组织工程化人工神经及其在面神经修复中的应用

组织工程化人工神经研究的重点是神经导管材料的选择和Schwann细胞的取材、培养、纯化方法。神经导管引导轴突生长 ,主要由天然材料和人工合成材料制成 ,目前较推崇人工合成材料。Schwann细胞对神经再生起重要作用 ,人工培养取材于自体或异体的神经或干细胞 ,有多种增殖和纯化方法。目前组织工程化人工神经用于肢体神经研究的较多 ,在面神经损伤修复中的研究较少 ,可能和面神经独特的解剖和生理功能有关     

组织工程化神经修复周围神经缺损的实验研究

目的通过人工神经修复神经缺损的实验研究，为神经组织工程的进一步研究和临床应用提供实验依据。方法分3组修复大鼠1cm长坐骨神经缺损：（A组）含许旺细胞的移植体；（B组）无许旺细胞的移植体；（C对照组）自体神经移植。术后10周内，进行肌肉湿重、电生理等测定以及组织学观察、图像分析。结果许旺细胞能与PLGA纤维构成活性细胞-材料复合物；神经修复术后10周，A、C两组电生理特性、组织学变化以及肌肉湿重等测定均明显优于B组，A组与C组之间无显著差别。结论许旺细胞能与PLGA纤维在体外构建具有活性的神经移植体并能够促进神经再生，其修复效果接近于自体神经移植。     

荧光金在视神经损伤研究中的应用

目的 研究荧光金在视神经损伤中的应用。方法 荧光金注射到正常及不完全视神经损伤后大鼠的外侧膝状体和上丘，观察视网膜铺片中视网膜神经节细胞的形态和数量；荧光金注射到大鼠玻璃体腔内，观察视网膜神经节细胞轴突的损伤情况。结果 视网膜铺片的节细胞边界清晰，易于计数和形态的观察。损伤2周时视网膜神经节细胞剩余57％，相对应的损伤2周的轴突远端的线形荧光明显减少。结论 荧光金是视神经损伤中视网膜神经节细胞数目变化和轴突损伤、分布和投射的可靠有效方法。     

青光眼视神经损伤机制的研究进展

青光眼是目前继白内障后全球第2位致盲性眼病,总人群发病率为1%,严重威胁着人类的视觉健康。关于青光眼视神经损伤的发病机制,近年来各国学者在该领域做了大量的研究,许多学说都证实其最终的共同通路是视网膜神经节细胞的凋亡,然而每一种学说都不能完全解释青光眼视神经损害的具体机制。到目前为止,其确切机制尚未阐明,因此,有必要进行更深入的研究,在合理的理论框架下,探索特异性阻断视网膜神经节细胞凋亡的新方法,从而更有效地保护视功能。     

睫状神经营养因子和雪旺细胞神经营养活性物质对大鼠视神经损伤后轴突数的影响

目的　观察睫状神经生长因子 ( ciliary neurotrophicfactor,CNTF)和雪旺细胞神经营养活性物质 ( Schwann cellsneurotrophic agent,SCNA)对视神经损伤后轴突的形态和纤维数目变化的作用 .方法　采用镊夹法制作大鼠视神经损伤模型 ,损伤后立即一次性向玻璃体内注射 CNTF( 5 0 ng)或SCNA ( 10μL ) ,在损伤后 1,2 ,3和 4 wk时观察夹伤视神经的形态 ,及进行图像分析和轴突纤维计数 .结果　损伤后视神经轴突减少 ,间质增多 .CNTF组和 SCNA组的轴突数密度在 1wk时分别为正常值 ( 0 .10 65± 0 .0 0 5 6个·μm- 2 )的0 .5 9和 0 .61,而对照组为 0 .5 5 ,实验组与对照组比较差异显著 ( P<0 .0 5 ) .但在夹伤 2 wk后 3个组间、各时间点间数据差异均不显著 ( P>0 .0 5 ) .结论　 CNTF及 SCNA一次玻璃体给药能在 1wk内减缓视神经损伤后轴突数目的减少 .     

Rho 激酶抑制剂在视神经损伤后修复再生的研究进展

在视神经的损伤过程中,视网膜神经节细胞因其自身逆行退化产生凋亡,同时其轴突在损伤后缺乏再生能力。既往研究认为：视神经无法在损伤之后再生,进而因视神经损伤后导致的视力损害也无法得到恢复［1］。已知视神经纤维表面由少突胶质细胞构成髓鞘细胞,故而视神经与其他周围神经不同,属于中枢神经系统,其组织学结构类似于脑实质和脊髓组织中白质部分［2］。近年研究发现,RhoA ／ROCK 通路在中枢神经轴突再生过程中,可以被少突胶质细胞髓鞘糖蛋白、Nogo-A 和髓鞘相关糖蛋白等激活,从而抑制轴突再生［3］。作为目前唯一获准应用于临床的 Rho 激酶抑制剂,法舒地尔对于 RhoA ／ROCK 通路具有较强的抑制作用,进而对于受损的神经起到保护。目前,研究已证实,法舒地尔通过抑制 Rho 激酶,在心血管疾病、脑卒中和神经系统疾病中均具有一定的作用［4］。本文主要针对以法舒地尔为代表的 Rho 激酶抑制剂在视神经损伤后修复再生的机制和临床应用进行探讨,报道如下。     

视神经损伤后RhoA在大鼠视网膜中的分布及表达研究

目的 观察视神经损伤后RhoA在大鼠视网膜中的分布及表达变化.方法 将36只成年Long Evans大鼠随机分为正常组,视神经损伤1、3、7 d组,共4组,每组9只,通过免疫组化染色,观察RhoA在视网膜中的分布变化;用Western blot分析统计RhoA表达变化.结果 正常及视神经损伤后1 d,RhoA主要分布于视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)层;3 d分布于RGCs及内丛状层;7 d分布于RGCs、内丛状层、内核层及外丛状层.Western blot示:视神经损伤后1、3、7 d,RhoA表达均高于正常组(P＜0.01,P＜0.05),但7 d表达量最高.结论 视神经损伤可显著增加RhoA在视网膜中的表达量及分布范围,它在视神经损伤后再生过程中发挥重要的作用.     

青光眼视神经损伤发病机制的研究进展

关于原发性青光眼的发病机制,目前有许多学说,但每种学说都不能完全说明青光眼视神经损害的具体机制。原发性青光眼进展的危险因素包括全身性及眼部因素,眼部因素包括眼压及非眼压因素。眼压虽然不是青光眼视神经损害的惟一因素,但仍然是青光眼最主要和最稳定的危险因素。另外,视网膜神经节细胞死亡是青光眼视神经损伤的最终共同通路,阻断视神经损伤通路和增强视神经存活机制的方法将成为一种重要的青光眼辅助治疗措施,目前这一领域主要包括抗凋亡途径、促红细胞生成素、抗青光眼药物等方面。     

骨髓基质干细胞构建组织工程神经修复神经缺损的研究进展

骨髓基质干细胞(BMSCs)存在于骨髓和其他一些组织(如脂肪等),它不仅具有干细胞的基本特征,而且具有自我更新和多向分化的潜能,它分离、培养的成功,以及向神经细胞分化的成功,为修复周围神经损伤提供了一种新的组织工程学种子细胞来源。本文就BMSCs作为种子细胞构建组织工程神经过程中的机制和所面临的新挑战进行综述,以探讨一种更新更有价值的周围神经缺损修复思路。     

组织工程神经中雪旺细胞的形态

目的:观察组织工程神经中雪旺细胞的形态.方法:体外培养雪旺细胞,用倒置显微镜、扫描电镜和透射电镜观察雪旺细胞在PGLA膜上的生长情况和雪旺细胞在BAM凝胶中的形态,用BrdU标记雪旺细胞,观察雪旺细胞-PGLA复合体植入SD大鼠3wk后,雪旺细胞的存活情况.结果:倒置显微镜下,PGLA膜上的雪旺细胞形态与常规培养特点相同,BAM凝胶中雪旺细胞逐渐恢复双极状形态,形成类Büngner带结构,然后可见细胞从凝胶中迁出;扫描电镜下,雪旺细胞细长的双极状形态特点明显,许多细胞聚合类似于Büngner带;透射电镜下,雪旺细胞底部形成一些特殊的钉状突与PLGA膜内接触;免疫组化染色显示组织工程神经中雪旺细胞大量存活.结论:本实验的组织工程神经中雪旺细胞形态正常,生长良好.     

施万细胞与脊髓损伤修复的研究进展

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后再髓鞘化障碍是导致患者神经功能缺失的主要原因。作为周围神经系统(peripheral nervous system,PNS)的神经胶质细胞,施万细胞(Schwann cells,SC)参与PNS髓鞘的形成与修复。越来越多的研究显示,SCI发生后可在损伤部位观察到SC。本文就SC参与SCI修复过程的细胞来源、修复机制及受到的调控因素进行综述。     

GDNF基因修饰的雪旺细胞对大鼠坐骨神经缺损的修复作用

目的应用携带胶质细胞源性神经营养因子基因的逆转录病毒载体质粒(pLXSN-GDNF)对体外培养的雪旺细胞进行基因修饰,并结合细胞外基质凝胶及生物可降解聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)管构建神经移植复合体,用于大鼠坐骨神经缺损的修复,同时对其促轴突再生及神经元保护作用予以检测评价.方法 40只成年Wistar大鼠随机分为4组:A组(n=10) 细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;B组(n=10)雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;C组(n=10) GDNF基因修饰的雪旺细胞-细胞外基质凝胶-PLGA管桥接组;D组(n=10)自体神经桥接组.损伤各组12周时应用神经电生理及甲苯胺蓝染色和透射电镜观测神经再生情况,辣根过氧化物酶神经逆行示踪技术用于脊髓前角运动神经元再生评价.结果 12周时再生神经运动传导速度检测、甲苯胺蓝染色轴突形态计量学分析、透射电镜超微结构观察以及脊髓前角运动神经元再生评价结果提示:C组优于A、B组,而与D组相比无明显差异.结论雪旺细胞的转基因处理可能弥补单纯细胞移植神经营养因子含量的不足,而可能达到与自体神经移植相似的效果.     

Schwann cells transplantation promoted and the repair of brain stem injury in rats

Objective To explore the possibility of Schwann cells transplantation to promote the repair of injured brain stem reticular structure in rats. Methods Schwann cells originated from sciatic nerves of 1 to 2-day-old rats were expanded and labelled by BrdU in vitro, transplanted into rat brain stem reticular structure that was pre-injured by electric needle stimulus, lmmunohistochemistry and myelin-staining were used to investigate the expression of BrdU, GAP-43 and new myelination respectively. Results BrdU positive cells could be identified for up to 8 months and their number increased by about 23%, which mainly migrated toward injured ipsilateral cortex. The GAP-43 expression reached its peak in 1 month after transplantation and was significantly higher than that in the control group. New myelination could be seen in destructed brain stem areas. Conelusion The transplantation of Schwann cells can promote the restoration of injured brain stem reticular structure.     

周围神经损伤后雪旺细胞分泌巨噬细胞游走抑制因子的变化

目的研究损伤的周围神经能否激活和促进雪旺细胞分泌巨噬细胞游走抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)。方法切取SD乳鼠损伤和未损伤的臂丛及坐骨神经,分离、纯化、培养雪旺细胞,72 h后分别收集培养基,即得损伤神经雪旺细胞条件培养基及未损伤神经雪旺细胞条件培养基,以含10%小牛血清的DMEM/F12培养基为对照组,用ELISA法测定其中的MIF含量。结果损伤神经雪旺细胞条件培养基中MIF含量明显高于未损伤神经雪旺细胞条件培养基及对照组,未损伤神经雪旺细胞条件培养基中MIF与对照组无明显差异。结论损伤的周围神经能激活和促进雪旺细胞分泌MIF,在激活巨噬细胞、调节免疫炎症反应过程中可能起重要作用。     

经颅视神经管显微减压术治疗外伤性视神经损伤

目的评价经颅视神经管显微减压术的疗效.方法作冠状头皮切口或改良翼点手术入路,手术显微镜直视下开放视神经管上壁及外侧壁,剪开视神经鞘膜和总腱环,显露视神经不少于1/2周径.结果施行手术14例,术后视力改善10例,有效率71.4%.结论经颅入路视神经管显微减压术减压充分、安全可行、疗效肯定.     

兔外伤性视神经损伤后不同时期减压的视功能动态检测

目的:观察视神经损伤动物模型在损伤后不同时期视神经管减压后视觉诱发电位的变化,了解外伤性视神经损伤的手术时机与疗效间的关系。方法:建立家兔外伤性视神经损伤及不同时间减压的模型,随机分为A、B、C、D、E共五组,分别为正常对照组、损伤48 h减压组、1周减压组、2周减压组以及损伤不减压组。采用图形翻转视觉诱发电位(P-VEP)检测A组视功能,B、C、D组在损伤前、后1 h,减压前1 h、减压后2周以及E组相应时间的视功能变化。结果:①每只健康家兔P-VEP检查均引出典型NPN曲线,视神经挤压伤后1 h NPN波形低阔扁平,P波潜伏期延长,波幅降低,与自身损伤前及正常对照组相比有显著性差异(P<0.05)。②减压前后各组自身对照:B组减压前后的P波潜伏期和波幅有显著性差异(P<0.05);C组无显著性差异(P>0.05);D组波幅无显著性差异(P>0.05),而减压后2周潜伏期明显延长(P<0.05)。③减压后2周B、C、D组两两比较,三组之间潜伏期均差异有显著性意义(P<0.01),B组与C、D组波幅比较均有极显著差异(P<0.01),C、D组之间波幅有显著性差异(P<0.05)。B、C与E组之间潜伏期和波幅均有极显著性差异(P<0.01),而D、E组之间均无明显差异(P>0.05)。B组与A组的潜伏期和波幅无显著差异(P>0.05),C、D、E组与A组之间均有极显著差异(P<0.01)。结论:神经元继发性损伤是视功能进行性下降的重要原因,视神经减压术有利于减轻视神经间接损伤,损伤后较早期(48 h以内)减压可阻止轴突继发性损伤,避免视功能进一步下降,并可在一定程度上逆转视功能的损害。     

周围神经损伤后雪旺细胞分泌巨噬细胞游走抑制因子的变化

目的：研究损伤的周围神经能否激活和促进雪旺细胞分泌巨噬细胞游走抑制因子（macrophage migrtion inhibitory factor,MIF).方法：切取SD乳鼠损伤和未损伤的臂丛及坐骨神经，分离、纯化、培养雪旺细胞，72h后分别收集培养基，即得损伤神经雪旺细胞条件培养基及未损伤神经雪旺条件培养基，以含10％小牛血清的DMEM／F12培养基为对照组，用ELISA法测定其中的MIF含量。结果：损伤神经雪旺细胞条件培养基中MIF含量明显高于未损伤神经雪旺细胞条件培养及及对照组，未损伤神经雪旺细胞条件培养基中MIF与对照组无明显差异。结论：损伤的周期神经能激活和促进雪旺细胞分泌MIF，在激活巨噬细胞、调节免疫淡症反应过程中可能起重要作用。