IDO激活剂治疗再生障碍性贫血的实验研究

目的 探讨IDO参与再生障碍性贫血(Aplastie Anemia,AA)的免疫系统异常活化的发病机制,观察IDO特异性激活剂--3,4-DAA治疗再障的疗效.方法 建立免疫介导的再障小鼠模型,用反向高效液相色谱法检测色氨酸(Trp)和其代谢产物犬尿氨酸(Kyn)的血清水平,用RT-PCR方法检测骨髓单个核细胞IDO mRNA的表达水平,探讨IDO在疾病进程中的异常表现;给予3,4-DAA治疗后检测相应指标的变化.结果 模型小鼠Trp浓度明显低于正常小鼠.Kyn浓度明显高于正常小鼠(P＜0.05),模型小鼠的单个核细胞IDO mRNA表达水平较正常小鼠高(P＜0.05);给予3,4-DAA治疗后上述指标差异更具统计学意义(P＜0.01).结论 在再障发病过程中,色氨酸限速酶IDO的表达水平和活性均较正常明显增高,促进色氨酸向犬尿氨酸转化,色氨酸的不足导致细胞内的"色氨酸饥饿状态"从而抑制T细胞的活化和增殖,是机体免疫系统自我调节的一种重要保护机制,IDO激活剂理论上是一种治疗再障的新策略.     

色氨酸代谢在再生障碍性贫血中的实验研究

目的 探讨色氨酸代谢参与再生障碍性贫血（Aplastic Anemia，AA）的免疫系统异常活化的发病机制。方法 建立免疫介导骨髓衰竭模型，用反向高效液相色谱法检测色氨酸（Trp）和其代谢产物犬尿氨酸（Kyn）的血清水平，以及Trp的限速酶——吲哚胺双加氧酶（IDO）活性，用RT—PCR方法检测骨髓单个核细胞IDOmRNA的表达水平，探讨色氨酸在疾病进程中的异常表现。结果 模型小鼠Trp浓度明显低于正常小鼠（P〈0．05），模型小鼠IDO活性明显高于正常小鼠（P〈0.05），模型小鼠的单个核细胞IDOmRNA表达水平较正常小鼠高（P〈0．05）。结论 免疫介导骨髓衰竭模型小鼠的色氨酸限速酶IDO的表达水平和活性均较正常小鼠高，免疫系统的异常活化导致必需氨基酸色氨酸的不足。     

ID-LC-MS/MS检测L-色氨酸及其代谢物的方法建立及方法学评价

目的建立同位素稀释液相色谱串联质谱(ID-LC-MS/MS)方法检测血清中L-色氨酸及其代谢物。方法方法学建立及评价。收集2022年11月至2023年1月的华西医院166例健康体检者的血清样本。采用L-色氨酸(Trp)、L-犬尿氨酸(Kyn)和犬尿喹啉酸(KA)的同位素标记物为内标, 通过蛋白沉淀处理血清样本, 应用LC-MS/MS同时检测Trp、Kyn和KA含量。评价该方法的选择性、特异性、线性、检出限(LOD)、定量限(LOQ)、携带污染、精密度、加标回收率、基质效应和稀释一致性。结果 Trp、Kyn和KA的线性相关系数均>0.999, LOD分别为0.10 μmol/L、0.01 μmol/L和1.00 nmol/L, LOQ分别为0.20 μmol/L、0.04 μmol/L和2.00 nmol/L, 批内精密度和批间精密度均<10%, 平均加标回收率与相对基质效应均在100%左右, 超线性范围的样本最多可稀释16倍。健康体检者血清中Trp、Kyn、KA含量、Kyn/Trp和KA/Kyn比值分别为(59.55±10.92)μmol/L、(1.85±0.43)μmol...     

高效液相色谱-荧光法测定SLE患者血清色氨酸及其代谢产物

目的建立一种同时测定血清色氨酸(tryptophan,Trp)、犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)和犬尿喹啉酸(kynurenic acid,Kyna)的高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FD),并用此法检测SLE患者血清中Trp及其代谢产物Kyn、Kyna的含量。方法血清标本经0.624 mol/L的高氯酸溶液去除蛋白质后取上清液20μl直接进样分析测定。色谱柱为Hypersil C18柱,流动相为0.20mol/L醋酸锌、8.3 mmol/L醋酸和2.5%的乙腈;流速为1.5 ml/min;荧光检测激发波长和发射波长在0~11 min分别为365nm和480 nm,11~15.5 min变换为344 nm和404 nm,15.5~20 min为254 nm和404 nm。采用建立的方法测定体检健康者和SLE患者血清Trp、Kyn和Kyna的含量。结果Trp的线性范围为0.610~196μmol/L,最低检出浓度为0.005μmol/L,平均回收率为103.71%;Kyn线性范围为0.049~98μmol/L,最低检出浓度为0.025μmol/L,平均回收率为97.45%;Kyna线性范围为1.05...     

高效液相色谱法同时测定血清色氨酸和犬尿氨酸浓度的方法建立及应用

目的建立一种高效液相色谱-紫外检测法同时测定血清中色氨酸(Trp)和犬尿氨酸(Kyn)浓度的方法。方法色谱柱采用Agilent Hypersil ODS(125.0mm×4.0mm,5μm),流动相为15mmol/L乙酸钠缓冲液(pH4.0)和乙腈95∶5(V/V),流速为0.8ml/min,柱温25℃,紫外检测λKyn=360nm,λTrp=278nm。结果Kyn和Trp的保留时间分别为3.3min和5.2min,线性范围分别为0.083~21.000μmol/L和2.650~678.000μmol/L,检测限分别为0.028μmol/L和0.053μmol/L,日内和日间相对标准偏差分别低于5%和10%,回收率分别为91.99%~113.89%和95.81%~118.82%。结论该方法简便、快速、特异,适合于临床检测。     

食管癌术后吻合口延迟愈合对机体免疫及预后的影响

目的:探讨胸内吻合口延迟愈合是否会引起机体的免疫学变化及这些变化对患者长期生存的影响。方法:根据术后吻合口是否发生线状瘘并延迟愈合将全部41例患者分为L组(21例)和N组(20例)。另设健康对照5例(H组)。分别检测3组研究对象外周血中色氨酸(Trp)、犬尿氨酸(Kyn)、IL-2、TNF-α浓度及NK细胞杀伤活性。分析L和N组患者预后的差别。结果:L组与N组相比Kyn/Trp比值明显降低(P<0.05),而IL-2、TNF-α浓度和NK细胞杀伤活性则显著提升(P<0.05)。L、N组分别与H组比较发现Kyn/Trp比值和IL-2浓度组间差异均有统计学意义(P<0.05)。随访结果显示L组患者较N组预后好。结论:胸内吻合口延迟愈合通过相关机制使体内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)活性下调,同时IL-2、TNF-α等细胞因子上调,促进NK细胞的活化,降低局部复发和远处转移的风险。     

高效液相色谱-荧光法测定血清犬尿喹啉酸和色氨酸方法的建立

目的建立同时检测血清犬尿喹啉酸（kynurenic acid，KYNA）和色氨酸（tryptophan，Trp）的高效液相色谱-荧光法。方法采用高效液相色谱在线衍生技术，通过对最佳检测波长、流速、流动相中醋酸锌浓度和乙腈比例等因素的探讨，得出测定Trp和KYNA的最优实验方案，并对其进行方法学评价；测定50名正常人血清KYNA和Trp含量。结果KYNA保留时间约为8．1min，线性范围为1．05～2093nmoL／L，最低检出浓度为0．05nmoL／L，平均回收率为101．19％；Trp保留时间约为11．3min，线性范围为0．49～196μmoL／L，最低检出浓度为0．001μmoL／L，平均回收率为104．43％，二者日内、日间测定的变异系数均小于5％，苯丙氨酸、酪氨酸、5-羟色胺和犬尿氨酸等物质对该法均无干扰。健康成人血清KYNA和Trp含量分别为（24．25±9．11）nmol／L和（49．05±11．67）μmol／L。结论建立的方法简便、快速、稳定、可行，适用于临床和科研工作。     

高效液相色谱-荧光法同时测定血清中的色氨酸和酪氨酸

目的建立一种高效液相色谱（HPLC）-荧光法（FD）同时测定血清色氨酸（Trp）和酪氨酸（Tyr）的方法。方法色谱条件：Megres C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,内径为5μm）,流动相为10%乙腈溶液,流速为1.2 mL/min,Tyr和Trp的荧光检测激发波长和发射波长分别为λexTyr=228 nm、λexTrp=285 nm和λemTyr=306 nm、λemTrp=353 nm。血清样本经5%高氯酸溶液去除蛋白质后取上层清液直接进样进行分析测定。且对样本的保存方法进行了探讨。结果 Tyr的保留时间为3.4 min,线性范围为0.275~275μmol/L,最低检出浓度为0.004μmol/L,回收率为90.5%~108.8%。Trp的保留时间为7.6 min,线性范围为0.490~196μmol/L,最低检测浓度为0.005μmol/L,回收率为88.8%~97.2%。Tyr和Trp的日内、日间测定的相对标准偏差均〈5%,苯丙氨酸、5-羟色胺、犬尿喹啉酸、犬尿氨酸和肌酐等物质对该法均无干扰。样本应-20℃冰冻保存。结论该方法简便、快速、敏感、特异,可同时测定血清Tyr和Trp,适合于临床和科研应用。     

再生障碍性贫血患者血清白细胞介素—3检测及其临床意义

目的 检测再生障碍性贫血（再障）患者血清白介素－3（IL－3）水平并探讨其意义。方法 采用酶联免疫法。结果 测定50例再障患者（慢性再障40例，重型再障10例）血清IL－3水平，18例高于正常（P＜0．01），其中慢性再障10例，重型再障8例；IL－3水平升高的再障患者CFU－GM数明显低于IL－3水平正常的患者（P＜0．05）。IC－3升高的再障患者同IL－3正常者疗效无差异（P＞0．05），而治疗有效的IC－3升高患者治疗后IL－3水平明显降低（P＜0．05）。结论 再障患者IC－3水平的检测有助于判定疾病的严重程度，为治疗提供指导。     

脑梗死患者血清IDO及KAT比活性测定

目的 探讨吲哚氨2,3-双加氧酶(IDO)及犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)活性在脑梗死患者中的变化情况及病理作用.方法 正常对照组35例和脑梗死组81例,采用免疫透射比浊法测定血清超敏C反应蛋白(hsCRP)、载脂蛋白A1(APOA1)、载脂蛋白B(APOB)浓度,采用酶法分析甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHO)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、游离脂肪酸(NEFA)浓度,采用HPLC-荧光衍生法测定血液色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)及犬尿喹啉酸(KYNA)浓度,计算IDO及KAT比活性,并进行对照分析.结果 脑梗死组TRP、KYNA、HDL、KAT比活性明显低于对照组(P均＜0.05).脑梗死组hsCRP、IDO比活性明显高于对照组(P均＜0.01).脑梗死患者IDO比活性与hsCRP呈正相关(r=0.425,P=0.027).结论 脑梗死患者体内存在炎症反应,炎症应答上调IDO的活性表达,进而影响KYN代谢途径,可能与脑梗死患者的病理生理密切相关.     

Tryptophan degradation in multiple trauma patients: survivors compared with non-survivors

Immune dysfunction in trauma patients is associated with immune system activation and inflammation. The cytokine-inducible enzyme IDO (indoleamine 2,3-dioxygenase) initiates the degradation of the essential aromatic amino acid tryptophan via the kynurenine pathway and could contribute to deficient immune responsiveness. Activated IDO is indicated by an increased kyn/trp (kynurenine/tryptophan) ratio. The aim of the present study was to investigate whether tryptophan degradation is associated with outcome in patients post-trauma. Tryptophan and kynurenine concentrations were measured by HPLC in serum specimens of 15 patients post-trauma during 12-14 days of follow-up. Up to five samples within this observation period from each patient were included in this analysis, and a total a 69 samples were available. For further comparisons, concentrations of the immune activation marker neopterin were measured. Compared with healthy controls, the average kyn/trp ratio and kynurenine concentrations were increased in patients, whereas tryptophan concentrations were decreased. During follow-up, increased kyn/trp ratio and kynurenine concentrations (all P<0.001) were observed, whereas the changes in tryptophan concentrations were not significant. Non-survivors had higher kyn/trp ratios and kynurenine concentrations compared with survivors. The kyn/trp ratio correlated with neopterin concentrations (r(s)=0.590, P<0.001). In conclusion, these results imply that increased tryptophan degradation in patients is due to activated IDO, which most probably is a consequence of a host defence response. These findings support a possible role for IDO in the development of immunodeficiency and death in patients.     

Enhanced enzymatic degradation of tryptophan by indoleamine 2,3-dioxygenase contributes to the tryptophan-deficient state seen after major trauma

Decreased lymphocyte proliferation, lymphopenia, immunodepression, and opportunistic infections are common after major trauma. Early alimentation in these patients corrects lymphopenia, enhances immunity, and reduces the incidence of infections, but the underlying mechanisms are poorly understood. Tryptophan is essential for the production and function of rapidly proliferating cells such as lymphocytes. Tryptophan is enzymatically degraded by indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO), whose activity is solely dependent on expression of interferon-gamma (IFN-gamma). Because increased expression of IFN-gamma has been reported in trauma patients, we investigated whether enhanced IDO-mediated tryptophan degradation is associated with lymphopenia and poor outcomes after major trauma. The incidence of bacteremic sepsis (BS), adult respiratory distress syndrome (ARDS), multiple organ dysfunction/failure syndromes (MODS/MOF), and death was prospectively documented in 22 trauma patients with a mean ISS of 24.9 +/- 2.2. Sequential blood samples were obtained from admission through postinjury day 10. Five patients developed BS, three of whom developed ARDS; two of the three ARDS patients developed MOF and died on day 10. Trauma patients had significantly lower tryptophan levels (days 1-10), higher kynurenine:tryptophan ratios (days 1-2), and fewer lymphocytes (days 1-4) than healthy volunteers (P < 0.05). Although patients with poor outcomes (i.e., BS, ARDS, MOF, and death) had significantly lower tryptophan levels and greater lymphopenia on several days after injury, the sample size was too small to draw any definitive conclusions. These data indicate that decreased plasma tryptophan levels and lymphopenia typically occur after major trauma. A concomitant increase in kynurenine suggests that the observed tryptophan deficiency is caused, in part, by IDO-mediated tryptophan degradation.     

原发性高血压患者血浆色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸浓度的变化

目的通过测定血浆色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)浓度,探讨外周吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)活性与原发性高血压(EH)的关系。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定100例EH患者和80名健康体检者(对照组)血浆TRP、KYN和KYNA浓度,计算产物/底物的百分比来评价酶活性,即IDO活性=KYN/TRP×100%,KAT活性=KYNA/KYN×100%。结果 EH组血浆TRP浓度为(59.85±9.89)μmol/L,明显高于对照组[(48.19±7.72)μmol/L,P<0.001];KYN浓度为(2.01±0.48)μmol/L,明显低于对照组[(2.17±0.43)μmol/L,P<0.05]。EH组和对照组血浆KYNA浓度分别为(24.10±9.12)、(23.59±7.27)μmol/L,二者差异无统计学意义(P>0.05)。EH组IDO活性为3.40%±0.85%,明显低于对照组(4.54%±0.81%,P<0.001);而KAT活性为1.20%±0.36%,明显高于对照组(1.09%±0.27%,P<0.05)。EH组血浆TRP浓度与年龄呈负相关(r=-0.316,P=0.001),而对照组二者之间无明显相关性(r=-0.208,P=0.064)。EH组和对照组血浆IDO活性均与年龄呈正相关(EH组:r=0.264,P=0.008;对照组:r=0.305,P=0.006)。2组血浆KYN、KYNA浓度及KAT活性与年龄均无明显相关性。结论EH组血浆TRP浓度明显增高而KYN浓度明显降低,提示外周TRP-KYN代谢途径的IDO活性可能与EH有关。     

再生障碍性贫血患者血清sVCAM-1、IL-18和VEGF水平及其临床意义

本研究探讨再生障碍性贫血（AA）患者血清可溶性血管细胞黏附分子-1（sVCAM-1）、白介素18（IL-18）和血管内皮生长因子（VEGF）水平及其临床意义。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测30例AA患者和25例正常人血清sVCAM—1、IL-18和VEGF水平。结果表明：AA患者血清sVCAM-1和IL-18水平分别为（839．08±173．97）ng／ml和（380．354-47．76）pg／ml,较正常对照组的（538．164-91．21）rig／ml和（256．39±59．52）pg／ml明显升高（p均〈0．01）;且重型AA的sVCAM-1和IL-18水平[（969．94±182．54）ng／m]、（388．96±46．06）pg／ml]较慢性AA的sVCAM和IL-18水平[（709．26±165．32）ng／ml、（352．21±47．08）pg／ml]升高更为明显（P〈0．01;P〈0．05）;而AA患者血清VEGF水平[（69．634-27．42）pg／ml]较正常对照组[（125．62±32．15）pg／ml]明显降低（P〈0．01）,且重型AA[（51．30±29．86）pg／ml]较慢性AA[（80．02±25．14）pg／ml]降低更显著（P〈0．01）。AA患者治疗后血清sVCAM-1和IL—18水平[（623．84±176．57）ng／ml、（295．25±89．31）pg／ml]较治疗前[（847．33±186．41）ng／ml,（368．50±62．02）pg／ml]明显降低（p〈0．01;P〈0．05）,而VEGF治疗后水平[（90．61±28．76）pg／ml]较治疗前[（63．93±26．04）pg／ml]则明显升高（p〈0．05）。结论：高水平的sVCAM-1、IL-18及低水平的VEGF细胞因子,可能与AA的发生、发展及病情进展相关。     

基于疾病风险分层的健康管理模式在中青年高血压前期患者中的应用效果

目的：探讨基于疾病风险分层的健康管理模式在中青年高血压前期患者中的应用效果。方法：选取中青年高血压前期患者256例,随机分为观察组和对照组各128例。对照组采用常规健康教育,观察组采用疾病风险分层的健康管理模式。结果：干预6个月后,观察组超重与肥胖、摄入盐过量、运动量不足、不合理膳食、饮酒情况均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;吸烟、心理问题情况比较差异无统计学意义（P>0.05）;在趋势性检验中,膳食不合理、饮酒比较差异有统计学意义（P<0.05）。干预3、6个月后,观察组自我健康管理行为各维度得分均高于对照组,且随时间改变呈增高趋势（P<0.001）;收缩压、舒张压均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,且随时间改变呈降低趋势（P<0.001）。结论：基于疾病风险分层的健康管理模式可有效改善中青年高血压前期患者的健康危险因素,促进自我健康管理行为的建立,从而降低血压水平。     

重症贫血患者血清白细胞介素-3检测的意义

目的 检测重症贫血患者血清介素(IL-3)水平,并探讨它的意义。方法 采用酶联免疫法对60例再生障碍性贫血患者血清IL-3水平进行测定。结果 60例再生障碍性贫血患者中IL-3稍高于正常对照组,(P<0.01),28例重症贫血患者血清IL-3水平明显高于正常(P<0.05)。其中慢性再障(CAA)15例,重症再障(SAA)13例;而治疗有效的IL-3升高患者,治疗后IL-3水平明显降低(P<0.05)。结论 重症贫血患者IL-3水平的检测有助于临床对疾病的诊断和掌握,为治疗提供指导。     

慢性肾脏病患者血清SCC和CYFRA21-1水平及其临床意义的研究

目的 探讨慢性肾脏病（CKD）患者血清鳞状细胞癌抗原（SCC）和细胞角蛋白19片段抗原21-1（CYFRA21-1）浓度变化及其临床意义.方法 选择90例CKD患者作为CKD组,根据其血清肌酐值再分为高肌酐组（47例,血清肌酐超过93 μmol/L）及正常肌酐组（43例,血清肌酐为39～91 μmol/L）,同期选择42例健康人作为对照.血清SCC、CYFRA21-1及肌酐的检测分别采用化学发光微粒子免疫分析法、电化学发光免疫分析法及苦味酸法.结果 高肌酐组患者血清SCC、CYFRA21-1浓度均明显高于正常肌酐组及对照组（P〈0.05）,正常肌酐组患者血清SCC、CYFRA21-1浓度均明显高于对照组（P〈0.05）.CKD组患者血清肌酐浓度与血清SCC、CYFRA21-1浓度呈正相关（rSCC=0.66,rCYFRA21-1=0.25,P〈0.05）.结论 血清SCC、CYFRA21-1水平可作为判断患者肾功能的指标.     

血尿酸及性激素水平与男性慢性心力衰竭的相关研究

方法:63例CHF患者及22例健康人,采用BECKMAN CX9分析仪测定血清UA浓度, 采用德国拜耳180ACS：Se全自动化学发光免疫分析仪测定血清T、E2水平。结果:男性CHF组UA水平显著高于对照组(P<0.001)，血清T水平显著低于对照组(P<0. 001)。在男性CHF患者中对比不同心功能分级(NYHA)患者各指标发现，血清UA水平随HF加重而显著升高，与CHF严重程度（LVEF）呈显著显著正相关(P<0.001)；T水平随HF加重明显降低，与CHF严重程度(LVEF)呈显著负相关((P<0.001)；在男性CHF患者中，血清UA与T水平呈负相关((P<0. 05)。结论:1、 血UA水平与男性CHF严重程度呈正相关，且与血清T相关性好，可做为判断男性CHF严重程度和影响预后的指标之一。2、血清T也可作为判断男性CHF及其严重程度的指标之一。     

同型半胱氨酸和 C-反应蛋白水平与冠状动脉病变相关性分析

目的研究同型半胱氨酸（Hcy）和C-反应蛋白（CRP）与冠心病病变程度的关系。方法选取123例行冠状动脉造影的患者,分为正常对照组、冠心病组、单支病变组、双支病变组、多支病变组,采集患者早晨空腹静脉血,选罗氏生化分析仪检测血脂、血糖、Hcy和CRP。所有对象行冠状动脉造影检查,根据造影结果分为正常对照组、冠心病组、单支病变组、双支病变组、多支病变组,比较各组间的Hcy和CRP水平。结果冠心病患者血清Hcy水平高于正常对照组（P〈0．05）,且单支病变组、双支病变组、多支病变组血清Hcy水平逐渐升高（P〈0．05）;CRP水平高于正常对照组（P〈0．05）,随着冠状动脉病变支数增加,血清CRP水平逐渐升高（P〈0．05）。结论血清Hcy与CRP水平与冠心病病变程度可能有相关性,可作为监测冠心病严重程度的指标。     

行动体验式心理健康教育对老年糖尿病合并心力衰竭患者心理应激的影响

目的：探讨行动体验式心理健康教育对老年糖尿病合并心力衰竭患者的效果及对心理应激的影响。方法：选取152例老年糖尿病合并心力衰竭患者,按随机数字表分为观察组与对照组,各76例。对照组采取常规健康教育,观察组采取行动体验式心理健康教育,干预时间2个月。比较2组干预前后的血清空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（PG2h）、糖化血红蛋白（HbA1c）、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、皮质醇（Cr）及自我管理效能。结果：两组干预2个月后,2组的FPG、PG2h与HbA1c均较干预前降低（P<0.05）。观察组干预后的FPG、PG2h与HbA1c低于对照组（P<0.05）。2组干预2个月后的KAB疾病知识与行为评分均较干预前升高、KAB态度评分较干预前降低（P<0.05）。观察组干预后的KAB疾病知识与行为评分高于对照组,态度评分低于对照组（P<0.05）。干预2个月后,2组的血清NE、E、Cr均较干预前降低,且观察组低于对照组（P< 0.05）。结论：与常规健康教育相比,行动体验式心理健康教育可有效强化老年糖尿病合并心力衰竭患者的血糖控制效果,提高患者自我管理能力,减轻心理应激。