血管紧张素(1～7)防止血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡

目的 已有实验证实血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)可诱导心肌细胞凋亡,本研究用血管紧张素(1～7)[Ang(1～7)]干预AngⅡ诱导培养的乳鼠心肌细胞,以观察Ang(1～7)对心肌细胞的保护机制.方法 分离出新生1～3 d内的SD乳鼠心肌细胞进行体外培养,4 d后将细胞随机分为正常对照组、AngⅡ组和AngⅡ Ang(1～7)组行加药干预,加药2 d后用免疫细胞化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax基因蛋白含量,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率.结果 正常对照组细胞Bcl-2表达灰度值为(12.4±1.5),Bax表达灰度值为(6.9±1.9),细胞凋亡率为(3.1±1.4)%;AngⅡ组细胞Bcl-2表达灰度值为(7.4±1.2),Bax表达灰度值为(16.4±1.6),细胞凋亡率为(16.1±2.2)%;AngⅡ Ang(1～7)组细胞Bcl-2表达灰度值为(10.5±1.3),Bax表达灰度值为(11.1±2.2),细胞凋亡率为(8.6±2.4)%;各组间相互比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 Ang(1～7)可部分拮抗AngⅡ的作用,使心肌细胞Bax的表达减少,Bcl-2的表达增加,减少细胞凋亡率,起到细胞保护作用.     

血管紧张素(1～7)防止血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡

目的已有实验证实血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）可诱导心肌细胞凋亡，本研究用血管紧张素（1～7）FAng（1～7）]干预AngⅡ诱导培养的乳鼠心肌细胞，以观察Ang（1～7）对心肌细胞的保护机制。方法分离出新生1～3d内的SD乳鼠心肌细胞进行体外培养，4d后将细胞随机分为正常对照组、AngⅡ组和AngⅡ＋Ang（1～7）组行加药干预，加药2d后用免疫细胞化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax基因蛋白含量，流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。结果正常对照组细胞Bcl-2表达灰度值为（12．4±1.5），Bax表达灰度值为（6．9±1．9），细胞凋亡率为（3．1±1．4）％；AngⅡ组细胞Bcl-2表达灰度值为（7．4±1．2），Bax表达灰度值为（16．4±1．6），细胞凋亡率为（16．1±2．2）％；AngⅡ＋Ang（1～7）组细胞Bcl-2表达灰度值为（10．5±1．3），Bax表达灰度值为（11．1±2．2），细胞凋亡率为（8．6±2．4）％；各组间相互比较差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论Ang（1～7）可部分拮抗AngⅡ的作用，使心肌细胞Bax的表达减少，Bcl-2的表达增加，减少细胞凋亡率，起到细胞保护作用。     

非诺贝特和吡格列酮对血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大和凋亡的干预作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体α和γ(PPARα和PPARγ)的配体非诺贝特、吡格列酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大、凋亡的干预作用,并观察其对凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达变化的影响。方法分别以非诺贝特和/或吡格列酮预处理体外原代培养的新生大鼠心肌细胞24h后,再加用AngⅡ作用24h。采用软件分析细胞表面积,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用Western-blot法观察凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达变化,逆转录聚合酶链反应检测PPARα和PPARγ的mRNA水平。结果与AngⅡ组比较,非诺贝特组、吡格列酮组及非诺贝特和吡格列酮组的心肌细胞表面积、细胞凋亡率及Bax蛋白的表达明显降低(P<0.05),而Bax蛋白的表达和Bcl-2/Bax蛋白水平比值显著增加(P<0.05),非诺贝特组、吡格列酮组及非诺贝特和吡格列酮组间的上述指标差异无显著性(P>0.05),非诺贝特组的PPARαmRNA和吡格列酮组的PPARγmRNA表达增高。结论PPARα和γ激活可逆转心肌细胞肥大,抑制心肌细胞凋亡,并能改变凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达,但PPARα、γ配体合用无叠加效应。     

微小RNA-155调节钙调磷酸酶和活化T细胞核因子4表达对心肌细胞肥大的影响

目的研究微小(microRNA,miR)-155对心肌细胞肥大的影响及对钙调磷酸酶(CaN-β)和活化T细胞核因子4(NFAT-4)表达的调控作用。方法培养大鼠心肌细胞H9C2(2-1),血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌细胞肥大,脂质体转染法将miR-155模拟物和miR-155抑制物转染入心肌细胞。分为对照组、AngⅡ组、mimics组、inhibitors组、AngⅡ+mimics组和AngⅡ+inhibitors组。实时荧光定量PCR检测心肌细胞miR-155的表达。逆转录PCR法检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)和CaN-βmRNA表达水平。Western blot法检测CaN-β和NFAT-4蛋白表达水平。结果与AngⅡ组比较,AngⅡ+mimics组ANP、β-MHC、心肌细胞表面积、CaN-βmRNA和蛋白表达及NFAT-4蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CaN-β可能为miR-155的作用靶点,miR-155可通过负性调控CaN-β和NFAT-4的表达,减少心肌细胞ANP和β-MHC表达,抑制心肌细胞肥大。     

MiR-155对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞表型转换的影响及机制研究

目的:观察mi R-155对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)表型转换的影响并研究其可能的机制。方法:原代培养小鼠VSMC,用不同浓度、时间AngⅡ作用于VSMC,然后用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)检测不同处理组mi R-155表达的变化情况。用q RT-PCR检测过表达及抑制表达mi R-155后空白对照组、mi R-155 mimics组、mimics阴性对照组、mi R-155 inhibitors组、inhibitors阴性对照组的mi R-155水平变化情况,检测转染效率。用免疫蛋白印迹(Western blot)法检测过表达及抑制表达mi R-155后空白对照组、AngⅡ组、mi R-155mimics组、AngⅡ+mi R-155 mimics组、mi R-155 inhibitors组、AngⅡ+mi R-155 inhibitors组对AngⅡ激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路的影响。Western blot检测转染mi R-155、使用雷帕霉素、细胞外信号调节激酶1/2抑制剂(U0126)后空白对照、AngⅡ组、mi R-155 mimics组、AngⅡ+mi R-155mimics组、AngⅡ+U0126组、AngⅡ+雷帕霉组AngⅡ促进VSMC表型转换的影响,检测两个收缩表型蛋白标志物即平滑肌22α(SM22α)与α-平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin),及一个合成表型蛋白标志物骨桥蛋白(OPN)。结果:与作用0 h或0 mol/L AngⅡ相比,AngⅡ作用于VSMC后AngⅡ以浓度、时间依赖方式降低mi R-155的表达。转染mi R-155后可显著减少基础及AngⅡ促进m TOR与ERK1/2通路激活作用,而转染mi R-155抑制剂可进一步增加基础及AngⅡ促进m TOR与ERK1/2通路激活作用。雷帕霉素、U0126及转染mi R-155均可抑制AngⅡ减少收缩表型蛋白标志物SM22α与α-SM-actin的表达,同时抑制AngⅡ促进合成表型蛋白标志物OPN的表达。结论:AngⅡ通过抑制mi R-155表达促进m TOR与ERK1/2激活促进VSMC表型转换。     

非诺贝特和吡格列酮对血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大和凋亡的干预作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体α和γ(PPARα和PPARγ)的配体非诺贝特、吡格列酮对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心肌细胞肥大、凋亡的干预作用,并观察其对凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达变化的影响 .方法 分别以非诺贝特和/或吡格列酮预处理体外原代培养的新生大鼠心肌细胞24 h后,再加用Ang Ⅱ作用24 h.采用软件分析细胞表面积,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用Western-blot法观察凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达变化,逆转录聚合酶链反应检测PPARα和PPARγ的mRNA水平.结果 与Ang Ⅱ组比较,非诺贝特组、吡格列酮组及非诺贝特和吡格列酮组的心肌细胞表面积、细胞凋亡率及Bax蛋白的表达明显降低(P＜0.05),而 Bax蛋白的表达和Bcl-2/Bax蛋白水平比值显著增加(P＜0.05),非诺贝特组、吡格列酮组及非诺贝特和吡格列酮组间的上述指标差异无显著性(P＞0.05),非诺贝特组的PPARα mRNA和吡格列酮组的PPARγ mRNA表达增高.结论 PPARα和γ激活可逆转心肌细胞肥大,抑制心肌细胞凋亡,并能改变凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达,但PPARα、γ配体合用无叠加效应.     

miR-92a对H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞凋亡以及MAPK-ERK通路的影响

目的探讨下调miR-92a表达对过氧化氢(H_2O_2)诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响以及可能的分子机制。方法将体外培养的H9C2心肌细胞分为空白对照组(Blank)、H_2O_2模型组、阴性对照组(NC)、NC+H_2O_2组、mi R-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+H_2O_2组。Blank组不经任何特殊处理。NC组、NC+H_2O_2组、mi R-92a inhibitor组、miR-92a inhibitor+H_2O_2组细胞进行转染,q RT-PCR法验证转染效率。另H_2O_2模型组、NC+H_2O_2组、mi R-92a inhibitor+H_2O_2组细胞经H_2O_2诱导6 h,流式细胞术法检测细胞凋亡率。采用试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)释放量。Western blot法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)-细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路蛋白磷酸化情况。结果成功建立miR-92a inhibitor转染细胞模型。经H_2O_2处理6 h后,H_2O_2+mi R-92a inhibitor组H9C2细胞的凋亡率、ROS产生量、MDA和LDH释放量均低于H_2O_2模型组和H_2O_2+NC组,而细胞培养上清中SOD水平高于H_2O_2模型组和H_2O_2+NC组(P0.05)。Western blot法检测,与H_2O_2模型组相比,H_2O_2+mi R-92a inhibitor组细胞Bcl-2蛋白表达量上调,Bax、Caspase-3、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、p-ERK蛋白表达量降低(P0.05)。H_2O_2对H9C2细胞AKT和ERK蛋白表达量无影响(P0.05)。结论下调miR-92a表达可抑制H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞凋亡,其可能的作用机制与降低ROS释放量、调控Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白以及MAPK-ERK信号通路有关。     

miR-383-5p转染对人卵巢颗粒细胞株KGN凋亡的影响及其机制

目的 观察miR-383-5p转染对人卵巢颗粒细胞株KGN凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 取对数生长期KGN细胞,分为3组,Blank组为空白对照组,miR-383-5p mimics组转染150 pmol的微小RNA-383-5p模拟物（miR-383-5p）,miR-383-5p mimics+NAC组为转染150 pmol的miR-383-5p mimics后N-乙酰半胱氨酸（NAC）干预组,比较Blank组与miR-383-5p mimics组、miR-383-5p mimics组与miR-383-5p mimics+NAC组两组间凋亡率及凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、cleaved caspase 3蛋白）的表达和活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 与Blank组比较,miR-383-5p mimics组凋亡率及Bax、cleaved caspase 3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少（P均<0.05）;与miR-383-5p mimics组比较,miR-383-5p mimics+NAC组miR-383-5p mimic...     

miR-499a-5p靶向调控CDKN1A基因在心肌细胞肥大中的作用机制研究

目的:探讨miR-499a-5p靶向细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(CDKN1A)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的作用机制。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,并将H9c2细胞随机分为正常对照(Con)组、细胞肥大模型(AngⅡ)组、转染对照(AngⅡ+miR-NC)组和转染(AngⅡ+miR-499a-5p)组。采用Image J软件测量单细胞表面积,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)分析各组细胞中miR-499a-5p的表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测CDKN1A、cleaved Caspase-3以及心肌肥大标志蛋白心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-499a-5p和CDKN1A的靶向作用关系。结果:与Con组比较,AngⅡ组H9c2细胞表面积、凋亡率、CDKN1A、Cleaved Caspase-3、ANP、BNP和β-MHC蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而细胞活力和mi...     

TGF—β1及AngⅡ对大鼠心肌细胞肥大的信号转导通路作用研究

目的：探讨在TGF-β1及AngⅡ分别诱导的大鼠心肌细胞肥大中Smad信号途径中Smad2蛋白的表达。方法：分别建立TGF-β1及AngⅡ诱导的大鼠心肌细胞肥大模型,分为正常对照组、TGF-β1组以及AngⅡ组。以碘化丙啶（PI）染色标记法检测心肌细胞中RNA的表达量以间接反映心肌细胞肥大。以实时荧光定量PCR检测心肌细胞肥大相关肌球蛋白重链β亚型（β—MHC）的表达。以Western blot检测心肌细胞中磷酸化Smad2信号蛋白的表达。结果：TGF-β1及AngⅡ诱导的培养心肌细胞中肥大相关蛋白β1-MHC的表达均明显高于对照组（P〈0．01）。PI染色检测表明,TGF-β1组及AngⅡ组PI的含量明显增高（P〈0．01）。与对照组相比,TGF-β1及AngⅡ均可明显上调磷酸化Smadz（p-Smad2）的表达（P〈0．01）。TGF-β1组与AngⅡ组p-Smad2表达峰值相比无明显差异,但达峰的时间有所不同。结论：TGF-β1及AngⅡ单独均可诱导心肌细胞肥大,在此过程中p-Smad2蛋白的表达明显增加,TGF-β1与AngⅡ促进p-Smad2蛋白表达作用无明显差异。     

circPRKCI靶向miR-217对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的探讨circPRKCI对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞氧化应激、凋亡的影响及其对miR-217的调控作用。方法采用H/R诱导大鼠心肌细胞H9c2建立细胞损伤模型,pcDNA、pcDNA-circPRKCI、anti-miR-NC、anti-miR-217、pcDNA-circPRKCI与miR-NC、pcDNA-circPRKCI与miR-217 mimics分别转染至心肌细胞后进行H/R处理;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测circPRKCI、miR-217表达量;采用试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测circPRKCI与miR-217的靶向关系;免疫印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果H/R诱导的H9c2细胞中circPRKCI表达水平降低(P<0.05),miR-217、MDA、凋亡率及Bax蛋白水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05)。H/R诱导的H9c2细胞中转染pcDNA-circPRKCI或转染anti-miR-217后可降低MDA含量、凋亡率及Bax蛋白水平(P<0.05),提高SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白水平(P<0.05)。双荧光素酶实验显示circPRKCI可靶向结合miR-217;miR-217过表达可逆转circPRKCI过表达对H/R诱导的H9c2细胞氧化应激及凋亡的作用。结论circPRKCI过表达通过下调miR-217表达抑制氧化应激及其诱导的细胞凋亡,从而减轻心肌细胞氧化损伤。     

沉默YTH结构域家族蛋白2改善血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠原代心肌细胞肥大与凋亡

目的 探讨YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠原代心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法 为探讨AngⅡ刺激下YTHDF2的表达水平,将细胞分为正常组和AngⅡ组。为探讨沉默YTHDF2对心肌细胞肥大与凋亡的影响,将细胞分为4组,空白组[转染阴性对照小干扰RNA(siRNA)+PBS]、siYTHDF2组[转染YTHDF2 siRNA(siYTHDF2)+PBS]、模型组(siRNA+AngⅡ)和实验组(siYTHDF2+AngⅡ)。用Western blot和逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测YTHDF2基因表达水平,RT-qPCR检测心肌肥厚相关基因心房钠尿肽(ANP)、B型钠尿肽(BNP)和β肌球蛋白重链(β-MHC)及心肌细胞凋亡相关基因Bax、B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)mRNA的表达水平,免疫荧光染色观察心肌细胞表面积,原位末端标记法染色观察心肌细胞凋亡情况,免疫沉淀反应验证YTHDF2和Bcl-2的结合关系。结果 AngⅡ组YTHDF2蛋白表达及mRNA水平显著高于正常组(1.49±0.03 vs 0.97±0.09,1.5...     

丹参素和川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的研究活血药丹参素和川芎嗪对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞凋亡的影响,探讨其抑制心肌肥大的作用机制.方法收集各组心肌培养细胞,PI染液,于流式细胞仪上进行检测.结果 AngⅡ能诱导心肌细胞凋亡,AngⅡ组与空白对照组相比,心肌细胞凋亡率显著增加（P〈0.01）,并随着时间的延长其凋亡率不断增高,于第7天达到高峰;洛沙坦明显抑制AngⅡ所诱导各个时间段的心肌细胞凋亡率（P〈0.01）,而活血药丹参素和川芎嗪也明显抑制AngⅡ所诱导各个时间段的心肌细胞凋亡率（P〈0.05或P〈0.01）.结论丹参素和川芎嗪能通过抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡而产生心肌保护作用,具有防止心肌细胞肥大作用,从而防治心室肥厚.     

miR-138-5p通过调控自噬影响乳腺癌细胞他莫昔芬耐药性的体外研究

目的 探讨miR-138-5p对乳腺癌细胞他莫昔芬(TAM)耐药性的影响及其机制。方法 体外培养乳腺癌细胞MCF-7和TAM耐药细胞株MCF-7/TAM,设置正常对照组(MCF-7细胞)、耐药对照组(MCF-7/TAM细胞)、LV-NC组(MCF-7/TAM细胞+慢病毒空载体)和LV-miR-138-5p mimics组(MCF-7/TAM细胞+miR-138-5p mimics慢病毒)。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞miR-138-5p表达水平;通过MTT法检测各组细胞增殖抑制率;通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率;通过MDC染色法检测各组细胞自噬小体数量;通过Western blot法检测各组细胞LC3Ⅱ、Beclin-1、Bcl-2蛋白表达水平。结果 与正常对照组相比较,耐药对照组、LV-NC组细胞miR-138-5p、增殖抑制率、凋亡率、Bcl-2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1表达水平及自噬小体数显著升高(P<0.05)。过表达miR-138-5p后,细胞增殖抑制率、凋亡率、蛋白Bcl-2表达水平显著升高...     

高糖诱导心肌细胞miR-26a/miR-197表达促进细胞凋亡的机制研究

目的探讨miR-26a/miR-197在高糖诱导的心肌细胞表达及对细胞活力和凋亡率的影响。方法H9c2心肌细胞分为低糖组(LG组)、LG+miRcramble组、高糖(HG)+miRcramble组、HG+miR-26a inhibitor组、HG+miR-197 inhibitor组和HG+miR-26a/miR-197 inhibitor组,RT-PCR检测细胞中miR-26a和miR-197的表达;MTT法及流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡率;Western blotting检测β-catenin、PCNA和Bax的蛋白表达。通过靶基因预测软件、miR-26a/miR-197的mimics/inhibitor转染后的细胞中MCL1表达检测及miR-NC、Wt-MCL1+miR-26a mimics、Wt-MCL1+miR-197 mimics、Mut-MCL1+miR-26a mimics和Mut-MCL1+miR-197 mimics共转染后的荧光素酶活性检测,确定MCL1与miR-26a/miR-197是否存在靶向关系。结果 HG诱导的H9c2心肌细胞miR-26a和miR-197的表达均明显高于LG组,而转染miR-26a/miR-197 inhibitor后miR-26a和miR-197表达均明显低于HG组(P0.05)。HG+miRcramble组细胞活力及PCNA的蛋白表达均明显低于LG+miRcramble组,细胞凋亡率及β-catenin和Bax的蛋白表达均明显高于LG+miRcramble组(P0.05),而HG+miR-26a inhibitor组和HG+miR-197 inhibitor组细胞活力及PCNA的蛋白表达均明显高于HG+miRcramble组,低于HG+miR-26a/miR-197 inhibitor组,细胞凋亡率及β-catenin和Bax的蛋白表达均明显低于HG+miRcramble组,高于HG+miR-26a/miR-197 inhibitor组(P0.05)。MCL1是miR-26a和miR-197的靶基因。结论 miR-26a/miR-197可通过靶向MCL1促进高糖诱导心肌细胞活力和降低细胞凋亡率,机制可能与抑制Wnt信号通路有关。     

卡维地洛对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡及相关因素的影响

目的探讨卡维地洛对自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞凋亡、心肌Bcl-2、p53蛋白表达、血浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平的影响.方法6周龄雄性SHR12只,随机分为2组(n=6)对照组普通饲料喂养+NS 5 mL/d灌胃;卡维地洛组卡维地洛(Car)20 mg/(kg·d)+NS 5 mL溶解灌胃,其余同对照组,共8周.随后给予2%戊巴比妥钠40 mg/kg IP麻醉,剖腹取下腔静脉血3 mL,分3等分于试管中分离血浆保存,待测AngⅡ、SOD与MDA.继之开胸取心脏,取左心室游离壁心肌于10%中性福尔马林中固定24 h,继之脱水,石蜡包埋及切片,并采用TUNEL法、免疫组化法分别检测心肌细胞凋亡率,Bcl-2及p53蛋白表达率.结果与对照组比较,Car组血浆MDA、AngⅡ、心肌细胞凋亡率及心肌细胞p53蛋白表达率均明显降低,而血浆SOD、心肌细胞Bcl-2蛋白表达率则明显增高(P＜0.01).且两组中MDA、AngⅡ及p53蛋白表达率与心肌细胞凋亡率均分别呈正相关;而SOD、Bcl-2蛋白表达率与心肌细胞凋亡率呈负相关(P＜0.05).结论Car具有明显抑制SHR心肌细胞凋亡,p53蛋白表达和抗氧化作用,同时还能明显改善Bcl-2蛋白表达的效应,AngⅡ、p53蛋白表达、Bcl-2蛋白表达和脂质过氧化反应均可能参与了心肌细胞凋亡过程.     

阿托伐他汀通过调节Bcl-2/Bax蛋白表达延缓血管内皮细胞衰老

目的探讨阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞衰老中凋亡调控基因Bcl-2、Bax及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及阿托伐他汀干预,分为对照组、血管紧张素Ⅱ诱导组及阿托伐他汀组,采用β-半乳糖苷酶染色和流式细胞术鉴定细胞衰老,并利用免疫细胞化学染色法、Western blot法分析各组凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果血管紧张素Ⅱ诱导组存活的细胞数与对照组相比81.90%±0.04%;约80%的细胞呈现β-半乳糖苷酶活性阳性染色和流式细胞仪检测细胞周期停滞于G0/G1,证实细胞衰老;与血管紧张素Ⅱ诱导组相比,阿托伐他汀组Bcl-2蛋白表达水平明显增高(P<0.05),Bax蛋白表达水平降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著增加(P<0.05)。结论血管紧张素Ⅱ可诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞老化,从而复制细胞衰老。Bcl-2、Bax蛋白表达的失衡可能是血管衰老的重要分子机制之一,阿托伐他汀有一定的延缓血管衰老的作用。     

上调miR-124表达诱导甲状腺癌细胞凋亡的作用及其机制

目的探讨上调微小RNA(miR)-124表达对甲状腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量(qRT)-PCR检测正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞和甲状腺乳头状癌SW579细胞中miR-124的表达差异;利用脂质体转染Has-miR-124mimics上调miR-124表达,并通过qRT-PCR检测其转染效果;流式细胞仪检测过表达miR-124对SW579细胞凋亡的影响;Western印迹检测过表达miR-124对SW579细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(PIK3CA)蛋白、蛋白激酶B(AKT)蛋白、磷酸化AKT(p-AKT)蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白及Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响。结果 miR-124在甲状腺癌SW579细胞中的表达明显低于正常甲状腺Nthy-ori3-1细胞(P0.05)。转染Has-miR-124 mimics后,miR-124模拟组细胞中miR-124表达明显高于空白对照组(P0.05),阴性对照组和空白对照组差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组相比,miR-124模拟组细胞凋亡率显著升高(P0.05),而阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P0.05)。Western印迹检测结果显示,与空白对照组相比,miR-124模拟组中PIK3CA、p-AKT和Bcl-2蛋白表达量均显著降低,Bax蛋白表达量显著升高(P0.05),而AKT蛋白的表达量变化不明显(P0.05);阴性对照组和空白对照组PIK3CA、AKT、p-AKT、Bcl-2及Bax蛋白表达量差异均无统计学意义(P0.05)。结论上调miR-124表达可诱导SW579细胞凋亡,其作用机制可能与抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT信号通路活性,上调Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达有关。     

丹参酮ⅡA抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡与肥大

目的研究丹参酮ⅡA(TSN)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞肥大、凋亡的影响。方法培养乳鼠心肌细胞分别暴露于AngⅡ(10-6)、TSN(10-6、AngⅡ(10-6mol/L) TSN(10-5mol/L)36 h,检测心肌细胞的凋亡蛋白p53的表达、心肌细胞直径和3H-亮氨酸掺入率。结果TSN可抑制AngⅡ所诱导的心肌细胞的凋亡蛋白p53(AngⅡ TAN:99 890±338比AngⅡ:389 712±270,P<0.05),抑制心肌细胞直径[(AngⅡ TAN:21.3±2.5比AngⅡ:28.5±3.8)μm,P<0.05]和3H-亮氨酸掺入率[(AngⅡ TAN:1 302±96比AngⅡ:1 900±100)计数/min,P<0.05]。结论TSN可抑制AngⅡ所诱导的心肌细胞的凋亡和肥大。