吗啡依赖和复吸时大鼠脑内神经甾体水平的变化

目的探讨吗啡精神依赖和复吸对大鼠脑内神经甾体水平的影响。方法采用条件性位置偏爱(CPP)实验,吗啡诱导大鼠CPP形成,足底电击应激诱发CPP重建,高效液相色谱-质谱法测定大鼠额叶皮质、海马及血浆中孕烯醇酮(PREG)及其硫酸酯(PREGS)、别孕烯醇酮(AP)、脱氢表雄酮(DHEA)及其硫酸酯(DHEAS)的含量。结果5 mg.kg-1吗啡训练10 d诱导大鼠产生了稳定的CPP,间歇足底电击有效诱发CPP的重建。与对照组比较,吗啡CPP形成时,大鼠额叶皮质内DHEA、PREG水平升高(P<0.05),海马内DHEA水平降低(P<0.05);与吗啡消退组比较,足底电击诱发CPP重现时,大鼠额叶皮质内PREG水平降低(P<0.01),而海马内PREG水平升高(P<0.05)。结论大鼠额叶皮质和海马内神经甾体水平的变化可能与吗啡依赖和复吸有关。     

吗啡依赖对大鼠伏隔核神经甾体和氨基酸递质的影响

目的　利用大鼠吗啡依赖模型,观察吗啡依赖及戒断对大鼠伏隔核中神经甾体和氨基酸类神经递质水平影响。方法　腹腔注射递增剂量的盐酸吗啡使雄性SD大鼠形成吗啡依赖,并用纳洛酮催促戒断。分离吗啡依赖和戒断大鼠的伏隔核。经液液萃取和固相萃取法提取脱氢表雄酮、孕烯醇酮、别孕烯醇酮、脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯,并采用高效液相色谱质谱系统检测其含量。采用柱前衍生-电化学检测-高效液相色谱法测定甘氨酸、谷氨酸和γ氨基丁酸的含量。结果　与对照组相比,纳洛酮催促戒断时,吗啡依赖大鼠伏隔核脱氢表雄酮硫酸酯的水平下降(P<0 .05),孕烯醇酮(P<0 .01 )和谷氨酸(P<0 .05 )水平均升高。结论　吗啡戒断时大鼠伏隔核的谷氨酸系统处于兴奋状态,伏隔核中的内源性神经甾体在吗啡依赖和戒断的形成中发挥作用。     

吗啡依赖大鼠纹状体内神经甾体水平的变化

目的:探讨吗啡躯体依赖、精神依赖和戒断对♂大鼠纹状体内神经甾体水平的影响。方法:高效液相色谱-质谱法测定大鼠纹状体和血浆中脱氢表雄酮(DHEA)及其硫酸酯(DHEAS)、孕烯醇酮(PREG)及其硫酸酯(PREGS)和别孕烯醇酮(AP)的含量。结果:(1)与纳洛酮对照组比较,纳洛酮催促吗啡戒断大鼠的纹状体内PREG的含量显著升高(P<0.01);血浆中PREG、AP、DHEAS和PREGS的含量显著升高(P<0.01),而DHEA的含量显著降低(P<0.01);(2)与生理盐水对照组比较,吗啡精神依赖大鼠的纹状体内DHEA和PREG的含量显著升高(P<0.01),血浆中DHEA的水平显著降低(P<0.01)。结论:慢性吗啡处理可影响大鼠纹状体内某些神经甾体的水平,表明神经甾体可能参与吗啡依赖的形成。     

吗啡成瘾和应激诱导复发的大鼠脑内神经甾体水平的变化

目的 观察大鼠吗啡成瘾及应激诱导成瘾复发是否与脑组织神经甾体水平的变化有关。方法 给大鼠注射吗啡（5 mg·kg^-1·d^-1，ip, 18：00～20：00）并在条件性位置偏爱(CPP)箱中训练，每日1次，连续10 d，最后1次给药后24 h测试大鼠是否产生CPP。再经过7 d的自然消退期后，给予足底电击(0.5 mA, 0.5 s, 间隔40 s, 15 min)诱发大鼠CPP复发，电击后2 h 进行CPP测试。测试后立即取样，取样时间18：00～20：00，气相色谱-质谱联用技术测定大鼠脑组织神经甾体。结果 给予吗啡并训练10 d，大鼠形成明显的CPP，同时脑组织内神经甾体孕烯诺龙和别孕烯诺龙水平显著升高。经过7 d的自然消退后再给予足底电击可诱发大鼠CPP复发，脑组织神经甾体脱氢表雄酮和硫酸脱氢表雄酮水平显著升高。结论 大鼠吗啡成瘾及应激诱导成瘾复发过程可能与脑组织内源性神经甾体水平有关。     

吗啡急性给药对大鼠伏隔核中神经甾体水平的影响

目的:观察吗啡急性给药后大鼠伏隔核中神经甾体水平的变化.方法:给3组大鼠腹腔分别注射0.5、5和20 mg/kg的盐酸吗啡,分别于给药后0.5和2 h将大鼠断头处死,分离伏隔核.经液-液萃取和固相萃取法提取脱氢表雄酮、孕烯醇酮和别孕烯醇酮,并采用高效液相色谱-质谱系统检测其含量.结果:与对照组比较,0.5 mg/kg剂量的吗啡使大鼠伏隔核中脱氢表雄酮水平显著降低,而5 mg/kg剂量的吗啡则使脱氢表雄酮水平显著升高;20 mg/kg剂量的吗啡使大鼠血浆中的别孕烯醇酮水平显著升高.结论:大鼠伏隔核中的脱氢表雄酮可能在吗啡急性给药的效应中发挥重要作用.     

吗啡急性给药对大鼠伏隔核中神经甾体水平的影响

目的:观察吗啡急性给药后大鼠伏隔核中神经甾体水平的变化.方法:给3组大鼠腹腔分别注射0.5、5和20 mg/kg的盐酸吗啡,分别于给药后0.5和2 h将大鼠断头处死,分离伏隔核.经液-液萃取和固相萃取法提取脱氢表雄酮、孕烯醇酮和别孕烯醇酮,并采用高效液相色谱-质谱系统检测其含量.结果:与对照组比较,0.5 mg/kg剂量的吗啡使大鼠伏隔核中脱氢表雄酮水平显著降低,而5 mg/kg剂量的吗啡则使脱氢表雄酮水平显著升高;20 mg/kg剂量的吗啡使大鼠血浆中的别孕烯醇酮水平显著升高.结论:大鼠伏隔核中的脱氢表雄酮可能在吗啡急性给药的效应中发挥重要作用.     

酒精依赖和戒断时大鼠伏隔核、杏仁核区内神经甾体水平的变化

目的:采用♂大鼠酒精依赖模型,观察酒精依赖及戒断对大鼠伏隔核、杏仁核中不同神经甾体水平的影响。方法:通过大鼠自由饮含6%的乙醇溶液,连续42d使大鼠形成酒精依赖,并撤除酒精使其自然戒断。断头取脑分离取出伏隔核、杏仁核脑区。使用液液萃取和固相萃取两步法提取脑组织中的孕烯醇酮(PREG)、脱氢表雄酮(DHEA)、别孕烯醇酮(AP)、脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)、孕烯醇酮硫酸酯(PREGS),以高效液相色谱-质谱联用法测定神经甾体含量。结果:与对照组相比,酒精依赖大鼠伏隔核DHEA,PREG,AP,DHEAS,PREGS的水平显著降低(P<0.05),杏仁核AP,PREGS的水平显著降低(P<0.05);酒精戒断6h大鼠伏隔核DHEA,DHEAS,PREGS的水平显著降低(P<0.05),杏仁核PREGS的水平显著降低(P<0.05);酒精戒断24h大鼠杏仁核DHEA的水平显著上升(P<0.05),伏隔核、杏仁核DHEAS、PREGS的水平显著下降(P<0.01)。结论:酒精依赖形成和戒断对伏隔核、杏仁核中的神经甾体水平有不同的影响,具有区域特异性。     

高效液相色谱-质谱法测定大鼠血浆中硫酸酯型脱氢表雄酮和孕烯醇酮

目的:建立同时测定SD大鼠血浆中脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)和孕烯醇酮硫酸酯(PREGS)的高效液相色谱-质谱法。方法:选择雌酮硫酸酯(ES)作为内标。SD大鼠的血浆使用乙腈沉淀除去蛋白后,经固相萃取,水解,衍生化后,以高效液相色谱-质谱测定脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯的浓度,采用大气压化学离子源(HPLC/APCI-MS),选择离子检测方式。结果:血浆中脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯线性范围分别为:0.050~2.00ng,0.030~2.00ng,相关系数分别为0.9990和0.9979。低、中、高浓度血样的提取回收率在66.8%~82.3%之间,相对回收率为:98.4%~111.6%,日内、日间变异均小于15%。正常SD大鼠的血浆脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯分别为0.070±0.020ng/ml、0.13±0.031ng/ml。结论:本实验方法具有灵敏度高、准确度好及变异较小的特点,适合测定SD大鼠血浆中脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯酮硫酸酯的含量。     

谷氨酸和γ-氨基丁酸对原代培养星形胶质细胞神经甾体合成释放的影响

目的研究氨基酸类神经递质对原代培养大鼠大脑皮质星形胶质细胞神经甾体合成释放的影响。方法采用原代培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞,分别加入不同浓度的谷氨酸和γ-氨基丁酸处理48h;采用固相萃取结合高效液相色谱质-谱联用分析方法提取分离和测定细胞培养液中游离型(脱氢表雄酮,DHEA;孕烯醇酮,PREG;别孕烯醇酮,AP)及结合型神经甾体(脱氢表雄酮硫酸酯,DHEAS;孕烯醇酮硫酸酯,PREGS)。结果与生理盐水对照组比较,谷氨酸处理使PREG和PREGS水平明显下降,DHEAS水平明显升高;γ-氨基丁酸处理使PREG水平明显降低,AP水平增加。结论谷氨酸和γ-氨基丁酸两种神经递质对原代培养的星形胶质细胞PREG合成释放均呈抑制作用;谷氨酸对DHE-AS、γ-氨基丁酸对AP的合成释放分别呈现明显促进作用;高剂量的谷氨酸还可以抑制PRGES的合成和释放。     

高效液相色谱-质谱法测定大鼠血浆中硫酸酯型脱氢表雄酮和孕烯醇酮

建立同时测定 SD 大鼠血浆中脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)和孕烯醇酮硫酸酯(PREGS)的高效液相色谱-质谱法。方法:选择雌酮硫酸酯(ES)作为内标。雄性 SD 大鼠的血浆使用乙腈沉淀除去蛋白后,经固相萃取、水解及衍生化后,以高效液相色谱质谱检测器测定脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯的浓度。色谱柱为 Zorbax SB C_(18)柱温40℃,流动相为乙腈水,使用梯度洗脱;采用大气压化学离子源(HPLC/APCI-MS),负离子检测方式,用于选择离子检测(SM)定量分析的离子为 m/z 490.0(DHEAS)和 m/z 518.0(PREGS)及 m/z 472.1(ES)[M-H]~-。结果:血浆中脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯线性范围分别为:0.05～2.0ng·mL~(-1),0.03～2.0 ng·mL~(-1),r 分别为0.9990和0.9979。低、中、高浓度血样的提取回收率在66.8%～82.3%之间,相对回收率为:98.4%～111.6%,日内、日间变异均小于15%。正常雄性 SD 大鼠的血浆脱氢表雄酮硫酸酯和孕烯醇酮硫酸酯分别为0.070±0.020 ng·mL~(-1)、0.13±0.031 ng·mL~(-1)。结论:本实验方法具有灵敏度高、准确度好及变异较小的特点,适合测定雄性 SD 大鼠血浆中脱氢表雄酮硫酸酯和和孕烯醇酮硫酸酯的含量。     

Effects of morphine dependence and withdrawal on levels of neurosteroids in rat brain

AIM: To investigate the effects of morphine dependence and withdrawal on the concentrations of neurosteroids in rat brain. METHODS: A method of simultaneous quantification of neurosteroids by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) had been established. RESULTS: The chronic morphine administration (ip) resulted in a marked decrease in the brain concentrations of pregnenolone (PREG), progesterone (PROG), and pregenenolone sulfate (PREGS) in rats killed 6 h after the last treatment. In contrast, there were no significant effects of morphine dependence on the brain concentrations of allopregnanolone (AP), dihydroepiandrosterone (DHEA), and dihydroepiandrosterone sulfate (DHEAS). Naloxone-induced withdrawal produced a significant increase in the concentrations of PREG, PROG, AP, DHEA, PREGS, and DHEAS as compared with the control group. CONCLUSION: Morphine dependence and withdrawal affected the concentrations of neurosteroids in rat brain, which suggests that endogenous neurosteroids in brain might be     

吗啡对原代培养大鼠皮质神经元神经甾体水平的影响

目的探讨吗啡慢性处理对大鼠大脑皮质神经元合成释放神经甾体水平的影响及其机制。方法建立原代培养大鼠大脑皮质神经元吗啡依赖样模型,固相萃取结合高效液相色谱-质谱联用法测定细胞培养液中神经甾体水平;免疫印迹法检测神经元中p-CREB水平。结果与盐水对照组相比,吗啡(1μmol.L-1)处理使PREG和DS的水平降低(P<0.01);μ-受体激动剂DAMGO使PREG、DS和PS水平下降,AP水平增高;与吗啡单独处理组相比,μ-阿片受体拮抗剂CTAP与吗啡联合处理使PREG增加(P<0.01)。与盐水对照组相比,吗啡或DAMGO慢性处理均可增加神经元内p-CREB的水平(P<0.01);与吗啡处理组相比,CTAP抑制吗啡诱导的p-CREB的增加。结论μ-阿片受体参与了介导吗啡慢性处理对皮质神经元神经甾体合成释放的影响;神经元内p-CREB水平的变化反映了吗啡引起的神经元适应性改变,提示神经甾体水平的变化可能与吗啡依赖有关。     

Differences in blood pregnenolone and dehydroepiandrosterone levels between schizophrenia patients and healthy subjects.

BACKGROUND AND OBJECTIVE: Contradictory and confusing reports on serum dehydroepiandrosterone (DHEA) levels in schizophrenia led us to compare the serum concentration of its precursor, pregnenolone (PREG), between medicated schizophrenia patients and healthy subjects. The neurosteroid levels were monitored for two months and the relationship of these neurosteroids with schizophrenic symptomatology, emotional distress, and anxiety was examined. METHOD: We determined blood levels of PREG, and DHEA in 15 schizophrenia patients and 12 healthy controls at four time points: at the start of the study, after 2, 4 and 8 weeks. Analysis of covariance and canonical correlations across four time points were applied. RESULTS: Controlling for age, serum concentrations of PREG were lower, while the DHEA level and the molar ratio values of DHEA/PREG were higher in schizophrenia patients compared to healthy controls. Both levels of PREG and DHEA and their molar ratio did not change significantly during the study's period either among schizophrenia patients or healthy controls. The blood levels of PREG appear to be associated with trait-anxiety scores in the schizophrenia patients, while associations of clinical symptoms with two neurosteroids did not reach a significant level when the confounding effect of emotional distress, and anxiety scores was controlled. CONCLUSION: Low serum pregnenolone concentrations in schizophrenia appear to be associated with trait-anxiety scores independent of symptoms. Further research into the role of pregnenolone in schizophrenia is warranted.