激发型CD40单克隆抗体联合特异性细胞毒T淋巴细胞对B细胞淋巴瘤的免疫治疗作用

目的研究激发型CD40单克隆抗体5C11联合特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对B细胞淋巴瘤的免疫治疗作用,方法人B细胞淋巴瘤Daudi细胞株经5C11刺激24或48 h,Annexin V/PI结合实验测定凋亡率,流式细胞术检测Fas表达率外周血单个核细胞来源的树突状细胞(DC),经凋亡Daudi细胞负载、5C11诱导成熟后,与自体T细胞混合培养,激发特异性CTL,JAM法检测5C11、CTL或5C11联合CTL对Daudi细胞的杀伤效应。皮下注射Daudi细胞,建立人源化SCID小鼠B细胞淋巴瘤模型;接种肿瘤细胞1周、3周后,分别经腹腔注射5C11、CTL、5C11 CTL进行治疗,通过肿瘤生长曲线、荷瘤小鼠生存期评价疗效。结果5C11作用后,Daudi细胞表面Fas的表达率显著上调,但细胞凋亡率没有明显改变。特异性CTL能有效杀伤靶细胞,且与5C11联合应用后,Daudi细胞DNA片段形成率显著增高,8 h为71.9%±4.0%,12 h达82.6%±4.4%经5C11、CTL、5C11联合CTL治疗后,荷瘤小鼠体内肿瘤生长速度均显著减缓,而且在低肿瘤负荷小鼠中,CTL、5C11联合CTL治疗分别取得了30.0%和70.0%的完全缓解率,与对照组相比,各治疗组小鼠生存期显著延长。结论激发型CD40单抗5C11可显著上调细胞表面Fas的表达,增强Daudi细胞对诱导凋亡的敏感性,从而促进肿瘤特异性CTL的体外杀伤和体内治疗效应。     

人T淋巴细胞白血病不同细胞株的混合抗原肽诱导特异性CTLs细胞毒效应及其交叉反应性分析

目的探讨T淋巴细胞白血病不同细胞株的混合抗原肽诱导特异性抗瘤免疫的作用及不同细胞株混合抗原肽之间的交叉反应性。方法从不同白血病细胞株中分别制备混合抗原肽,与Hsp70体外结合,观察Hsp70-抗原肽复合物对人外周血单个核细胞(PBMC)的激活增殖作用;以激活增殖的PBMC为效应细胞,对不同的靶细胞进行体外杀伤试验。结果不同白血病细胞株的抗原肽为混合肽,经Hsp70提呈均能够有效激活PBMC,并能使激活的PBMC增殖,增殖活化的PBMC可以特异性杀伤与抗原肽对应的白血病细胞;Hut78-肽和Molt-4-肽激活的PBMC对Hut78细胞、Molt-4细胞和Jurkat细胞的细胞毒作用均显著高于HL-60-肽激活的PBMC(P<0.05)。而Hut78/Molt-4-肽激活的PBMC对Jurkat细胞的杀伤作用则显著高于Hut78-肽和Molt-4-肽单独激活的PBMC(P<0.05)。结论不同T淋巴细胞白血病细胞株来源的混合抗原肽均能够诱导特异性抗肿瘤免疫,其所含的抗原肽之间存在交叉性,通过多株来源的抗原肽混合,这种交叉性可以被放大。     

细胞毒T淋巴细胞识别肿瘤抗原—特异性免疫疗法的新进展

目前已分离出T淋巴细胞识别的小鼠和人的肿瘤排斥抗原的第一个编码基因.其它此类基因可望在不远的将来鉴定出来.本文将简要地概述作者在这方面的研究进展,并探讨在此基础上新的肿瘤特异免疫疗法产生的可能性.虽然作者的研究限于细胞毒T淋巴细胞(CTL)的识别的抗原,但这并不意味着由CTL介导的细胞毒作用是肿瘤排斥仅有的或最有效的机制.事实上,作者已经遇到了几例在几乎缺乏CTL情况下,非常强烈的肿瘤排斥现象.但CTL克隆已充分证明是有效的和可靠的用遗传学方法分析研究肿瘤排斥抗原的工     

IL-2基因修饰的细胞毒 T淋巴细胞抗肿瘤效应的研究

目的：了解IL－2基因修饰的细胞毒T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes,CTL)的增殖和杀伤活性,探索细胞因子基因疗法及被动免疫治疗脑胶质瘤的新途径。方法：用昆明种小鼠的脾细胞体外诱导CTL,用腺病毒载体转染IL－2基因,观察其体外增殖活性和样伤活性,再用G422小鼠胶质母细胞瘤细胞建立肺转移瘤模型,36h后经过继回输,2周后计数肺的肿瘤结节,观察IL－2基因转染的CTL对实验性肺转移瘤的治疗作用。结果：重组腺病毒载体在MOI（multipliciy of infection)为100时,转染率达96．8％,IL－2基因修饰CTL增殖活性、IL－2的分泌（248u)和体外杀伤活性（36．4％）明显增强,对实验性肺转移瘤的治疗作用都显著增强,肺转移结节数（28）显著减少（P＜0．01）。结论：IL－2基因转染的CTL过继回输,可直接杀伤和诱导激活机体抗肿瘤免疫反应,使体内抗肿瘤效果显著增强,有效抑制实验性肺转移瘤的生长,为胶质瘤的过继免疫治疗提供了新的思路和实验依据。     

人脑胶质瘤特异性CTL的诱导及体外抗瘤活性的实验研究

细胞毒淋巴细胞(CTL)是体内重要的抗肿瘤效应细胞.克隆的CTL由于具有高效特异性杀伤肿瘤的特点,近年来越来越受到人们的瞩目;体外诱导肿瘤特异性CTL,并进行特异性过继免疫治疗也就成为肿瘤兔疫治疗研究的一个热点.     

特异性RNA诱导的CTL对Hep-A-22肿瘤细胞的特异性杀伤作用研究

目的检测特异性核糖核酸诱导的CTL对肿瘤的特异性杀伤作用.方法应用Hep-A-22小鼠肝癌细胞提取的核糖核酸对小鼠进行主动特异性免疫治疗,检测机体对肿瘤的免疫及抑制作用.结果实验动物淋巴细胞对ConA增殖呈明显促进,抑瘤作用较明显.结论特异性RNA能刺激机体特异性抗体的产生能力,可作为特异性抗原对肿瘤进行特异性免疫治疗.     

抗CML特异性T细胞的诱导和细胞毒作用分析

 引言诱导特异性抗白血病免疫应答 ,而应用于开展白血病患者的特异性过继性免疫治疗 ,清除微小残留病变一直是众多研究人员的研究目标。本研究应用混合淋巴细胞肿瘤细胞培养 (MLTC)和LDH方法分析CML细胞诱导自体和异体T细胞的特异性细胞毒活性作用 ,为特异性免疫治疗提供基础资料。1　材料与方法1.1　标本收集经细胞形态学、组织化学和细胞遗传学确诊初发未治慢性粒细胞白血病患者 1例和 1例正常人外周血 ,分别分离单个核细胞 (MNC ) ,利用MACS磁珠分选仪和CD3单抗阳性分选CD3+细胞(总T细胞 ) ,并收集CML患者CD3- 细胞 (主要为CML细胞 )。1.2　T细胞液体培养1.2 .1　刺激细胞　经磁珠分选CML患者外周血的CD3- 细胞 (CML细胞 ) ,经丝裂霉素C (mito mycinC ,MMC ,5 0 μg/mL)处理后 ,用做诱导T细胞特异性扩增的刺激细胞。1.2 .2　T细胞培养　T细胞培养分CML自体T细胞和异基因T细胞两类 ,每类分 3组 ,分别为外周血T细胞 +CML细胞组 ,外周血单个核细胞 +CML细胞组和外周血T细胞单独培养组 ,单个核细胞和CD3+细胞 (终浓度...     

人νδT细胞细胞毒活性研究

细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤肿瘤细胞的作用是机体抗瘤机制的重要环节，也是肿瘤过继免疫疗法中的主要效应细胞之一。因此寻找能特异杀伤肿瘤细胞的CTL是目前肿瘤生物疗法中急待解决的焦点之一。νδT细胞是T细胞的另一亚类，大量的实验表明：这群细胞与LAK，NK细胞相似，其胞浆中富含穿孔素，     

外源性肿瘤相关抗原协同肿瘤细胞诱导细胞毒T淋巴细胞反应的研究

CA-Hb3抗原是人大肠癌细胞膜糖蛋白的肿瘤相关抗原,该抗原特异性地存在于大肠癌组织中.实验选择了3个大肠癌病例,经ELLSA方法检测,其血清中皆含有CA-Hb3抗原,以免疫组化方法检测,其肿瘤细胞上的CA-Hb3抗原微弱.分离PBL及肿瘤细胞,以肿瘤细胞在体外诱导自体外周血淋巴细胞的细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应.经细胞毒功能测定,结果显示未能获得明显的CTL杀伤活性.然后,按冻-融,超声方法,制备包裹外源性CA-Hb3抗原的阳离子脂质体,将肿瘤细胞与包裹脂质体共育,在脂质体的介导下,CA-Hb3抗原被导人肿瘤细胞的胞浆内(金标记电镜证实)、导入CA-Hb3抗原2h后,免疫组化方法检测显示有2个病例     

不同浓度IL-2对体外诱导肽特异性细胞毒性T淋巴细胞培养体系的影响

背景与目的：细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)介导的特异性细胞免疫在抗肿瘤免疫过程中发挥着主要作用。该研究探讨不同浓度IL-2(50、200和1000 U/mL)对体外诱导表位肽特异性CTL培养体系培养的细胞亚群比例和功能的影响,以及高剂量IL-2是否会诱导该体系中的调节性T细胞(regulatory cell,Treg)的富集。方法：选取HLA-A2超型的肿瘤患者和健康供者各10例,取外周血分离外周血单核细胞,使用环氧合酶-2(Cox-2)来源的CTL表位肽P321(ILIGETIKI)与不同浓度IL-2体外诱导肽特异性CTL。运用流式细胞仪检测细胞的增殖能力、CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞亚群的比例、Treg细胞亚群的比例,以及CD8+T淋巴细胞分泌穿孔素(perforin)、颗粒酶B(granzyme-B)、干扰素IFN-γ的能力。使用Elispot实验检测实验组细胞分泌IFN-γ的能力。结果：高浓度的IL-2有利于细胞的增殖。肿瘤患者组的CD4+T淋巴细胞比例高于健康供者组,而CD8+T淋巴细胞比例较健康供者组低;不同浓度IL-2对CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和Treg细胞亚群比例以及CD8+T淋巴细胞分泌穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ的能力没有影响。随着IL-2浓度的增高,Elispot实验出现的阳性斑点数越多。结论：不同浓度IL-2条件对体外诱导表位肽特异性CTL培养体系培养出的细胞亚群比例和功能没有影响,在50~1000 U/mL IL-2浓度范围内,高剂量的IL-2不会诱导该体系中的Treg的富集。但高浓度的IL-2可以提高细胞的增殖能力,并且促进细胞分泌IFN-γ,而高浓度的IL-2可以使培养体系中存在的NK细胞或NKT细胞能够非特异性产生IFN-γ,从而对Elispot实验产生干扰。因此,在体外诱导肽特异性CTL时选用50 U/mL的IL-2浓度可以很好地维持T细胞的增殖和存活,并且最大程度地降低对Elispot实验的干扰。     

急性B淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链可变区的细胞毒T淋巴细胞识别表位

目的分析儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞免疫球蛋白重链可变区(IgHV)的基因特征,确定IgHV的细胞毒T淋巴细胞(CTL)识别表位。方法PCR扩增37例儿童B-ALL的7个：IgHV基因家族,PCR产物直接测序,利用生物信息资源,分析所得序列的特征并预测B-ALL细胞IgHV上与HLA-A*0201分子结合的九肽。合成预测九肽QLNQSGAEV,进行T-B杂交瘤细胞系(T2)结合实验,用荷肽抗原呈递细胞,反复刺激HLA-A*0201正常供者外周血中肽特异性CD8^ T细胞的扩增。结果37例B-ALL均检测到IgHV基因,经PCR产物测序,得到40份IgHV基因序列,它们优先利用基因片段VH4．34(12．5％)和VH4．59(10．0％)。V-ALL细胞的IgHV基因利用D7．27片段的频率(15．4％)和在DJH结合区缺乏非编码核苷酸的频率(20．0％),均明显高于正常成人外周血淋巴细胞的IgHV基因。17．5％的序列含有不到2％的替代突变。从40份B-ALL细胞的IgHV序列,预测出12条与HLA-A*0201分子有高亲和力的九肽,10条(83．0％)位于框架1和3区。合成九肽QLNQSGAEV使T2细胞表面HLA-A*0201分子的表达强度提高1．6倍。HLA-A*0201正常供者外周血中的QLVQSGAEV特异性CD8^ T细胞,在荷肽抗原呈递细胞的重复刺激下,由2轮刺激后的1．6％增至3轮刺激后的82．6％。结论儿童B-ALL的IgHV基因为胚系基因,重链框架区有与HLA-A*0201结合的抗原九肽,这些九肽能够诱导特异性CD8^ T细胞的活化和增殖。     

DCs诱导特异性CTL抗非霍奇金淋巴瘤作用的研究

目的：探讨树突状细胞（dendritic cells,DCs）及经DCs诱导的肿瘤特异性CTL（cytotoxic T lympho-cyte,CTL）对杀伤非霍奇金淋巴瘤（NHL）细胞的作用。方法：分选DCs,NHL细胞株（Raji）冲击DCs,诱导产生CTL,加入荧光标记的抗体100μl（分别为抗CD11a、CD86、CD83的单抗）,FACScan检测其表型,MTT检测其刺激淋巴细胞的能力。LDH释放实验检测DC诱导的CTL的杀伤作用。结果：DC可刺激T细胞增殖;CTL对Raji细胞有杀伤作用,CTL与Raji细胞比例为100：1、10：1时,对Raji细胞的杀伤率为（57.1±3.7）%、（35.8±6.2）%,两者有显著差异（P〈0.05）。结论：DC及CTL对NHL能产生高效的杀伤作用。     

IL-2基因转导自身肿瘤特异性细胞毒T细胞对小鼠实体瘤作用的实验研究

许多研究发现自身肿瘤特异性细胞毒T细胞(CTL)能定位于体内肿瘤所在部位．其杀瘤细胞活性及特异性远在LAK细胞之上，来源和增殖性方面较TIL为优，因此可作为较为理想的载体细胞导入各种治疗基因。将IL-2基因导入CTL中表达并回输．通过其聚集在肿瘤发生局部持续分泌一定量的IL-2，激活机体肿瘤免疫反应或直接杀伤肿瘤细胞，     

树突状细胞诱导的细胞毒T淋巴细胞抑制移植瘤细胞增殖

目的　研究树突状细胞（ Ｄ Ｃ）体外诱导的细胞免疫能否抑制裸鼠移植瘤肿瘤细胞增殖。方法　联合应用粒／巨细胞集落刺激因子（ Ｇ Ｍ  Ｃ Ｓ Ｆ）及白介素４（ Ｉ Ｌ４）直接从肝癌患者外周血中培养出 Ｄ Ｃ;以源于人肝癌细胞系 Ｈｅｐ Ｇ２ 细胞的肿瘤抗原粗提物刺激 Ｄ Ｃ; Ｄ Ｃ 激活同源的 Ｔ 淋巴细胞产生细胞 毒性 Ｔ 淋 巴细胞 （ Ｃ Ｔ Ｌ）; 建立 人肝癌 细胞 系 Ｈｅｐ Ｇ２ 裸鼠移植瘤模型; Ｃ Ｔ Ｌ 治疗人肝癌细胞系 Ｈｅｐ Ｇ２ 裸鼠移植瘤;检测移植瘤标本肿瘤细胞 Ｐ Ｃ Ｎ Ａ 表达水平。结果　 Ｄ Ｃ诱导的 Ｃ Ｔ Ｌ抑制 Ｈｅｐ Ｇ２ 裸鼠移植瘤细胞增殖从而抑制移植瘤生长。结论　经肿瘤抗原激活的 Ｄ Ｃ 作为一新概念上的抗肿瘤疫苗有可能在肿瘤的治疗中发挥重要作用。     

细胞毒T淋巴细胞识别的人类肿瘤抗原

在多数肿瘤患者外周血淋巴细胞或肿瘤浸润淋巴细胞中，存在对自体肿瘤细胞有特异性杀伤作用的细胞毒T淋巴细胞(CTL)。已鉴定出众多可被特异性C1L所识别的抗原，一些抗原仅在肿瘤组织中表达，另一些是组织分化抗原或由广泛表达的基因点突变所产生。肿瘤抗原中部分人类白细胞抗原(HLA)-I类分子限制性CTL表位已被确定；临床应用已知抗原或抗原肽进行免疫治疗已取得一定疗效。     

脐血来源树突状细胞体外诱导抗卵巢癌免疫特异性

[目的]研究脐血来源树突状细胞(DC)体外诱导特异性抗卵巢癌细胞的免疫效应.[方法]①从脐血中分离单个核细胞(MNCs)后,获得单核细胞(Mo).粒单集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)诱导分化,培养7天后应用流式细胞仪进行细胞表型分析.②诱导单核细胞分化的第3天加入人卵巢癌细胞株3AO的冻融抗原,共培养4天后获得负载肿瘤抗原的成熟DC;将致敏DC与从脐血中分离的同种异体T淋巴细胞共培养3天,获得细胞毒T淋巴细胞(CTL);四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL及上清对人卵巢癌细胞株3AO、人胚肾细胞株293T(对照细胞)、人肝癌细胞株HCCC-9810的细胞毒作用.[结果]①脐血来源单核细胞(Mo)在GM-CSF和IL-4作用下,7天后可分化生成成熟的DC,高表达DC特异性抗原CDla、CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、HLA-DR、CD83.②DC可负载并递呈肿瘤抗原,激活同种异体T淋巴细胞,诱导肿瘤特异性CTL产生.不同浓度CTL及上清对卵巢癌细胞3AO有特异性杀伤、抑制作用(P＜0.05).[结论]脐血中单核细胞可体外分化扩增为成熟的功能性DC,并诱导出特异性杀伤卵巢癌细胞的免疫效应.     

EB病毒潜伏感染膜蛋白特异性T淋巴细胞

EB病毒与鼻咽癌关系十分密切,而EB病毒感染后抗体的细胞免疫反应渐受到人们的关注[1]。目前,检测细胞类的方法有乳酸脱氧酶法;酯酶法及甲基偶氮华外等非同位素方法,而传统的51Cr释放法显然受仪器及使用同位素的种种限制,但其灵敏度高,重复性好,仍不失为检测细胞毒的经典方法。本文用叱r检测EB病毒特异性细胞毒T淋巴细胞（C：17lls）,以了解EB病毒感染后的细胞免疫反应。l材料和方法1．l材料表达EBV－］IMI,l的重组痘苗病毒由美国ta教授惠赠。＊d卜、H2‘川＼鼠由中国预防医学科学院病毒所肿瘤室繁殖。田匕细胞由中国医学科…     

双特异性抗体与T淋巴细胞抗肿瘤免疫

导向免疫效应细胞的双特异性抗体可以同进结合靶细胞的肿瘤相关抗原和效应细胞２表面的触发分子，能引发正常的细胞防御机制到肿瘤细胞上来，是一种新型高铲的肿瘤免疫制剂。其中根据Ｔ细胞活化的双信号识别理论发展而来的导向Ｔ淋巴细胞的双特异性抗体用于某些肿瘤的免疫治疗临床前研究报告了令人瞩目的抗肿瘤免疫效应。     

体外树突状细胞诱导细胞毒T淋巴细胞杀伤肺癌细胞A549的研究

 目的　研究负载有肺癌细胞株A549可溶性抗原并携带外源粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）基因的树突状细胞（DC）在体外激活自身T淋巴细胞形成的细胞毒T淋巴细胞（CTL）对A549细胞的杀伤作用。方法　用肺癌细胞株A549可溶性抗原致敏DC,再用含有GM-CSF外源基因的腺病毒感染DC,将所得的DC与T细胞混合培养以形成对A549细胞有特异杀伤作用的CTL。细胞分为未处理（N-DC）组、加抗原未感染病毒（A-DC）组和加抗原感染病毒（G-A-DC）组。通过测定乳酸脱氢酶（LDH）计算CTL对A549细胞的杀伤率。结果　当CTL与A549细胞,即效应细胞与靶细胞比值（E／T）为5∶1时,N-DC组的杀伤率为（1.9±0.7）%,A-DC组为（21.3±2.6）%,G-A-DC组为（34.5±4.9）%;当E／T为10∶1时,N-DC组的杀伤率为（4.8±0.8）%,U-DC组为（35.4±3.6）%,G-A-DC组为（51.3±2.9）%;E／T为20∶1时,N-DC组的杀伤率为（5.3±0.2）%,A-DC组为（40.5±7.7）%,G-A-DC组为（72.5±4.7）%。3组之间的杀伤率差异有统计学意义（n＝2,F＝356,P＜0.05）,通过两两比较,得出G-A-DC组的杀伤率高于其他两组（P＜0.001）,且A-DC组高于对照组（P＜0.001）。结论　以肺癌细胞株A549可溶性抗原致敏的DC可诱导出对A549具有特异杀伤作用的CTL,当所致敏的DC通过腺病毒感染而带有外源基因GM-CSF时,所诱导的细胞毒杀伤反应进一步增强。     

细胞毒T淋巴细胞识别的人类肿瘤抗原

在多数肿瘤患者外周血淋巴细胞或肿瘤浸润淋巴细胞中,存在对自体肿瘤细胞有特异性杀伤作用的细胞毒T淋巴细胞(CTL).已鉴定出众多可被特异性CTL所识别的抗原,一些抗原仅在肿瘤组织中表达,另一些是组织分化抗原或由广泛表达的基因点突变所产生.肿瘤抗原中部分人类白细胞抗原(HLA)-Ⅰ类分子限制性CTL表位已被确定;临床应用已知抗原或抗原肽进行免疫治疗已取得一定疗效.