牙本质基质蛋白1在人牙胚发育过程中的表达和意义

目的：观察牙本质基质蛋白1(dental matrix protein，DMP1)在人牙胚发育过程中的表达和分布变化，探讨DMP1在人牙齿发育过程中的作用。方法：制备人牙胚发育各期组织标本，采用免疫组织化学方法观察DMP1在人牙胚不同阶段的表达情况。结果：DMP1主要表达于钟状晚期分泌型成牙本质细胞，在前成牙本质细胞、前成釉细胞和牙乳头细胞中表达弱阳性，在成釉细胞中有一过性表达，即在釉基质开始形成但没有形成硬组织时的分泌型成釉细胞中有表达，但在随后的分泌型成釉细胞中表达渐弱至阴性。结论：观察到DMP1在人牙胚发育不同时期的表达和表达变化，提示其可能参与成牙本质细胞和成釉细胞的分化及牙本质形成过程。     

人牙本质基质蛋白1基因启动子在不同细胞中的活性比较和分析

目的观察并比较不同长度的人牙本质基质蛋白1(Dmp1)基因上游启动子片段在人牙髓干细胞(HDPSC)、成骨细胞(OC)和子宫颈癌上皮细胞株Hela中的启动子活性,为进一步研究Dmp1基因在矿化组织中的特异性转录调控特点和作用机制奠定基础。方法以获得正确序列的2 195 bp Dmp1基因上游启动子重组T载体为模板,通过 PCR方法获得不同长度的Dmp1基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染至HDP- SC、OC和Hela细胞,荧光素酶检测这些细胞中启动子活性并进行分析。结果成功地获得了6段不同长度的Dmp1 启动子目的片段。酶切鉴定表明不同长度启动子报告基因载体构建成功,不同片段的Dmp1启动子在不同细胞中活性不同,在HDPSC和OC中活性较强,而在Hela细胞中活性最低。在-505--193 bp区和-935--505 bp区可能分别存在HDPSC和OC较为特异的转录调控作用区域点,该区可能包含Dmp1表达的基础调控元件。结论成功克隆了不同长度的Dmp1上游启动子的序列,不同启动子片段在牙髓干细胞和成骨细胞等矿化性细胞中活性较强,并初步确定了Dmp1启动子在矿化性细胞中的基本启动子区域,而在非矿化性细胞Hela细胞中活性较低。     

牙本质基质蛋白1、骨桥蛋白及骨涎蛋白在小鼠牙骨质形成中的组织学定位

目的：研究牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)、骨桥蛋白(osteopontm,OPN)及骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)在小鼠成牙骨质细胞分化及牙骨质形成中的时空分布特点：方法：取出生后第5、10、15、25天的BALB／c小鼠36只．引颈处死．解剖分离含下颌第一磨牙区的下颌骨,新鲜配制4％多聚甲醛固定过夜,甲酸一甲酸钠复合脱钙液脱钙1～3周,常规石蜡包埋,近远中向5μm连续切片,免疫组化PV二步法检测DMP1、OPN及BSP的表达。采用CMIAS2000多功能真彩色病理图像分析系统．高倍镜下每张切片阳性部位沿牙骨质表面随机选取不相重叠的10个视野．计算机测量其积分光密度值,取其均值．计为该指标的1个标本的积分光密度值、相同指标重复3次．均值作为该指标在该标本中的表达强度,各指标在不同发育期的积分光密度值采用重复测量数据方差分析,分别进行统计学处理。结果：DMP1、OPN及BSP在小鼠成牙骨质细胞分化及牙骨质形成过程中呈先后不同的时相表达。DMP1表达最早,出生后第5天在牙囊细胞中表达阳性,一旦牙囊开始分化为牙周膜细胞、成牙骨质细胞和成骨细胞,其表达开始转为阴性;而PPN至出生后第10天出现表达,第15天达到高峰,此后持续表达至牙发育完成的第25天;BSP直到第15天开始表达,持续到第20天后开始减弱．至牙根发育第25天近阴性表达。对3种调节因子的染色积分光密度值的方差分析结果显示：除OPN在第15～25天之间无显著性差异外,其他各因子两两比较差异均具有显著性。结论：牙骨质是由不同序贯发生的多种调节信号顺序启动牙囊细胞分化成牙骨质细胞而形成,DMP1、OPN及BSP在这一过程中先后起着重要的调节作用。     

人牙本质基质蛋白1 cDNA序列的克隆

目的：克隆人牙本质基质蛋白１（ＤＭＰ１）成熟肽编码区基因片段。方法：用异硫氰酸胍一步法从引产胎儿牙乳头组织中抽提总ＲＮＡ,用Ｏｌｉｇｏ（ｄｔ）作引物逆转录合成牙乳头ｃＤＮＡ,然后利用ＰＣＲ方法,从ｃＤＮＡ中扩增出人ＤＭＰ１成熟区的基因片段（约１．８ｋｂｐ）,将所得基因片段插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ质粒载体,转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ后挑选阳性克隆,提取重组质粒ＤＮＡ,通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。结果：酶切图谱和部分序列分析结果与国外文献报道一致。结论：克隆到人ＤＭＰ１成熟肽编码区基因片段。     

牙本质基质蛋白1在组织中的表达及其对牙本质形成调控作用的研究进展

牙本质基质蛋白1(DMPI)是非胶原蛋白中的重要一员,属于SIBLINGs家族,在硬组织形成和发育中具有重要作用.该文就近几年对DMP 1基因、蛋白结构、分布以及在牙本质形成调控方面的研究作一综述.     

牙本质基质蛋白-1与生物矿化

牙本质基质蛋白(DMP)-1是骨、软骨、釉质、牙骨质和牙本质生物矿化所必需的一种酸性非胶原蛋白.蛋白质化学研究显示,DMP-1全基因序列是生物矿化的启动因子,由C末端和N末端组成.体内实验证实DMP-1具有多方面功能,不仅是生物矿化的信号分子,同时也是调节因子,对成骨细胞和成牙本质细胞的成熟至关重要.本文就DMP-1在基因调节、组织细胞中的表达以及成骨、成牙本质中的生物矿化作用作一.     

甲状旁腺激素对人牙乳头细胞牙本质基质蛋白1表达的影响

目的：观察甲状旁腺激素(parathyroid hormone，PTH)对体外培养的人牙乳头细胞(human dental papilla cells，HDPC)牙本质基质蛋白1(dental matrix protein，DMP1)合成分泌的影响。方法：原代方法培养出人牙乳头细胞，用不同浓度的甲状旁腺激素刺激培养的第5代人牙乳头细胞，免疫组化观察结果，并采用图像分析的方法，进行半定量分析。结果：PTH可刺激人牙乳头细胞DMP1的表达，诱导的DMP1主要表达于细胞胞浆内，呈一定的浓度依赖性，0．3μg／mL为刺激最佳浓度。结论：PTH能够刺激人牙乳头细胞产生DMP1，对牙乳头细胞向成牙本质细胞分化有一定促进作用，可能是成牙本质细胞分化的重要介质之一。     

大鼠牙本质基质蛋白1对人牙髓细胞增殖和ALP活性的影响

目的 :探讨大鼠牙本质基质蛋白 1(DMP1)对体外培养的人牙髓细胞增殖和ALP活性的影响。方法 :利用MTT法研究牙髓细胞的细胞增殖情况 ,碱性磷酸酶检测试剂盒检测牙髓细胞内ALP活性。结果 :DMP1在细胞培养 3d和 5d时 ,5 μg/mL组可促进人牙髓细胞增殖 (P <0 .0 5 )。细胞培养 3d时 ,仅5 μg/mL组可促进人牙髓细胞ALP活性 (P <0 .0 5 ) ;培养 5d时 1μg/mL和 5 μg/mL均可促进人牙髓细胞ALP活性 (P <0 .0 5 ) ;培养 7d时促进作用进一步加强 (P <0 .0 5 )。结论 :DMP1在一定浓度下可促进牙髓细胞的增殖 ;DMP1对牙髓细胞ALP活性的促进作用呈浓度依赖性 ,高浓度DMP1可以促进人牙髓细胞ALP活性 ,随着时间的延长 ,促进ALP活性的作用也增强。     

牙本质基质蛋白-1的研究进展

牙本质基质蛋白-1是牙发育过程中一种非常重要的非胶原性基质蛋白,对牙本质的形成和矿化起着重要的作用,但其具体的作用机制有待于进一步的研究.下面就牙本质基质蛋白-1的表达定位、基因结构、生物学功能以及表达调控因素作一综述.     

大鼠牙本质基质蛋白1单克隆抗体的制备、鉴定及其在牙胚发育过程中的表达

目的：制备抗大鼠牙本质基质蛋白1（dentin matrix protein1,DMP1)的单克隆抗体，研究其在牙胚发育过程中的时空表达。方法：以重组的DMP1为抗原，免疫Balb/c小鼠，通过细胞融合，建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系，用免疫组化方法检测DMP1在牙胚发育过程中的表达。结果：获得了2株稳定分泌抗DMP1特异性抗体的杂交瘤细胞，两株单克隆抗体的亚类均为IgG1，与重组的DMP1蛋白和牙齿组织总蛋白均可特异性反应，DMP1在磨牙和切牙分泌性成牙本质细胞胞浆顶端及切牙成釉细胞中有表达，结论：通过杂交瘤技术，获得了2株抗DMP1的单克隆抗体，DMP1在大鼠磨牙发育过程中的分布具有时空特异性，可能促进牙本质矿化诱导前成釉细胞向成釉细胞分化。     

人龋病牙髓中降钙素基因相关肽阳性神经纤维的研究

目的：研究人牙髓降钙素基因相关肽（calicitonin gene-related peptide CGRP）在龋病发展过程中的变化特点，为探讨牙髓局部免疫系统如何参与牙髓的各种病理改变提供理论基础。方法：用免疫组织化学染色法标记牙髓中CGRP并进行定量研究。结果：正常及龋病牙髓中均存在CGRP，牙髓CGRP阳性神经纤维的数量随龋病进展而增多，各组间比较有显著差异。结论：正常牙髓中存在CGRP并与龋坏深度相关。龋坏早期，神经肽对龋源性刺激做出了反应，随着龋坏的发展，局部反应增强，提示CGRP可能参与了牙髓炎症修复过程。     

热休克蛋白70在人正常牙和龋坏牙牙髓中的免疫定位

目的：观察热休克蛋白７０（ｈｅａｔｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ７０ ,ＨＳＰ７０）在人正常和龋坏牙牙髓组织中免疫定位,并通过对比研究,检测ＨＳＰ７０ 的分布变化。方法：选取人正常牙、浅龋牙和深龋牙的组织切片标本进行免疫组织化学染色,并通过计算机图像分析对比３ 种牙髓中ＨＳＰ７０ 量的不同。结果：ＨＳＰ７０ 于３ 组牙髓组织中普遍表达,分布于成牙本质细胞及细胞突、牙髓成纤维细胞、血管内皮细胞及管壁平滑肌细胞中。牙髓神经阴性。深龋组成牙本质细胞或成牙本质细胞样细胞中含量显著增加（ Ｐ＜ ０．０５） 。浅龋组观察到阳性细胞核数目增加。结论：提示ＨＳＰ７０ 维持成牙本质细胞、牙髓细胞功能,参与牙髓组织的自身修复。     

钙结合蛋白Calbindin-D28K在人健康和龋坏牙齿中免疫定位

目的：探讨Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８Ｋ（ＣａＢ）在牙髓损伤修复过程中的作用。方法：用免疫组化ＡＢＣ法观察ＣａＢ在健康和龋坏人恒牙牙髓中的表达,并用图像分析系统进行半定量分析。结果：ＣａＢ在正常和龋病牙髓中成牙本质细胞、前期牙本质、血管内皮细胞及神经纤维中均有表达。在中龋和龋组部分牙髓细胞ＣａＢ弱阳性表达。中龋组成牙本质细胞数目增多,胞浆、胞突及部分胞核强阳性。龋组前期牙本质层变薄,成牙本质细胞空泡     

Partial biochemical characterisation of collagen in carious dentin of human primary teeth

The process of dentin caries is a complex event involving demineralisation and matrix degradation. The objective of this study was to biochemically characterise collagen, the major dentin matrix component, by amino acid and cross-link analyses in two distinct carious dentin regions of human primary teeth. Twenty-seven carious primary teeth were obtained from 3 to 11-year-old patients and three layers of dentin, i.e. outer, inner carious dentin and normal dentin, were identified by a 1% acid red solution and dissected from each tooth. The samples were pulverised, the respective layers obtained from three to five teeth were pooled and six samples per layer were analysed. Aliquots of the dried dentin powder were hydrolysed with 6N HCl at 110 degrees C for 24h and subjected to amino acid analyses. Other aliquots were demineralised, reduced with standardised NaB3H4, hydrolysed and subjected to quantitative collagen cross-link analyses. The results demonstrated that in the outer carious layer the collagen-associated amino acids were significantly lower and the reducible cross-links were markedly diminished when compared to the other two groups. There was no significant difference in these parameters between the inner carious and the normal layers. The data indicate that while the collagen in the outer carious dentin is significantly altered and degraded, the one in the inner carious dentin is relatively unaffected in primary teeth.     

Neuropeptide Y Y1 receptor in human dental pulp cells of noncarious and carious teeth

Aim To determine the distribution of the NPY Y1 receptor in carious and noncarious human dental pulp tissue using immunohistochemistry. A subsidiary aim was to confirm the presence of the NPY Y1 protein product in membrane fractions of dental pulp tissue from carious and noncarious teeth using western blotting. Methodology Twenty two dental pulp samples were collected from carious and noncarious extracted teeth. Ten samples were processed for immunohistochemistry using a specific antibody to the NPY Y1 receptor. Twelve samples were used to obtain membrane extracts which were electrophoresed, blotted onto nitrocellulose and probed with NPY Y1 receptor antibody. Kruskal–Wallis one‐way analysis of variance was employed to test for overall statistical differences between NPY Y1 levels in noncarious, moderately carious and grossly carious teeth. Results Neuropeptide Y Y1 receptor immunoreactivity was detected on the walls of blood vessels in pulp tissue from noncarious teeth. In carious teeth NPY Y1 immunoreactvity was observed on nerve fibres, blood vessels and inflammatory cells. Western blotting indicated the presence and confirmed the variability of NPY Y1 receptor protein expression in solubilised membrane preparations of human dental pulp tissue from carious and noncarious teeth. Conclusions Neuropeptide Y Y1 is expressed in human dental pulp tissue with evidence of increased expression in carious compared with noncarious teeth, suggesting a role for NPY Y1 in modulation of caries induced pulpal inflammation.     

正常年轻恒牙发育过程中牙髓免疫活性细胞的动态研究

目的：研究人完全萌出但尚未发育完成的前磨牙牙髓组织中牙髓树突状细胞(pulpal dendritic cells,PDCs),T、B淋巴细胞,血管内皮细胞的变化特点,以探明年轻恒牙发育过程中牙髓局部免疫防御状态的改变。方法：按根尖孔的闭合状态分为大喇叭组,小喇叭组和闭合组,应用SP免疫组化法分别标记上述细胞,并对前两种细胞进行双标免疫组化染色。结果：（１）大喇叭组ＨＬＡ－ＤＲ^ 细胞数多于小喇叭组及闭合性。（2）3组HLA－DR^ 血管表达率相比较差异无显著性（P＞0．05）;（3）3组CD45RO^T细胞比较差异无显著性（P＞0．05）;（4）双标免疫组化染色显示,HLA－DR^＋PDCs和CD45RO^＋T细胞几乎很少接触。两者的相关性分析结果尚不能认为两者间有直线相关关系。结论：PDCs在人正常发育性牙髓组织中随年龄增加而逐渐减少,其他免疫活性细胞与此进程无明显相关。     

犬年轻恒牙组织再生后牙本质基质蛋白1的表达

目的：观察牙本质基质蛋白1 （DMP-1）在血管再生治疗犬年轻恒牙根尖周炎后的表达.方法：免疫组化方法检测DMP-1在新生成的矿化物、牙本质、牙骨质中的表达;用天狼星红染色法来判断胶原基质的组成和成熟度.结果：①.DMP-1在新生成矿化组织,牙本质,牙骨质中都有不同程度表达.在新生成矿化物组织中的表达强度明显高于牙本质.②.新生成的矿化物形状不规则,成斑片状,颜色为黄色或橙色.结论：DMP-1在根尖新形成的矿化区有高表达,与新生物矿化有关系.     

氟保护漆Duraphat治疗前牙初期龋损的临床效果

目的 探讨氟保护漆Duraphat对前牙初期龋损白垩色斑块的治疗效果。方法 共纳入并分析120例患者146个前牙唇侧白垩斑病损,分为三组：A组（涂氟保护漆Duraphat＋口腔健康教育组,n = 52）,B组（口腔健康教育组,n = 47）和C组（对照组,n = 47）。由同一位已经过培训的医生采用牙周探针对白垩斑的直径及龋活动性进行评估,同时对研究对象的口腔卫生采用改良菌斑指数进行评估。结果 A组在接受2年的涂氟治疗后其白垩斑直径明显缩小,与另外两组差异有统计学意义（X^2=29.1,P 〈 0.001）,初期龋损白垩色斑块活动性龋的比例明显下降（χ^2=42.5,P 〈 0.001）。结论 氟保护漆Duraphat能有效治疗光滑面的初期龋损。     

3种不同方法预防儿童恒牙龋的临床效果评价

目的： 对氟保护漆、氟化泡沫和含氟窝沟封闭剂预防儿童恒牙龋的临床效果进行比较,寻找适合在学校开展的龋病预防适宜技术。方法：应用随机对照试验方法,将来自4个学校、33个班级的1016名 7~8岁儿童随机分为4组。第1组应用氟保护漆,半年应用1次;第2组应用氟化泡沫,半年应用1次;第3组应用含氟窝沟封闭剂,一次性使用;第4组为对照组,仅做口腔卫生宣教。比较2年后4组儿童第一恒磨牙的防龋效果。采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析。结果：2年后, 977名儿童（随访率为96.2%）接受龋病复查。多因素协方差分析结果显示,氟保护漆组和含氟窝沟封闭组与对照组相比,新增龋面均显著减少（P<0.05）。氟化泡沫组与对照组相比,新增龋均和龋面均无显著差异（P>0.05）。结论：氟保护漆（半年使用1次）和含氟窝沟封闭剂对儿童恒牙有良好的防龋效果。