干细胞表面抗原AC133研究进展

AC133抗原是最近干细胞研究领域的热点。本文从基因及蛋白结构、转录调控、抗原表达、生物功能以及应用前景等方面进行综述。     

AC133-2分子的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建

目的克隆人AC133—2全长基因，构建PGEZ—TerM—AC133—2逆转录病毒表达载体。方法采用分段克隆的方法，通过聚合链式反应从胎肝文库中克隆AC133—2，并构建AC133—2基因的逆转录病毒表达载体。结果成功克隆AC133—2全长基因并构建PGEZ-Term—AC133—2逆转录病毒表达载体。结论AC133—2全长基因克隆及构建逆转录病毒表达载体的成功，为构建AC133—2转基因细胞和制备抗人AC133—2单克隆抗体和研究AC133—2的生物学功能奠定了物质基础。     

人源性AC133-1基因在293T细胞中的真核表达

目的构建人源性肿瘤干细胞标记物AC133-1基因的真核表达载体pcDNA4/TO-AC133-1,并进行真核细胞的表达。方法通过RT-PCR从人急性髓性白血病（AML）骨髓样品中获得编码AC133-1基因的cDNA,定向克隆到真核表达载体pcDNA4/TO载体中,进行酶切鉴定并测序来验证目的基因的正确性。然后在293T细胞中进行转染48h后,采用细胞免疫荧光法和蛋白印迹法来检测AC133-1的表达。结果成功克隆AC133-1全长基因并构建pcDNA4/TO-AC133-1真核表达载体。结论人源性AC133-1的真核表达载体的克隆和构建的成功,为进一步制备其相关抗原、抗体及其生物学功能研究打下基础。     

不同细胞因子组合对脐带血AC133+细胞体外扩增效率的影响

目的探讨不同细胞因子组合对脐带血AC133+细胞体外扩增效率的影响.方法采用免疫荧光标记法,使用流式细胞仪测定新鲜分离的、不同培养条件下体外培养7、14d的脐带血AC133+细胞的扩增效率.结果新鲜脐带血AC133+细胞的比例为(0.93±0.2)%.短期液体扩增培养后,脐带血AC133+细胞的比例发生明显变化,其中在细胞因子SCF、FL和IL-3组合下,AC133+细胞的细胞数及扩增倍数与SCF、FL和IL-11组合相比较,差异非常显著(P＜0.01).结论在体外短期扩增培养中,早期效应细胞因子能显著上调脐带血AC133+细胞的比例;用SCF、FL和IL-3组合扩增脐带血造血干/祖细胞,能够获得更高的体外扩增效率.     

不同组合方式的细胞因子对人骨髓AC133+和CD34+细胞增殖的影响

目的：探讨细胞因子不同的组合方式对人骨髓CD34⁺富集细胞及AC133⁺富集细胞体外扩增潜能的影响。方法：常规富集人骨髓CD34⁺及AC133⁺细胞,应用本研究组设计并已经证实的细胞因子组合方式,对人骨髓CD34⁺及AC133⁺富集细胞进行体外对照培养,分别观察CD34⁺和AC133⁺富集细胞的扩增情况;应用甲基纤维素半固体培养法,观察不同组别培养7、14、21d CD34⁺和AC133⁺富集细胞的集落形成情况及细胞凋亡率。结果：AC133⁺细胞实验组在相同条件下细胞扩增倍数以及集落生成数目上均明显高于CD34⁺细胞实验组,相同条件下细胞凋亡率明显低于CD34⁺细胞实验组。结论：AC133⁺细胞包含有更多原始的造血干细胞,AC133作为造血干细胞抗原标记明显优于CD34。     

结肠癌组织中CD133抗原的原核表达、纯化和初步鉴定

目的:制备CD133特异性抗原用于筛选CD133单克隆抗体库,筛选产物能够与肿瘤表面的CD133抗原结合以达到靶向治疗的目的。方法:用PCR扩增CD133两段胞外区,分别将扩增的两段片段与PGEX4T-1(6*HIS)质粒结合,将连接产物转入BL21大肠杆菌中培养,IPTG诱导表达,镍柱纯化。通过ELISA等技术对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果:已成功表达出CD133两段胞外区,ELISA鉴定表明,纯化后的两段CD133胞外区抗原可特异性地结合CD133抗体。结论:筛选出的两段CD133胞外区抗原可用于CD133特异性抗体的筛选。     

CD133多克隆抗体制备及肿瘤干细胞鉴定

目的 制备肿瘤干细胞标志性蛋白CD133的多克隆抗体,为进一步研究肿瘤组织中肿瘤干细胞的生物学特性以及筛选肿瘤干细胞、制备肿瘤干细胞的小鼠模型奠定基础.方法 以人CD133蛋白细胞外膜表面肽段为抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,进而用其对肿瘤组织进行Western blot以及免疫组化染色.结果 Western b...     

CD133多克隆抗体制备及肿瘤干细胞鉴定

目的 制备肿瘤干细胞标志性蛋白CD133的多克隆抗体,为进一步研究肿瘤组织中肿瘤干细胞的生物学特性以及筛选肿瘤干细胞、制备肿瘤干细胞的小鼠模型奠定基础.方法 以人CD133蛋白细胞外膜表面肽段为抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,进而用其对肿瘤组织进行Western blot以及免疫组化染色.结果 Western blot证实该抗体可以识别过表达的myc-CD133以及内源性CD133,进一步免疫组化结果显示该抗体可以识别恶性胶质瘤中的肿瘤干细胞.结论 成功制备高效、特异的CD133多克隆抗体,该抗体可以用于肿瘤组织的免疫染色及肿瘤干细胞的筛选.     

生理氧环境下CD133分子在脑胶质瘤干细胞的表达

目的通过对生理氧环境下CD133表达的研究,判断脑胶质瘤中CD133mRNA、CD133蛋白以及糖基化CD133即AC133表达与胶质瘤干细胞表型的相关性。方法将CD133阳性胶质瘤干细胞由含20%O2的大气氧环境转换至含1.5%O2的生理氧环境下培养,持续3d。实时荧光定量PCR检测CD133mRNA水平的表达,Western blot检测CD133蛋白水平的表达,流式细胞学检测细胞表面及细胞内AC133的表达,ELISA检测培养液上清中AC133的表达。结果生理氧环境下CD133阳性胶质瘤干细胞NCH421k,NCH441及NCH440细胞表面AC133的表达相对于大气氧环境均显著上调(均P<0.05),其蛋白荧光表达强度分别由(2 381.07±649.76)、(20 787.90±2 200.24)、(406.99±167.99)增加至(7 685.06±1 170.69)、(30 499.43±9 013.76)、(2 692.38±516.67)(n=3)。AC133的上调是转录水平和翻译后水平调控共同作用的结果。结论 AC133相对于CD133mRNA和蛋白更敏感地标记了胶质瘤干细胞。     

CD133在肝癌中的研究进展

肝癌恶性程度高、病情进展快.肿瘤干细胞被认为可能是癌症产生、转移和复发的关键.CD133作为公认的肿瘤干细胞标志物,在多种肿瘤组织中表达.同样也有望成为肝癌干细胞的特异性标记物,成为肝癌治疗的新靶点.     

miR-133a在结肠癌组织中的表达

目的探讨miR-133a在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达差异,为研究其在结肠癌中的作用奠定基础。方法采用miRNA芯片分析结肠癌组织和癌旁正常组织中miR-133a的表达水平,并运用实时荧光定量PCR验证其结果。结果 miRNA表达芯片发现miR-133a在结肠癌组织中较癌旁正常组织表达下调,并被实时荧光定量PCR所证实。结论 miR-133a在结肠癌组织中表达下调,提示其可能作为抑癌因子参与结肠癌的发生发展。     

人脐带血中CD133~+细胞的分布情况以及与CD34的共表达

目的:了解CD133~+细胞在脐带血中的分布情况以及与CD34共表达的情况,为今后脐带血移植提供基础理论依据。方法:采用6%羟乙基淀粉沉降法和密度梯度离心法联合应用分离脐带血单个核细胞。采用流式细胞技术检测单个核细胞中的CD34~+/CD133~+百分率。结果:单个核细胞中CD133~+百分比为0.17%±0.08%,在CD34~+细胞中同时表达CD133的百分比为78.49%±7.53%。结论:CD133在人脐带血中主要表达与CD34~+细胞亚群上,且CD133~+细胞在单个核细胞中所占的比例较CD34~+细胞低。     

CD133~+细胞在结肠癌中的研究进展

<正>大量的研究表明实体瘤中有一小部分肿瘤细胞具有"干细胞"性质[1-2],即所谓的肿瘤起始细胞(tumor initiating cell)或者称肿瘤干细胞(cancerstem cell),其具有无限增殖和自我更新的潜能,能够驱动肿瘤的形成、生长、侵袭、转移,并具有抵抗放化疗的能力[3-4]。有研究证明在很多实体瘤中都存     

CD_(133)表达与脑肿瘤干细胞关系研究进展

已经证实多种血液和实体瘤组织中均存在肿瘤干细胞,常常通过特异的细胞表面分子来鉴定肿瘤干细胞。CD133,是一种干细胞标记,被广泛用于鉴定和分离脑肿瘤干细胞。然而,随着近几年越来越多的研究证实了CD133-脑肿瘤干细胞的存在,CD133作为脑肿瘤干细胞的分选标记出现争议。本文综述了CD133和脑肿瘤干细胞关系研究的进展。     

CD133+人脐血造血祖细胞的干性维持培养及鉴定

目的 从人脐带血中分选出CD133+造血祖细胞,并进行长时间干性维持培养.方法 通过免疫磁珠法分选出人脐带血中的CD133+造血祖细胞,经流式细胞仪检测免疫磁珠分选后的CD133+造血祖细胞.采用五种方法扩增培养该细胞,8周后,再通过细胞形态学、流式细胞术、免疫细胞化学和免疫荧光对细胞进行干性鉴定,探索最佳干性维持培养方法.结果 通过免疫磁珠法可以从人脐带血中分选出80％以上的CD133+造血祖细胞.采用优化的无血清培养基培养8周之后,CD133+造血祖细胞可得到有效扩增.而其他的培养基会使CD133+造血祖细胞由半悬浮细胞分化为梭形贴壁细胞,并且细胞状态欠佳.结论 利用免疫磁珠法分选出的CD133+造血祖细胞,采用优化的无血清培养基能够有效扩增该细胞,并可长期有效的维持其干性.     

CD133~+人脐血造血祖细胞的干性维持培养及鉴定

目的从人脐带血中分选出CD133+造血祖细胞,并进行长时间干性维持培养。方法通过免疫磁珠法分选出人脐带血中的CD133+造血祖细胞,经流式细胞仪检测免疫磁珠分选后的CD133+造血祖细胞。采用五种方法扩增培养该细胞,8周后,再通过细胞形态学、流式细胞术、免疫细胞化学和免疫荧光对细胞进行干性鉴定,探索最佳干性维持培养方法。结果通过免疫磁珠法可以从人脐带血中分选出80%以上的CD133+造血祖细胞。采用优化的无血清培养基培养8周之后,CD133+造血祖细胞可得到有效扩增。而其他的培养基会使CD133+造血祖细胞由半悬浮细胞分化为梭形贴壁细胞,并且细胞状态欠佳。结论利用免疫磁珠法分选出的CD133+造血祖细胞,采用优化的无血清培养基能够有效扩增该细胞,并可长期有效的维持其干性。     

microRNA-133a在复发性肝细胞癌中差异表达及其生物学功能研究

目的 探讨miR-133a在不同复发时间间隔复发性肝癌中的表达差异,并研究其对肝癌细胞侵袭、迁移、增殖等生物学功能的影响。方法 通过miRNA芯片筛选复发性肝细胞癌病例差异表达的miRNA;将miR-133a mimic及inhibitor转染入人肝癌细胞株SMMC-7721,通过CCK8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;利用生物信息学方法预测miR-133a的可能靶基因。结果 芯片结果发现miR-133a在早期复发肝癌样本中表达明显升高;转染miR-133a的mimic或inhibitor入肝癌细胞SMMC-7721后,细胞增殖能力无显著差异(P>0.05);转染mimic后,细胞的侵袭及迁移能力明显增强(P<0.05),而转染inhibitor后,细胞的侵袭及迁移能力明显减弱(P<0.05)。结论 miR-133a的表达在不同复发间隔的肝细胞癌组间有显著差异,在短期复发肿瘤组织内明显升高;miR-133a可以促进肿瘤细胞的侵袭和迁移,而对增殖无明显作用,提示miR-133a水平升高可能通过促进肿瘤细胞侵袭从而增加肝细胞癌肝内转移复发风险。     

CD133 Ki-67在胃癌的表达及临床病理意义

目的：研究在胃癌中CD133、Ki-67的表达及临床病理意义。方法选取在我院就诊的299例胃癌患者,检测免疫组化,分析CD133、Ki-67在胃癌中的表达及临床病理意义。结果 Ki-67与CD133随肿瘤增大、TNM分期递增,腹腔出现及远处转移呈现逐渐递增的趋势（P<0.05）;术后胃癌生存时间的预后因子为患者组织学类型、肿瘤大小、CD133、腹腔及远处转移及Ki-67等。结论在临床中联合检测CD133和Ki-67可作为评价胃癌肿瘤生物学行为、诊疗及预后的重要生物标志物。     

肿瘤干细胞标识CD_(133)研究进展及争议

目前已在多种肿瘤中发现了肿瘤干细胞(CSCs)存在的证据,CSCs在肿瘤的耐药、转移复发过程中发挥关键作用。CD_(133)已作为CSCs标识广泛用于CSCs的分析、分选。表达CD_(133)标识的肿瘤细胞具有CSCs的特征;同时CD_(133)作为某些CSCs的标识(如胃间质瘤、黑色素瘤等)不具特异性,且CD_(133)的表达受氧分压、微生物感染、培养条件、信号通路激活等多种因素影响。因此,通过各种手段分选出的CSCs,最好进行前期的体内外成瘤能力鉴定后再用于后续研究。     

CD133+与CD133-人原代胃癌细胞的差异表达基因及核心基因的筛选

目的 通过生物信息学方法筛选出CD133+与CD133-人原代胃癌细胞的差异表达基因(DEGs),寻找可能参与胃癌发生的关键基因.方法 根据人CD133+和CD133-人原代胃癌细胞的转录组数据,以|log2FC|≥1,P<0.05为标准筛选DEGs;用Metascape对DEGs进行基因本体论(GO)富集及京都基因和...