H2S促进神经胶质瘤细胞增殖作用的机制探讨

目的为了明确硫化氢(H2S)是否能够促进人胶质瘤U251细胞的增长,探讨Survivin和Sirt1在U251细胞中是否有表达及H2S促进U251细胞增长机制。方法 CCK8(Cell Counting Kit-8)法测细胞活力,Western Blot检测U251细胞内Survivin和Sirt1表达。结果 100-400μmol/L的H2S呈浓度依赖性地促进了U251细胞的增长;100-400μmol/L的H2S处理U251细胞24 h后,细胞内Survivin和Sirt1呈H2S浓度依赖性地增加,与空白对照比较,差异有统计学意义(P<0.01);用100μmol/L Sirt1抑制剂,Sirtinol预处理U251细胞0.5 h后,在继续用200μmol/L H2S继续培养细胞4 h后,预处理组和单独的硫化氢组相比,细胞的活力显著下降,差异有统计学意义(P<0.001),但是单独Sirtinol组对细胞活力影响不大,说明H2S促进细胞增殖功能可能是通过促进Sirt1的表达来实现的。结论 H2S促进了U251细胞的增长,H2S促进了U251细胞内Survivin和Sirt1表达,Sirt1抑制剂抑制了H2S对细胞的促进增长作用。     

H2S对大鼠大脑中动脉平滑肌细胞膜电位的超极化作用

目的:探讨大鼠大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)内皮源性超极化因子(endo-thelium-derived hyperpolarizing factor,EDHF)介导的平滑肌细胞(VSMC)静息膜电位超极化作用与硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)的关系。方法:采用大鼠离体MCA的VSMC静息膜电位记录实验,观察乙酰胆碱(ACh)、硫氢化钠(NaHS,H2S外源性供体)等的超极化作用。结果:ACh可使大鼠MCA的VSMC发生浓度依赖性超极化,用NO合酶抑制剂(-LNAME,3×10-5mol/L)和前列环素(PGI2)合成酶抑制剂(Indo,10-5mol/L)预处理后,ACh对大鼠MCA的VSMC仍有明显的超极化,即非NO、非PG2介导的超极化。钙激活钾通道的阻断剂四乙胺(TEA,1×10-3mol/L)或H2S合成酶(胱硫醚-γ-裂解酶,CSE)的抑制剂DL-炔丙基甘氨酸(PPG,10-4mol/L)均可明显取消这种非NO、非PG2介导的超极化。H2S供体NaHS[(10-5~10-2.5)mol/L]对大鼠MCA的VSMC产生浓度依赖性的超极化作用,而1×10-3mol/L TEA可以抑制其超极化作用。结论:大鼠MCA非NO、非PGI2介导的VSMC超极化作用,即EDHF反应可能是H2S介导的。     

异亚丙基莽草酸对H2O2损伤血管内皮细胞的保护作用

目的研究异亚丙基莽草酸(ISA)对血管内皮细胞损伤的保护作用。方法倒置显微镜下观察细胞形态学改变,MTT比色法检测细胞活性,用硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO的含量。放射免疫法测定细胞培养液中前列环素代谢物6-酮-前列腺素F_1α(6-keto-PGF_1α)含量,比色法测定培养液及细胞裂解液的乳酸脱氢酶(LDH)活性并计算LDH的释放率。结果ISA可明显改善H₂O₂所致的内皮细胞变形、皱缩等损伤表现。1～100 μmol·L^-1 ISA可浓度依赖性的减轻H₂O₂引起的细胞活性降低和LDH释放,并促进H₂O₂诱导的血管内皮细胞释放NO和前列环素。结论异亚丙基莽草酸对H₂O₂损伤血管内皮细胞具有保护作用。     

荛花酚对H2O2和兴奋性神经递质诱导的大鼠皮层神经元细胞损伤的保护作用

目的从中药祖师麻中发现有效的神经保护成分,阐明其治疗神经退行性疾病的药效物质基础。方法使用体外培养的大鼠皮层神经元细胞作为筛选系统,综合运用各种色谱技术进行活性跟踪指导下的分离,对发现的活性成分在体外细胞水平研究其神经保护机制。结果我们发现中药祖师麻的甲醇提取物可显著地减轻由谷氨酸（L-glutamate）、海人藻酸（kainic acid,KA）和过氧化氢（H2O2）诱导的大鼠皮层神经元细胞损伤。从祖师麻中分离纯化了一系列化合物,其中活性最强的是荛花酚（wikstromol）。荛花酚在50μM的浓度下可显著地降低H2O2诱导的细胞损伤。荛花酚显著地减少了细胞内谷胱甘肽、超氧化物歧化酶等抗氧化物质的下降,并减轻由兴奋性神经递质（谷氨酸、海人藻酸）诱导的神经毒性损伤,但不能减轻由N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱导的神经毒性损伤。结论本研究确证了荛花酚可作为一种天然神经细胞保护剂,推测其神经保护机制可能是通过抗氧化作用实现的。     

胱硫醚-γ-裂解酶产生的H2S在小鼠脑缺血/再灌注损伤中的作用及与RhoA-ROCK2信号通路的关系

目的 探讨胱硫醚-γ-裂解酶产生的H₂S在脑缺血/再灌注(cerebral ischemia/reperfusion, I/R)损伤中的作用及与RhoA-ROCK₂信号通路的关系。方法 采用双侧颈总动脉结扎制备小鼠脑缺血/再灌注损伤模型,激光散斑法检测脑血流量,HE染色法观察脑海马组织病理学变化,检测LDH、NSE、RhoA和ROCK₂活性及H₂S含量和ROCK₂蛋白表达。结果 H₂S合酶CSE底物L-Cys(300 mg·kg^-1)可明显促进脑I/R小鼠脑血流量的恢复,改善海马组织的病理损伤,抑制血清中LDH活性和脑组织中NSE、RhoA及ROCK₂活性的升高,并抑制血清H₂S含量的降低和脑组织中ROCK₂蛋白表达的增多。但L-Cys上述作用可被CSE合酶抑制剂PPG(50 mg·kg^-1)明显地减弱;H₂S供体NaHS(4...     

H2受体介导组胺对大鼠海马缺氧缺糖诱导细胞水肿及活性降低的保护作用

目的探讨组胺对海马脑片缺血诱导细胞水肿及活性降低的作用，以及与受体亚型的关系。方法大鼠海马脑片以缺氧缺糖(OGD)诱导缺血损伤后，实时检测CA1区透光度变化评价细胞水肿；并测定2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产物甲，评价脑片活性。观察不同浓度组胺的作用，以及组胺受体拮抗剂对组胺作用的影响。结果 组胺(0.01～10 μmol·L^-1)明显抑制OGD诱导的海马脑片透光度增加，并提高脑片活性。H₁受体拮抗剂苯海拉明(0.1～10 μmol·L^-1)不影响组胺的作用，H₂受体拮抗剂西咪替丁(0.1～10 μmol·L^-1)则部分拮抗组胺的保护作用。结论组胺对大鼠海马脑片缺血诱导细胞水肿及活性降低有保护作用，该作用与H₂受体有关。     

组胺H2受体激动剂和拮抗剂及抗癌药对正常人造血祖细胞和HL-60白血病细胞生长的作用

采用体外微量克隆培养体系研究了组胺H2受体激动剂4-甲基组胺(4-MH)和拮抗剂雷尼替叮(ranitidine)及抗癌药阿糖胞苷分别对正常人外周血粒-巨噬系祖细胞(PBCFU-GM)和HL-60白血病细胞生长的作用。当4-MH的浓度为10^-9～10^-6mol·L^-1时,可促进PBCFU-GM的增殖,4-MH的浓度增加至10^-4mol·L^-1时则表现为抑制PBCFU-GM的增殖。Ranitidine的浓度为10^-9～10^-5mol·L^-1时,表现出对PBCFU-GM增殖的抑制作用,但在10-6mol·L^-1剂量时对PBCFU-GM的抑制率低于50%,而在该剂量时对HL-60白血病细胞的抑制率已达100%,具有一定的选择性。抗癌药阿糖胞苷(Ara-C)对HL-60白血病细胞的抑制作用比对PBCFU-GM的抑制作用较强,但两者的IC₅₀值处于同一个数量级。在强化化疗剂量10^-5mol·L^-1时,Ara-C对HL-60白血病细胞和PBCFU-GM正常造血祖细胞的抑制率均达100%。