去卵巢雌性大鼠颏舌肌雌激素受体表达的研究

目的:检测分析去卵巢雌性大鼠颏舌肌内雌激素受体的表达及其因雌激素水平而变化的规律。方法:30只雌性SD大鼠随机分成3组:正常组、假手术组、去卵巢组。采用SP法检测各组大鼠颏舌肌细胞内雌激素受体ERα、ERβ的表达,并分析比较各组间差异。结果:正常雌性大鼠的颏舌肌细胞存在ERα和ERβ的阳性表达,ERβ的表达明显较ERα弱(P<0.05);去卵巢组大鼠颏舌肌细胞ERα的表达较正常组显著降低(P<0.001),但ERβ的表达无显著变化(P>0.05)。结论:雌性大鼠颏舌肌细胞内存在雌激素受体的表达,其中ERα的表达明显受雌激素水平的影响。     

去卵巢雌性大鼠颏舌肌肌功能特征的研究

目的 检测雌性大鼠去卵巢后颏舌肌肌功能的变化，探索雌激素影响上气道稳定性的机制。方法 30只雌性SD大鼠随机分成三组：正常组、假手术组、去卵巢组。手术6周后，麻醉动物，切断双侧迷走神经，采用插入式双极针电极引导大鼠颏舌肌肌电；电脉冲刺激舌下神经中央支诱发颏舌肌收缩。原始信号经SMUP-PC型生物信号处理系统输入计算机，使用MF lab功能学实验软件包Version3．00分析，检测各实验动物颏舌肌的肌电强度、最大等长收缩力和70％强直收缩力的时程。结果假手术组颏舌肌的肌电强度、最大收缩力、70％强直收缩时程与正常组相比无显著性差异（P〉0．05），去卵巢组颏舌肌的肌电强度、最大收缩力、70％强直收缩时程较正常组明显降低（P〈0．05）。结论 雌性大鼠去卵巢后颏舌肌肌功能降低，雌激素可能通过增强颏舌肌肌功能的途径对上气道稳定性发挥保护作用。     

去卵巢对大鼠颏舌肌肌电及其肌纤维型的影响

目的检测雌性大鼠去卵巢后颏舌肌肌电及肌纤维组织化学特征变化,探索雌激素影响上气道稳定性的机制。方法30只雌性SD大鼠随机分成3组：正常组、假手术组、去卵巢组。手术6周后,采用插入式双极针电极引导大鼠颏舌肌肌电,检测各实验动物颏舌肌的肌电强度;采用颏舌肌肌球蛋白ATP酶组织化学染色法,检测各组大鼠颏舌肌肌纤维的分类及其面积,并分析比较各组间差异。结果假手术组颏舌肌的肌电强度与正常组相比无显著性差异（P>0.05）,去卵巢组颏舌肌的肌电强度较正常组明显降低（P<0.05）。正常雌性大鼠颏舌肌由Ⅱ型肌纤维构成,其中ⅡA为（40.27±1.01）%,ⅡB/ⅡX为（59.73±1.01）%;假手术组和正常组大鼠颏舌肌肌纤维构成和面积无显著性差异;去卵巢组颏舌肌肌纤维构成比例与正常组相比较无显著性变化（P>0.05）,但ⅡA型肌纤维面积较正常组有明显减小（P<0.05）。结论去卵巢后大鼠颏舌肌肌电减弱可能与其ⅡA型肌纤维减小有关,雌激素可能通过影响颏舌肌肌功能对上气道稳定性发挥保护作用。     

ERα在雌激素调控颏舌肌功能中的作用研究

目的:探索ERα在雌激素调控SD大鼠颏舌肌功能中的作用。方法:将30只8周龄雌性SD大鼠(250±25) g,随机分为假手术组(SHAM组),去卵巢+雌二醇组(OVX+E₂组),去卵巢+雌二醇+ERα拮抗剂MPP组(OVX+E₂+MPP组)(n=10)。通过卵巢切除与雌激素回补,在外周血建立稳定的雌激素水平大鼠模型;使用玻璃微电极检测SD大鼠舌下神经核团放电频率,BL-420E+生物机能实验系统检测颏舌肌肌电频率及幅值。结果:(1)舌下神经核放电频率：OVX+E₂+MPP组明显弱于OVX+E₂组(P<0.05)。(2)颏舌肌电频率及幅值：OVX+E₂+MPP组明显弱于OVX+E₂组(P<0.05)。结论：雌激素可能通过与ERα受体结合,影响舌下神经核放电,进而改变颏舌肌肌电功能。     

外源性雌激素局部应用对去势雌性大鼠颏舌肌肌球蛋白重链基因表达的影响

目的:检测外源性雌激素局部应用对去卵巢大鼠颏舌肌肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)基因表达的影响,探讨雌激素水平与颏舌肌肌功能的相关性。方法:将30只7周龄健康雌性体质量210g左右的SD大鼠随机分为3组,每组10只。①去卵巢对照组(ovariectomized group,OVX组);②雌激素给药组(E2组);③假手术组(sham-operated group,SO组)。给药30d后取颏舌肌肌肉组织用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测肌肉组织MHCⅡa、MHCⅡx、MHCⅡb、β-actin(内参照)基因表达。结果:去卵巢对照组颏舌肌MHCⅡb的表达明显高于假手术组(P<0.05),MHCⅡa、MHCⅡx的表达明显低于假手术组(P<0.05)。雌激素给药组颏舌肌MHCⅡb的表达明显低于去卵巢对照组(P<0.01),MHCⅡa、MHCⅡx的表达明显高于去卵巢对照组(P<0.05)。结论:雌激素水平变化能导致颏舌肌肌纤维类型的转化,从而改变肌肉功能。     

雌激素对雌性大鼠颏舌肌肌质网Ca^2＋-ATPase活性及其基因表达的影响

目的:观察雌激素对雌性大鼠颏舌肌细胞肌质网(sarcoplasmic reticulum, SR )Ca2 -ATPase活性及其基因表达的影响,探索其影响颏舌肌功能的分子生物学机制.方法:将30 只成年雌性SD大鼠随机分为对照组(control)、去卵巢组(ovariectomy,OVX)、去卵巢回补激素组(ovariectomy with 17β-estradiol, OVX E2).术后6 周,处死动物,提取颏舌肌SR.采用定磷法检测颏舌肌SR Ca2 -ATPase活性,荧光定量RT-PCR测定SR Ca2 -ATP酶 mRNA表达的变化.结果:OVX组血清雌激素水平及子宫湿重较对照组明显降低(雌二醇P<0.01;子宫湿重P<0.01),而OVX E2组与对照组相比差别无统计学意义(P>0.05).OVX组颏舌肌SR Ca2 -ATP 酶活性较对照组明显降低(P<0.01);OVX E2组较OVX组有明显提高(P<0.01)、与对照组相比差别无统计学意义(P>0.05).OVX组颏舌肌 SR Ca2 -ATPase mRNA表达较对照组明显降低(P<0.01);OVX E2组较OVX组有明显提高(P<0.01)、与正常组相比差别无统计学意义(P>0.05).结论:成年雌性大鼠雌激素水平的变化可引起颏舌肌SR Ca2 -ATP 酶活性及其mRNA表达的变化,雌激素可能通过该途径改变颏舌肌功能.     

不同雌激素对慢性间歇性低氧去卵巢大鼠颏舌肌功能的影响比较

目的:探讨不同雌激素对慢性间歇性低氧(CIH)去卵巢大鼠颏舌肌功能的影响。方法:将40只8周龄健康雌性SD大鼠去卵巢后随机分为5组:正常氧组(NC)、慢性间歇性低氧组(CIH)、CIH雌二醇干预组(E2)、CIH金雀异黄素干预组(GEN)、CIH白藜芦醇干预组(RES)。后4组建立CIH大鼠模型,建模最后4 d,E2组、GEN组、RES组分别给予雌二醇、金雀异黄素、白藜芦醇2.5 mg/kg/d腹腔注射,NC组、CIH组给予相应剂量DMSO腹腔注射。建模后麻醉大鼠,分离颏舌肌,电脉冲刺激舌下神经中央支诱发颏舌肌收缩,检测颏舌肌收缩功能。结果:①各组大鼠颏舌肌单刺激收缩最大张力(Pt)与强直收缩最大张力(Po)无明显差异(P>0.05);②各组大鼠抗疲劳性比较,E2组、GEN组、RES组高于CIH组(P<0.01),E2组稍低于NC组,但无统计学差异(P>0.05),GEN组、RES组低于NC组、E2组(P<0.01),RES组高于GEN组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:植物雌激素能一定程度恢复慢性间歇性低氧造成的去卵巢大鼠颏舌肌肌功能下降,但效果不如雌二醇,其作用机制有待进一步探讨。     

一氧化氮对舌下神经核兴奋作用的影响

目的观察一氧化氮（NO）及其清除剂对舌下神经运动核（HMN）活动的影响并初步探讨其机制。方法麻醉雄性成年Wistar大鼠,微透析探针先透析人工脑脊液（ACSF）到HMN作为对照,然后再分别持续给予二乙胺一氧化氮水合钠盐（DEA,NO供体）和2-（4-羧基苯基）-4,4,5,5,-四甲基-1,3-二氧咪唑啉钾盐（carboxy-PTIO,NO清除剂）到HMN,观测大鼠颏舌肌（GG）、膈肌电活动及血压和呼吸频率的变化。结果给予DEA后,大鼠的呼吸相关GG活动明
显增加,而给予carboxy-PTIO后则明显降低,与ACSF时的值相比差异均有统计学意义（P<0.05）。不管是给予DEA还是carboxy-PTIO,在30~120 min时大鼠的紧张性GG活动、膈肌活动、血压及呼吸频率与ACSF时的值相比均无统计学差异（P>0.05）。结论NO作为一种神经递质对HMN产生兴奋,从而对维持生理状态下上气道的开放起重要作用。     

雌激素对慢性间歇性低氧大鼠颏舌肌收缩功能及超微结构的影响

目的:探讨雌激素对慢性间歇性低氧大鼠颏舌肌等长收缩功能及肌细胞超微结构的影响. 方法:健康雄性SD大鼠40 只,随机分为正常对照组(NC)、慢性间歇性低氧组(CIH)、低、中、高剂量雌激素干预组(LE、ME、HE).后4 组建立CIH大鼠模型(8 h/d,5 周),同时LE、ME、HE组分别予苯甲酸雌二醇0.1、0.2、0.3 mg/kg(2 次/周)肌肉注射,NC、CIH组予无菌橄榄油 0.2 ml/次肌肉注射.第5 周末电刺激法测定各组大鼠颏舌肌等长收缩功能的变化,透射电镜观察肌细胞超微结构的改变.结果:各组大鼠颏舌肌单刺激收缩、强直收缩最大张力无明显变化;诱导疲劳试验中各时间点颏舌肌抗疲劳性:CIH组显著低于NC组(P＜0.01),ME、HE组明显高于CIH组(P＜0.05,P＜0.01);颏舌肌细胞超微结构:CIH组肌原纤维结构紊乱,部分肌丝溶解、消失,线粒体水肿,嵴断裂,空泡变;ME、HE组肌原纤维病变减轻,部分线粒体水肿,嵴减少.结论:慢性间歇性低氧可破坏大鼠颏舌肌细胞超微结构,降低抗疲劳能力;中、高剂量雌激素可不同程度逆转低氧对肌细胞超微结构及抗疲劳能力的损伤,保护低氧大鼠颏舌肌的抗疲劳能力.     

阻鼾器治疗OSAS疗效与颏舌肌肌电活性变化的相关性

目的 :本研究旨在探讨GG与阻鼾器治疗OSAS疗效的关系。方法 :通过 15名OSAS患者PSG和同步GG肌电图检查 ,对阻鼾器的疗效与治疗前后GG肌电活性的变化进行相关分析。结果 :OSAS患者治疗前后无论是清醒期还是睡眠期 ,其GG肌电活性的变化均与治疗效果不相关 (P >0 .0 5 )。结论 :进一步验证阻鼾器治疗OSAS的机制并非是GG肌电活性的改变     

Effects of artificial rearing on contractile properties of genioglossus muscle in Sprague-Dawley rat

Mammals suckle from a nipple during the early neonatal period to obtain nourishment. The genioglossus muscle helps position and move the tongue for efficient suckling. The purpose of this study was to examine the contractile properties and myosin heavy chain (MHC) phenotype of the genioglossus following an early period of artificial rearing, which reduced nutritive suckling. Beginning at 3 days of age, rats were fed via gastric cannula until postnatal day 14 (P14). At P14, artificially reared rat pups were either allowed to grow to postnatal day 42 (P42) or anaesthetised and prepared for experimentation. Comparisons were made between artificially reared and dam reared groups at P14 and P42. At P14 maximum tetanic tension and fatigue index were lower in the artificially reared group than the dam reared group. By P42, artificially reared rats had a higher fatigue index and lower percentage of MHCIIa than dam reared rats. The artificial rearing technique employed in this study was adequate to produce chronic changes in fatigue resistance and MHC distribution in genioglossus muscle of rat; the changes observed here may be similar to changes that occur in premature human infants requiring early artificial feedings.     

The expression of estrogen receptors in rat genioglossus muscle-derived satellite cells and its relationship to intracellular Ca mobilization

Genioglossus (GG) is the most important pharyngeal dilator muscle in maintaining upper airway (UA) patency in human; therefore, its dysfunction plays an important role in pathogenesis of sleep-related breathing disorder. Recently, the expression of estrogen receptors (ERs) on mRNA and protein level has been evidenced in GG muscle; however, the cellular localization of two subtypes of ER in GG myoblasts remains unclear. The present study was designed to clarify the expression and cellular distribution of ERs in rat GG muscle-derived satellite cells (MDSCs) and further probe the effect of ERs expression on regulation of intracellular Ca²⁺. The immunocytochemistry revealed positive staining for both ERα and ERβ in nuclei and cytoplasm of GG MDSCs. Noticeably, positive signals for ERα and ERβ were comparable in cytoplasm, whereas the positive staining of ERα in nuclear was obviously strong than that of ERβ. More intriguingly, by using Fluo 4-AM as a fluorescent Ca²⁺ indicator and 17β-estradiol (E2) as a stimulant, we observed that the level of intracellular Ca²⁺ was not affected by E2 application, which implied that Ca²⁺ signaling may not be involved in ER-mediated estrogenic effects on GG MDSCs. Taken together, the present study clearly indicates the differential cellular localization of ERs in rat GG MDSCs; moreover, ER-mediated estrogenic effect in rat GG MDSCs bears no relationship to intracellular Ca²⁺ mobilization. In addition, the GG MDSCs express both ERα and ERβ and therefore, provide a suitable and convenient in vitro cell model for investigating the molecular mechanisms of estrogenic effects on rat GG muscle.     

雌激素对慢性间歇性低氧大鼠颏舌肌线粒体细胞色素C氧化酶活性及其亚基表达的影响

目的 通过研究雌激素对慢性间歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)大鼠颏舌肌线粒体细胞色素C氧化酶(cytochreme C oxidase,COX)活性及其亚基(COX Ⅰ、COXⅣ)表达的影响,探讨阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)发病中雌激素所起的作用.方法 3个月龄健康雄性SD大鼠48只,分为正常对照组(NC组)、慢性间歇性低氧组(CIH组)及慢性间歇性低氧+雌激素干预组(E+CIH组).后两组建立CIH模型,同时E+CIH组给予苯甲酸雌二醇0.2 mg/kg,NC组、CIH组给予无菌橄榄油0.2 ml/次,2次/周,肌肉注射.密度梯度离心法分离大鼠颏舌肌线粒体,极谱法测量COX活性;Western blotting分析COX Ⅰ和COXⅣ蛋白表达;实时聚合酶链反应(real-time polymerase chain action)法检测COX Ⅰ和COXⅣ的基因表达.结果 CIH组大鼠颏舌肌线粒体COX活性为(0.143±0.029)μkat/mg,与NC组[(0.273±0.058)μkat/mg]相比显著降低(P＜0.01),E+CIH组COX活性[(0.203±0.073)μkat/mg]较CIH组有所回升(P＜0.05),但仍显著低于NC组(P＜0.05).CIH组与E+CIH组COX Ⅰ蛋白表达分别为(10.789±8.144)和(25.593±11.108),与NC组(47.325±7.502)相比均显著降低(P＜0.01),且E+CIH组COX Ⅰ蛋白表达显著高于CIH组(P＜0.05).3组COXⅣ蛋白表达的差异无统计学意义(P＞0.05);3组COX Ⅰ、COXⅣmRNA表达量的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CIH可抑制大鼠颏舌肌线粒体COX蛋白表达及活性,而雌激素干预可部分恢复COX蛋白表达及活性.     

猕猴舌下神经显微解剖的图像处理与测量分析

目的：揭示猕猴舌下与舌神经间的关系,为临床开展新的术式提供依据。方法：采用显微解剖研究,结合计算机图象处理和测量分析,测量猕猴舌下,舌神经的解剖参数。结果：（１）舌下神经与舌神经之间有二个恒定的联系部位,即舌下神经分支进入舌肌后最初５～１０ｍｍ处和２６～３０ｍｍ处;（２）舌下神经与舌神经最佳吻接部位,我们认为应在舌下神经主干分叉后１０ｍｍ左右;神经直径测量也发现神经直径与舌神经主干和分支直径较为匹配,且此区有利解剖,便于神经吻合;（３）舌下神经分叉之前,在神经干上方距分叉约６～１０ｍｍ处有一较固定分支,参与分布舌肌并与舌神经呈丛状结构。结论：实验结果为舌根切除时将支配舌内肌这一分支与舌经吻合,从而不破坏舌外肌的神经支配这一新术式提供解剖依据。     

Effects of phytoestrogen genistein on genioglossus function and oestrogen receptors expression in ovariectomized rats

Objective

This study was designed to investigate the effects of genistein on genioglossal muscle function and the expression of oestrogen receptors (ERs) in the ovariectomized rats.

Design

Fifty female Sprague-Dawley rats were randomly divided into 5 groups: the control group (SHAM), the ovariectomized group (OVX), the ovariectomized rats receiving low genistein dosage (OVX+L), the moderate genistein dosage group (OVX+M) and the high genistein dosage group (OVX+H). Oestradiol level was detected by radioimmunity. The isometric twitch tension (P_t) and tetanic tension (P₀) of the GG muscle were measured in response to electrical field stimulation. The expression of ERs on the mRNA and protein levels was measured by real-time PCR and western blot respectively.

Results

Ovariectomy decreased muscle fatigue resistance and the expression of different ERs significantly. Genistein treatment resulted in a dose-dependent protective effect on muscle fatigability and a parallel dose-responsive increase in the expression of oestrogen receptors mRNA and protein levels in genioglossus, with larger effects on oestrogen receptor beta vs. alpha. In contrast to the improvements in fatigability, there was no treatment effect on isometric twitch or tetanic tensions.

Conclusion

The results indicated that genistein increased muscle fatigue resistance in addition to effects on receptors, and the up-regulation of receptors expression may be a possible mechanism by which genistein improved fatigue.     

雌二醇和白藜芦醇二聚体对颏舌肌成肌细胞HIF-1α的作用及机制

目的: 研究雌二醇（17β-estrodial,E2）和白藜芦醇二聚体（resveratrol dimer,RD）对低氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α）的作用及其分子生物学机制。方法: 提取小鼠颏舌肌成肌细胞,构建ERα敲降的成肌细胞（KD组）低氧模型,将成肌细胞（NS组）和KD组细胞分别低氧、低氧+E2、低氧+RD或低氧++E2+LY294002处理24 h, 利用Western免疫印迹方法检测信号分子T-Akt和P-Akt的表达,qRT-PCR和 Western免疫印迹检测HIF-lα的表达水平。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 低氧环境下成肌细胞HIF-1α的表达显著高于常氧（P<0.05）,E2或RD处理后,HIF-1α的表达水平显著低于低氧组（P<0.05）;ERα敲降后,低氧也促进HIF-1α的表达（P<0.05）,但是E2或RD+低氧处理组成肌细胞HIF-1α的表达与低氧相比无显著差异（P>0.05）,Western免疫印迹结果与RT-PCR结果趋势一致。PI3K/Akt通路抑制剂与E2共培养则促进HIF-1α的表达（P<0.05）。结论: ERα在E2或RD对小鼠颏舌肌成肌细胞HIF-1α的抑制中起主导作用,其下游PI3K/Akt信号通路在该抑制效应中也发挥重要作用。     

雌激素治疗骨质疏松大鼠正畸牙移动的实验

目的 探讨雌激素对骨质疏松患者正畸牙齿移动的影响及其对牙槽骨的作用。方法 选用３０只雌性ＳＤ大鼠随机分为３组,健康对照组、骨质疏松组、骨质疏松雌激素治疗组。测量３组不同时期牙齿移动的距离、破骨细胞计工进行组织学观察。结果 治疗１个月后,骨质疏松组较健康对照组正畸牙牙移动增加４３．３％,雌激素治疗组增加３０．７％;破骨细胞计数骨质疏松组较健康对照组增加６４．４％,雌激素治疗组增加３２．９％。治疗２个     

牙齿移动对大鼠动情周期和雌激素水平的影响

目的探讨正畸施力时间对雌性大鼠动情周期的影响。方法200只雌性大鼠均分为对照组、加力1次组、加力4次组、假处理1次组和假处理4次组。各组均分为4个亚组，在动情周期不同时段进行相应处理。测定雌激素含量，记录动情周期变化。结果在同一动情周期时段加力的各亚组之间，雌激素测量值的差异有统计学意义（P〈0．01）；在同一处理方式下各亚组之间，雌激素测量值的差异也有统计学意义（P〈0．05）。结论加力对动情后期和间期加力组大鼠的动情周期有影响。选择在动情期戴入矫治装置及加力，可减少加力对雌性大鼠的不利影响。