中华按蚊幼虫肠壁膜泡的制备及其鼠抗血清对幼虫的作用

目的：搞清Ｂ．ｓ杀虫蛋白对蚊幼虫肠细胞膜的作用机理，从而改进杀虫蛋白活性。方法：差速离心制备肠细胞膜泡，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析其蛋白组分；测试其鼠抗血清对蚊幼虫的效应。结果：膜制备物蛋白组分分析显示了膜泡的纯度，而抗血清则对Ⅰ龄幼虫有明显的致死效应；日龄越小，致死率越高。结论：蚊幼虫肠细胞膜泡抗体组分与肠壁具有结合作用     

孕鼠香烟烟雾染毒对胎鼠视杯和视泡上皮细胞凋亡的影响

[目的]观察孕鼠香烟烟雾染毒致胎鼠眼畸形的作用及对视杯、视泡上皮细胞和问充质细胞凋亡的影响.[方法]将怀孕的金黄地鼠随机分为吸烟组和对照组,吸烟组共3组(每组10只动物)分别于孕第6、7、8天开始用香烟烟雾染毒(即A、B、C组);对照组(共15只动物)除无烟熏外,其他条件同吸烟组.分别于染毒第3天时,在体视显微镜和光镜下观察各组鼠胚的发育情况及眼畸形的形态学变化;采用原位末端标记法定量分析金黄地鼠胎鼠视杯、视泡上皮细胞及间充质细胞凋亡的变化.[结果]孕鼠香烟烟雾染毒对胚胎有显著致畸作用,吸烟组总畸形率为40.08%,眼畸形率为10.32%,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01),其中以孕7天开始染毒组畸形率最高(51.69%).吸烟组视杯、视泡上皮细胞及间充质细胞的凋亡细胞数明显高于对照组(P<0.05),且以孕7天开始染毒组凋亡细胞计数最高,为(29.1±2.1)个.组织学观察发现,吸烟组胎鼠视杯的发生明显迟干对照组.[结论]香烟烟雾染毒对胚胎有明显眼致畸作用;香烟烟雾可以诱导视杯、视泡上皮细胞及间充质细胞过度凋亡,导致视杯的发生明显延迟,这可能是香烟烟雾染毒致胚胎眼畸形发生的机制之一.     

鼠伤寒沙门氏菌yejE基因缺失对沙门氏菌囊泡结构完整性的影响

目的 沙门氏菌囊泡（Salmonella-containing vacuole, SCV）是沙门氏菌进入宿主细胞后产生的一种类似于吞噬体的结构。SCV结构完整性一旦被破坏,其内包裹的沙门氏菌将进入细胞质并通过MHC-I途径激活宿主CD8 + T细胞免疫应答。有研究表明沙门氏菌yejE基因能够影响宿主CD8 + T细胞免疫应答,但具体机制尚不明确。本研究将观察并计算yejE基因缺失后鼠伤寒沙门氏菌的SCV逃逸率,探讨沙门氏菌yejE基因是否通过改变SCV的结构稳定性,影响宿主的CD8 + T细胞免疫应答。方法 （1）采用Red同源重组技术或P22噬菌体转导技术,在减毒沙门氏菌TT-16（ΔclpP TT-1）的基础上构建缺失了sifA、yejE基因或二者同时缺失的减毒沙门氏菌,随后导入质粒pGEX-6P-1-sf-GFP,获得一系列能够在IPTG诱导下表达绿色荧光蛋白的减毒沙门氏菌;（2）用构建好的菌株分别感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,于感染后2h和6h进行免疫荧光染色;（3）采用激光共聚焦显微镜观察并计算各菌株的SCV逃逸率。结果 感染后2h和6h,鼠伤寒沙门氏菌yejE和sifA单缺失株的逃逸率均显著高于亲本株,且sifA与yejE双基因缺失株的逃逸率与yejE或sifA单缺失株的SCV逃逸率相比无显著差异性。结论 鼠伤寒沙门氏菌yejE基因能通过改变SCV的结构完整性,影响宿主CD8 + T细胞免疫应答;此外,sifA与yejE基因可能通过相同的途径影响SCV的结构完整性。     

ClpXP蛋白复合物对沙门氏菌囊泡结构稳定性的影响初探

目的 初探ClpXP蛋白复合物是否会对沙门氏菌囊泡(Salmonella-containing vacuole,SCV)结构稳定性产生影响.方法 (1)将表达绿色荧光蛋白的质粒(pGEX-6P-l-sf-GFP)通过电转化方式导人野生型鼠伤寒沙门氏菌TT-l(Wild-type)及敲除了clpP基因的鼠伤寒沙门氏菌TT...     

铅对孕鼠及其胎鼠肝微粒体药酶活性的影响

铅是一种不可降解的环境污染物质,在环境中可长期蓄积,可通过食物链、土壤、水和空气进入人体。近年来环境污染日益严重,人类铅摄入量及铅负荷不断升高,众多的研究表明,铅对人体的影响是全身性的,对神经、血液、消化、泌尿、生殖、心血管、免疫等系统均有毒性作用［１］,本文拟观察孕鼠接触不同剂量铅对孕鼠、胎鼠肝药酶活性的变化,以进一步研究铅对孕妇及胎儿肝药物代谢功能的影响。１　材料和方法１．１　药品和试剂ＮＡＤＰ、ＮＡＤＰＨ、细胞色素Ｃ还原酶、异柠檬酸、异柠檬酸脱氢酶、谷胱甘肽（ＧＳＨ）、１－Ｃｌ－２,４－二…     

实验教学中颗粒性抗原与可溶性抗原制备抗血清的方法及其应用

目的 比较颗粒性抗原与可溶性抗原制备抗血清的效价,寻求获取符合实验教学需要的高效价抗血清的较佳方法.方法 牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)作为可溶性抗原,伤寒H菌液作为颗粒性抗原,采用1周间隔的免疫程序,以BSA和伤寒杆菌H菌液免疫家兔,用对流免疫电泳和双向琼脂扩散试验、肥达试验检测并比较其血清抗体效价.结果 浓度为7×109个/ml伤寒杆菌H菌液免疫家兔后获取的伤寒H抗血清几何平均滴度(geometry mean titer,GMT)为1:9051.07,浓度为5mg/ml BSA免疫家兔后测得抗血清GMT分别为1:3.668和1:6.17.结论 颗粒性抗原与可溶性抗原1周间隔免疫程序制备的抗血清可获取符合实验教学的抗血清效价.     

乐果对雄性大鼠生殖系统及其胎鼠发育的影响

目的 为进一步观察长期摄入小剂量乐果对雄性大鼠生殖系统及其胎鼠发育的影响。方法 以12.50mg/Kg浓度的乐果灌喂断乳SD大鼠60天。结果 发现其血清睾酮(To)和间质细胞刺激素(LH)浓度明显降低(P<0.001和P<0.05);睾丸碱酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性明显抑制(P<0.05);睾丸部分曲精小管上皮层次有所减少,多为2层;上皮部分有变性;部分腔内成熟精子减少;胎鼠体重明显减小,并有短肢畸形和吸收胎。结论 长期摄入小剂量乐果对大鼠雄性生殖系统及其胎鼠发育有一定程度的危害。     

微生物降解法制备高钙混合液对胎鼠骨骼发育的影响

钙是人体不可缺少的重要的膳食因素,不仅婴幼儿需要,中老年人更为需要。但目前人类因钙摄入量普遍不足而影响健康质量的问题已广泛受到重视。1994年美国国家卫生研究等9个单位召开的钙最适摄入量的会议提出,11～24岁钙摄入量应提高至1200～1500mg/d,才能使成年时期骨密度达到较高峰值;绝经期骨钙摄入应保持在1000～1500mg/日才能不丢失或缓解钙的丢失。因此提倡改变饮食习惯及强化补钙来满足人体钙摄入要求。     

米非司酮对种植于鸡胚绒毛尿囊膜的人绒毛膜和蜕膜组织 …

为研究人子宫组织的出血现象，将米非司酮８＊１０＾－３Ｍ滴加到种植于鸡胚绒毛尿囊膜表面的人蜕膜和绒毛膜组织上进行培养观察。结果显示：米非司酮具有明显促进组织生长，抑制组织出血现象产生的作用。提出胚胚绒毛尿囊膜可做研究子宫组织出血的实验模型；米非司酮抑制出血的作用，可借鉴到临床用药物流产后出血副反应的防治。     

家蝇幼虫抗菌肽对K562细胞膜的质量浓度阈值作用

目的探讨家蝇3龄幼虫抗菌肽对K562细胞膜的作用。方法通过针刺感染大肠埃希菌诱导家蝇3龄幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心、固相萃取、反相高效液相色谱分离纯化家蝇3龄幼虫抗菌肽,采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法和光镜观察法筛选对K562有抑制作用的抗菌肽;用不同质量浓度的峰5、峰8处理K562细胞,采用台盼蓝拒染法测定细胞存活率和生长曲线的变化;用光学显微镜和荧光显微镜检测细胞膜形态的变化;用荧光分光光度计检测细胞膜荧光素的渗漏;用激光共聚焦显微镜观察细胞膜的损伤程度。结果低质量浓度(<50μg/ml)对细胞存活率无明显影响,细胞整体形态变化不大,细胞荧光素渗漏较少[(18.95±0.05)～(22.49±0.68)],细胞损伤甚微;高质量浓度(≥50μg/ml)使细胞存活率明显下降,细胞形态变化逐渐增大,细胞荧光素渗漏较多[(62.77±4.08)～(70.81±0.18)],甚至大分子荧光素DextranFITC可以通过。结论家蝇3龄幼虫抗菌肽对K562细胞膜的作用存在质量浓度阈值,低质量浓度时可引起膜通透性增加,高质量浓度时可引起细胞膜严重损伤。家蝇幼虫抗菌肽可能通过直接杀伤作用抑制K562细胞生长,其作用机制首先是通过对膜作用,然后可能进一步对膜作用从而使膜上孔洞不断扩大或者进入细胞后经过其他途径抑制K562细胞生长。     

藻酸盐抗体的制备及其对铜绿假单胞菌生物被膜的影响

目的探讨藻酸盐抗体的制备、检定和对院内常见致病菌铜绿假单胞菌生物被膜作用. 方法应用免疫方法制备藻酸盐抗血清;应用脾细胞-骨髓瘤细胞融合技术制备藻酸盐单克隆抗体;应用扫描电镜观察细菌生物被膜形态变化. 结果建立了两株稳定分泌高效价单克隆抗体细胞株;藻酸盐抗体可减少铜绿假单胞菌生物被膜藻酸盐. 结论藻酸盐抗体可中和细菌藻酸盐以防治铜绿假单胞菌生物被膜相关感染.     

超声波驱鼠器对鼠活动行为的影响及其应用探讨

目的了解超声波对鼠活动行为的影响,明确超声波驱鼠器对褐家鼠的现场驱避效果,探讨超声波驱鼠器在鼠类控制中的使用方法。方法用粉迹法调查鼠的活动性,以评价驱鼠器对鼠活动行为的影响,用粘鼠板与驱鼠器联合使用来探讨驱鼠器的更有效的使用方法。结果在不使用驱鼠器时,平均每只鼠在每个粉块上,每天的鼠足迹百分率在0.3%~1.4%,昆明小白鼠主要集中在房屋的边缘活动,当驱鼠器使用1-2d时,鼠的活动性无显著变化,第3天时鼠的活动性急剧增加,鼠足迹百分率最高达12.5%。在仅使用驱鼠器时,对野生褐家鼠的活动性没有显著影响,处理前后的粉块阳性率分别为(30.9±8.2)%和(36.0±11.4)%;在粘鼠板和驱鼠器同时使用时,与仅用粘鼠板的对照区相比,两次重复都有显著的驱鼠效果,在重复1中驱鼠器使用第8天后无鼠活动,重复2中在使用第19天后基本无鼠活动。结论超声波对鼠的活动行为有影响,超声波驱鼠器对外来褐家鼠的侵入有一定的驱避作用,驱鼠器和粘鼠板等鼠类防控措施联合使用,可以提高对褐家鼠的预防控制效果。     

葡萄糖酸锌对石英尘肺泡巨噬细胞膜脂质过氧化和抗氧化酶影响的研究

采用体外培养方法，观察了葡萄糖酸锌（ＺｎＧ）对染石英尘肺泡巨噬细胞膜脂质过氧化和抗氧化酶的影响。结果表明，葡萄糖酸锌能抑制因石英作用而升高的膜脂质过氧化，提高超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力。本文从膜毒理学角度研究了ＺｎＧ抗粉尘毒作用，为ＺｎＧＧ应用于尘肺防治提供实验依据。     

补肾安胎方对胚泡着床障碍小鼠子宫LIF及其受体表达的影响

目的:观察补肾安胎方对胚泡着床障碍小鼠子宫白血病抑制因子(Leukaemia inhibitory factor,LIF)及其受体(Leukaemia inhibitory factor receptor,LIFR)表达的影响。方法:将雌鼠随机分为未孕组、正常组、模型组、中药组,每组40只,在妊娠4、5、6天(Pd4、5、6)均取妊娠子宫-80℃保存。采用免疫荧光双标和免疫印迹法分别观察LIF及其受体的表达。结果:免疫印迹显示正常组和中药组Pd4LIF蛋白为表达高峰,高于模型组(P<0.01),此后下降;模型组LIF蛋白表达高峰延迟至Pd5,高于正常组和中药组(P<0.01),此后下降。免疫荧光双标显示正常组和中药组LIF及其受体Pd4荧光较强,LIF及其受体表达基本同步;Pd4模型组LIF及LIFR均有较少表达,但LIFR表达更弱,其范围及强度不如LIF广泛,二者表达强度不完全同步;Pd5为模型组LIF及LIFR表达高峰,此后表达强度降低。结论:补肾安胎方可能通过促进LIF及其受体的同步表达来促进胚泡着床。     

铅对大鼠海马及其突触体膜脂质流动性的影响

目的　通过检测染铅大鼠海马铅含量及其突触体膜脂质流动性变化 ,探讨铅对学习记忆功能影响的机制。方法　Wistar大鼠饮用含 2 g/L 的醋酸铅 (PbAc)的水溶液 ,染铅 3个月后 ,分别采用原子吸收法和荧光偏振分光光度法测定血清、海马中铅含量和海马突触体膜脂质流动性。结果　与对照组比较 ,染铅组大鼠血清和海马中铅含量明显升高 (P <0 0 5 ) ,其海马突触体膜脂质流动性降低 (P <0 0 5 )。结论　铅对大鼠海马突触体膜脂质流动性的影响可能与铅干扰脑的学习记忆功能有关     

选择性头部亚低温疗法联合鼠神经生长因子治疗新生儿缺氧缺血性脑病的疗效及其对氧化应激水平和炎症因子表达的影响

目的观察选择性头部亚低温疗法联合鼠神经生长因子治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的疗效及其对氧化应激水平和炎症因子表达的影响。方法采用随机数字表法将108例HIE患儿分为观察组和对照组,每组各54例。对照组患儿给予降颅压、抗惊厥等常规治疗,同时给予选择性头部亚低温疗法。观察组在对照组治疗基础上给予鼠神经生长因子30μg,肌肉注射,1次/d,连续应用2周为1个疗程。观察两组患儿临床症状改善情况、行为神经评分(NBNA)、心理运动发育指数(PDI)和智力发育指数(MDI)、氧化应激指标、炎性细胞因子及神经相关因子水平变化,观察不良反应发生情况。结果观察组患儿意识、反射、肌张力、惊厥等临床症状的改善时间显著短于对照组(P0.05)。经治疗后2周,两组患儿NBNA评分、MDI指数及PDI指数均较治疗前显著提高(P0.05),且治疗后观察组各项评分显著高于对照组(P0.05)。两组患儿超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平均较治疗前显著增高,丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平均显著降低(P0.05)。其中,观察组治疗后SOD和GSH-Px水平显著高于对照组,MDA和NO水平均显著低于对照组治疗后(P0.05)。治疗后2周,两组患儿各项炎性细胞因子水平均较治疗前显著降低(P0.05)。且观察组治疗后各项炎性细胞因子水平显著低于对照组治疗后(P0.05)。两组患儿神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平较治疗前显著降低(P0.05)。观察组治疗后NSE水平显著低于对照组治疗后(P0.05)。观察组神经营养因子(NTF)水平较治疗前显著增高(P0.05)。对照组NTF水平较治疗前略增高(P0.05)。两组患儿治疗过程中均无严重不良反应发生。结论选择性头部亚低温疗法联合鼠神经生长因子治疗HIE的疗效确切,可显著改善患儿临床症状,降低脑组织氧化应激水平,减轻神经炎性损伤,优于单纯选择性头部亚低温疗法。     

肠内营养对艾滋病病人细胞凋亡膜表面分子及其配体影响的研究

目的:应用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附(ELISA)实验,研究EN对艾滋病(AIDS)病人细胞凋亡膜表面分子及其配体(FAS/FASL)的影响. 方法:检测30例AIDS病人服用EN液前和服用4周后FAS/FASL的指标变化,分析AIDS病人肠道功能的变化情况. 结果:AIDS病人应用EN治疗4周后FAS/FASL明显降低,与EN前比有显著性差异(P＜0.05). 结论:EN治疗对AIDS病人的FAS/FASL具有调节作用.     

hSCGF-α穿膜肽的构建及其对hUCMSCs增殖作用的影响

目的:构建hSCGF-α穿膜肽(TAT-SCGF),研究其对人脐带间充质干细胞的增殖作用。方法:采用基因工程技术将hSCGF-α基因重组插入pET-28a(+)质粒DNA,构建TAT-SCGF-28a重组DNA,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功高效表达,包涵体纯化后,通过实验比较hSCGF-α及hSCGF-α穿膜肽(TAT-SCGF)对人脐带间充质干细胞的增殖刺激作用。结果与结论:成功构建TAT-SCGF-28a重组DNA;纯化的蛋白纯度达90%以上;TAT-SCGF较不具有穿膜功能的SCGF对人脐带间充质干细胞有更强的增殖效果。     

ω-3PUFA及其诱导的外源性跨膜型TNFα对肿瘤细胞生长的影响

目的:探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)及其诱导的外源性跨膜型TNFα对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:将ω-3PUFA可调控的跨膜型TNFα真核表达载体转导入HL-60和MCF-7细胞,免疫荧光细胞化学方法检测ω-3PUFA对转染细胞外源基因表达的调控,生长曲线、流式细胞和DNA梯形带分析检测ω-3PUFA对转染细胞增殖能力和凋亡的影响。结果:在6.0×10-5mol/Lω-3PUFA诱导下转染细胞外源性跨膜型TNFα表达增加。HL-60和MCF-7细胞经6.0×10-5mol/Lω-3PUFA处理后增殖能力减弱,但只有HL-60细胞周期阻滞于G0/G1期及形成DNA梯形带。经ω-3PUFA处理后,以上变化在HL-60和MCF-7转染细胞中均更为显著。结论:ω-3PUFA诱导的外源性跨膜型TNFα基因产物可以增强ω-3多不饱和脂肪酸的抗肿瘤能力,而诱导细胞凋亡可能是其中重要机制之一。     

纤维粘连蛋白酶切片段的制备及其对大白鼠血浆中冷凝蛋白形…

冷凝蛋白是机体血浆经低温致冷后形成的大分子冷不溶性蛋白它在机体组织冷损伤起着一定的作用。ＣＩＰ的形成与纤维粘连蛋白有关。本文观察到猪血浆Ｆｎ的胰蛋白酶酶切片段混合物在５×１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ浓度时，能明显抑制新鲜大白鼠血浆中ＣＩＰ的形成，血浆中ＣＩＰ的形成量仅为对照组血浆组的１０％，推测Ｆｎ分子上可能可能有相应的结构参与了ＣＩＰ的形成。