补肾方含药血清促进PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸神经毒作用的研究

目的运用中药血清药理学方法研究补肾复方含药血清(BS)促进体外培养的PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸兴奋性神经毒损伤的作用.方法以MTT法观察BS对体外培养的PC12细胞活力的影响及其拮抗谷氨酸损伤的作用,采用流式细胞仪观察BS对谷氨酸所诱导PC12细胞凋亡的影响.结果 BS含药血清可以增强PC12细胞活力,拮抗谷氨酸的兴奋性神经毒作用且在20%浓度时作用最强,并且能够抑制谷氨酸诱导的PC12细胞早期凋亡.结论补肾方BS可能具有神经保护作用.     

藁本内酯对谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

研究藁本内酯对谷氨酸诱导PC12细胞凋亡的保护作用。采用MTT比色法检测细胞存活率;Annexin V-FITC/propidium iodide(PI)双染法流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡率;Fluo-3/AM荧光染色法检测钙离子含量;Western blot法检测线粒体和胞浆中细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达。结果显示,谷氨酸具有细胞毒性,其半数抑制浓度(IC50)为15 mmol·L-1;不同浓度藁本内酯(1、5、15μmol·L-1)预处理可显著提高细胞存活率。与正常对照组相比,谷氨酸单独给药组的细胞凋亡率为13.39%;藁本内酯给药组(1、5、15μmol·L-1)使细胞的凋亡率分别减少到9.06%、6.48%和3.82%。并且藁本内酯可以显著减少谷氨酸所致的钙离子内流,Western blot结果显示,藁本内酯可能通过减少线粒体Cyt C的释放,抑制Caspase-3活性,同时升高Bcl-2/Bax比值来保护谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡。结果表明,藁本内酯对谷氨酸诱导PC12细胞的凋亡具有保护作用。该保护作用可能与抑制细胞内钙离子内流及阻断Cyt C从线粒体释放入胞浆有关。     

Ⅱ、Ⅲ组亲代型谷氨酸受体激动剂对6-羟基多巴诱导的PC12细胞毒性无保护作用

阐明Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors,mGluRs)激动剂对6—羟基多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的PC12细胞毒性是否具有保护作用。方法：应用高效液相色谱仪联用荧光检测技术测定谷氨酸浓度，应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定PC12细胞活性。结果：6—OHDA剂量依赖性地诱导PC12细胞释放谷氨酸、减低细胞活性，Ⅱ组mGluRs激动剂DCG—IV和Ⅲ组mGluRs激动剂L-AP4对6—0HDA诱导的PC12细胞释放谷氨酸和细胞活性的降低均无显影响。结论：6—OHDA对多巴胺神经元的损伤作用与其诱导谷氨酸过度释放及其继发的兴奋性神经毒性有关，Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体激动剂对6—OHDA诱导的PC12细胞毒性无保护作用。     

黄连解毒汤对体内外损伤的神经保护作用

目的观察黄连解毒汤(HJDT)对体外糖氧剥夺(OGD)和谷氨酸诱导的PC12细胞损伤及体内小鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法体外建立OGD和谷氨酸诱导的PC12细胞损伤模型,分别给予不同浓度的HJDT作用一定时间,以MTT和LDH法观察HJDT对细胞损伤的保护作用。体内采用双侧颈总动脉阻断30 min建立C57BL/6小鼠全脑缺血模型,术前7 d开始灌服HJDT(1,2,4和8 g.kg-1)至术后3 d,采用新奇事物探究实验检测小鼠学习记忆能力,采用Nissl染色检测神经元存活的情况。结果 OGD 4 h复灌2 h后,HJDT(4.0×10-5,4.0×10-4,4.0×10-3g.L-1)可显著增加PC12细胞活性,(4.0×10-6,4.0×10-5,4.0×10-4g.L-1)减少LDH释放(P<0.01);谷氨酸处理24 h后,HJDT(4.0×10-4,4.0×10-3g.L-1)能显著增加PC12细胞活性,减少LDH释放(P<0.05)。小鼠全脑缺血后,HJDT 4 g.kg-1能显著提高小鼠对新奇物体的分辨比,HJDT(2,4 g.kg-1)可显著提高小鼠海马CA1区的神经元密度。结论 HJDT对体内外损伤具有神经保护作用。     

异黄酮活性成分对Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨异黄酮活性成分对β淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法从大豆中提取纯化异黄酮活性成分,以Aβ1-42诱导PC12细胞损伤为细胞模型,采用细胞形态学方法、MTT法、LDH法观察不同剂量的异黄酮活性成分对PC12细胞损伤的保护作用。结果异黄酮活性成分能有效地改善PC12细胞的形态,提高细胞存活率(P<0.05),保护组LDH活性低于损伤组(P<0.05)。结论大豆异黄酮活性成分对Aβ1-42诱导的PC12细胞损伤具有显著的保护作用。     

甘草次酸对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用及其机理

目的 考察甘草次酸对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的保护作用及作用机制.方法 使用20 mmol·L-1谷氨酸处理大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(PC12),构建细胞凋亡模型.采用药物预处理给药方法,MTT法测定细胞存活率,Fluo-4 AM染色测定胞内钙离子浓度,JC-1染色测定线粒体跨膜电位变化,western blot测定Bcl-2和Bcl-X1蛋白表达.结果 甘草次酸可明显提高谷氨酸诱导的PC12细胞的还原能力,抑制细胞LDH的释放,提高细胞存活率;抑制兴奋性谷氨酸所引起的细胞内钙离子内流;还原谷氨酸引起的线粒体跨膜电位的减弱,增加Bcl-2和Bcl-X1蛋白的表达量.结论 甘草次酸可通过线粒体依赖途径有效抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡.     

7,8-二羟基-4-甲基香豆素对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用

目的探讨7,8-二羟基-4-甲基香豆素(Dhmc)对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用。方法采用谷氨酸诱导PC12细胞损伤凋亡模型,给予Dhmc处理后,MTT法检测细胞增殖;化学检测法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、细胞上清液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用Annexin-V-FITC双染法检测细胞凋亡率;采用荧光法检测活性氧(ROS)的生成;采用流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cyt C、cleaved caspase-3蛋白表达。结果 Dhmc可显著降低由谷氨酸诱导的细胞损伤,提高了细胞存活率,减少LDH漏出量,降低MDA含量,增加SOD活性,抑制ROS的生成,维持线粒体膜电位水平,下调Bcl-2/Bax比率,减少Cyt C的释放,降低Caspase-3活性。结论 Dhmc具有减轻由谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的作用,其机制可能与抗氧化应激和减轻线粒体损伤有关。     

天麻素通过抑制细胞凋亡保护谷氨酸诱导的PC12细胞损伤

目的：研究天麻素（Gastrodin）对谷氨酸诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的影响及可能机制。方法：以谷氨酸建立体外培养PC12细胞损伤模型并采用MTT比色法测定细胞存活率;AO/EB双染法经荧光显微镜观察细胞凋亡形态;采用流式细胞术检测细胞内活性氧含量以及Annexin V/PI染色后的细胞凋亡率;Western blot法检测细胞内Caspase-3蛋白表达。结果：天麻素可明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1～10μmol/L剂量呈一定的量效关系;同时,天麻素可明显抑制谷氨酸引起的活性氧（ROS）的累积,降低谷氨酸诱导的活性Caspase-3蛋白的表达,降低PC12细胞的凋亡率,在0.1～10μmol/L剂量呈量效相关性。结论：在一定剂量范围内,天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与减少ROS的生成,阻止氧化损伤的发生,抑制Caspase-3途径依赖的细胞凋亡相关。     

衍生肽Esc-1GN(1-24)能减轻细胞氧化应激损伤和调节细胞因子抑制炎症反应北大核心CSCD

目的 探究衍生肽Esc-1GN(1-24)的抗氧化和抗炎活性。方法 利用MTT检测Esc-1GN(1-24)对Raw264.7和PC12细胞增殖的影响及对H_(2)O_(2)诱导PC12细胞损伤的保护作用;利用FRAP、ABTS和DPPH法检测Esc-1GN(1-24)的抗氧化活性;利用流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)和细胞凋亡;通过ELISA检测Esc-1GN(1-24)对炎症因子的影响。利用小鼠足趾肿胀模型检测Esc-1GN(1-24)的体内抗炎活性。结果 Esc-1GN(1-24)细胞毒性低,并且抑制H_(2)O_(2)对PC12细胞的损伤;Esc-1GN(1-24)的总抗氧化能力强,能快速清除ABTS和DPPH自由基,减少H_(2)O_(2)诱导PC12的ROS产生和细胞凋亡;Esc-1GN(1-24)浓度依赖性抑制LPS诱导的Raw264.7细胞NO、IL-6、IL-1β和TNF-α的产生,且能抑制角叉菜胶诱导的小鼠足趾肿胀和MPO活力。结论 Esc-1GN(1-24)是一种具有良好抗氧化和抗炎活性的衍生肽,对抗菌肽的结构改造具有重要的参考意义。     

苯氧茚酮类衍生物的保护神经细胞和改善小鼠学习记忆作用

目的观察新型乙酰胆碱酯酶抑制剂苯氧茚酮类衍生物(YKY-1~7)对谷氨酸诱导PC12细胞神经毒性的保护作用和对Aβ25~35致痴呆小鼠学习记忆能力的改善作用。方法2mmol·L-1谷氨酸诱导PC12细胞兴奋毒性损伤,观察YKY-1~7对谷氨酸致PC12细胞兴奋毒性的保护作用;小鼠侧脑室注射(icv)凝聚态Aβ25~358μg制作痴呆模型,次日,igYKY-72·5、5、10mg·kg-1,连续10d,测试小鼠被动回避的学习记忆能力,大脑皮层、海马和血清中的乙酰胆碱酯酶(AChE)活性以及大脑皮层局部脑血流量。结果7个苯氧茚酮类衍生物中有6个对谷氨酸诱导的PC12细胞兴奋毒性损伤具有较好的保护作用,其中YKY-7的作用最强。YKY-7可明显改善Aβ25~35所致痴呆小鼠的学习记忆能力,对皮层和海马组织中AChE活性有相对较弱的选择性抑制作用,对皮层局部脑血流量也有一定的提高作用。结论所合成的多数苯氧茚酮类衍生物对神经细胞具有保护作用;对Aβ25~35icv致痴呆模型小鼠学习记忆功能有较大的改善作用,其作用可能与一定程度的选择性抑制大脑皮层和海马AChE活性有关。