IQGAP2在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的:认识肝细胞肝癌中含IQ模体的GTP酶活化蛋白2(IQ motif containing GTPase activating protein 2,IQGAP2)的亚细胞定位和表达,及其在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用.方法:分别通过Western blot、免疫荧光和免疫组织化学染色分析IQGAP2在7种人肝癌细胞与正常肝细胞系中的表达、定位,及其在HCC组织样本中的表达与分布.结果:IOGAP2在Bel-7402、Bel-7404、SMMC-7721、SK-HEP-1、HLE和HL-7702等肝癌和正常成人肝细胞系中不表达,仅在HepG2和Hep3B等2种甲胎蛋白(AFP)表达阳性的人肝癌细胞系中表达,IQGAP2主要分布于细胞质,此外,在HepG2细胞中还具有明显的核膜和核仁定位,IQGAP2在HCC组织中表达降低(56.9%,29/51).其中,19例配对HCC组织的IQGAP2表达与肿瘤大小,AJCC分期和血清AFP水平相关(P=0.020,P=0.017,P=0.002);38例配对组织IQGAP2在肿瘤和癌旁正常肝组织中主要定位于胞质,部分细胞伴有胞核和胞膜定位,但是,IQGAP2的表达与肿瘤大小、分化程度、AJCC分期以及血清AFP表达水平无相关性.结论:IQGAP2蛋白可能参与细胞黏附、信号转导等过程,在肝癌的发生发展中发挥重要作用,是一种潜在的抑癌基因.     

microRNA-145在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

[目的]探讨肝细胞肝癌中microRNA-145(miR-145)水平的变化及其临床意义。[方法]采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测30例肝癌组织、癌旁组织及3例正常肝组织中miR-145表达量,以及Hep G2肝癌细胞、L-O2胎肝细胞中miR-145表达量并计算miR-145相对表达量。结合采集组织的性别、年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、HBV感染、AFP浓度等临床病理参数分析miR-145表达水平有无明显差异。[结果]肝癌组织中miR-145表达明显低于正常肝组织,差异有统计学意义(P0.05),癌旁组织与正常肝组织及肝癌组织之间表达差异无统计学意义(均P0.05),Hep G2细胞中miR-145表达明显低于L-O2细胞,差异有统计学意义(P0.05)。miR-145在肝癌中的表达异常与性别、年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、HBV感染、AFP浓度无相关,差异无统计学意义。[结论]miR-145在肝癌患者中低表达,在肿瘤发生发展过程中可能担任了抑癌基因的角色,对肝细胞肝癌的临床诊断有意义。     

PNPLA3对肝细胞和肝癌细胞脂质代谢的影响*

PNPLA3基因在人类和哺乳动物体内都有表达,并且在肝癌细胞中也有表达。PNPLA3在人体和小鼠体内突变后可导致肝细胞内甘油三酯的蓄积,肝细胞发生脂肪变性。在人类和大鼠肝癌细胞使突变型PNPLA3过表达,与过表达野生型PNPLA3细胞比,也会导致肝癌细胞脂质的聚集。本文将归纳总结以往关于PNPLA3基因对肝细胞和肝癌细胞脂质代谢的影响,并分别讨论了PNPLA3对人类肝细胞和肝癌细胞、大鼠和小鼠肝细胞及其肝癌细胞的影响。     

肿瘤特异性Survivin启动子与甲胎蛋白启动子的活性评价与比较

目的研究并比较肿瘤特异性Survivin和甲胎蛋白(AFP)基因启动子在不同肝细胞癌细胞系中的转录活性，为肝癌靶向性基因治疗提供依据。方法采用聚合酶链反应法扩增获得Survivin和AFP基因的启动子片段，并克隆入表达虫荧光素酶基因的报告质粒中，通过测定荧光素酶报告基因的表达情况，测定Survivin与AFP基因启动子的转录活性，同时采用巨细胞病毒启动子为对照，评价其转录活性水平。结果Survivin启动子在肝癌细胞中具有相当强的活性，其活性水平在高表达AFP的肝癌细胞中为AFP启动子的54～100倍，达到巨细胞病毒启动子活性的16％～21％。结论Survivin启动子在肝癌细胞系中具有较强的启动活性，可望开发成为新的肝癌靶向性基因治疗工具。     

rasp21、C-myc、C-erbB-2和AFP在2-乙酰氨基芴诱发大鼠肝癌变的表达

目的 探讨癌基因rasp21、C-myc、C-erbB-2和AFP在2－乙酰氨基芴诱发大鼠肝癌变过程中的分布情况及关系。方法 rasp21、C-erbB-2、C-myc和AFP,采用免疫组织化学SP方法检测分析。结果 诱癌早期小中周边增生及变异的肝细胞灶中即显示rasp21、AFP和C－myc的表达,并随增生肝细胞结节的形成和演进,所表达的细胞也增多并且相伴而存,诱癌中期出现C－erbB-2的表达。结论 癌基因蛋白rasp21、AFP和C－myc是大鼠实验性肝癌变中较早出现的分子改变,可能与肝癌的启动和演进有关,也是肝癌形态发生的分子基础之一,三者具有协同作用。而C-erbB-2的异常表达则可能对癌前期病变的发展具有促进作用,同时也表明肝细胞的恶性转化需要多个癌基因的协同作用。     

甘露糖受体在肝细胞癌中的表达及意义

目的:观察甘露糖受体(mannose receptor,M R)在肝细胞癌组织/肝癌细胞系中的表达,探讨其与肝细胞癌发生、发展及恶性程度的关系.方法:应用免疫组织化学检测50例肝细胞癌组织及癌旁组织、10例正常肝组织中MR的表达,免疫荧光法、Western blot法检测肝癌细胞系、肝细胞系中MR的表达.结果:免疫组织化学染色:肝细胞癌组织中M R的表达水平明显高于癌旁组织及正常肝组织(86%vs 76%,30%,P0.05).免疫荧光:MR在肝癌细胞系BEL-7402、Hep G2和人肝细胞系HL-7702中均有表达.在肝癌细胞系BEL-7402、Hep G2上有很强的MR表达,在肝细胞系HL-7702上MR的表达分布明显较少.Western blot法:MR在肝癌细胞系Hep G2、BEL-7402和人肝细胞系HL-7702上均有表达,肝癌细胞BEL-7402中MR的表达水平明显高于肝癌细胞Hep G2(P0.01)、肝细胞HL-7702(P0.01).结论:MR在肝细胞癌组织/肝癌细胞系中高表达提示可能与肝细胞癌的发生、发展及恶性程度密切相关.     

HBx诱导甲胎蛋白表达对肝细胞恶性转化的影响及其调控机制

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生与肝细胞感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)密切相关,HBV在复制时表达的X蛋白(HBx)在肝细胞恶性转化过程中发挥关键性作用.甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)是HCC发生早期表达的蛋白质,HBx通过抑制P53对AFP基因的阻遏作用诱导AFP表达.近期研究发现,在HBx诱导的肝细胞恶性转化过程,优先促进AFP表达,AFP通过激活磷酸肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)/蛋白激酶-A(protein kinas A,AKT)信号途径刺激肝细胞恶性行为分子的表达,提示AFP的表达可能是HBx驱动肝癌发生的重要因素和先锋分子.AFP新功能的发现,可以利用AFP的表达预警HBV相关肝癌的发生,AFP可能作为肝癌治疗的新靶点.     

组织蛋白酶-S在肝癌细胞中的表达及意义

目的研究组织蛋白酶-S（Cat-S）在肝癌细胞和正常肝细胞中的表达情况,探讨其与肝细胞癌（HCC）发生、发展的关系。方法体外培养高转移人肝癌细胞株MHCC97-H、低转移人肝癌细胞MHCC97-L和正常肝细胞LO2,采用荧光定量PCR技术定量检测其Cat-S mRNA表达水平。结果 Cat-S mRNA在LO2细胞中呈弱表达,MH-CC97-H细胞及MHCC97-L细胞表达均明显高于LO2细胞（P〈0.05）;MHCC97-H细胞表达明显高于MHCC97-L细胞（P〈0.05）。结论 Cat-S在高转移、低转移肝癌细胞株和正常肝细胞株中的表达存在差异性,此可能与肝癌的发生发展有关;Cat-S可作为肝癌诊治的分子靶标。     

肝癌细胞系DcR3的表达及意义

目的 探讨肝癌细胞系诱捕受体3(DcR3)的表达变化及意义. 方法 分别取人肝癌细胞HepG2、HepB3、SMMC-7721、bel-7402、bel-7405及癌旁肝细胞QSG-7701和正常肝细胞HL-7702,RT-PCR和EnVision法分别检测其DcR3 mRNA和蛋白;MTT法检测加入DcR3中和性抗体后的肝癌细胞存活率. 结果 DcR3在5种肝癌细胞中均有mRNA和蛋白的表达,QSG-7701及HL-7702均无表达.加入DcR3中和性抗体后肝癌细胞存活率下降. 结论 肝癌细胞高表达DcR3,DcR3中和性抗体可抑制肝癌细胞的生长.     

Glypican-3在肝细胞癌中的表达和意义

Glypican-3(GPC3)在肝细胞癌(肝癌)中过表达,而在成人正常组织、癌旁组织、肝炎、肝硬化组织中仅低表达或不表达。GPC3mRNA在小肝癌检出率明显比甲胎蛋白(AFP)mRNA和血清中的AFP高。以上研究是用northernblot、原位分子杂交等技术检测GPC3mRNA,本研究用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肝癌及癌旁组织中GPC3mRNA的表达情况,探讨GPC3在肝癌发生发展中的作用。一、材料与方法1.材料:标本的收集:原发性肝癌及其相应的癌旁组织     

miR-145-3p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞生长的调控作用

背景miR-145-3p在头颈癌、肺癌和胃癌等肿瘤可发挥抑癌的作用,而其在肝癌中的表达和作用并不清楚.目的探讨miR-145-3p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞的增殖与凋亡的调控作用.方法用RT-q PCR法检测肝癌组织、癌旁组织、肝细胞株(Hep3B、Huh-7、Hep G2和SMMC-7721)与正常肝细胞株L-02中miR-145-3p的表达水平;将miR-145-3pmimic或miR-145-3pinhibitor转入Hep3B细胞,用CCK-8法、流式细胞术、TUNEL法和Westernblot法分别检测细胞活力、细胞周期、细胞凋亡和4型黏蛋白(mucin4, MUC4)表达.用荧光素酶报告基因实验鉴定miR-145-3p的靶基因.将pc DNA-MUC4转入已转染miR-145-3p mimic的细胞,用CCK-8法和TUNEL法分别检测细胞活力与细胞凋亡.结果miR-145-3p在肝癌组织和细胞中呈低表达.过表达miR-145-3p能抑制细胞增值和G0/G1期到S期转换,促进凋亡和降低MUC4表达;而敲减miR-145-3p则作用相反. MUC4是miR-145-3p的靶基因.过表达MUC4能逆转miR-145-3p mimic对细胞存活的抑制作用.结论miR-145-3p在肝癌低表达,且其表达与T分期呈负相关.过表达miR-145-3p可抑制肝癌细胞存活与生长,而敲减miR-145-3p能促进肝癌细胞存活与生长.     

大鼠肝癌细胞与胚胎肝细胞的microRNA差异表达谱分析

目的 建立大鼠肝癌细胞与大鼠胚胎肝细胞microRNA (miRNA)表达的差异谱,为miRNA在肝细胞癌变发生机制中的作用提供新线索.方法 化学致癌剂二乙基亚硝胺(DEN)建立近交系F334大鼠肝癌模型,体外原代培养大鼠肝癌细胞和正常F334大鼠胚胎肝细胞,Trizol法抽提细胞总RNA,进一步制备Hy3荧光标记的miRNA;利用Exiqon miRNA基因芯片技术,采用含2 056条探针的哺乳动物miRNA表达谱芯片对两组之间差异表达的miRNA进行分析.结果 原代培养可获得稳定传代的肝癌细胞及胎肝细胞,两者在形态上无明显差异;miRNA芯片共获得78个差异表达的miRNAs,其中68个表达上调,10个表达下调,部分miRNAs与肿瘤关系密切,其中miR-122为肝细胞癌变相关miRNA.结论 正常肝细胞中存在着与肝细胞癌变及侵袭、转移相关的miRNAs,miRNAs的表达具有明显的时序性,主要参与转录后基因表达的调控,其表达特征的改变可能导致了肝癌的发生.     

AFP和PTEN在肝癌细胞中的表达及AFP在全反式维甲酸诱导肝癌细胞凋亡中的作用

目的探讨AFP与PTEN在肝癌细胞中的表达情况及AFP对全反式维甲酸(ATRA)诱导肝癌细胞凋亡的影响。方法 Western Blot分析AFP和PTEN在肝癌细胞Bel7402和HLE中的表达情况,并用30μmol/L和180μmol/L的ATRA溶液处理细胞,观察其对AFP和PTEN表达的影响;应用免疫共沉淀技术分析PTEN和AFP的相互作用;构建AFP表达载体转染HLE细胞,观察AFP的表达对ATRA抑制癌细胞生长的影响。结果 PTEN在Bel7402和HLE细胞中均有表达,Bel7402细胞能表达AFP,HLE细胞则无AFP表达;经过180μmol/L ATRA处理24 h之后,Bel7402细胞PTEN表达水平上升,AFP表达水平下降;AFP可与PTEN相结合;当ATRA浓度为30、60、90和180μmol/L时,通过MTT法测得HLE细胞的A490分别为1.05、0.97、0.83、0.71、0.39;HLE成功表达AFP后,ATRA对癌细胞的抑制作用消失。结论 AFP可抑制PTEN的活性;AFP可以通过与PTEN结合的方式,抑制PTEN的磷酸酯酶活性;AFP可能通过抑制PTEN的表达方式,使肝癌细胞耐受ATRA诱导的凋亡。     

多药耐药相关蛋白-3表达与肝癌耐药的相关性

目的 探讨多药耐药相关蛋白-3(MRP-3)的表达与肝癌耐药的相关性.方法 应用RT-PCR方法检测正常肝细胞L-02、肝癌细胞BEL及肝癌耐药细胞HepG2/ADM中MRP-3 mRNA的差异表达,再将MRP-3反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染进肝癌耐药细胞HepG2/ADM中,用MTT法、流式细胞仪及RT-PCR检测转染后细胞内阿霉素(ADM)的荧光强度、耐药指数及MRP-3 mRNA的表达情况.结果 肝癌耐药细胞HepG2/ADM中MRP-3 mRNA的表达明显高于正常肝细胞L-02和肝癌细胞BEL(P<0.05).MRP-3反义转染进耐药细胞后,可明显降低细胞内ADM的耐药指数,提高细胞内ADM浓度(P<0.05),细胞内MRP-3 mRNA的表达较未转染细胞下降了62.5%(P<0.05).结论 MRP-3的高表达可能是导致肝癌多药耐药的机制之一.     

肝癌组织甲胎蛋白表达特点及其基因片段的扩增分析

目的探讨肝癌组织甲胎蛋白(AFP)表达的病理学特点及其基因分析的临床价值。方法以免疫组织化学法研究AFP在肝癌及癌周组织中的胞内分布及其表达;并从肝癌的癌灶、癌旁组织中制备总RNA,以巢式聚合酶链反应(nested_PCR)扩增不同癌组织AFP_mRNA片段,以探讨AFP表达的临床病理学特征及其AFP_mRNA分析的应用价值。结果肝癌细胞及癌旁肝细胞的胞浆中,均可见AFP阳性的棕黄色颗粒,癌组织中AFP阳性表达率为73.3%,癌旁组织中为40.0%,中、低分化组肝癌中AFP的表达阳性率明显高于高分化组肝癌(P<0.05),且癌旁组织中AFP的表达强度明显低于肝癌的癌灶组织。肝癌组织、癌周组织的总RNA表达水平存在差别,癌组织中AFP_mRNA片段扩增全数阳性(100%),显著高于癌周组织(P<0.01)。结论肝癌不同组织中AFP表达存在差异,AFP_mRNA分析有助于肝癌的早期发现和诊断。     

混合型肝癌的免疫组织化学分析

目的：肝细胞癌、胆管细胞癌以及混合型肝癌三者的病理鉴别诊断有时颇为困难。因此，分析这些肿瘤的免疫组化标记特点，提供有用的诊断指标。方法：对15例混合型肝癌进行免疫组化S－P法观察。结果：15例混合型肝癌占同期原发性肝癌的3．39％，组织学特点同时表现为肝细胞癌和胆管细胞癌，其中有1例为罕见的碰撞瘤，免疫组化标记，AFP为10／15例阳性，均表达在肝细胞癌的部位中，而胆管细胞癌均为阴性，细胞角蛋白8（CK8）在肝细胞癌成分全阳性，而在胆管细胞癌区域有13例为阳性，2例阴性，CK19在胆管细胞癌成分全阳性，而在肝细胞癌区域也有13例阳性，其余为阴性。Bcl-2表达阳性率为66．7％（10／15），大部分表达在胆管细胞癌成分，也有5例肝细胞癌成分表达阳性，AB／PAS黏液染色在胆管细胞癌的成分均为阳性或弱阳性。结论：诊断混合型肝癌主要依据显微镜下的病理特征，结合免疫组化及特殊黏液染色的结果。     

骨形态发生蛋白9对肝细胞癌肿瘤干细胞干性、增殖和侵袭的影响及机制

目的 探讨骨形态发生蛋白9 (BMP9)对肝细胞癌（HCC）肿瘤干细胞（CSCs）干性、增殖和侵袭的影响及机制。方法 取对数生长期的正常肝细胞、肝癌细胞、肝癌CSCs,采用RT-qPCR法检测BMP9 mRNA表达,采用Western blotting法检测BMP9蛋白表达。采用慢病毒干扰载体转染肝细胞癌肿瘤干细胞（HepG2-CSCs）以敲低BMP9表达,并分成HepG2-CSCs组、HepG2-CSCs-BMP9敲低组。加入MAPK/ERK信号激动剂（DIPQUO）后,将细胞分为三组：HepG2-CSCs组、HepG2-CSCs敲低组及HepG2-CSCs敲低+DIPQUO组。采用RT-qPCR实验检测HepG2-CSCs干性相关分子CD44、SOX2和OCT4表达,采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,采用Transwell实验检测细胞侵袭能力,采用蛋白印迹法检测MAPK/ERK通路关键蛋白表达。结果 与正常肝细胞比,肝癌细胞和肝癌肿瘤干细胞（HepG2-CSCs）中BMP9表达上调（P<0.05）。HepG2 CSCs细胞中BMP9 mRNA和蛋白表达高于HepG2细胞（P...     

小干扰RNA沉默巨噬细胞移动抑制因子基因对肝癌细胞p27表达的影响

目的 观察巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和细胞周期调控因子p27在肝细胞癌中表达的相互关系,探讨小干扰RNA(siRNA)沉默MIF基因对肝癌细胞p27表达的影响.方法 免疫组织化学法和荧光定量PCR法检测MIF、p27的蛋白和mRNA在肝癌及其癌旁组织中的表达情况.化学合成MIF siRNA和对照siRNA,脂质体法转染肝癌细胞PLC和Hep3B,荧光定量PCR法检测MIF和p27 mRNA在实验组及对照组中的表达情况.根据不同资料分别采用X2检验、Logistic回归分析或单因素方差分析.结果 MIF蛋白及其mRNA在肝癌组织中过表达,在癌旁组织中低表达;p27蛋白及其mRNA在癌组织中低表达,在癌旁组织中高表达.Logistic回归分析提示MIF为肝癌发生的危险因素,p27为保护因素.MIF mRNA在肝癌细胞株中过表达(F=61.036,P＜0.01),p27 mRNA在正常肝细胞L02中高表达(F=529.853,P＜0.01).经MIFsiRNA转染后,MIF mRNA在PLC及Hep3B中的表达水平降低,并且呈剂量依赖关系(F值分别为320.1和201.2,P值均＜0.01);p27 mRNA伴随MIF mRNA的降低而增加(F值分别为419.4和459.9,P值均＜0.01).结论 MIF在肝细胞癌中过表达,MIF siRNA能特异性抑制其在肝癌细胞中的表达;MIF可能参与了p27基因表达的调控.     

甲胎蛋白在肝癌细胞株的癌干细胞中的表达

目的 观察甲胎蛋白在肝癌细胞株的癌干细胞表达.方法 利用肝癌细胞株HepG-2,采用细胞克隆法分离肝癌干细胞,倒置显微镜下采用细胞克隆形态鉴别肿瘤干细胞和普通肿瘤细胞.应用免疫细胞化学技术对所用的细胞克隆进行AFP的检测,同时以宫颈癌细胞株HeLa作为阴性对照.结果 HepG-2细胞形成三种克隆形态,即Holoclones型、Meroclones型、Paraclones型,其中Holoclones型为少数,是肿瘤干细胞.免疫细胞化学技术显示,HepG-2细胞三种克隆AFP染色均为阳性,HeLa细胞AFP染色为阴性.结论 肝癌细胞株HepG-2分离的癌干细胞表达AFP,为以AFP为靶点的肝癌肿瘤干细胞治疗提供了实验基础和理论依据.     

体外培养的肝癌细胞株与正常肝细胞株蛋白质的差异表达

目的:运用SELDI蛋白质芯片技术分析体外培养的肝癌细胞株(HepG2)与正常肝细胞株(L02)蛋白质表达差异．方法:在体外培养HepG2和L02细胞株,收获细胞,将细胞用细胞裂解液裂解后,采用SELDI蛋白质芯片技术用IMAC3 及WCX2芯片检测HepG2、L02的蛋白质谱．结果:体外培养的肝癌细胞株与正常肝细胞株的蛋白质存在差异表达,IMAC3芯片共捕获61个蛋白,发现差异峰7个,与 L02细胞相比,其中3个差异蛋白在肝癌细胞中高表达,4个差异蛋白在肝癌细胞中低表达．WCX2芯片共捕获91个蛋白, 发现差异峰14个,其中3个差异蛋白在肝癌细胞中高表达,11 个差异蛋白在肝癌细胞中低表达．结论:SELDI蛋白芯片技术检测肝癌细胞株与正常肝细胞株蛋白质的差异表达方法简便,敏感性高,重复性好．