜芦醇具有对抗MG132诱导细胞毒性的潜在作用.     

肝素干预长春新碱诱导的K562细胞凋亡

目的探讨肝素对长春新碱诱导的K562细胞凋亡及增生的影响。方法肝素预处理K562细胞1h,再经长春新碱（0．05mg／L）处理24h,应用Hoechst33342染色、DNA电泳、FMC等方法检测细胞凋亡。Trypanblue染色及MTr法检测细胞毒性及增生反应。结果Hoechst33342荧光染色见长春新碱凋亡诱导组细胞凋亡率达40．10％,肝素25、50、100、200U／ml组凋亡率依次为32．47％、29．70％、25．50％、19．53％（均P〈0．05）。随肝素浓度增加DNA电泳凋亡梯带亮度逐渐减弱至消失。FACS检测凋亡诱导组凋亡率为21．61％,肝素25～200U／ml组凋亡率依次为13．64％、11．75％、8．59％、6．03％（均P〈0．05）。肝素各组处理K562细胞24h后细胞存活率、活细胞总数及细胞增生水平与正常对照组比较差异均有统计学意义（P〉0．05）。结论肝素浓度在200U／ml内对K562细胞无毒性作用及增生影响,在25～200U／ml以浓度依赖性方式抑制由长春新碱诱导的K562细胞凋亡。     

紫草素诱导人白血病细胞K562的凋亡

目的: 研究紫草素对人白血病细胞株K562增殖抑制和诱导凋亡作用.方法: 四氮甲唑蓝(MTT)观察细胞的生长状况,应用彗星分析法、TUNEL技术和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果: 紫草素在(1-9)×10-5mol/L浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性,9 X 10-5mol/L紫草素作用72h的K562细胞株A值最低;彗星分析法显示经紫草素作用的K562细胞出现长的彗尾条带;原位细胞凋亡可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块;流式细胞仪检测细胞凋亡主要发生在G1/S期.结论: 紫草素在体外一定浓度范围内能抑制K562细胞增殖,诱导凋亡.     

N-磷酰化二肽甲酯诱导K562细胞凋亡

背景与目的：磷被认为是生命代谢过程中的中心元素,许多N-磷酰化氨基酸和N-磷酰化肽具有重要的生物活性和药用价值。本实验研究N-磷酰化二肽甲酯诱导人慢性髓性白血病K562细胞凋亡作用。方法：采用四甲基偶氮唑盐还原法[3-（4,5-dimethylthiazo-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT]检测15种N-磷酰化二肽甲酯对K562细胞的增殖抑制作用;用Hoeches33258染色后观察细胞核的形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳,双染法和流式细胞术检测细胞凋亡。结果：MTT法筛选出细胞增殖抑制活性较好的化合物是（DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3,IC50为22.66μmol/L;Hoechst33258染色后细胞核出现明显的凋亡形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型的梯状条带;流式细胞仪检测到早期的凋亡细胞。结论：（DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3能够诱导K562细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的了解三氧化二砷(As2O3)诱导慢粒细胞系K562细胞株凋亡是否与线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potentials,△ψm)改变有关及其可能机制。方法联合应用As2O3、DTT和BSO处理K562细胞株,通过细胞内荧光染料PI/Rh123的色强度分析(△ψm),测定细胞活力、亚G1期细胞含量及形态学观察等鉴定细胞凋亡。结果As2O3可明显诱导K562细胞线粒体△ψm下降。BSO可加强As2O3诱导的K562细胞凋亡和线粒体△ψm下降,而DTT则有部分拮抗作用。在2×10-6mol/L As2O3处理72h的K562细胞,PI-Rh123-细胞达(26.0±2.5)%,当1×10-3mol/LBSO同时处理时,PI-Rh123-细胞和凋亡细胞数上升达(37.2±5.7)%和(39.1±4.5)%;而当2×10-4mol/L DTT同时处理时,PI-Rh123-细胞和凋亡细胞数分别降至(11.5±1.3)%和(15.4±3.5)%。结论线粒体跨膜电位下降是As2O3诱导K562细胞凋亡的关键环节,其机制可能与巯基氧化有关,巯基可能是As2O3凋亡细胞的重要靶分子。     

榄香烯诱导K562细胞凋亡的流式细胞术分析

应用流式细胞分析技术检测了榄香烯作用前后人白血病Ｋ５６２细胞凋亡峰的出现，细胞凋亡百分率、癌基因ｂｃｌ－２蛋白的表达等指标。     

3,7-二硝基二苯并溴五环盐诱导K562肿瘤细胞凋亡作用研究

目的：研究３,７－二硝基二苯半溴五环盐对人慢性粒细胞红白血病细胞株Ｋ５６２增殖的影响及其凋亡机理。方法：采用台盼攻拒染法,ＭＴＴ比色法及克隆形成率等方法,并用化学、荧光及电子显微镜观察照相,流式细胞术等方法分析ＤＮＡ断裂的数值。结果：ｃＢｒ对Ｋ５６２具有杀伤作用,可明显抑制Ｋ５６２细胞增殖,呈现时间和剂量效应：克隆形成率测得ＩＣ５０为０．４９７ｍｍｏｌ／Ｌ,流式细胞术测定凋亡率为７０．３４％;荧光显微镜和电镜观察到明显凋亡特征。结论：ｃＢｒ抑制肿瘤增殖是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的。     

氨基葡萄糖硫酸盐诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的　探讨氨基葡萄糖硫酸盐(GS)对慢性髓系白血病K 5 62细胞凋亡诱导作用和分子机理。方法　采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线来观察GS对K5 62细胞的生长抑制作用;取对数生长期K 5 62细胞,在0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS不同浓度作用48h后,利用细胞计数、电镜、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色、DNA梯状电泳、流式细胞仪等方法来观察GS对K 5 62细胞的抑制效应和促凋亡作用。并用Westernblot检测活化的caspase 3和bcl- 2基因的表达。结果　0 .5 ,1.0 ,5 .0mmol/LGS对K 5 62细胞的生长有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性(P <0 .0 1)。采用光镜、电镜和AO /EB染色法发现5mmol/LGS作用K 5 62细胞后,出现典型的凋亡形态学改变。AnnexinV染色后流式细胞仪能检测到早期凋亡细胞,细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期比例减低,并有凋亡峰。有明显的梯状DNA。同时GS诱导K 5 62细胞凋亡后出现活化的Caspase 3 ,而Bcl- 2蛋白表达减弱,甚至消失。结论　GS能诱导白血病K- 5 62细胞凋亡,该过程伴有Caspase- 3的活化和Bcl- 2蛋白表达降低。     

苦参碱对K562及其多药耐药细胞K562/vin、K562/dox的诱导凋亡作用

目的　明确中药苦参碱对化疗敏感和耐药细胞的诱导凋亡作用。方法　采用MTT法测定苦参碱对各细胞的IC5 0值。K 5 6 2、K 5 6 2 /vin、K 5 6 2 /dox细胞与适宜浓度苦参碱共同孵育于 16 40培养液中 ,一定时间后对细胞行Wright′s Giemsa染色 ,做形态学观察 ,同时行DNA凝胶电泳、流式细胞仪DNA含量分析以检测凋亡。结果　细胞形态学观察可见 0 .2 5～ 1.0 0mg/ml浓度苦参碱作用后的细胞体积缩小、核固缩深染、细胞质空泡化、核碎裂等 ;DNA电泳可见阶梯状条带 ;流式细胞仪检测可见有低G1期细胞出现 ,并S期细胞比例增高。在试验范围内凋亡比率与药物浓度呈一定相关。苦参碱对敏感和耐药细胞的诱导凋亡作用无明显差异。结论　苦参碱可诱导K 5 6 2细胞凋亡 ,对其多药耐药细胞K 5 6 2 /vin、K 5 6 2 /dox亦有诱导凋亡作用 ,其作用与药物浓度呈一定相关性。苦参碱诱导肿瘤细胞凋亡可能与其S期阻滞有关。     

他莫昔芬诱导K562细胞凋亡的实验研究

 目的 观察他莫昔芬对体外培养的人白血病细胞系K562细胞增生抑制及诱导凋亡作用。方法 在体外设定的浓度梯度和作用时间下用他莫昔芬处理K562细胞,采用锥虫蓝拒染法计数活细胞数,并计算细胞生长率,Wright-Giemsa染色光镜观察细胞形态、琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯带（DNA,ladder）、流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率。结果 他莫昔芬能够抑制K562细胞增生;1 ~ 5μmol／L他莫昔芬可诱导K562他莫昔芬对体外培养的人白血病细胞系K562细胞。结论 他莫昔芬可抑制K562细胞生长,诱导其凋亡。     

彗星实验检测紫外线诱导的K562细胞DNA损伤

背景与目的研究紫外线(Ultraviolet,UV)诱导K562细胞DNA损伤情况,评价彗星实验改良方法及分析参数的可靠性。材料与方法采用0.3mW/cm2UV以用不同时间(3、5、10、40、60、120、180、240s)照射K562细胞,诱导细胞DNA损伤,用彗星实验检测,CASP软件分析。结果尾长、彗星长、尾矩、Olive尾矩4个参数与紫外线照射时间有良好的时间依赖关系。结论0.3mW/cm2的紫外线照射K562细胞3s即可造成细胞DNA损伤,CASP分析软件可以用于彗星检测分析,其中尾长、彗星长、尾矩、Olive尾矩可作为彗星实验的分析指标,所改良的彗星实验系统可靠性较强,且基本上解决了实验中常见的脱胶现象,采图更方便。     

人参皂苷Compound K对慢性粒细胞白血病K562细胞系凋亡诱导作用及其机制的研究

[目的]探讨人参皂苷CompoundK（CK）对慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的诱导作用及其机制。[方法]应用MTT法检测CK对K562细胞增殖的影响,用流式细胞术分析细胞凋亡情况,半定量RT—PCR检测Caspase3、Caspase9、Bcl-2和Bax的mRNA表达水平,WesternBlot检测Caspase3、Caspase9、Bcl-2和Bax蛋白质的表达。[结果]人参皂苷CK能诱导K562细胞的凋亡,细胞凋亡率呈浓度依赖性增加。RT—PCR结果显示Caspase3、Caspase9mRNA的表达上调,Bcl-2mRNA的表达下调,WesternBlot实验显示蛋白质表达情况与RT—PCR结果-致,Caspase3、Caspase9蛋白质的表达上调,Bcl-2的表达下调。[结论]人参皂苷CK诱导K562细胞凋亡作用的机制可能是CK抑制Bcl-2基因的表达,进而使Caspase3、Caspase9表达量上调,启动凋亡途径,引起凋亡。     

中药苏木提取物诱导K562细胞凋亡的研究

目的：探讨中药苏木提取诱导人类慢性髓性白细胞病K562细胞的凋亡作用。方法：采用MTT法检测苏木提取物对K562细胞增殖抑作用。荧光显微镜观察细胞形态变化,库尔特全自动颗粒粒度分析药物引起K562细胞体积大小的分布变化,琼脂糖凝胶是电泳测定DNAladder及流式细胞术检测细胞周期变化,结果：25μg/ml苏木浸膏能明显诱导K562细胞凋亡,产生凋亡细胞所具有的典型形态学及生化学特征,同时对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用呈一定的浓度依赖性,结论：中药苏木提取物能诱导细胞凋亡,抑制癌细胞增殖呈一定的浓度依赖关系。     

梁金菇多糖对K562细胞凋亡及相关分子表达的影响

目的 研究梁金菇多糖（ABPS）对人白血病细胞K562凋亡的影响及其机制。方法 应用荧光显微镜观察凋亡细胞形态。应用流式细胞仪检测ABPS对K562细胞周期的改变及凋亡的影响。应用Western blot检测bcl-6及增殖细胞核抗原（PC-NA）的表达情况。结果 荧光显微镜下观察到K562细胞核碎裂，核溶解和凋亡小体形成等典型的凋亡形态学变化。DNA凝胶电泳观察到“阶梯状”条带，用药5天后，G1期细胞数明显增多，占54.5%,42.0%的细胞发生凋亡。bcl-6表达水平升高，PCNA表达水平下降。结论 ABPS能诱导K562细胞发生凋亡，其机制可能与PCNA表达水平下降，bcl-6表达水平升高有关。