重组人白细胞介素—2的分离纯化

报道了重组人白细胞介素-2(rHuIL-2)高表达菌株的最佳培养和表达条件、表达产物的分离纯化、复性条件对rHuIl-2活力的影响及高纯度rHuIL-2的性质鉴定。利用制备性SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)进行rHuIL-2的纯化,回收率可达80%以上,纯度达95%以上,其比活为1～2×10~6 U/mg,能在体外维持CTLL和CTC细胞的增殖,其分子量、等电点、氨基酸组成、N-末端分析结果与德国Boehringer公司的同类产品基本一致。     

白细胞介素—2与可溶性白细胞介素—2受体

各种免疫活性细胞、抗原递呈细胞、免疫效应细胞之间极其复杂的相互作用,是通过许多免疫活性分子介导的。这些免疫活性分子包括由淋巴细胞产生与分泌的淋巴因子(Lymphokine),单核细胞产生的单核因子(monokine)等等,总称为细胞因子(cytokine)。免疫活性分子是免疫应答的产物,又作为信号调控着免疫应答的发生与发展。其功能有:增殖性、分化性、抑制     

白细胞介素—2与LAK细胞

自从1976年由 Morgan 等发现白细胞介素—2(IL—2)以来,尤其是 Rosenberg等首次报道用过继性免疫疗法治疗25例常规疗法治疗无效的晚期肿瘤患者的临床效果以来,许多研究者投身于此热点领域,而且取得了一定的效果。目前国内基因工程产品重组白细胞介素—2(rIL—2),已进入Ⅱ期临床试验阶段,这将为我国临床     

肺癌患者外周血单个核细胞分泌白细胞介素—2受体的研究

采用ＥＬＩＳＡ法对３３例肺癌和２８例健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）分泌可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）能力的研究显示：肺癌患者ＰＢＭＣ分泌ｓＩＬ－２Ｒ能力明显高于健康人（Ｐ〈０．０１）。但鳞癌、腺癌、小细胞未分化癌之间，ＰＢＭＣ分泌ＳＩＬ－２Ｒ能力无差别，三者分别较显著增高（Ｐ〈０．０１）。在肺癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期之间，ＰＢＭＣ分泌ＳＩＬ－２Ｒ能力亦显显著性差异。     

体外诱生人白细胞介素-2的实验条件

探讨用植物血凝素(PHA)诱导人外周血单核的细胞(PBMC)产生白细胞介素-2(IL-2)的实验条件,并用PHA诱导正常人PBMC产生IL-2及用IL-2依赖细胞株(CTLL-2)增殖试验来滴定IL-2活性单位。结果:(1)PHA-M诱导人PBMO产生IL-2的最适条件:PBMC为1×10~3/ml、PHA-M浓度为0.5～1％、诱生时间为24h、RPMI1640营养液中需加入2～10％灭活的人AB型血清;(2)无论是PHA-M或PHA在较高剂量时(分别≥0.25％和6.25μg/m1)均抑制aTLL-2的生长;(3)用PHA-M诱导19例正常人PBMG产生IL-2,其活性单位为64±65u/mL(±SD,范围4～260)。     

白细胞介素—12和白细胞介素—13在儿童哮喘中作用的研究

目的：研究白细胞介素－12（IL－12），白细胞介素－13（IL－13）在哮喘发病中的作用。方法：用逆转录（RT）－聚合酶链反应（PCR）法半定量分析了哮喘急性发作期及正常对照组儿童外周血单个核细胞（PBMC）中IL－12，IL－13mRNA表达水平的变化，同时对IgE水平进行了检测。结果：哮喘组IL-12mRNA表达减少，IL－13mRNA表达增多，病情越重，IL－12mRNA表达越少，IL－13mRNA表达越多，无论IgE升高与否，与对照组比较，IL－12，IL－13mRNA表达均存在显差异，结论：IL－12，IL－13可能是构成气道慢性炎症的各类因素之一。     

白血病细胞对白细胞介素—2的反应研究

为研究重组人ＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）对白血病治疗的可用性和安全性，用＾３Ｈ胸腺嘧核苷（＾３ＨＴｄＲ）掺入法检测有白介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）基因表达的７个白血病细胞株，６例急林巴细胞白血病（ＡＬＬ）患者和８例生髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者白血病细胞体外对ｒｈＩＬ－２的反应性。结果显示，ＩＬ－２Ｒ基因表达阳性细胞体外对ｒｈＩＬ－２的反应呈不均一性。ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲｍＲＮＡ均为阳性的Ｎｕ     

感音神经性耳聋与白细胞介素—2、可溶性白细胞介素—2受体和白细胞介素—6关系的研究

白介素 - 2、可溶性白细胞介素 - 2受体和白细胞介素 - 6 ,主要是Ｔ淋巴细胞及其活化或单核类细胞及非淋巴细胞产生的多功能细胞因子 ,参与体液免疫和细胞免疫 ,有广泛的生物学功能。我们采用放射免疫法 (ＲＩＡ)和双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(ＥＬＩＳＡ) ,对 34例感音神经性耳聋患者及 12例健康人血清中白细胞介素 - 2、可溶性白细胞介素 - 2受体和白细胞介素 - 6进行测定 ,结果表明其在感音神经性耳聋的发病中起重要作用 ,相关报告如下。1　材料与方法1 1　对象　实验组 :1997年 11月～ 1998年 6月感音神经性耳聋患者 34例 ,男性 2 6例…     

人白细胞介素2单克隆抗体的制备

作者采用自行制备ＩＬ－２纯品及免疫ＢＡＬＢ／Ｌ小鼠，将脾细胞与ＮＳ－１细胞融合，获得具有分泌稳定性抗体的高效价杂交瘤细胞株，细胞连续舆传４２代仍稳定分泌单克隆抗体，该抗体与ＩＬ－２有特殊吸附，杂交瘤核型呈双亲染色体特点。连续传代未见变异。     

胰岛素对人外周血内皮祖细胞凋亡的影响

目的:研究不同浓度的胰岛素对体外培养条件下的健康人外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)凋亡的影响。方法:经密度梯度离心法分离出健康成年人外周血中的单个核细胞(mononuclear cells,MNCs),在体外诱导分化后,用Dil-acLDL和FITC-UEA-1双染色鉴定为内皮祖细胞。观察不同浓度的胰岛素对将所获取的内皮祖细胞凋亡的影响。结果:20mU/L胰岛素干预组较对照组的的凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);200mU/L及2000mU/L胰岛素干预组较对照组的凋亡率差异有统计学意义(P<0.05),且2000mU/L胰岛素干预组的凋亡率随着干预时间的延长而增加(P<0.01)。结论:高浓度胰岛素可增加体外培养的人外周血内皮祖细胞的凋亡,并且这种影响呈时间依赖性。     

老化对人体白细胞功能的影响

本文比较了不同年龄不同性别的人体外周血白细胞在PHA诱导下DNA和蛋白质合成的能力及IL-2的产生水平。结果表明,在30岁至65岁年龄组之间,上述三项指标均平行下降,DNA合成下降50%,蛋白质合成下降43%,IL-2水平下降47%;同时发现该三项指标在两性间似无明显差异。说明在人体衰老过程中人外周血白细胞的IL-2产生明显下降,这可能与老龄人群免疫功能系统功能降低有关。     

Her2/neu蛋白基因重组腺相关病毒转染树突状细胞的初步探讨

目的 用Her2／neu蛋白基因重组腺相关病毒(rAAV-Her-2／neu)转染人外周血中树突状细胞(dendritic cell,DC),并鉴定其表面分子的表达,及同种混合淋巴细胞反应。方法 采用Fieol分离人外周血中的单个核细胞,在6孔板上培养。细胞分2组,分别加入病毒液和293细胞冻溶液。流式细胞仪检测DC表面标志。应用MTT法检测同种混合淋巴细胞反应。结果 两组细胞均高表达CD80,CD83,CD86,HLA-DR,较低表达CDla,CD40,两组无明显差异(P＞0．05)。结论 rAAV-Her-2／neu转染DC刺激T细胞增殖能力明显高于非转染组DC(P＞0．05)。     

阳离子脂质体介导的Ａ20基因转染人外周血单核细胞的可行性

目的探讨阳离子脂质体介导的A20基因转染人外周血单核细胞的可行性及最佳转染条件。方法采用脂质体LipofectamineTM2000包裹pCAGGS-GFP／A20质粒转染人外周血单核细胞,通过荧光显微镜检测GFP报告基因,RT-PCR检测A20基因表达。结果应用LipofectamineTM2000介导的A20基因转染人外周血单核细胞,在2×10 6／L细胞接种浓度,脂质体与质粒的量之比为4μl：3μg时,转染效果最佳,RT-PCR证实成功获得A20目的基因的表达。结论脂质体转染法可介导A20基因在人外周血单核细胞获得表达,该研究为A20基因转染的相关实验研究提供参考依据。     

甲醛对人外周血淋巴细胞遗传毒性的研究

目的:研究甲醛对人外周血淋巴细胞染色体的影响。方法:用不同浓度(5、25、125、500μmol/L)的甲醛溶液处理培养中的人外周血淋巴细胞,观察其微核率及SCE频率的变化。结果:低浓度(5、25μmol/L)甲醛处理后,人外周血淋巴细胞微核率和SCE频率与阴性对照组相比,无明显增加(P>0.05);而甲醛浓度(125、500μmol/L)较高时,细胞微核率和SCE频率均显著高于阴性对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:较高浓度甲醛对人外周血淋巴细胞染色体有不同程度的损伤作用。     

脐血淋巴细胞的分型研究

本实验采用双色直接免疫荧光染色流式细胞分析技术检测30例脐血淋巴细胞。结果表明：脐血CD3＋细胞占其淋巴细胞总数的46．50±12．30％；CD19＋细胞占9．85±3．79％；CD16＋／56＋的百分率为20．74±5．23％。脐血T淋巴细胞中辅助性T细胞与抑制性T细胞之比约为7：3。本文显示脐血淋巴细胞亚群的分布与外周血不同。实验还发现脐血中存在一种CD3－／8＋的自然杀伤细胞。     

外周血单个核细胞产生IL-8影响因素的探讨

目的：观察Ｃ５ａ、ＰＭＡ、Ａ２３１８７、ＬＰＳ对ＰＢＭＣＩＬ－８产生的影响，为研究减轻Ｃ５ａ致病作用的途径创造条仵。方法：用ｒｈＣ５ａ、ＰＭＡ、Ａ２３１８７、ＬＰＳ诱导ＰＢＭＣ，以ＥＬＩＳＡ法测定细胞培养上清中ＩＬ－８。结果：ＰＢＭＣ经ｒｈＣ５ａ、ＰＭＡ、Ａ２３１８７和ＬＰＳ诱导后ＩＬ－８分泌水平较对照组增高。结论：激活ＰＫＣ、提高细胞内钙离子浓度可使ＩＬ－８分泌增加，提示用ＰＫＣ抑制剂、钙通道拮抗剂有可能使Ｃ５ａ介导的ＰＢＭＣＩＬ－８分泌水平降低。     

云芝糖肽对人外周血淋巴细胞增殖和T细胞亚群变化的调节作用

用流式细胞仪技术和ＭＴＴ法观察了云芝糖肽对由植物血凝素诱导的人外周血淋巴细胞增殖和Ｔ细胞亚群变化的调节作用。结果表明,５０－１００μｇ／ｍＬＰＳＰ对经ＰＨＡ诱导的人ＰＢＬ增殖有显著的促进作用,该浓度的ＰＳＰ也能促进细胞从Ｇ１期进入Ｓ期,并可使ＣＯ＾４＋细胞明显升高,使ＣＤ＾＋４／ＣＤ＾＋细胞比例增加,提示ＰＳＰ具有免疫促进作用。     

胰岛素对体外单个核细胞产生IL_2、IL_6的影响

本实验研究了不同浓度胰岛素对体外单个核细胞ＩＬ_２、ＩＬ_６诱生的影响。实验提示：胰岛素浓度为０．０２μｕ／ｍｌ、２０μｕ／ｍｌ时不影响单个核细胞ＩＬ_２，ＩＬ６_的产生。胰岛素浓度为２０００μｕ／ｍｌ时能显著增加单个核细胞ＩＬ_２、ＩＬ_６的产生。结果表明：高浓度胰岛素才能增加外周血单个核细胞产生ＩＬ_２、ＩＬ_６的能力。     

人外周血中树突状细胞的诱导、培养及其表面标记的初步研究

目的：在人外周血中有效地诱导，培养树突状细胞（dendritic cells,DC)并鉴定其表面分子的表达，方法：采用密度梯度离心的方法分离人外周血中的单个核细胞，在6孔板上贴壁2h，然后吸去悬浮细胞，用粒细胞－巨噬细胞集落群体刺激因子（GM－CSF）、白细胞介素－4（IL－4）、肿瘤坏死因子－α（TNF-α）细胞因子组合，刺激树突状细胞（DC）增殖，分化。用标有荧光素的单抗标记培养细胞，在激光共聚共焦显微镜下拍摄标记有荧光素的细胞，在流式细胞仪上分析所培养的细胞。结果：该细胞直径在10－20μm，培养14天后，CD1a^ 48%,CD83^ 97%,CD40^ 33%，人体主要组织相容性复合物（MHC）Ⅱ^ 95%,CD80^ 98%,CD86^ 93%,CD83是DC的成熟标记。结论：该方法是一种可靠的诱导和培养DC的方法，对于乳腺癌患者还可通过动员等措施进一步提高DC的分离率。