PMA对U937细胞CD18mRNA表达的诱导作用及其机制

目的:研究PMA对CD18mRNA表达的促进作用及机制。方法:选用PMA刺激下的U937细胞为实验模型,运用定量RT-PCR方法检测U937细胞CD18mRNA的表达水平。结果:PMA具有浓度和时间依赖性地诱导U937细胞CD18mRNA表达的作用,这种作用能分别被PKC、NF-κB抑制剂所抑制,但不能被转录因子AP-1抑制剂所抑制。结论:PMA能激活细胞的PKC,进而通过其后的信号转导通路促进CD18mRNA的表达,转录因子NF-κB为PMA刺激下的U937细胞CD18基因转录所必需,而AP-1则相反。     

糖皮质激素对PMA诱导的CD18表达的抑制作用及机制

国内外大量研究表明糖皮质激素 (ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ,ＧＣ)能明显抑制包括由于ＣＤ1 8在内的多种粘附分子的表达。以往研究多限于ＣＤ1 8蛋白质水平 ,无法阐明ＧＣ -ＧＲ使细胞表面ＣＤ1 8数量减少 ,是由于合成减少 ,分解增多 ,还是细胞内转位过程受到抑制 (ＣＤ1 8从胞内储存池脱落并转位至质膜有关 )。对ＧＣ在ＣＤ1 8基因转录水平上的抑制作用极其机制目前研究得很少。目的 :探讨ＧＣ抑制ＣＤ1 8ｍＲＮＡ表达的作用及机制。方法 :本研究以细胞激活剂ＰＭＡ诱导下的人组织淋巴瘤细胞系Ｕ937细胞和人早幼粒白血病细胞系ＨＬ - 6…     

地塞米松对视网膜色素上皮细胞IL—6表达的抑制作用

目的观察视网膜色素上皮(RPE)细胞中,IL-6的表达及地塞米松对IL-6表达的抑制作用.方法培养的人RPE经IL-1β(10μg/L)刺激及地塞米松作用后,采用ELASA、免疫组化和原位杂交等方法,检测培养的人RPEIL-6mRNA及其蛋白的表达.结果用IL-1β刺激后8h,RPE细胞表达的IL-6约为2000ng/L@106细胞;地塞米松可明显抑制IL-6蛋白的产生(200ng/L@106细胞),与对照组相比较差异显著(P＜0.01).免疫组化染色显示,表达的IL-6在RPE细胞胞浆中呈浓淡不一的棕黄色,地塞米松作用组染色较浅.原位杂交表明,IL-6mRNA在RPE细胞胞浆中的表达呈浓淡不一的紫蓝色,地塞米松作用组染色与对照组相同.图像分析显示,二者的吸光度(A)值无明显差别(P＞0.05).结论在IL-1β刺激下,人RPE细胞可表达IL-6的mRNA及其蛋白,地塞米松能有效地抑制RPE细胞中IL-6蛋白的表达.     

阻断糖皮质激素受体的雏鸡抵抗地塞米松诱导的免疫抑制作用

给予雏鸡地塞米松（Dex）10mg～75mg／kg后24h，诱导脾淋巴细胞产生IL－2和IFN诱生的活性，T、B细胞对Con-A的反应性，以及免疫器官（脾脏、胸腺及法氏囊）重量与体重比值均降低（p＜0．01）。用50mg／kg的RU486阻断GR后，对Dex诱导的免疫抑制无明显地逆转作用，表现为阻断GR后，给予（10～75）mg／kg的Dex24h，上述免疫参数仍明显低于正常雏鸡（P＜0．01），与只给予Dex的雏鸡相比较，无明显差异（P＞0．05）。用25mg／kg的RU486阻断GR，对Dex诱导的免疫抑制作用具有明显地逆转作用，阻断GR后再给予（10～75）mg／kg的Dex后24h，上述免疫参数明显高于只给予Dex的雏鸡（P＜0．01）。若给予10mg／kg或25mg／kg的Dex时，上述免疫参数接近正常水平，表明Dex对雏鸡的免疫抑制作用主要由GR所介导，给予适当量的RU486阻断GR的功能，有利于雏鸡抵抗糖皮质激素诱导的免疫抑制作用。     

PMA诱导的THP-1细胞分化过程中MMP-9及MMP-2的表达与细胞侵蚀性的关系

目的：应用单核细胞THP-1株建立单核细胞向巨噬细胞分化的体外模型，并探讨THP-1细胞分化过程中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达与细胞侵蚀性的关系以及巨噬细胞住类风湿关节炎(RA)发病机制中的作用。方法：用乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞向成熟的单核-巨噬细胞分化后，采用倒置显微镜观察分化细胞的形态学变化。用流式细胞术测定细胞表面特异性抗原CD14的表达。采用明胶酶谱(gelatin—zymogram)分析法测定分化前后THP-1细胞中MMP-9和MMP-2的表达。采用侵蚀性小室(Boyden Chamber-Matrigel人工重组基底膜)法，观察分化前后的THP-1细胞侵蚀性的变化。结果：THP-1细胞向单核-巨噬细胞分化过程中，细胞由分散、悬浮转变为黏附、贴壁，且出现CD14的高表达分化后的THP-1细胞中MMP-9和MMP-2的表达明显增多，侵蚀性明显增强结论：建立了THP-1单核细胞的体外分化模型。该细胞在分化过程中，MMP-9和MMP-2的表达增多、侵蚀性增强，为巨噬细胞在RA发病机制的作用提供了一定的实验依据。     

PMA促进CD18表达的信号转导通路及机制

细胞激活剂肉豆蔻酰佛波醇乙酯 (ＰＭＡ)是蛋白激酶Ｃ(ＰＫＣ)的特异性激动剂 ,ＰＭＡ具有促进Ｕ937细胞和ＨＬ - 60细胞分化的作用 ,能使Ｕ937细胞和ＨＬ - 60细胞膜上的整合素 β2 亚族ＣＤ1 8蛋白增多。但ＰＭＡ诱导作用的机制尚未明了。目的 :进一步阐明ＰＭＡ促进ＣＤ1 8表达的信号传导通路及机制。方法 :定量ＲＴ -ＰＣＲ法、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交法、流式细胞术研究了细胞激活剂ＰＭＡ对人组织淋巴瘤细胞系Ｕ937细胞和人早幼粒白血病细胞系ＨＬ - 60ＣＤ1 8表达的作用及有关的信号传导通路。结果 :Ｕ937细胞经不同浓度的ＰＭＡ( 5ｎ…     

肝素增强佛波酯对人鼻咽癌CNE2细胞的作用：上调c-jun、p53、p21的表达（英文）

目的：观察肝素联合佛波酯对人鼻咽癌细胞的增殖与凋亡的影响及其可能的分子机制。方法：用细胞记数法、流式细胞术观察肝素联合佛波酯对人鼻咽癌细胞的增殖及细胞周期的影响；而用TUNEL、琼脂糖凝胶电泳、Western blot等方法观察肝素与佛波酯联合应用对人鼻咽癌细胞凋亡的作用。结果：肝素与佛波酯联合应用后对鼻咽癌细胞的生长抑制及其凋亡具有显著增强的作用，同佛波酯单独应用于诱导细胞凋亡相比,低剂量的肝素与佛波酯联合应用后发现：TUNEL阳性细胞明显增多；G₁期细胞阻滞，S期细胞明显减少，凋亡率增加；DNA“梯形”变化更加明显；c-jun、p53、p21基因表达明显升高，而c-fos在整个用药过程中没有改变。结论：肝素增强佛波酯对人鼻咽癌细胞的抗增殖及促凋亡，这可能与c-jun、p53、p21的表达上凋有关。     

佛波醇酯加离子霉素诱导脐血和成人外周血CD4+CD25+ T细胞分泌IL-2的相关机制研究

目的：以佛波醇酯加离子霉素作为刺激剂,验证CD4+CD25+ 调节性T细胞本身并不存在分泌IL-2障碍；同时通过对脐血和成人外周 血的比较性研究，了解脐血CD4+CD25+ T细胞的成熟度。方法：以au toMACS从足月婴儿脐血（CB）和成人外周血（PB）分选CD4+CD25+和CD4+CD25-T细 胞，以PDB+ionomycin作为刺激剂，培养45 h后流式细胞术检测各组细胞表达CD69和CD25水 平，并以Luminex多重细胞因子检测技术检测培养上清中7种细胞因子的浓度。结果:经PDB+ionomycin刺激后，CB、PB的CD4+CD25+ 和CD4+CD25- T细胞均 发生增殖，但在培养 45 h 后CD4+CD25+ T细胞均出现细胞状态变差或死亡倾向。C B、PB 的CD4+CD25+ T细胞活化后CD25分子表达进一步上调，高于CD25-细胞活化后的CD25分 子密度。经PDB+ionomycin刺激后，PB CD4+CD25+和CD4+CD25- T细胞均分泌高水平 的IFN-γ、IL-2和TNF-α，但CD25+ 细胞分泌IL-5、IL-4和IL-10水平远远高于CD25-细 胞；CB CD4+CD25+和CD4+CD25- T细胞亦分泌高水平的IL-2和TNF-α，但IFN-γ水 平远远低于PB，基本不分泌IL-5、IL-4和IL-10。结论：CD4+CD25+ T细胞本身并不存在合成和分泌IL-2障碍，其可能具有与传统T细胞不同的T细胞受体信息转 导模式；脐血CD4+CD25+ T细胞功能尚未完全成熟。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺及内脏感觉传入系统神经生长因子表达的抑制作用

目的：探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺及内脏感觉传人系统(C7-T5脊神经节及对应的脊髓后角)神经生长因子(NGF)表达的影响。方法：利用免疫组织化学和Westem印迹方法,观察生理盐水组、单纯致敏组、哮喘组和地塞米松组豚鼠肺及内脏感觉传人系统(C7-T5脊神经节及对应的脊髓后角)NGF表达的变化。结果：哮喘组豚鼠NGF在肺及内脏感觉传人系统(C7-T5脊神经节及对应的脊髓后角)表达明显高于对照组,而地塞米松组则明显低于哮喘组。结论：NGF可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠NGF的表达可能是其治疗哮喘的机制之一。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺内脏感觉传入部位TrkA表达的抑制作用

为了探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺内脏感觉传入系统(C7T5脊神经节及对应的脊髓后角)TrkA表达的影响,我们利用免疫组织化学和Westernblot方法,研究了哮喘豚鼠C7T5脊神经节及对应的脊髓后角TrkA的免疫反应变化。结果显示:哮喘组豚鼠C7T5脊神经节及对应的脊髓后角TrkA表达明显高于对照组(P<0.01),而地塞米松组则明显低于哮喘组(P<0.01)。结果提示TrkA可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠TrkA的表达可能是其治疗哮喘的作用机制之一。     

JIP抑制鼻咽癌细胞中LMP1诱导的AP-1活性及机理的研究

目的:探讨鼻咽癌细胞中JIP抑制激活蛋白1(AP-1)信号转导途径的分子机制。方法:用Dox诱导L7(Tet-on-LMP1-HNE₂)细胞表达LMP1,观察AP-1活性的动力学变化,然后用不同浓度的JIP质粒转染L7细胞后,观察JIP的表达对LMP1诱导的AP-1活性的影响,并用荧光免疫组化方法观察JIP抑制JNK核移位引起磷酸化的JNK在胞浆中的滞留。结果:在转染JIP表达质粒24h之后,抑制了活化的JNK核移位,下调了AP-1的生物活性。结论:JIP能够通过抑制磷酸化的JNK核移位,从而下调AP-1活性。     

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导大鼠肺组织NF-κB活性增高的抑制作用

目的与方法：为探讨八肽胆囊收缩素（CCK-8）防治内毒素引起急性肺损伤的分子作用机理，用电泳迁移率变动分析技术（EMSA），观察CCK-8对脂多糖（LPS）诱导核转录因子κB（NF-κB）活性变化的影响，用光密度扫描电泳谱带峰面积积分值表示NF-κB活性，观察肺组织的病理学变化。结果：LPS入血可以明显引起大鼠肺组织的NF-κB活性1 639.92±198.63（P<0.01），显著高于对照组（593.56±89.34），此作用为预先静脉注入CCK-8部分逆转，NF-κB活性低至823.91±97.32（P<0.01），CCK-8可减轻LPS引起的肺组织病理学变化。结论：CCK-8对LPS激活肺组织NF-κB有抑制作用。     

葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎症反应的抑制作用

目的： 观察葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎症反应的抑制作用并探讨其作用机制。方法: 采用大鼠大脑中动脉内栓线阻断法（MCAO）复制大鼠脑缺血再灌注损伤模型，于缺血开始及再灌注即刻由尾静脉注射葛根素18 mg·kg-1，缺血 2 h 再灌注 24 h 后取缺血侧脑组织，HE染色观察海马存活锥体细胞数，比色法测定脑组织MPO活性观察脑组织中性粒细胞浸润程度，Western blotting及RT-PCR法测定脑组织中ICAM-1 蛋白及mRNA表达情况及NF-κB p65亚基核转位情况。结果: 葛根素组缺血侧脑组织海马存活锥体细胞数明显高于缺血再灌注损伤组（P<0.01）， MPO活性明显低于缺血再灌注损伤组（P<0.01），ICAM-1 蛋白及mRNA表达较缺血再灌注损伤组明显减少（P<0.01），NF-κB p65蛋白亚基核转位明显少于缺血再灌注损伤组（P<0.01）。结论: 葛根素可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤后炎症反应，这可能是其发挥脑保护作用的机制之一。     

茶多酚对高脂环境中THP-1细胞核因子-κB、转化生长因子-β1 mRNA表达的影响

目的 :观察茶多酚 (TP)对单核细胞源性泡沫细胞核因子 -κB(NF -κB)、转化生长因子 - β1(TGF -β1)mRNA表达的影响。方法 :分别用极低密度脂蛋白 (VLDL)、低密度脂蛋白 (LDL)、氧化低密度脂蛋白 (ox -LDL)诱导人髓系白血病单核细胞株THP - 1细胞向泡沫细胞转化 ,加入TP干预后检测细胞NF -κB的核移位率、TGF - β1mRNA阳性指数、细胞内胆固醇含量等。结果 :茶多酚浓度为 0 4 - 4 0 μg/L时细胞NF -κB的核移位率、TGF - β1mR NA阳性指数、细胞内胆固醇含量等均低于未用TP干预的细胞 (P <0 0 5 )。结论 :一定浓度的TP对高脂环境中单核-巨噬细胞NF -κB活化、TGF - β1mRNA表达有抑制作用 ,并阻止泡沫细胞形成。     

神经钙调蛋白介导IL-1β诱导的NF-κB p65的表达及神经毒性

目的：探讨神经钙调蛋白在白细胞介素-1β(IL-1β)和兴奋性氨基酸（NMDA）诱导皮层神经元NF-κΒ表达及神经损伤机制的作用。 方法： 应用IL-1β或NMDA诱导原代培养的胎鼠皮层神经元损伤；通过MTT法、LDH释放率测定观察细胞生存力和损伤程度；通过Western blotting分析NF-κB p65的表达；通过膜联蛋白（Annexin V）和碘化丙啶（PI）免疫荧光法观察细胞凋亡或坏死程度。 结果： MTT和LDH释放率测定结果表明， IL-1β和NMDA都可分别引起神经细胞的生存力明显下降，并呈量效依赖关系。IL-1β和NMDA在引起细胞损伤的同时都可促进NF-κΒ p65的表达。应用神经钙调蛋白抑制剂CsA明显抑制IL-1β引起的细胞损伤，也明显抑制IL-1β诱导的NF-κB p65表达增加。但是，环孢菌素A(CsA)不能明显抑制NMDA诱导的细胞损伤（P>0.05），对NMDA诱导的NF-κΒ p65的表达的抑制作用也不明显。Annexin V 和 PI免疫荧光检测表明，IL-1β诱导的神经损伤以神经元凋亡为主，而NMDA则主要引起坏死。 结论： 神经钙调蛋白参与介导IL-1β诱导的NF-κΒ p65的表达及神经细胞凋亡，但对NMDA诱导的神经元坏死则不起主要作用。说明神经钙调蛋白是细胞凋亡信号通路中重要分子。     

CCK-8抑制LPS作用下大鼠肺间质巨噬细胞NF-κB活性的cAMP-PKA通路研究

目的： 用cAMP激动剂forskolin和PKA抑制剂H-89，探讨八肽胆囊收缩素（CCK-8）抑制LPS作用下大鼠肺间质巨噬细胞（PIMs）核因子-κB （NF-κB）活性的cAMP-PKA信号通路机制。 方法： 分离纯化大鼠PIMs。用电泳迁移率改变分析（EMSA）法检测大鼠PIMs中NF-κB活性，用Western blotting分析IκB-α蛋白水平。 结果： 正常对照组大鼠PIMs核内未检测到与特异性寡核苷酸探针相结合的NF-κB，LPS组细胞内NF-κB活性明显高于正常对照组（P<0.01），胞浆中IκB-α水平显著低于正常对照组（P<0.01）。CCK组和Fsk组细胞内NF-κB活性和胞浆中IκB-α含量均无明显差异（P>0.05）。CCK+LPS组和Fsk+LPS组，细胞内NF-κB活性均低于LPS组（P<0.05），IκB-α含量均高于LPS组（P<0.01）。LPS+CCK+H-89组NF-κB活性高于CCK+LPS组（P<0.01），而IκB-α蛋白水平低于CCK+LPS组（P<0.01）。 结论： cAMP-PKA信号通路的活化可抑制LPS诱导的大鼠PIMs细胞内NF-κB活性升高和IκB-α蛋白水平的降低，CCK-8的抗炎作用是通过激活cAMP-PKA信号通路进而抑制NF-κB活性来实现的。     

地塞米松对成纤维细胞核仁组成区相关嗜银蛋白增生的抑制作用

目的和方法：应用核仁组成区相关嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲｓ）染色结合图像分析技术,观察皮质类固醇激素地塞米松对体外培养的ＮＩＨ／３Ｔ３成纤维细胞ＡｇＮＯＲｓ增生的抑制作用。结果：（１）地塞米松对正常和不同因子刺激的成纤维细胞ＡｇＮＯＲｓ的增生均显示不同程度的抑制作用,其抑制强弱的顺序为：正常〉５－羟色胺〉ＩＬ－１和肝素;（２）地塞米松的抑制作用与其浓度密切相关,对正常５－羟色胺和肝素、ＩＬ－１刺激的成纤     

佛波脂对体外培养Th细胞表面CD4分子表达的影响

目的探索佛波脂(PMA)对Th细胞表面CIM分子表达的影响。方法用荧光标记的抗CD3／418抗体同经10、15、20、25ng/mL的PMA和1μg／mL的Ionomycin刺激培养2、3、4h的正常人外周全血细胞中的Th细胞上的CIM分子结合，溶血后用流式细胞仪检测CIM通道的荧光强度(MFI)。结果CIM通道的MFI随PMA质量浓度的升高和刺激时间的延长而降低。结论Th细胞表面CIM分子在刺激培养过程中随PMA质量浓度的升高和刺激时间的延长而减少。     

抗CD47单抗对人树突状细胞的免疫调控作用及其机制探讨

目的:研究可溶性的抗CD47单抗(B6H12)对树突状细胞(DC)的免疫调控作用及分子机理。方法:分离人外周血单核细胞,联合应用rhGM-CSF、IL-4、细菌脂多糖(LPS)在体外诱导扩增DC,并在培养体系中添加抗CD47单抗(B6H12)。采用透射电镜观察DC形态,流式细胞仪检测DC膜表面分子,ELISA定量检测DC释放IL-12P70水平,Brdu-ELISA 法检测DC刺激同种异型淋巴细胞增殖,凝胶电泳迁移率改变实验(EMSA)检测NF-κB活性。结果:(1)经抗CD47单抗(B6H12)处理的DC,膜表面CD80、CD86、CD1a、CD83、DR表达显著降低(P＜0.05);其释放IL-12P70的水平及刺激同种异型淋巴细胞增殖的能力也显著低于对照组(P＜0.01)。(2) B6H12单抗处理DC组其NF-κB活性显著降低(P＜0.05),且该效应呈剂量依赖性。结论:抗CD47单抗可通过抑制NF-κB活性而影响DC的发育、成熟及功能。