大鼠局部脑缺血再灌注后淀粉样前置蛋白基因的表达

目的检测大鼠局部脑缺血再灌注后淀粉样前置蛋白(APP)基因的表达情况.方法选取SD大鼠136只,随机分为八组.采用线栓法制作右侧大脑中动脉(MCA)缺血再灌注模型.A组为对照组,B～H各组大鼠脑缺血1h后,分别再灌注0、1、3、8h和1、3、7d后处死.取双侧脑皮质,用RT-PCR方法检测APP770、APP751、APP695 mRNA的表达水平;应用Western印迹及免疫组化方法检测APP蛋白质的表达.结果缺血再灌注后脑皮质含KPI结构区的APP770和APP751mRNA水平在再灌注ld后开始升高(P≤0.01),第3d达高峰后逐渐下降,第7d达基础水平.APP695 mRNA在缺血再灌注后第1d到第3d逐渐下降后回升(P≤0.01),直到第7d达基础水平.再灌注8h后神经变性开始出现,同时神经胶质酸性蛋白(GFAP)免疫阳性的星形细胞开始增多.结论缺血再灌注损伤能诱发APP mRNA的表达升高;选择性诱发KPI-APP表达升高的原因可能是由于反应性星形细胞增多所致,调节APP剪切的一些因素也参与脑缺血病理过程.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后β-淀粉样蛋白的表达

①目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后 β 淀粉样蛋白 (β AP)在梗死区的表达。 ②方法　应用免疫组织化学方法观察大鼠大脑中动脉缺血再灌注后存活 6h、1d、2d、3d、7d、14d不同时间 β AP的表达。 ③结果　缺血再灌注后 1d ,β AP在梗死区及其周围表达开始增强 ,7d时达高峰 (F =92 .6 3,q =5 .2 1～ 2 5 .87,P <0 .0 1)。④结论　β AP在脑缺血再灌注损伤区表达增多 ,提示β AP在脑缺血损伤的病理改变中具有重要作用     

大鼠局部脑缺血再灌注后阿尔茨海默病相关基因的表达

ＰＰ是阿尔茨海默病老年斑中的主要成份 ,有实验证实缺血可以导致大脑皮质ＡＰＰ基因表达发生改变。但国内外尚无报道缺血再灌注损伤时ＡＰＰ表达的变化情况。ＰＳ1、ＰＳ2基因是近两年刚刚发现的基因 ,它们的突变是引起大部分早发型阿尔茨海默病的主要病因。缺血能否影响ＰＳ基因在脑皮质中的表达有待进一步澄清。本实验目的在于探索缺血再灌注后ＰＳ和ＡＰＰ基因的表达情况。本实验选用ＳＤ大鼠 136只 ,随机分为 8组。采用线栓法制作右侧大脑中动脉 (ＭＣＡ)缺血再灌注模型。Ａ组为对照组 ,Ｂ到Ｈ组大鼠脑缺血为 1ｈ ,分别再灌注 0ｈ、1ｈ…     

大鼠脑缺血再灌注后水孔蛋白4表达的研究

目的:探讨水孔蛋白4(AQP-4)在脑缺血再灌注后的表达及意义.方法:采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,分别于缺血再灌注后12,24,48,72,120,168 h的6个时相点用免疫组化方法观察大鼠模型缺血区AQP-4的表达,并与假手术组和正常组比较.结果:正常组和假手术组不同时相点均无AQP-4的表达;缺血再灌注组12 h在缺血周边区神经胶质细胞上有较弱表达,24h表达增强,48～120 h达到高峰,168 h后AQP-4持续表达.结论:脑缺血再灌注时缺血区域有AQP-4表达,AQP-4表达可能是脑缺血再灌注损伤的机制之一.     

肌苷对大鼠脑缺血再灌注后勿动蛋白基因表达的影响

①目的　探讨脑缺血再灌注后勿动蛋白 (Nogo A)基因表达的变化规律及肌苷对其表达的影响。②方法　成年健康雌性SD大鼠 6 0只 ,以线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注模型。随机分为治疗组和对照组 ,每组再随机分为缺血 1.5h再灌注 2h、12h、1d、2d、3d、7d、14d组 (n =4 ) ,另外 4只作假手术组。应用Bederson等神经功能评分法评定脑缺血再灌注后各组大鼠神经功能的恢复情况 ,原位杂交技术检测脑组织Nogo AmRNA的表达。③结果　对照组在缺血侧皮质和纹状体区Nogo AmRNA表达于 12h和 2d呈双峰增高 ,神经功能于 3d开始恢复。肌苷治疗组与对照组比较 ,Nogo AmRNA在皮质区的表达于 12h增高 ,7d下降 ,在纹状体区 12h、2d、3d增高 (t=1.93～ 14 .96 ,P <0 .0 5 ) ;神经功能于 7d恢复 ,差异有显著性 (t =2 .31,P <0 .0 5 )。④结论　肌苷可促进大鼠脑缺血再灌注后神经功能恢复 ,其作用机制可能与Nogo AmRNA表达下调有关。     

急性局部脑缺血再灌注大鼠外周血糖变化实验观察

目的：探讨急性脑缺血再灌注时大鼠外周血糖的变化。方法：大脑中动脉阻断缺血后，在再灌注３０，６０，１２０ｍｉｎ对外周血糖进行测定。结果：大脑局部缺血再灌注时，血糖明显升高。结论：以上资料表明应注意脑缺血再灌注时的血糖变化。     

超敏C反应蛋白在大鼠脑缺血再灌注后12h的表达

目的:观察大鼠脑缺血再灌注12 h后血清hS-CRP含量的变化,以探讨血清hS-CRP水平对于急性脑血管病的诊断意义。方法:线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血2 h再灌注12 h后,评价大鼠神经功能状态,观察大鼠脑梗死情况,心脏取血检测血清hS-CRP含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分升高,血清hS-CRP含量升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:hS-CRP与大鼠脑缺血造成的神经功能缺损密切相关。     

大鼠脑缺血/再灌注层粘连蛋白表达的实验研究

目的探讨层粘连蛋白(Laminin,LN)在大鼠脑缺血再灌注中的作用.方法制备大鼠脑缺血再灌注(MCAO/R)模型,分为假手术组与缺血再灌注组;缺血2h后依照再灌注时间点的不同分为2h、6h、12h、24h、3d及7d共6组.各时相点取材,免疫组化观察脑组织LN的表达变化,并使用多媒体彩色病理图像分析系统进行定量分析.结果 LN的表达于再灌注2h开始降低,24h时达最低,第3日时开始回升.结论 LN可能参与了缺血再灌注血管源性脑水肿的形成与发展,并且可能参与了再灌注损伤后新生血管的生成、血管重塑及侧支循环的建立.     

P-糖蛋白在大鼠脑缺血再灌注后的表达变化

目的 观察大鼠局灶性脑缺血90 min再灌注后p-糖蛋白(P-gp)在脑组织中的表达及其变化规律.方法 采用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,选取26只成年健康SD雄性大鼠,其中1只用于2,3,5--三苯基氯化四氮唑(TTC)染色,其余25只随机分为对照组(n=5)、假手术组(n=5)、脑缺血再灌注1、3、7d组(n=5).用免疫组织化学DAB单标,观察P-gp在正常脑组织和缺血脑组织中的分布变化;用Mdr-1抗体分别和神经元标记物(Neun)、星形胶质细胞标记物(GFAP)、微血管内皮细胞标记物(CD31)进行免疫荧光双标,观察P-gp在缺血再灌注后脑组织的表达;用实时定量PCR技术检测脑缺血再灌注后大脑皮质及纹状体微血管P-gp mRNA的表达变化.结果 对照组仅在脑组织微血管内皮细胞表达P-gp,缺血再灌注组除微血管内皮细胞表达P-gp外,在部分神经元及星形胶质细胞的突起也有表达.脑缺血再灌注后1d皮质P-gp mRNA表达降低,但3d表达明显增高,7d又下降,其升高和降低水平与对照组及假手术组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).脑缺血再灌注后1、3、7d纹状体P-gp mRNA表达均增多,其中以1、3d增多明显,与对照组和假手术组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脑缺血再灌注后P-gp在大脑皮层及纹状体微血管P-gp的表达呈现不同的趋势,这可能是脑组织的自我保护机制之一.     

川芎嗪与尼莫通对大鼠脑缺血再灌注c-fos蛋白表达影响

1目的　探讨 c- fos蛋白在大鼠脑缺血再灌注脑损伤过程中的表达 ,以及川芎嗪和尼莫通对其影响。2方法　采用免疫组化法检测大鼠脑缺血再灌注不同时间内 c- fos蛋白表达的水平 ,以及川芎嗪和尼莫通干预后c- fos蛋白表达的变化。3结果　脑缺血再灌注时缺血侧脑皮质和基底核区均有 c- fos蛋白阳性表达 ,其阳性表达率随再灌注时间长短不同而不同 ,于缺血 30 min再灌注 1h时阳性表达达高峰 (34 .6 1% )。缺血 30 m in再灌注 30 m in和1h时 ,川芎嗪干预组和尼莫通干预组大鼠脑皮质和基底核区 c- fos蛋白的表达均明显下降 (χ2 =2 40 .45 6～719.96 6 ,P<0 .0 0 1)。4结论　 c- fos蛋白参与大鼠脑缺血再灌注时缺血细胞损伤的发生 ,川芎嗪和尼莫通可明显下调 c- fos蛋白的表达。     

实验性局灶性脑缺血再灌注Fos蛋白的表达

目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注Fos蛋白表达的意义及其机制。方法　采用免疫组化法观察Fos蛋白在大鼠局灶性脑缺血再灌注后皮层和基底节区的动态变化。结果　Fos蛋白在大脑中动脉阻断 1h后 ,随再灌注时间延长其分布不同。基底节区持续时间长 ,阳性细胞多 ,而皮层持续时间短 ,阳性细胞少。其中再灌注 90min ,Fos蛋白表达最显著。大脑中动脉供血中心区皮层几无表达。结论　Fos蛋白的表达与神经细胞存活密切相关 ,出现Fos蛋白表达的区域神经元易于耐受缺血性损害而存活 ,可能是神经细胞自我保护机制之一 ,Fos蛋白的表达存在扩散抑制     

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中nNOS的表达

目的研究局灶性脑缺血再灌注损伤中神经元型NOS（nNOS）在同脑区的表达。方法用改良的血管内栓线技术制造大鼠局灶性脑缺血与再灌注模型，应用免疫组织化学技术检测脑组织中nNOS的表达。结果①脑缺血再灌注损伤后，脑组织中nNOS的表达显著性增强，与正常对照组比较，P〈0．05；②缺血侧在皮质、CA1区和CA3区的nNOS表达比对照侧显著性增强（P〈0．05）。结论一侧脑缺血再灌注后，也会引起对侧损伤，但缺血侧损伤更为严重。     

局灶性脑缺血-再灌注大鼠Wnt3a蛋白表达的变化

目的：观察局灶性脑缺血-再灌注大鼠Wnt3a蛋白表达的动态变化。方法: 取80只SD大鼠,采用改良的Zea Longa线栓法栓塞大脑中动脉,缺血30 min后再灌注3、6、12、24 h,3、7、14、28 d,按随机数字法分组。假手术组除未栓塞大脑中动脉外,其余操作与模型组相同。免疫印迹法分别检测各组大鼠皮质Wnt3a蛋白表达情况。结果：与假手术组（0.66±0.04）相比,Wnt3a的表达从缺血-再灌注后3 h开始升高,在24 h时达到最高峰（1.57±0.18）,之后7 d内维持较高水平,但14 d后下降,直至28 d时（0.68 ± 0.04）表达仍高于假手术组。结论：局灶性脑缺血再灌注后,大脑皮质区Wnt3a的表达随时间而动态变化,提示可能激活了Wnt3a参与的调节神经发生的信号通路。     

大鼠局灶性脑缺血早期脑内HO-1 蛋白的表达

目的　研究局灶性脑缺血血红素氧合酶 (HO)在脑内的表达。方法　采用大鼠大脑中动脉栓塞致脑缺血 ,对缺血早期不同时间点进行HO 1免疫组化及病理学研究 ,并应用计算机图像分析技术计算HO 1表达的强弱。结果　栓塞后 3 0min皮质及海马即有HO 1阳性神经元和胶质细胞 ,且随着时间推移 ,HO 1的表达逐渐增强 ,HO 1主要分布在灶周皮质、梗死皮质区、梨状皮质内的神经元及胶质细胞 ,丘脑、下丘脑、海马齿状回的神经元及对测海马也出现HO 1的表达。结论　脑缺血时脑内HO 1迅速而强烈的表达可能是脑组织对自身损伤的恢复机制     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注后ICAM-1表达的影响

目的　观察亚低温的不同时程对大鼠脑缺血再灌注后ICAM 1表达的影响。方法　 30只SD大鼠随机分为 5组 :假手术组 ,常温组 ,亚低温 1/ 2h组 ,亚低温 1h组 ,亚低温 3h组。每组各 6只 ,参照ZeaLonga的方法建立脑缺血再灌注动物模型 ,于缺血 3h再灌注 2 4h后 ,断头取脑 ,行ICAM 1免疫组化染色。其中 ,亚低温组于缺血即刻行不同时程 (1/ 2h、1h、3h)的亚低温治疗。结果　常温组可见在缺血梗死灶周围区ICAM 1表达阳性的微血管数较多 ;随亚低温治疗时间的延长 ,其阳性微血管数减少。常温组与亚低温组以及各组与假手术组之间均有显著差异 (P <0 .0 1)。结论　ICAM 1参与脑缺血再灌注损伤 ,亚低温治疗可抑制脑缺血再灌注后ICAM 1的表达 ,并具有神经保护作用。     

局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡相关基因表达的研究

目的探讨在局灶性脑缺血再灌注损伤中神经细胞凋亡及相关基因表达的影响及脑缺血后神经细胞凋亡的调控机制。方法利用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，采用免疫组化和逆转录聚合酶链（RT—PCR）反应方法分别检测脑缺血再灌注不同时间细胞洲亡及相关基因bcl-2和bax、Caspase-3表达的动态变化。结果轻度脑缺血和再灌注早期，bcl-2表达升高，具有神经保护作用，但重度脑缺血和再灌注后期，其保护作用不足以抑制神经细胞凋亡。Bax表达于神经细胞删亡时空分布一致，可反映缺血后脑损伤的程度。Caspase-3在脑缺血再灌注损伤中起重要作用，其表达的升高早于细胞凋亡，直接参与神经细咆凋亡的执行。结论脑缺血再灌注能够引起Bcl-2基因和Caspase-3基因表达的改变。导致神经细胞凋亡的发生。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后血管源性脑水肿与细胞凋亡

研究大鼠大脑中动脉（MCA）短暂闭塞后血管源性脑水肿（VBE）与调亡细胞数的关系。VBE程度用光密度法测量甲酸胺提取外渗至血脑屏障（BBB）受损最严重的脑区Evans蓝（EB）含量定量，石蜡切片的调亡细胞数用原位末端标记法（ISEL）检测。结果表明BBB受损程度与调亡细胞数随缺血时间延长而增加二者密切相关。VBE促进了细胞凋亡机制。     

大鼠急性脑缺血后Hephaestine表达变化的研究

目的　研究大鼠急性局灶性脑缺血后皮层和纹状体hephaestine表达的变化。 方法　用线栓法制备大鼠急性大脑中动脉阻塞 (MCAO)再灌注模型 ,在再灌注后的不同时间点应用免疫组化及图像分析检测皮层和纹状体的表达。结果　MCAO再灌注后大鼠出现大脑中动脉梗塞的神经系统损害体征 ,TTC染色有白色梗死区。hep haestine在正常大鼠的皮层、纹状体有表达 ,在急性脑缺血再灌注后 12h缺血侧皮层、纹状体表达明显增加并持续到再灌注后 4 8h ,在 2 4h达到高峰 (P <0 .0 1) ,至 1周时表达较正常明显减少 (P <0 .0 1)。结论　大鼠急性脑缺血再灌注后hephaestine的表达出现明显的变化 ,在急性脑缺血的病理生理变化中可能起着重要的作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的复制及评价

目的介绍一种通过改良的SD大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型的制作方法,建立一种最接近人类缺血性脑卒中的理想动物模型用于研究缺血性脑血管疾病。方法参照Longa等的线栓法,通过改良制作大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型复制并通过观察实验大鼠的行为学变化、神经功能缺损评分、脑梗死体积测定（TTC染色）及组织形态观察对模型进行评价。结果改良前后蛛网膜下腔出血发生率从30%下降至5%（χ2=4.33,P〈0.05）、动物早期死亡率从35%下降至10%（χ2=3.58,P〈0.10）、模型复制的成功率则从35%上升到85%（χ2=10.42,P〈0.01）。结论改良后的SD大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型复制的成功率明显提高,用于缺血性脑卒中的临床和实验研究,能达到较为满意的效果。