TGF-β/Smad与Wnt/β-catenin在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达及相互作用

目的观察TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在肺纤维化大鼠模型肺组织中的表达,探讨两条通路对肺纤维化的影响及其相互作用。方法取Wistar大鼠36只,随机分为正常对照组和肺纤维化模型组,每组18只。采用气管内注入博来霉素(BLM)建立Wistar大鼠肺纤维化模型,每组分别于第14、21和28天处死大鼠各6只;取肺组织称重,测定肺组织中HYP、IL-1β水平,观察肺组织Col-I、IL-1β、TGF-β1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-catenin、LEF-1 mRNA的表达,并进行HE染色和Masson胶原染色。结果 (1)与正常对照组比,造模后14~28 d大鼠肺指数均明显升高(P0.01);肺组织HE染色呈现明显的肺纤维化病理改变,Masson染色结果可见造模后14~28 d肺间质蓝色胶原呈渐进性增加。(2)造模后第14天,肺组织IL-1β含量、IL-1βmRNA相对含量均显著升高(P0.01),随后逐渐降低,至造模后第28天IL-1β表达量接近正常水平(P0.05)。(3)造模后14~28d大鼠肺组织HYP含量、Col-I mRNA相对表达量均明显升高(P0.01)。(4)与正常组相比,模型组中TGFβ1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-Catenin、LEF-1 mRNA表达显著增加(P0.01),且TGFβ1、Smad3 mRNA分别与Wnt1、LEF-1、β-catenin mRNA的表达呈显著正相关。结论 TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在博来霉素致大鼠肺纤维化中表达上调,两条通路对肺纤维化可能有促进作用且它们间可能存在一定联系。     

TGF-β/Smad与Wnt/β-catenin在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达及相互作用

【摘要】目的 观察TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在肺纤维化大鼠模型肺组织中的表达,探讨两条通路对肺纤维化的影响及其相互作用。方法 取Wistar大鼠36只,随机分为正常对照组和肺纤维化模型组,每组18只。采用气管内注入BLM建立Wistar大鼠肺纤维化模型,每组分别于第14天、21天和28天处死大鼠各6只;取肺组织称重,测定肺组织中HYP、IL-1β水平,观察肺组织Col-Ⅰ、IL-1β、TGF-β1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-catenin、LEF-1mRNA的表达,并进行HE染色和Masson胶原染色。结果 （1）与正常对照组比,造模后14~28天大鼠肺指数均明显升高（P<0.01）;肺组织HE染色呈现明显的肺纤维化病理改变,Masson染色结果可见造模后14~28天肺间质蓝色胶原呈渐进性增加。（2）造模后第14天,肺组织IL-1β含量、IL-1β mRNA相对含量均显著升高（P<0.01）,随后逐渐降低,至造模后第28天IL-1β表达量接近正常水平（P>0.05）。（3）造模后14~28天大鼠肺组织HYP含量、Col-ⅠmRNA相对表达量均明显升高（P<0.01）。（4）与正常组相比,模型组中TGFβ1、Smad3、α-SMA、Wnt1、β-Catenin、LEF-1 mRNA表达显著增加（P<0.01）,且TGFβ1、Smad3 mRNA分别与Wnt1、LEF-1、β-catenin mRNA的表达呈显著正相关。结论 TGF-β/Smad和Wnt/β-catenin通路相关基因在博来霉素致大鼠肺纤维化中表达上调,两条通路对肺纤维化均有促进作用且它们间可能存在一定联系。     

基于Wnt/β-catenin通路探讨益气活血方对急性心肌梗死大鼠心肌损伤的修复作用

[目的]探讨益气活血方对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌损伤的修复作用及机制.[方法]将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、Wnt-C59(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂)组,每组15只.模型组、中药组、Wnt-C59组大鼠采用冠状动脉前降支结扎法建立AMI模型,假手术组大鼠仅打开胸腔后缝合.成功造模后,中药组大鼠灌胃益气活血方药液6.48 g·kg-1·d-1,Wnt-C59组大鼠灌胃Wnt-C5930 mg·kg-1·d-1,假手术组和模型组大鼠灌胃0.9％氯化钠(NaCl)溶液20 mL·kg-1,共4周.给药结束后,评价大鼠心功能变化,采用苏木素-伊红(HE)法和Masson染色法观察大鼠心肌组织病理学改变,脱氧核苷酸末端转移酶(TdT)介导的核苷酸(dUTP)缺口末端标记法(TUNEL)染色检测心肌细胞凋亡情况,实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)法检测心肌组织半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达,酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测血清心肌损伤指标乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、CK同工酶(CK-MB)的含量,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测心肌组织Wnt3a、β-catenin及β-catenin靶基因细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、C-myc蛋白表达水平.[结果]与正常组比较,模型组大鼠心功能显著降低,出现明显心室扩张和重构,心肌组织排列紊乱、纤维化明显、细胞凋亡增加,Caspase-3、Bax mRNA表达水平上调,Bcl-2 mRNA表达水平下调,血清心肌损伤因子含量显著升高,心肌组织Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达水平显著升高(P<0.05).与模型组比较,中药组和Wnt-C59组大鼠心功能指标得到显著改善,心肌组织排列较为整齐,胶原纤维沉积减少,细胞凋亡减少,Caspase-3、Bax mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达水平增加,血清心肌损伤因子含量降低,心肌组织Wnt3a、β-catenin、Cyclin D1、C-myc蛋白表达水平降低(P<0.05).[结论]益气活血方可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路改善AMI大鼠心肌损伤.     

经典Wnt信号通路调控对大鼠心肌梗死后心肌愈合的影响

目的探讨经典Wnt信号通路对大鼠心肌梗死后心肌组织愈合的影响。方法建立大鼠急性心肌梗死模型,采用免疫组化和实时荧光定量PCR技术检测经典Wnt信号通路中的两个关键信号分子Wnt-1、β-catenin蛋白及mRNA在对照组(C组)、梗死组(I组)和非梗死组(N组)各时间点心肌组织中的时空表达;同时观察心肌梗死后心肌组织的病理学变化。结果各时间点心肌组织中Wnt-1、β-catenin的表达水平在C组与N组中无显著性差异。I组4天、7天、10天、14天心肌组织中Wnt-1、β-catenin的蛋白表达水平较C组、N组明显增高(P<0.01);I组1天、4天、7天、10天、14天心肌组织中Wnt-1、β-catenin的mRNA表达水平较C组、N组明显增高(P<0.01);且动态变化与心肌梗死后心肌的愈合过程相平行。通过病理形态学与免疫组化分析发现肌纤维母细胞、内皮细胞在发生梗死的大鼠心脏中增殖和迁移的过程中伴随着Wnt-1、β-catenin的高表达。结论经典Wnt信号通路参与心肌梗死后心肌组织的修复和愈合过程;并对肌纤维母细胞和血管内皮细胞的增殖、迁移起一定的调控作用。     

益气解毒方通过Wnt/β-catenin信号通路对鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响

目的探讨益气解毒方对鼻咽癌CNE2细胞增殖及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将CNE2细胞用不同浓度(0.25、0.50、1.0 g/L)的益气解毒方水提物和阳性对照药(顺铂,4 mg/L)分别处理24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测药物作用48 h后细胞周期分布情况;Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt5a/b、β-catenin及细胞周期蛋白CyclinD1的表达情况。结果MTT结果显示,益气解毒方对鼻咽癌CNE2细胞增殖具有明显抑制作用,且其抑制作用与作用时间、药物浓度呈正相关(P<0.05)。细胞周期结果显示,处理48 h后,G0/G1期比例降低,S期和G2/M期比例增加(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果显示,水提物处理48 h后,Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt5a/b、β-catenin及细胞周期蛋白CyclinD1的表达量明显下降(P<0.01)。结论益气解毒方可通过下调Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt5a/b、β-catenin及细胞周期蛋白CyclinD1的表达,阻滞细胞周期,抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖。     

Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的检测对甲状腺腺瘤患者及临床意义

本研究旨在探讨甲状腺腺瘤患者Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt-1,β-catenin的检测及临床意义。采用RT-PCR方法检测Wnt-1,β-catenin mRNA表达情况,采用Western blot和免疫组化方法检测Wnt-1,β-catenin蛋白表达情况。结果显示,与对照组相比,疾病组Wnt-1,β-catenin mRNA和蛋白的表达量均升高。肿瘤组织中,疾病组的Wnt-1蛋白表达阳性率和β-catenin蛋白表达阳性率均高于对照组。结果表明,Wnt-1表达与甲状腺腺瘤患者肿瘤直径密切相关。β-catenin表达也与甲状腺腺瘤患者肿瘤直径密切密切相关。甲状腺腺瘤患者Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt-1,β-catenin蛋白表达上调,且其表达与肿瘤生物学状态密切相关。     

乌司他丁通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路活性减轻糖尿病大鼠神经病变性疼痛

目的 探讨乌司他丁减轻糖尿病大鼠神经病变性疼痛（DNP）的效应及相关信号通路。方法 将36只SD大鼠随机分为对照组（Con组）、DNP模型组（DNP组）、乌司他丁治疗组（ULI组）,分别采取不同的干预措施。对大鼠进行机械缩足反射阈值（MWT）测试和热缩足反射潜伏期（TWL）测试。分批处死大鼠,解剖分离L3～5脊髓,采用Western Blot检测Wnt 10a蛋白、β-catenin蛋白的表达水平。采用ELISA法检测瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)等炎性因子的表达水平。结果 (1)DNP组各时间点的MWT和TWL值均显著低于Con组。与Con组相比,ULI组的WMT值及TWL值更高（P <0.05）。Western Blot检测显示,与Con组相比,DNP组大鼠脊髓Wnt 10a蛋白和β-catenin蛋白的表达水平增加（P <0.05）,ULI组Wnt 10a和β-catenin蛋白表达水平显著降低（P <0.05）。(2)与Con组相比,DNP组脊髓星形胶质细胞明显激活,Wnt 10a和β-catenin表达增强。ULI组星形胶质细胞的激活受到抑制,Wnt 10a和β-catenin的表达也受到抑制。(3)ELISA检测显示,在注射链脲佐菌素后第39、42、45天,由Wnt 10a/β-catenin信号通路激活的TNF-α和IL-1β水平显著升高,经乌司他丁干预后,显著降低了TNF-α和IL-1β水平。结论 乌司他丁可通过抑制炎症和星形胶质细胞的激活减轻大鼠DNP症状,这可能是通过Wnt 10a/β-catenin信号通路实现的。     

Wnt3a在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中对神经发生的作用

目的探讨Wnt3a在大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤中对神经发生的作用及其机制。方法将健康雄性SD大鼠70只按随机数字表法分为假手术组、SAH组、Wnt3aⅠ组、Wnt3aⅡ组、Wnt3aⅢ组、Wnt3aⅣ组和DKK-1组。蛛网膜下腔出血的模型通过枕大池自体血注入法建立。应用免疫荧光技术观察各组大鼠海马的神经发生情况,应用蛋白印迹法检测各组大鼠海马中Wnt通路信号分子散乱蛋白-1(Dvl-1)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况。结果随着Wnt3a剂量升高,各组中BrdU阳性细胞百分率呈上升趋势(P<0.05),各组中Dvl-1与β-catenin的蛋白表达量也呈逐渐升高趋势(P<0.05);给予经典Wnt通路抑制剂DKK-1后,Dvl-1、β-catenin蛋白表达量与阳性细胞百分率均明显下降(P<0.05)。结论在蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤中,Wnt3a可能通过经典Wnt信号通路促进神经发生,对中枢神经系统的修复与保护发挥积极作用。     

骨痹通方对骨关节炎大鼠基质金属蛋白酶-3和Ⅱ型胶原酶的影响

目的:以盐酸氨基葡萄糖为阳性对照组,研究骨痹通方调控Wnt/β-catenin信号通路影响大鼠膝骨关节炎基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、Ⅱ型胶原酶(COL-Ⅱ)的表达的机制。方法:将35只大鼠分为正常组、假手术组、模型组、阳性药物对照组、骨痹通组,每组7只。造模成功后,正常组、假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,阳性药物对照组及骨痹通组分别给予盐酸氨基葡萄糖及骨痹通方灌胃治疗。采用Real-time PCR和western blot检测大鼠软骨中Wnt5a、β-catenin、MMP-3、COL-Ⅱ的基因和蛋白表达量。结果:骨痹通方组与模型组、阳性药物对照组相比能够显著抑制Wnt5a、β-catenin、MMP-3的基因及蛋白表达(P<0.05),减少COL-Ⅱ的降解(P<0.05)。模型组与正常组相比Wnt5a、β-catenin、MMP-3的基因及蛋白的表达显著增多(P<0.05),COL-Ⅱ的表达显著减少(P<0.05)。结论:骨痹通方能明显抑制Wnt5a、β-catenin的表达,从而减少MMP-3的产生、促进COL-II的表达,起到保护关节软骨的作用。     

奥拉西坦通过Wnt/β-catenin减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究

目的研究奥拉西坦对大鼠脑缺血再灌注(I/R)损伤的影响及分子机制。方法 2017年5月—2018年12月在上海市第六人民医院南院中心实验室进行实验,选择成年雄性SD大鼠并随机分为假手术组(n=10)、I/R组(n=10)、奥拉西坦组(n=10),后2组采用线栓法建立脑I/R模型,奥拉西坦组给予奥拉西坦200 mg/kg腹腔注射,连续7 d。比较3组间神经功能缺损评分、血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)及星形胶质原蛋白(S100B)含量、脑组织中细胞凋亡率及凋亡基因、Wnt/β-catenin通路基因表达的差异。结果 I/R组大鼠的神经功能缺损评分、血清NSE及S100B含量、脑组织的细胞凋亡率及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(CytC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的表达水平均明显高于假手术组,脑组织中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Wnt1、Wnt3、β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平均明显低于假手术组(P<0.05或0.01);奥拉西坦组大鼠的神经功能缺损评分、血清NSE及S100B含量、脑组织的细胞凋亡率及Bax、CytC、Caspase-3、GSK-3β的表达水平均明显低于I/R组,脑组织中Bcl-2、Wnt1、Wnt3、β-catenin的表达水平均明显高于I/R组(P<0.05或0.01)。结论奥拉西坦能够减轻大鼠脑I/R损伤的程度,且该作用与Wnt/β-catenin通路的激活有关。     

益气活血方和补肾生髓方对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3表达的影响

目的 探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血大鼠海马Wnt/β-catenin信号通路Wnt3a、卷曲蛋白9(Frizzled9)和T细胞因子3(TCF3)蛋白表达的影响.方法 采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、益气活血方组和补肾生髓方组,脑缺血2h后持续灌注7d.采用Western-Blot法检测缺血侧海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达,用免疫组化Envision两步法检测缺血侧海马CA1区Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达.结果 在缺血侧海马区,与假.手术组比较,模型组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著增加(P＜0.01);与模型组比较,益气活血方组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著降低(P＜0.01),补肾生髓方组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白的相对表达量均显著降低(P＜0.01或P＜0.05).在缺血侧海马CA1区,与假手术组比较,模型组Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达显著增加(P＜0.01);与模型组比较,益气活血方组与补肾生髓方组能显著降低CA1区Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达(P＜0.01).结论 2种中药复方能通过抑制缺血侧海马Wnt3a、Frizzled9和TCF3蛋白表达,调节Wnt/β-catenin信号通路,促进局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织修复.     

加味六味地黄汤对大鼠肾间质纤维化的干预机制

【目的】探讨加味六味地黄汤对大鼠肾间质纤维化的干预机制。【方法】将120只健康成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、缬沙坦组等4组,4组组内再按7、14、28 d 3个时间点分组,每组10只。除假手术组,其他组别大鼠均采用结扎输尿管法构建单侧输尿管梗阻模型。假手术组除不结扎输尿管外其他手术步骤均与上述造模方法相同。成功造模后,中药组术后24 h给予加味六味地黄汤2.376 g·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,缬沙坦组术后24 h给予缬沙坦30 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,假手术组和模型组均在术后24 h给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,直至相应实验时间点处死。采用免疫组织化学法检测肾组织c-myc、纤维连接蛋白(Fn)的表达,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测肾组织Wnt4、β-连环蛋白(β-catenin)、磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK-3β)、磷酸化T细胞因子/淋巴增强因子(p-TCF/LEF)的表达。【结果】与假手术组相同时间点比较,模型组大鼠肾组织Wnt4、β-catenin、p-GSK-3β、p-TCF/LEF、Fn和c-myc蛋白表达水平显著上调,差异均有统计学意义(P 0.01);与模型组相同时间点比较,中药组和缬沙坦组大鼠肾组织Wnt4、β-catenin、p-GSK-3β、p-LEF/TCF、Fn和c-myc蛋白的表达水平下调,差异均有统计学意义(P 0.05或P 0.01),且2个治疗组组间比较,差异无统计学意义(P 0.05)。【结论】加味六味地黄汤具有抗肾间质纤维化作用,其机制可能与阻断Wnt4/β-catenin信号通路的活化,下调Fn和c-myc蛋白的表达有关。     

归经组方对肾纤维化大鼠肾组织中Wnt信号表达的影响

目的:观察归肾经药物组方对肾纤维化大鼠疗效及肾组织Wnt信号表达的影响。方法:用5/6肾切除方法建立大鼠肾纤维化模型。经验方肾衰Ⅰ号为肾衰Ⅰ号组,以治则相同不归肾经药物组方为不归经组,以治则相同且归肾经的组方为归经组,同时设模型组,假手术组。连续治疗2月后,采血检测肾功能及血色素、取肾组织Masson染色、Western blot法检测肾组织Wnt2、GSK-3β、P-GSK-3β、β-catenin、α-SMA、β-actin蛋白表达,免疫组化法检测转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在肾组织表达。结果:成功造模并治疗2个月后,与假手术组比较,模型组体质量、血浆总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(Albumin,Alb)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)含量显著降低(P0.01),血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(creatinine,Cr)含量显著增高(P0.01),Wnt2、P-GSK-3β、β-catenin、α-SMA及TGF-β1蛋白表达显著增高(P=0.000),GSK-3β活性显著降低(P=0.000),胶原含量显著增高(Masson染色)(P0.05);与模型组比较,各治疗组体质量显著增高(P0.01),BUN、Cr显著降低(P0.01),Wnt2、P-GSK-3β、β-catenin、α-SMA、TGF-β1表达及胶原含量显著降低(P0.05)。3个治疗组间相比较,归经组Hb、Tp含量及GSK-3β表达较肾衰Ⅰ号组及不归经组显著升高P0.01),P-GSK-3β表达显著降低(P0.01);不归经组α-SMA、β-catenin表达明显高于其他两组(P0.05)。3个治疗组间体质量、ALB、BUN、Cr含量及Wnt2表达之间没有明显差异,归经组与肾衰Ⅰ号之间α-SMA、β-catenin表达亦没有明显差异。结论:三组方均能通过Wnt信号通路减轻模型动物肾纤维化程度,且经验方与归肾经处方优于不归肾经方。     

槲皮素减轻坐骨神经慢性缩窄性损伤大鼠的神经病理性疼痛及其相关机制

目的 探究槲皮素对坐骨神经慢性缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)模型大鼠神经病理性疼痛的影响及其机制.方法 构建CCI大鼠模型,用不同浓度槲皮素干预,通过行为学实验检测机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL),ELISA试剂盒检测大鼠脊髓中炎性因子的表达,Western blot和qRT-PCR分别检测iNOS、COX-2和Wnt3a、β-catenin的蛋白以及mRNA的表达.结果 与对照组相比,模型组大鼠MWT和TWL值明显下降(P＜0.05),脊髓TNF-α、IL-1β,疼痛相关分子iNOS、COX-2,WNT通路Wnt3a、β-catenin蛋白水平均显著上升(P＜0.05),而槲皮素使模型组大鼠MWT和TWL值显著提高,TNF-α和IL-1p,iNOS和COX-2,Wnt3a和β-catenin水平均显著下降(P＜0.05),并呈现一定的剂量依赖效应.而Wnt/β-catenin通路激活剂可阻断槲皮素对CCI大鼠的作用.结论 槲皮素可能通过抑制Wnt/β-catenin通路及其下游靶分子COX-2和iNOS的表达减轻CCI大鼠的神经病理性疼痛.     

消瘤方对子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响

目的:探讨消瘤方对子宫内膜异位症模型大鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响。方法:雌性8~12周龄SD大鼠,采用自体移植法手术造模成功后,随机分为模型组、西药组、消瘤方高剂量与低剂量组;另设正常组、假手术组为对照。模型组和假手术组灌胃0.9%Na Cl溶液,西药组灌胃丹那唑混悬液,消瘤方高、低剂量组灌胃不同剂量(55.0、27.5 g·kg-1·d-1)的消瘤方药液,连续给药4周。剖腹观察子宫内膜组织种植及生长情况,并采用Western-blot法检测药物干预后模型大鼠在位及异位子宫内膜细胞Wnt7a、β-catenin蛋白表达的变化。结果:模型组异位内膜组织生长良好,中药高剂量与西药组异位内膜组织萎缩,而各组在位的子宫内膜组织肉眼观察无明显变化;与模型组比较,中药高剂量组和西药组在位、异位内膜细胞中Wnt7a、β-catenin蛋白的表达水平下降(P0.05),且均优于中药低剂量组(P0.05)。结论:消瘤方可促进子宫内膜细胞凋亡,并可抑制Wnt通路的关键调节因子。     

Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞衰老的影响及其作用机制

目的:研究不同年龄血清对Wnt/β-catenin信号通路激活水平的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路对间充质干细胞(MSCs)衰老、增殖、存活能力的作用及其机制。方法:提取年轻(8～12周)及老年(64～72周)SD大鼠血清,实验分为4组,分别为年轻血清(Young rat serum,YRS)组,YRS+Wnt 3a组、老年血清(Old rat serum,ORS)组和ORS+DKK1组。免疫细胞化学染色和Western blotting检测胞浆、胞核β-catenin的表达。SA-β-半乳糖苷酶染色检测各组细胞衰老,MTT法检测细胞增殖,AO/EB染色法检测MSCs存活和凋亡。为研究Wnt/β-catenin信号通路导致MSCs衰老的作用机制,免疫细胞化学染色和Western blotting检测γ-H2A.X和p53蛋白表达,RT-PCR法检测p53、p21 mRNA表达。结果:ORS组β-catenin表达较YRS组明显增强,尤其是胞核,出现β-catenin聚集现象,而ORS+DKK1组β-catenin表达减弱。与YRS组相比,YRS+Wnt 3a组细胞SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞...     

壮骨止痛方对去势大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:观察壮骨止痛方对去势大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其治疗骨质疏松的机制。方法:60只3月龄SD雌性大鼠,按体重随机分为假手术组、空白组、模型组、壮骨止痛方组,15只/组。模型组、壮骨止痛方组采用双侧去卵巢建立绝经后骨质疏松大鼠模型,假手术组切除卵巢周围相应质量脂肪。术后5 d开始药物干预,连续13 w。取股骨,观察病理形态及Wnt7b、TCF3、GSK3β蛋白的表达。结果:与模型组相比,壮骨止痛方组骨小梁密度及梁髓比均提高。与模型组相比,壮骨止痛方组骨组织中Wnt7b、TCF3蛋白表达增高,GSK3β蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论:壮骨止痛方可通过上调去势大鼠骨组织中Wnt7b、TCF3蛋白表达,下调GSK3β蛋白表达来调控Wnt/β-catenin信号通路。     

延龄草皂苷通过抑制TGF-β/Smad3与Wnt/β-catenin信号通路改善大鼠肺纤维化

目的 探讨延龄草皂苷对肺间质纤维化大鼠的治疗作用及其可能机制。 方法 雄性SD大鼠50只,随机分为对照组,模型组,延龄草皂苷低、中、高剂量组［25 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)和100 mg/(kg·d)］,每组10只。除对照组外,其余各组采用气管插管注入伯莱霉素法(5 mg/kg)建立大鼠肺纤维化模型;次日开始连续给药28 d。处死大鼠后,取肺组织称重并计算肺系数;进行HE和Masson染色观察小鼠肺组织形态病理学变化;ELISA法检测大鼠白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的表达以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;Western blotting法检测大鼠肺组织中纤连蛋白(fibronectin)、胶原蛋白Ⅰ型(Collagen Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β(TGF-β)、SMAD同源物3(Smad3)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的蛋白表达水平。 结果 与模型组比较,延龄草皂苷低、中、高剂量组的肺系数降低;大鼠肺组织炎性细胞浸润、胶原沉积和纤维化程度改善;大鼠IL-1β、TNF-α、IL-6、MDA和ROS的表达水平降低, SOD的活性升高,发挥抗炎、抗氧化作用;肺纤维化标志蛋白fibronectin,Collagen Ⅰ和α-SMA表达被抑制;大鼠肺组织TGF-β1、Smad3、Wnt3a、β-catenin和GSK-3β蛋白的表达水平降低,且治疗效果呈现剂量依赖性。 结论 延龄草皂苷可通过抗炎、抗氧化,抑制TGF-β/Smad3与Wnt/β-catenin信号通路激活,从而对肺纤维化产生保护作用。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨枸杞多糖对压疮大鼠创面愈合的影响

目的 探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对压疮(pressure ulcer,PU)大鼠创面愈合及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 采用随机数字表法将18只SD大鼠分为3组,即空白组、模型组和LBP组。采用缺血再灌注损伤方法制备PU大鼠模型并给予LBP干预2周。观察各组大鼠治疗后第1天、3天、7天和14天创面的治愈率。创面组织取材进行HE染色病理检测。采用ELISA进行血清 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平检测。Wnt1、β-catenin和GSK-3β的 mRNA和蛋白表达水平采用RT-qPCR方法和蛋白印迹方法进行检测。结果 在第3天、7天和14天时,LBP组大鼠创面愈合率明显高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果表明LBP可以减轻组织炎性浸润增加毛细血管数量。LBP治疗后与模型组比较可以有效降低血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。LBP治疗后与模型组比较,可以明显提高血清SOD和VEGF表达水平,降低MDA表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,LBP治疗后PU大鼠创面组织中Wnt1和β-catenin的mRNA及蛋白表达明显升高,而GSK-3β的mRNA及蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LBP在PU大鼠创面愈合过程中发挥了抗氧化和抗炎的特性,同时通过对Wnt/β-catenin信号通路的调控达到促进皮肤创面愈合的作用。     

骨痹通方干预凋亡软骨细胞Wnt/β-catenin通路的实验研究

目的探讨骨痹通方通过Wnt/β-catenin通路抑制软骨细胞凋亡的作用机制。方法SD大鼠关节软骨细胞传至第三代后分为空白组,模型组,骨痹通方高、中、低剂量组(简称高、中、低剂量组)。除空白组外其余各组用白细胞介素-1β(IL-1β)诱导软骨细胞凋亡,空白组及模型组培养基中加空白大鼠血清,骨痹通方各组分别加相应剂量的含药血清,并于培养0 h、24 h、72 h时测定各组软骨细胞MTT值,干预后第4天收集软骨细胞,运用PCR及Western Blot法测定Wnt5a、β-catenin mRNA的表达量及蛋白表达水平。结果各组0 h、24 h及72 h所测的MTT值无显著差异(P0.05)。模型组Wnt5a与β-catenin的mRNA表达量与空白组比较明显升高(P0.05),骨痹通方各剂量组能够下调Wnt5a与β-catenin表达,且骨痹通方低剂量组与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。模型组与空白组比较Wnt5a、β-catenin的蛋白表达量上调,差异不显著(P0.05),骨痹通方高、中、低剂量组Wnt5a、β-catenin的蛋白表达量与模型组比较均有下调趋势,差异不显著(P0.05),骨痹通方各组间Wnt5a、β-catenin的蛋白表达量比较差异无统计学意义(P0.05)。结论骨痹通方可能通过抑制Wnt5a与β-catenin的表达,从而达到延缓软骨细胞凋亡的作用。