新疆Ⅱ、Ⅲ期宫颈癌患者外周血T细胞亚群、B细胞、NK细胞分析

目的 探讨T细胞亚群、B细胞、NK细胞的比例在新疆地区宫颈癌患者中的特点.方法 随机抽取临床Ⅱ、Ⅲ期宫颈癌患者140例,健康人群159例作为对照,运用流式细胞术检测外周血中T细胞亚群、B细胞、NK细胞的比例.结果 宫颈癌CD3+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞的比例均低于健康人群;CD4+T细胞、CD4+/CD8+T细胞比例高于健康人群,差异均有统计学意义(P＜0.05).两组间B细胞比较差异无统计学意义(P＞0.05).维吾尔族宫颈癌CD3+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞比例显著低于健康人群,CD4+T细胞、CD4+/CD8+T细胞比例显著高于健康人群;汉族宫颈癌仅CD3+T细胞比例显著低于健康人群;所有细胞比例在维、汉之间均无显著差异.HPV16+组与HPV16-组之间,CD4+T细胞、NK细胞比例比较差异有统计学意义(P＜0.05).T细胞亚群、B细胞、NK细胞在不同年龄、不同临床分期间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 新疆维吾尔族Ⅱ、Ⅲ期宫颈癌患者外周血T细胞亚群、NK细胞与健康人群存在差异,且可能与HPV表达有关.     

宫颈癌患者T淋巴细胞与NK细胞在放疗中变化的临床分析

通常来说,癌症患者的免疫功能会有所下降,常用的放射治疗又可以进一步损伤患者的免疫功能[1]。为研究T淋巴细胞与NK细胞在宫颈癌患者放疗前后变化及其临床意义,我们采用FCM技术,选择44例宫颈癌患者放射治疗前后,进行抽血检测其T淋巴细胞与NK细胞,现总结报告如下。     

T、B、NK淋巴细胞在宫颈癌及癌前病变中的表达及其意义

目的:探讨宫颈癌(ICC)及癌前病变(CIN)患者中的T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞的表达及其意义。方法:采用免疫组化SP法检测30例宫颈浸润癌(ICC)、85例宫颈上皮内瘤样病变(CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ)和21例正常宫颈上皮(NCE)LCT标本中T淋巴细胞(CD4、CD8)、B淋巴细胞(CD20)、NK细胞(CD57)的表达情况。结果:NCE、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及ICC组中CD4阳性率分别为33.3%、32.0%、23.3%、16.7%及16.7%,随病变进展CD4阳性率逐渐下降。NCE、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及ICC组中CD8阳性率分别为19.0%、16.0%、16.7%、23.3%及23.3%,随病变进展CD8阳性率逐渐升高。CD20阳性率各组间比较差异无显著性(P>0.05)。NCE、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及ICC组中CD57阳性率分别为23.8%、24.0%、23.3%、、16.7%,20.0%,随病变进展CD57阳性率下降。结论:宫颈癌及癌前病变患者局部以细胞免疫为主,随病变进展局部细胞免疫功能受到抑制。检测T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及NK细胞可用于宫颈癌及癌前病变的免疫监测。     

宫颈癌患者外周T淋巴细胞及NK细胞的检测及临床意义

目的探讨宫颈癌患者外周T淋巴细胞及NK细胞的检测及临床意义。方法 2009年1月～2010年6月诊治的宫颈癌患者268例,同期进行健康体检女性260例,进行检测外周T淋巴细胞及NK细胞。结果宫颈癌组各期（CD3＋、CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋、CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋、CD16＋CD56＋）检测与正常组对比有显著性差异（P〈0.05）。结论宫颈癌患者的病期越晚,免疫状态越差。在宫颈癌患者诊治中外周血T淋巴细胞NK细胞的检测可以对肿瘤的恶性程度、患者的预后有着良好的指导作用。     

中晚期肿瘤患者T淋巴细胞和NK细胞检测的临床意义

目的分析中晚期恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞表型和NK细胞测定值的特点、影响因素及其临床意义。方法采用流式细胞术（FCM）检测60例实体肿瘤患者和30例健康人外周血中T淋巴细胞表型和NK细胞的变化。结果中晚期恶性肿瘤患者CD3^＋、CIM^＋、NK16＋56^＋百分率下降，CD8^＋百分率升高，CIM^＋／CD8^＋比值降低，上述指标与健康人比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；患者性别、年龄、肿瘤的部位及病理类型不影响其表达，差异无统计学意义（P〉0．05），结论中晚期肿瘤患者存在细胞免疫功能下降，临床上应对中晚期肿瘤患者提供积极的免疫辅助治疗。     

肺癌患者T淋巴细胞亚群NK细胞活性检测的临床监控

观察肺癌者外周血Ｔ淋巴细胞亚群及ＮＫ细胞活性。；方法：采用流式细胞分析法检测肺癌者血中Ｔ淋巴细胞亚群及ＮＫ细胞活性，结论肺癌患者外周血Ｔ细胞亚群及ＮＫ细胞活性联合测定可反映机体免疫能状态。     

恶性肿瘤患者T细胞及NK细胞功能研究及临床意义

目的 :探讨恶性肿瘤患者免疫功能变化及意义。方法 :利用流式细胞仪 ,采用双色免疫荧光法测定 31例恶性肿瘤患者T淋巴细胞亚群及NK细胞水平。结果 :恶性肿瘤患者CD3 、CD4 明显低于对照组 (P <0 .0 1) ;CD 8较对照稍有升高 ,无统计学意义 ;CD4 /CD8 比值明显降低 (P <0 .0 1) ;NK细胞水平明显降低(P <0 .5 )。结论 :恶性肿瘤患者普遍存在免疫功能低下 ,建议在肿瘤治疗过程中定期观察其免疫功能状态 ,以及早发现肿瘤转移及复发     

高乌甲素对手术创伤患者T细胞亚群和NK细胞的影响

目的:探讨高乌甲素(lappaconitine,LA)对手术创伤患者T细胞亚群和NK细胞的影响,探讨其在临床上的应用价值。方法:选择行三类手术患者36例,按病种对等随机分3组,高乌甲素组(L)、曲马多组(T)、空白对照组(B),每组12例。在L组、T组诱导前30 min分别静脉滴注高乌甲素8 mg、曲马多100 mg,30 min滴注完。诱导后即开始在L组、T组连接电子输注泵,以高乌甲素0.28 mg/ml或曲马多8 mg/ml进行持续背景输注,手术清醒后再实施自控镇痛(PCA)。分别于麻醉用药前30 min、术毕即刻、术后24 h、术后48 h采取外周静脉血,测定NK细胞数、T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8、CD4/CD8)。结果:空白对照组术后24 h CD4/CD8降低,与高乌甲素组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:在手术创伤后,高乌甲素在一定程度上可稳定血浆CD3、CD4及NK细胞水平。     

IL-21及其受体在银屑病患者外周血和皮损组织中的表达及意义

目的探讨IL-21及其受体在斑块型银屑病患者外周血PBMC和皮损组织中的表达情况及临床意义。方法采用流式细胞仪检测斑块型银屑病58例患者及20例健康对照者外周血PBMC中IL-21、IL-21R的表达;采用实时定量RT-PCR（quantitative real-time, RT-PCR）法检测25例银屑病和15例正常人外周血PBMCs和皮肤组织中IL-21、IL-21R mRNA的表达情况;采用Western印迹法检测皮肤组织中IL-21和IL-21R的表达情况;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测PBMC培养上清液中IL-21的分泌水平。结果流式细胞仪检测发现银屑病患者PBMC中IL-21和IL-21R占CD4+T细胞的百分率明显增加（P<0.01）;Real-time PCR发现IL-21、IL-21R mRNA在银屑病患者的PBMC和皮肤组织中表达均较健康对照者增高（P<0.01,P<0.05）;Western印迹法显示IL-21和IL-21R蛋白在银屑病患者的皮损中表达增高（P<0.01）;ELISA检测发现培养上清中IL-21分泌水平增加（P<0.01）。结论斑块型银屑病患者PBMC和组织中IL-21和IL-21R的表达水平均较健康对照者升高,IL-21可能参与了银屑病的发病过程,并可能成为一个潜在的治疗靶点。     

miR-21对宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性的影响

目的：探讨miR-21与宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性之间的关系,阐明miR-21对细胞凋亡和自噬改变的可能作用机制。方法：人宫颈癌HeLa细胞分为假照组和4 Gy照射组,分别转染miR-21 NC（阴性对照）、miR-21 mimics、miR-21 inhibitor NC和miR-21 inhibitor。实时荧光定量PCR检测照射前和照射后miR-21的表达水平;集落形成实验观察miR-21对HeLa细胞辐射敏感性的影响;流式细胞术检测细胞凋亡和自噬细胞百分率;采用生物信息学方法预测miR-21的靶基因;荧光素酶报告基因分析验证miR-21与靶基因3′UTR的结合;Western blotting法检测相关蛋白beclin1表达水平。结果：与假照组比较,4 Gy照射组miR-21表达水平明显增加(P<0.05）;集落形成实验,与miR-21 NC组比较,miR-21 mimics组HeLa细胞辐射敏感性无明显变化(P>0.05）;与miR-21 inhihitor NC组比较,miR-21 inhibitor 组HeLa细胞辐射敏感性无明显变化(P>0.05）;与miR-21 NC+4 Gy组比较,miR-21 mimics+4 Gy组HeLa细胞凋亡率明显增加(P<0.05）;与miR-21 inhibitor NC组比较,miR-21 inhibitor组HeLa细胞凋亡率明显减少（P<0.05）。与miR-21 NC组比较,miR-21 mimics组自噬率升高（P<0.05）。与miR-21 NC+4 Gy组比较,miR-21 mimics+4 Gy组自噬率升高（P<0.05）;与miR-21 NC+4 Gy组比较,miR-21 mimics+4 Gy组beclin1蛋白表达水平增加（P<0.05）。
结论：发现了miR-21新的靶基因beclin1。过表达miR-21促进辐射诱导的凋亡和自噬,但对于宫颈癌HeLa细胞辐射敏感性无直接影响。
［关键词］ miR-21;宫颈肿瘤;HeLa细胞;辐射敏感性;细胞凋亡;自噬     

IL-21在慢性乙型肝炎中免疫调节作用的研究

目的探讨白细胞介素21(IL-21)在慢性乙型肝炎中的免疫调节作用。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测32例慢性乙型肝炎病人(病人组)和29例健康人(对照组)血清中IL-21水平。提取外周血单个核细胞后分别设为IL-21刺激组、IL-2刺激组和未刺激组,多色流式分析技术检测CD8+T细胞频率,胞内细胞因子染色技术检测CD8+IFN-γ+T细胞的频率。结果与对照组相比,病人组血清中IL-21浓度明显增高(t=2.75,P<0.01);与IL-2刺激组和未刺激组相比,IL-21刺激组CD8+T细胞频率及分泌IFN-γ水平显著升高(F=59.27、10.27,q=3.82~14.11,P<0.01)。结论 IL-21通过对CD8+T细胞的免疫调节效应参与慢性乙型肝炎病人体内病毒的清除,为临床治疗提供了新的靶标。     

人granzyme B基因在HeLa细胞中的表达

目的 构建携带人granzyme B基因的真核表达载体，并将其在HeLa细胞中的表达。方法 用反转录PCR获取人granzyme B全长cDNA序列，将其活性型序列克隆进pcD-NA3重组表达质粒。脂质体法转染HeLa细胞，间接免疫荧光检测目的蛋白表达，HE染色观察其对转染HeLa细胞形态的影响。结果工成功获得了野生型granzyme B cDNA，构建了编码活性型granzyme B的真核表达载体pcDNA3-G。转染HeLa细胞后观察到目的的蛋白表达，转染细胞形态发生变化，出现多核大细胞及固缩小细胞。结论 活性型granzyme B哺乳动物表达系统的建立，为进一步研究granzyme B的生物学效应奠定了基础。     

表达人IL-21的细胞因子诱导的杀伤细胞对裸鼠肝癌的治疗研究

目的 探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK细胞)作为人IL-21(hIL-21)基因的载体治疗肝癌的可行性.方法 构建携带hIL-21、CopGFP基因的质粒pDC759-hIL-21、pDC759-CopGFP并分别与pAd5、pAd5F35共转染HEK293细胞,包装表达hIL-21、CopGFP蛋白的Ad5、Ad5F35病毒.分离培养CIK细胞并绘制生长曲线,将携带CopGFP基因的Ad5、Ad5F35病毒以不同MOI(0、1、5、10、50、100、1 000)感染CIK细胞;将携带hIL-21基因的Ad5、Ad5F35病毒以不同MOI(0、1、5、10、20、50)感染SMMC-7721细胞48 h后检测hIL-21蛋白的表达;将携带hIL-21基因的Ad5F35病毒以不同MOI(0、1、5、10、50、100)感染CIK细胞48 h后检测hIL-21蛋白的表达.皮下注射SMMC-7721细胞致裸鼠成瘤,以表达hIL-21的CIK细胞治疗荷瘤裸鼠,评价疗效.结果 成功构建出用于Ad5、Ad5F35病毒的质粒;构建的质粒与pAd5、pAd5F35脂质体共转染HEK293细胞,包装出表达hIL-21及CopGFP蛋白的Ad5、Ad5F35病毒.携带CopGFP基因的Ad5、Ad5F35病毒对CIK细胞的感染实验表明Ad5F35腺病毒感染率更高;携带hIL-21基因的Ad5、Ad5F35病毒对SMMC-7721细胞的感染实验表明hIL-21表达量差异无统计学意义;携带hIL-21基因的Ad5F35病毒以50 MOI感染CIK细胞后hIL-21的表达量较高;动物实验统计分析说明表达hIL-21的CIK细胞对荷瘤裸鼠疗效较好.结论 hIL-21与CIK细胞在荷瘤小鼠体内联合发挥抗肿瘤作用.     

人截短型凋亡诱导因子对HeLa细胞的促凋亡作用

目的:观察人截短型凋亡诱导因子(AIF△1-400)对HeLa细胞的促凋亡作用.方法:在AIF△1-120基因克隆成功的基础上进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号,FAD结合结构域和NADH结合结构域(1-400位氨基酸)编码序列的AIF△1-400基因,将其克隆入pcDNA3和pIRES2-EGFP真核表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察,MTT检测等方法检测该基因在转染细胞中的表达及其对肿瘤细胞的促凋亡活性.结果:经酶切鉴定与测序证实,带有AIF△1-400的真核表达载体构建成功.瞬时转染后出现细胞形态变化,随转染时间的延长转染细胞数减少,荧光变弱.经间接免疫荧光检测可观察到截短型AIF蛋白位于细胞质中,部分已位于细胞核内.MTT法检测发现AIF△1-400转染后对细胞生长有明显的抑制作用.结论:AIF△1-400仍然具有诱导HeLa细胞凋亡的作用.     

雷帕霉素在顺铂诱导HeLa细胞凋亡中的协同作用

目的评价雷帕霉素联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞的协同作用。方法HeLa细胞经雷帕霉素和（或）顺铂处理后,以MTT法检测细胞的增殖情况。以流式细胞仪检测细胞凋亡。Westernblot检测p-4E-BP1和p-S6K1的表达情况。结果雷帕霉素联合顺铂抑制HeLa细胞的增殖,且随时间延长抑制作用越显著,与单独用药组相比差异有显著性。雷帕霉素可增强顺铂诱导的HeLa细胞凋亡。经雷帕霉素作用后的HeLa细胞表达p-4E-BP1和p-S6K1较对照组下降,两者联用明显下降。结论雷帕霉素和顺铂联用在抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡上具有协同作用。这预示着雷帕霉素和顺铂联用可能是一种合理的靶向治疗宫颈癌的方法。     

IL-13对肾小球系膜细胞的IL-12表达的影响

目的探讨白细胞介素13（IL-13）对肾小球系膜细胞分泌白细胞介素12（IL-12）的调节作用。方法用酶联免疫吸附（ELISA）法和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测系膜细胞的IL-12蛋白水平和IL-12p40 mRNA的表达。结果未受刺激的系膜细胞无IL-12mRNA的表达及其蛋白分泌。LPS诱导系膜细胞的IL-12p40mRNA的表达及其蛋白分泌。IL-13在1～100ng／ml的浓度范围内呈剂量依赖性抑制LPS诱导的系膜细胞的IL-12分泌及其mRNA的表达。结论LPS诱导系膜细胞分泌IL-12，而IL-13则抑制LPS诱导的系膜细胞IL-12的表达；IL-13可能通过抑制IL-12的产生，调整了体内Th1／Th2细胞因子的平衡，作为抗炎性细胞因子在肾小球肾炎发病机制中发挥一定的作用。     

人截短型凋亡诱导因子AIF△1-480的表达对HeLa细胞的促凋亡作用

目的: 观察人截短型AIF(AIF△1-480)基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用. 方法: 在人截短型AIF(AIF△1-120)基因克隆成功的基础上,进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号、FAD结合结构域和NADH结合结构域(1-480位氨基酸)编码序列的人截短型AIF(AIF△1-480)基因.将其克隆入pIRES2-EGFP绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察、电镜观察等方法,检测目的基因在转染细胞中的表达以及对转染细胞形态的影响.结果: 成功构建了人截短型AIF(AIF△1-480)基因的真核表达载体.转染细胞后,可检测到人截短型AIF(AIF△1-480)分子的表达.转染后48 h,可观察到表达人截短型AIF(AIF△1-480)分子的细胞呈现典型的凋亡特征.结论: 人截短型AIF(AIF△1-480)基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡.