益肾活血胶囊对高同型半胱氨酸血症及动脉粥样硬化兔TGF-β1 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨益肾活血胶囊对高同型半胱氨酸(Hcy)血症致动脉粥样硬化(AS)兔转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法 48只新西兰兔,随机平分为正常组、模型组,益肾活血胶囊小剂量组、中剂量组、大剂量组及西药(叶酸、维生素B6、维生素B12)组,除正常组外,其他组建立高Hcy血症及AS动物模型,分别给予相应的药物治疗,观察血浆Hcy浓度、腹主动脉血管形态学变化及TGF-β1mRNA和蛋白表达。结果益肾活血胶囊和叶酸等维生素均可明显降低血浆Hcy水平,减轻血管内膜厚度,下调腹主动脉TGF-β1mRNA和蛋白表达,益肾活血胶囊大剂量组疗效最佳。结论益肾活血胶囊可明显降低血浆Hcy水平,抑制Hcy诱导的动脉粥样硬化形成,其机制可能与抑制TGF-β1表达有关。     

胰岛素对血管平滑肌细胞转化生长因子β1及其受体表达的影响

流行病学调查的资料显示 ,5 0 %以上的 2型糖尿病患者并发高血压 ,这将加重患者的大血管粥样硬化的形成。近年来研究发现 :高血糖是血管损伤的重要因素 ,却不是此并发症的唯一因素〔1〕;胰岛素抵抗所导致的高胰岛素血症是血管硬化的独立高危因子 ,胰岛素能直接加强血管平滑肌细胞(ＶＳＭＣ)增生 ,参与血管硬化的病理过程。为此 ,本研究观察胰岛素对血管平滑肌细胞ＴＧＦβ1和Ⅰ、Ⅱ型ＴＧＦβ受体表达的影响。一、材料和方法1.材料 :实验动物 :ＳＨＲ和ＷＫＹ大鼠 (购自上海第二医科大学附属瑞金医院上海市高血压研究所 ) ,雄性 ,7～ 10周龄…     

红景天甙对大鼠血管平滑肌细胞增殖和TGF-β表达的影响

以往的研究发现红景天(多年生草本或亚灌木植物)有明显的抗缺氧、延续机体衰老、防治老年疾病等功能，其公认的主要有效成分为红景天甙。本实验主要研究红景天甙对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响，并初步探讨其机制，为心血管疾病的临床治疗提供新的思路。     

益肾活血胶囊对同型半胱氨酸致兔动脉粥样硬化血管细胞黏附分子-1表达的影响

目的 探讨益肾活血胶囊对同型半胱氨酸(Hcy)所致兔动脉粥样硬化(AS)血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)基因与蛋白表达的影响.方法 40只新西兰兔,随机分为正常组、模型组、益肾活血胶囊小剂量组、益肾活血胶囊大剂量组及西药(叶酸、维生素B6、维生素B12)组,除正常组外,其他组建立高Hcy血症及AS动物模型,然后分别给予相应的药物治疗.高效液相色谱技术检测血浆Hcy浓度,HE染色观察血管形态学变化,实时定量PCR检测动脉壁VCAM-1基因表达,Western印迹法检测VCAM-1蛋白表达.结果 益肾活血胶囊和叶酸等维生素均可明显降低血浆Hcy水平,抑制血管内膜增厚,下调腹主动脉VCAM-1基因和蛋白表达.益肾活血胶囊大剂量组疗效明显优于小剂量组和西药组.结论 益肾活血胶囊可明显降低血浆Hcy水平,抑制Hcy诱导的AS形成,其机制可能与下调VCAM-1表达有关.     

转化生长因子β1对血管平滑肌细胞行为的影响

血管平滑肌细胞是参与高血压,动脉粥样硬化,冠状动脉介入术后再狭窄,及移植相关的血管病变发生发展的主要细胞成分之一,因此对其增殖、分化、迁移、分泌细胞外基质等生物学行为的调控显得尤为重要,实验研究显示转化生长因子β1是其最重要的调节因子之一,本文将以转化生长因子β1对血管平滑肌细胞这些生物学行为的调控作一综述。     

新型KATP开放剂埃他卡林对原代培养人肺动脉平滑肌细胞TGF-β1、PCNA mRNA表达的影响

目的 观察新型ATP敏感性钾(KAPT)开放剂埃他卡林(IPT)对原代培养人肺动脉平滑肌细胞转化生长因子β1(TGF-β1)和增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA表达的影响.方法 分离3～4级人肺小动脉,按照组织贴块法原代培养人肺动脉平滑肌细胞,用内皮素1(ET-1)诱导细胞增殖,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RQ-RT-PCR)技术检测TGF-β1和PCNA目的 mRNA表达变化.结果 ET-1(10 nmol/L)诱导人肺动脉平滑肌细胞增殖的同时,TGF-β1、PCNA mRNA 表达均增加;在相同条件下,加入ET-1(10 nmol/L)的同时,分别在培养基中加入IPT 10-7、10-6、10-5 mol/L 作用 24 h 后,IPT呈浓度依赖性地抑制TGF-β1、PCNA mRNA表达;加入ET-1(10 nmol/L)、IPT(10-5 mol/L)前30 min,预先加入特异性KATP拮抗剂格列本(Glibenclimide,GLI)10-7、10-6、10-5 mol/L,GLI呈浓度依赖性地拮抗IPT的抑制作用.结论 IPT通过开放KATP通道,浓度依赖性地抑制原代培养人肺动脉平滑肌细胞TGF-β1、PCNA mRNA表达,抑制人肺动脉平滑肌细胞增殖,有望今后成为治疗缺氧性肺动脉高压(HPH)、肺血管重构的药物.     

转化生长因子-β_1对大鼠血管平滑肌细胞产生基质金属蛋白酶9作用的实验研究

目的:研究转化生长因子(TGF)-β1对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)产生基质金属蛋白酶(MMP)的调控作用。方法:原代培养大鼠动脉血管平滑肌细胞,用不同浓度(0、1、5、10 ng/m L)的TGF-β1干预血管平滑肌细胞,分别在干预后0、2、4、6、16、24 h裂解细胞提取蛋白和培养基上清,Western Blot检测其中MMP2和MMP9蛋白质的表达。结果:MMP9蛋白质表达随TGF-β1浓度增加而增加,并且随着干预时间的延长也增加,其中10 ng/m L TGF-β1刺激24 h后升高最明显(P0.05),MMP2蛋白质表达却无明显改变。结论:10 ng/m L的TGF-β1刺激血管平滑肌细胞24 h后能产生大量的MMP9。     

氯沙坦对转化生长因子β受体在糖尿病鼠血管平滑肌细胞表达的影响

转化生长因子β(TGF-β)不仅促进细胞增殖、肥大,更重要的是促进细胞外基质(ECM)的积聚和成分改变,这些是糖尿病血管病变的主要病理特征。TGF-β的作用由特异性受体(TβR)介导。有研究证实,血管紧张素Ⅱ(Aug Ⅱ)受体AT_1拮抗剂氯沙坦可使糖尿病鼠微血管基膜增厚减轻、间质胶原减少,对其确切的作用机制报道很少。为此,我们用糖尿病鼠模型观察了氯沙坦对TβR和纤连蛋白(FN)mRNA表达的影响,以探讨其防治糖尿病血管病变的作用机理。     

过氧化体增殖物激活型受体γ抑制转化生长因子β1诱导的血管平滑肌细胞钙化

目的探讨过氧化体增殖物激活型受体γ(PPARγ)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)钙化的作用。方法体外培养大鼠主动脉VSMC,先分为正常对照组、不同浓度TGF-β1组(1、2、4、8μg/L),观察TGF-β1对VSMC的影响;再分为正常对照组、钙化组(TGF-β1 4μg/L)、罗格列酮(RSG,20μmol/L)组、钙化+罗格列酮(RSG,20μmol/L)组,观察PPARγ激动剂罗格列酮对VSMC钙化后的作用,对细胞进行钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性检测,茜素红S染色检测钙化结节的形成情况,Western blot检测VSMC标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PPARγ、成骨样细胞标志物Runt相关转录因子2(Runx2)的蛋白表达情况。结果与正常对照组相比,TGF-β1处理后的VSMC钙盐沉积和ALP活性明显升高(P0.05),且TGF-β1浓度为4μg/L时作用最明显,成骨样细胞标志物Runx2表达明显升高(P0.05),同时平滑肌细胞标志物α-SMA表达减少(P0.05)。而加入罗格列酮后,VSMC的钙盐沉积和ALP活性明显降低(P0.05),α-SMA、PPARγ表达明显上升(P0.05),相反,Runx2的表达则明显受到抑制(P0.05)。结论 TGF-β1可以诱导VSMC向成骨样细胞分化和钙化,而PPARγ激动剂罗格列酮可以抑制TGF-β1诱导下VSMC钙化的发生。     

氧化低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞弗林蛋白酶表达的影响

目的:研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)弗林蛋白酶(furin)表达的影响,初步探讨ox-LDL影响活性转化生长因子-β(TGF-β)产生的作用机制。方法:本实验分为5组:对照组,ox-LDL 20、40、80、100mg/L组;体外培养大鼠VSMCs,按实验方案给予不同浓度ox-LDL作用24h后,采用实时定量PCR和western blot方法检测各组细胞furin的mRNA及蛋白表达量,用荧光分析法检测各组furin的活性。结果:与对照组比较,ox-LDL 20、40mg/L组的furin蛋白表达量升高[(0.628±0.013),(0.991±0.009),(1.078±0.033),P<0.01],而ox-LDL 80、100mg/L组furin的蛋白表达量下降[(0.584±0.017),(0.559±0.021),P<0.05]。结论:低浓度ox-LDL(20、40mg/L)促进大鼠VSMCs中furin的表达,而高浓度ox-LDL(80、100mg/L)则抑制furin的表达;ox-LDL可能通过furin途径影响活性TGF-β的产生,从而影响斑块的稳定性。     

白细胞介素-1β上行调节兔血管平滑肌细胞极低密度脂蛋白受体mRNA的表达

为了研究血管平滑肌细胞是否表达极低密度脂蛋白受体ｍＲＮＡ，采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析法检测培养兔主动脉平滑肌细胞表达极低密度脂蛋白受体ｍＲＮＡ的情况。结果发现，培养兔主动脉平滑肌细胞可以表达极低密度脂蛋白受体ｍＲＮＡ；而且，细胞因子白细胞介素－１β能使表达增强约２倍。提示极低密度脂蛋白受体有可能参与动脉平滑肌细胞源性泡沫细胞；白细胞介素－１β上行调节平滑肌细胞表达极低密度脂蛋白受体ｍＲＮＡ     

血小板源生长因子对大鼠血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的影响

目的本实验研究血小板源生长因子对血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的影响以及对血管平滑肌细胞与单核细胞粘附的作用。方法利用基因芯片和RT-PCR技术检测鼠主动脉血管平滑肌细胞经血小板源生长因子处理0min、20min、6h后血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的mRNA表达变化;细胞粘附实验观察血管平滑肌细胞经血小板源生长因子分别处理0min、20min、6h后与单核细胞粘附情况。结果血小板源生长因子对鼠血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的表达有显著的诱导作用,其诱导作用在20min即已出现(P<0.05),6h时明显增强(P<0.01)。细胞粘附实验显示随着血小板源生长因子的作用时间的延长,血管平滑肌细胞与单核细胞的粘附率增高,血小板源生长因子处理20min和6h后粘附率是对照组的1.92倍和3.04倍(P<0.05)。结论血小板源生长因子明显诱导血管平滑肌细胞中血管平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1的表达,促进血管平滑肌细胞与单核细胞的粘附,从而参与了损伤早期,白细胞向内膜下迁移的炎症反应。     

SHR血管平滑肌PDGF-A链,TGFβ1及其受体mRNA表达的研究

目的:在自发型高血压和正常血压的Wistar-kyoto大鼠血管壁平滑肌细胞(SHR-VSMC和WKY-VSMC),比较几种内源性生长因子及它们受体的表达水平,从VSMC自分泌和旁分泌产生内源性生长因子的角度,阐述SHR-VSMC和WKY-VSMC的差异.方法:以定量RT-PCR技术,在二株系VSMC,检测长型PDGF-A链,TGFβ1及它的受体mRNA的表达水平.结果:(1)在SHR-VSMC,长型PDGF-A链表达水平明显高于在WKY-VSMC的表达水平(P＜0.01);(2)TGFβ1及其Ⅰ型受体在SHR-VSMC表达水平亦明显高于在WKY-VSMC的表达水平(P＜0.05);(3)在二株系VSMC,TGFβ1Ⅱ型受体的表达水平无明显差异.结论:在二株系VSMC,长型PDGF-A链、TGFβ1和Ⅰ型TGFβ1受体表达水平明显不同.在SHR-VSMC,高水平表达的生长因子及受体,可能参与SHR-VSMC过度增殖的调节.     

Smad4、TGF-β1、TGF-βR1表达与乳腺癌细胞恶性程度的相关性

目的探讨乳腺癌细胞株与乳腺癌临床标本中Smad4及转化生长因子(TGF)-β1、TGF-β受体(R)1的蛋白表达水平与乳腺癌发生、发展、转移等生物学行为及预后的相关性。方法利用免疫组织化学检测30例乳腺癌临床标本Smad4和TGF-β1、TGF-βR1蛋白表达,免疫细胞化学检测MCF-7、T47D、SKBR-3三种乳腺癌细胞的TGF-β1、TGF-βR1和Smad4蛋白表达,Western印迹检测乳腺癌TGF-βR1和Smad4蛋白表达,分析三种乳腺癌细胞TGF-β1、TGF-βR1和Smad4蛋白表达情况。结果免疫组化法结果显示,Smad4和TGF-βR1的表达水平在低度恶性的MCF-7细胞中明显高于高度恶性的SKBR-3细胞,中度恶性的T47D细胞介于二者之间。病理类型非浸润性癌组,TGF-β1、TGF-βR1及Smad4的表达水平明显高于恶性程度高的浸润性癌患者组,早期浸润性癌组介于二者之间。Western印迹显示,恶性程度低的MCF-7细胞,其TGF-βR1和Smad4的蛋白含量明显高于恶性程度高度的SKBR-3细胞。恶性程度低的患者TGF-βR1和Smad4的蛋白含量明显高于恶性程度高的患者。结论 TGF-β/Smads信号传导通路活性与乳腺癌的恶性程度呈负相关,Smad4、TGF-β1、TGF-βR1可能在乳腺癌演变中起抑制作用。     

白细胞介素-1β上行调节兔血管平滑肌细胞极低密度脂蛋白受体mRNA的表达

为了研究血管平滑肌细胞是否表达极低密度脂蛋白受体mRNA，采用Northernblot分析法检测培养兔主动脉平滑肌细胞表达极低密度脂蛋白受体mR-NA的情况。结果发现，培养兔主动脉平滑肌细胞可以表达极低密度脂蛋白受体mRNA；而且．细胞因子白细胞介素-1β能使表达增强约2倍。提示极低密度脂蛋白受体有可能参与动脉平滑肌细胞源性泡沫细胞；白细胞介素-1β上行调节平滑肌细胞表达极低密度脂蛋白受体mRNA可能是其参与动脉粥样硬化斑块形成途径之一。     

转化生长因子β1对不同阶段支气管哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞外信号调节激酶通道的影响

目的 本文旨在探讨转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)对不同阶段(急性和慢性)支气管哮喘(简称哮喘)大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMC)上细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)1/2 mRNA、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达水平的影响.方法 建立2周、6周哮喘大鼠模型,用TGF-β1和ERK的特异性抑制剂PD98059干预哮喘大鼠ASMC的培养.用RT-PCR检测不同阶段哮喘大鼠模型ASMC上ERK1/2 mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测p-ERK1/2蛋白的表达及定位.结果 与正常对照组ASMC比较,2周、6周哮喘组ERK mRNA、ERK1/2蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达量以及ERK活化率显著增高.经PD98059干预之后,2周、6周哮喘组ASMC的ERKmRNA、p-ERK1/2蛋白的表达量以及ERK活化率均显著降低.经TGF-β1干预后,2周、6周哮喘组ASMC的ERK mRNA、p-ERK1/2蛋白的表达量较各自哮喘组显著增高,而这一作用可以被PD98059部分抑制.但以上结果 2周和6周哮喘模型组之间差异无统计学意义.结论 TGF-β1可上调不同阶段哮喘大鼠ASMC上ERK1/2 mRNA及p-ERK1/2表达.在哮喘的不同阶段,TGF-β1可能持续通过促进ERK信号转导通道的活性对ASMC的增殖进行调控.     

辛伐他汀和西拉普利对人肾小球系膜细胞TGF-β1和IGF-Ⅰ表达的影响

目的 探讨辛伐他汀和西拉普利对人肾小球系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子Ⅰ(ICF-Ⅰ)表达的影响。方法 体外培养人胎肾小球系膜细胞，在低糖(5．6mmol／L)和高糖(30mmol／L)环境下，加入辛伐他汀(10μmol／L)、西拉普利(10μmol／L)及辛伐他汀 西拉普利培养48h后，分别测定细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原(酶免法和放免法)浓度及系膜细胞TGF-β1和IGF-Ⅰ mRNA表达水平(RT-PCR法)。结果 与低糖比较，高糖环境中系膜细胞过度增殖，TGF-β1和IGF-Ⅰ mRNA表达明显增高，细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原含量也显著升高。加入辛伐他汀和西拉普利后，高糖环境下系膜细胞TGF-β1和ICF-Ⅰ mRNA的表达明显降低，细胞上清液中TGF-β1和基质蛋白含量也亦显著下降。合用辛伐他汀和西拉普利对系膜细胞TGF-β1表达的抑制作用较单独用上述两药更强。结论 高糖可促进系膜细胞TGF-β1和IGF-Ⅰ的表达，辛伐他汀和西拉普利可一定程度逆转高糖环境中系膜细胞TGF-β1和IGF-Ⅰ的过度表达，并降低细胞上清液中TGF-β1和基质蛋白的含量。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织血管内皮生长因子表达的影响

目的研究益肾胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠模型肾组织血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,探讨益肾胶囊对DN的保护机制。方法将体重为200g～250g正常Wistar健康雄性大鼠24只随机分为正常对照组、模型组、益肾胶囊治疗组。模型组和治疗组分别用STZ诱导建立DN大鼠模型,成模2d后治疗组每天给予益肾胶囊625mg/（kg.d）灌胃,模型组和正常对照组每天仅给予等量生理盐水灌胃。监测血糖、体重、24h尿蛋白的变化,测定血生化,采用免疫组织化学方法 ,观察大鼠肾小球VEGF的分布及其强度变化。结果 2周、4周、8周末,模型组大鼠的体重明显低于对照组大鼠;治疗组大鼠的体重高于模型组大鼠,而低于对照组大鼠（P〈0.05）。模型组及治疗组大鼠的血糖、24h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均高于对照组大鼠（P〈0.05）。正常对照组大鼠VEGF主要分布于肾小球脏层上皮细胞,治疗组大鼠肾皮质VEGF表达比未治疗组明显减弱。结论模型组大鼠肾脏VEGF的表达较正常组大鼠表达明显增强,提示VEGF与DN的发生发展有关。益肾胶囊可抑制DN大鼠肾脏VEGF的过度表达。     

胰岛素样生长因子-1对兔动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对兔动脉粥样硬化血管壁平滑肌细胞（VSMC）凋亡的影响。方法将24只大白兔随机分为正常组、模型组、IGF-1组及阳性对照（辛伐他汀）组。通过高脂饲料喂养及腹主动脉球囊拉伤建立兔动脉粥样硬化模型,12周后腹腔静脉取血并检测血脂,取腹主动脉并用Tunel法检测血管壁平滑肌凋亡细胞。结果与正常组相比,模型组血脂水平显著升高（P〈0.05）;与模型组相比,辛伐他汀组血脂水平显著降低（P〈0.05）;与模型组相比,IGF-1组Tunel阳性细胞数明显减少、辛伐他汀组Tunel阳性细胞数明显增加（P均〈0.05）。结论 IGF-1对动脉粥样硬化有一定的防治作用,并能在动脉粥样硬化形成晚期维持斑块稳定性,其机制可能与减少血管平滑肌细胞凋亡有关。     

多巴胺D1类受体对血管平滑肌细胞胰岛素样生长因子1受体表达的影响

目的 观察多巴胺D1类受体对血管平滑肌细胞胰岛素样生长因子1(IGF-1)受体的影响.方法 以A10细胞为研究对象,免疫印迹观察刺激D1类受体对IGF-1受体表达的影响,并初步探讨D1类受体对IGF-1受体影响的机制.结果 刺激D1类受体可降低IGF-1受体的表达,D1类受体阻断剂可完全阻断D1类受体激动剂Fenoldopam对IGF-1受体的影响,免疫印迹显示运用蛋白激酶C(PKC)和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)阻断剂后,IGF-1受体表达恢复,提示PKC和MAPK途径可能参与了D1类受体对血管平滑肌细胞IGF-1受体的影响过程,在Wistar-Kyoto(WKY)大鼠和自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞中D1类受体激动剂Fenoldopam对IGF-1受体表达具有抑制作用,但该抑制作用在SHR细胞明显低于WKY细胞.结论 D1类受体对血管平滑肌细胞IGF-1受体表达具有抑制作用,该作用可能通过PKC和MAPK途径发挥一系列生理效应.