益气温阳护卫法对哮喘大鼠IL-12/STAT4信号途径的影响

目的：探讨益气温阳护卫法对哮喘大鼠白细胞介素12／信号传导子及转录激活子4（IL-12／STAT4）信号途径的调节作用。方法：50只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、益气温阳护卫组、地塞米松组和卡介菌多糖核酸组，每组10只。采用TaqMan Real time PCR测定哮喘大鼠Th细胞IL-12和STAT4的mRNA表达变化。结果：哮喘模型组IL-12和STAT4的mRNA表达显著低于正常对照组（P〈0．01），益气温阳护卫组、地塞米松组和卡介菌多糖核酸组PBMC中IL-12和STAT4的mRNA表达显著高于哮喘模型组（P〈0．01）且与正常对照组IL-12和STAT4的mRNA表达相当。结论：益气温阳护卫法调节哮喘大鼠Th1／Th2平衡的作用可能是通过上调IL-12／STAT4信号途径的基因表达实现。     

益气温阳护卫法对哮喘大鼠GATA3_mRNA表达的影响

目的:探讨益气温阳护卫法对哮喘大鼠Th细胞异常分化相关分子基因表达影响。方法:50只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、益气温阳护卫组、地塞米松组和卡介菌多糖核酸组,每组10只。采用TaqMan Realtime PCR测定各组外周血单个核细胞(PBMC)中GATA3_mRNA的表达变化。结果:哮喘模型组PBMC中GATA3_mRNA表达显著高于正常对照组(P<0.01),益气温阳护卫组、地塞米松组和卡介菌多糖核酸组PBMC中GATA3_mRNA的表达显著低于哮喘模型组(P<0.01),且与正常对照组PBMC中GATA3_mRNA的表达相当。结论:益气温阳护卫法调节Th1/Th2细胞亚群趋于平衡可能是通过抑制哮喘大鼠GATA3_mRNA的表达实现,从而达到防治哮喘的作用。     

益气温阳护卫汤对哮喘大鼠IFN-γ_mRNA表达的影响

目的:探讨益气温阳护卫汤对哮喘大鼠IFN-γ_mRNA的影响。方法:40只清洁级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、益气温阳护卫组、地塞米松组,每组10只。采用SYBR Green Realtime PCR测定各组外周血单个核细胞(PBMC)中IFN-γ_mRNA的表达变化。结果:哮喘模型组PBMC中IFN-γ_mRNA表达显著低于正常对照组(P<0.01),益气温阳护卫组、地塞米松组PBMC中IFN-γ_mRNA的表达显著高于哮喘模型组(P<0.01),且与正常对照组PBMC中IFN-γ_mRNA的表达相当。结论:益气温阳护卫汤可以上调IFN-γ_mRNA的表达,益气温阳护卫汤防治哮喘的作用途径可能是通过该机制实现。     

益气温阳护卫汤对哮喘豚鼠BALF Th1、Th2细胞因子产生及调节的影响

目的观察益气温阳护卫汤对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)Th1、Th2细胞因子产生及调节影响.方法将豚鼠随机分为正常组、哮喘组、地塞米松组、玉屏风散组及益气温阳护卫汤低剂量组、中剂量组、高剂量组;于诱喘后24小时采集标本,并采用双抗体夹心ELISA法测定Th1细胞分泌的细胞因子干扰素-γ(IFN-γ);Th2细胞分泌的细胞因子白细胞介素-4,5(IL-4,IL-5);采用比色法测定各组BALF一氧化氮(NO)含量.结果益气温阳护卫汤各剂量组均能提高IFN-γ水平,降低IL-4,IL-5水平.中、高剂量组与地塞米松组IL-4水平无明显差异(P＞0.05);高剂量组IL-5水平虽低于地塞米松组,但无明显差异(P＞0.05),与其他各组均有差异(P＜0.05).高剂量组IFN-γ浓度与其他各组比较有显著性差异(P＜0.05),中、低剂量组、玉屏风散组与地塞米松组比较无显著性差异(P＞0.05),但这四组均高于哮喘组(P＜0.05).BALF NO水平,以高剂量组最低,但与中剂量组及地塞米松组比较无显著性差异(P＞0.05),三者与其他组比较有显著性差异(P＜0.05).结论益气温阳护卫汤可以促进Th1细胞分泌IFN-γ,抑制Th2细胞分泌IL-4,IL-5;调节Th1、 Th2细胞因子产生的可能有效途径之一,是通过降低NO水平实现.     

补肺平喘汤对支气管哮喘大鼠Th1/Th2失衡及JAK/STAT信号通路影响

目的观察补肺平喘汤对支气管哮喘大鼠Th1/Th2细胞因子失衡及JAK/STAT信号通路影响。方法将50只健康大鼠随机分为正常组,模型组,中药低剂量组,中药中剂量组,中药高剂量组5组,每组10只。除正常组外,其余各组给予卵白蛋白和氢氧化铝免疫反应制备支气管哮喘大鼠模型。造模4周后,中药低、中、高剂量组分别按照生药量10.8,21.6,32.4 g/kg进行灌胃给药,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,灌胃4周后,分离大鼠血清和肺组织,Elisa法检测大鼠血清IFN-γ、IL-4水平变化,RT-PCR法检测大鼠肺组织JAK/STAT信号通路变化。结果与正常组比较,模型组大鼠血清IL-4水平显著升高(P0.01),而IFN-γ呈显著下降趋势(P0.01),IL-4/IFN-γ提示免疫调节显著向Th2水平失衡,肺组织JAK1、STAT6 mRNA水平明显升高;与模型组比较,中药中、高剂量组大鼠血清IL-4水平显著降低(P0.05,P0.01),IFN-γ水平显著升高(P0.05),免疫调节明显向Th1方向调节(P0.01),肺组织JAK1、STAT6 mRNA水平明显降低(P0.05,P0.01)。结论补肺平喘汤能有效改善支气管哮喘大鼠Th1/Th2细胞因子失衡,降低JAK1、STAT6 mRNA表达,调节Th1/Th2细胞因子平衡。     

益气温阳护卫汤含药血清对体外Th17/Treg细胞失衡与RORγ、Foxp3的影响

目的：研究益气温阳护卫汤含药血清对体外辅助性T淋巴细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)细胞失衡与维甲酸相关孤核受体γ(RORγ)、特异性叉头状转录因子3(Foxp3)的影响。方法：制备益气温阳护卫汤含药血清,CD₄⁺T细胞进行原代分离、培养、鉴定。构建体外Th17/Treg细胞失衡模型：将细胞分为对照组、模型组、益气温阳护卫组、地塞米松组,除对照组外,其余组中分别加入等量转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素(IL)-6、IL-23溶液,诱导CD₄⁺T细胞向Th17细胞分化。给予相应的含药血清干预处理48 h后,采用流式细胞术检测各组Th17和Treg细胞比例。RT-PCR、Western Blot分别检测RORγ、Foxp3 mRNA和蛋白表达水平。结果：与对照组比较,模型组Th17细胞比例、Th17/Treg比例均显著上升(P<0.01),Treg细胞比例显著下降(P<0.01);与模型组比较,益气温阳护卫组及地塞米松组Th17细胞比例、Th17/Treg比例均显著降低...     

四逆散及其拆方对实验性溃疡性结肠炎大鼠IL-4/STAT6通路的影响

目的:从基因水平进一步探讨四逆散调控实验性溃疡性结肠炎大鼠IL-4/STAT6信号通路的作用机制。方法:将实验动物分为6组,采用免疫法造模,以大鼠IL-4、SOCS1、STAT6的基因表达作为观察与检测指标。结果:四逆散组实验大鼠IL-4、SOCS1表达显著增加(P0.05),而STAT6显著降低(P0.05);三个拆方组中,柴芍配伍对IL-4、SOCS1 mRNA表达的影响与四逆散无显著性差异(P0.05),但STAT6 mRNA的表达显著高于正常组(P0.05);与柴枳甘组、芍枳甘组比较,柴芍组IL-4、SOCS1 mRNA表达明显升高(P0.05),STAT6 mRNA的表达显著降低(P0.05)。结论:四逆散能够通过刺激IL-4、SOCS1 mRNA的表达,抑制STAT6mRNA的表达来调节IL-4/STAT6通路,干预实验性UC。方中柴芍配伍作用明显,主要体现在对IL-4、SOCS1mRNA表达的影响上;柴、芍分别配伍柴枳后,对TL-4/STAT6通路的调节作用明显降低。     

泽漆水提物对香烟联合LPS所致的COPD大鼠的改善作用

目的研究泽漆水提物对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠的影响。方法将72只SD雄性大鼠随机分为空白组和造模组,连续5周采用香烟烟雾暴露联合LPS的方法制备COPD大鼠模型。造模5周后,将大鼠随机分为模型组,地塞米松组(0.81 mg/kg),泽漆水提物低、中、高剂量组(生药1.25、2.5、5 g/kg),每组12只,开始灌胃给药。在给药至第28天后,采用动物肺功能仪测定大鼠肺功能相关参数的变化,高通量蛋白芯片技术检测肺泡灌洗液中炎性相关细胞因子的水平,HE染色法观察大鼠肺和气管组织一般病理学变化,Masson染色法观察肺组织胶原沉积变化,RT-qPCR法检测大鼠肺组织中基质金属蛋白酶系统、IL-12/STAT4和IL-4/STAT6信号通路中相关mRNA的表达。结果与模型组比较,泽漆水提物能升高肺功能相关参数(P0.05,P0.01),对大鼠肺泡灌洗液中细胞因子的水平都有不同程度的降低作用(P0.05,P0.01),明显改善大鼠肺组织病理学变化,降低大鼠肺组织中基质金属蛋白酶系统相关mRNA表达(P0.01),对大鼠肺组织中IL-12/STAT4信号通路中相关mRNA表达都有不同程度的降低作用(P0.05,P0.01),对大鼠肺组织中IL-4/STAT6信号通路中相关mRNA表达有升高作用(P0.01)。结论泽漆水提物对香烟联合气管内滴入LPS所致COPD大鼠具有保护作用,其机制可能与调节IL-12/STAT4、IL-4/STAT6信号通路有关。     

卡介菌多糖核酸对小鼠血清IL-2、IFN-γ水平及免疫功能的影响

目的:探讨卡介菌多糖核酸对小鼠血清IL-2、IFN-γ水平的影响.方法:选用BALB/c裸鼠作为免疫缺陷动物模型,将50只裸鼠随机分为卡介菌多糖核酸高、中、低剂量组,阳性药物组和裸鼠正常对照组,另选用10只正常小鼠作为空白对照组.观察卡介菌多糖核酸对小鼠血清IL-2、IFN-γ水平的影响.结果:卡介菌多糖核酸高、中剂量组和阳性药物组均能明显提高裸鼠血清IL-2的水平(P＜0.05或P＜0.01);卡介菌多糖核酸高、中、低剂量组和阳性药物组均能显著提高裸鼠血清IFN-γ的水平(P＜0.05或P＜0.01).结论:卡介菌多糖核酸可以提高裸鼠血清IL-2、IFN-γ的表达水平,通过增强其表达提高裸鼠的免疫功能.     

五脏温阳化瘀汤对动脉粥样硬化大鼠JAK2/STAT3信号转导及IL-6/STAT3信号通路影响

目的:分析五脏温阳化瘀汤对动脉粥样硬化(AS)大鼠JAK2/STAT3信号传导及IL-6/STAT3信号通路影响。方法:选取SPF级Wistar雄性大鼠45只,随机数字表法将大鼠分成3组,正常组、模型组与观察组,观察组与模型组制备AS模型,造模后观察组灌胃2ml/kg的五脏温阳化瘀汤药液,模型组与正常组则灌胃等剂量生理盐水,共进行6周。观察组大鼠腹主动脉病理状况,ELISA检测血清IL-6、SOCS、JAK2、STAT3、p-JAK2及p-STST3含量,实时荧光定量PCR检测各组大鼠肝脏组织内TLR4、NF-B、p38MAPK、IL-6、SOCS3、STAT3及JAK2mRNA表达。结果:和正常组相比,模型组组大鼠血清IL-6、SOCS3、STAT3及JAK2含量上升;和模型组相比,观察组大鼠血清IL-6SOCS3、STAT3及JAK2含量下降,差异均有统计学意义(P0.05);和正常组相比,模型组大鼠血清p-STST3、p-JAK2、p-STAT3/STAT3及p-JAK2/JSK2含量上升;和模型组相比,观察组大鼠血清p-STST3、p-JAK2、p-STAT3/STAT3及p-JAK2/JSK2含量下降,差异均有统计学意义(P0.05);和正常组相比,模型组大鼠肝脏内TLR4、NF-B、p38MAPK、IL-6、SOCS3、STAT3及JAK2mRNA表达上升;和模型组相比,观察组大鼠肝脏内TLR4、NF-B、p38MAPK、IL-6、SOCS3、STAT3及JAK2mRNA表达下降,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:五脏温阳化瘀汤经过抑制p38MAPK和JAK磷酸化,降低TLR4mRNA水平,减少IL-6分泌量,对JAK2/STAT3信号传导路径产生影响,改善AS大鼠症状。     

咳喘宁对病毒诱发哮喘大鼠模型信号转导子和转录激活子6表达的影响

目的:研究咳喘宁对病毒诱发支气管哮喘大鼠信号转导子和转录激活子6(STAT6)及其mRNA表达的影响。方法:幼年雄性SD大鼠60只随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组20只、模型组20只、地塞米松与沙丁胺醇治疗组(简称"地沙治疗组")10只和咳喘宁治疗组10只。建立卵白蛋白哮喘大鼠模型并以呼吸道合胞病毒激发哮喘。采用免疫组化法和原位杂交法分别检测STAT6蛋白和STAT6 mRNA的表达。结果:免疫组化和原位杂交法显示,模型组支气管STAT6蛋白和STAT6 mRNA的表达均高于磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、地沙治疗组和咳喘宁治疗组,其主要表达细胞是上皮细胞;咳喘宁治疗组支气管STAT6蛋白和STAT6 mRNA的表达低于模型组(P<0.01),和地沙治疗组比较,咳喘宁治疗组支气管STAT6蛋白和STAT6 mRNA的表达略高,但两组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:哮喘大鼠支气管STAT6及其mRNA较强表达,上皮细胞是其主要表达细胞;咳喘宁可下调哮喘大鼠支气管STAT6及其mRNA表达,可能为其防治病毒诱发哮喘的重要机制。     

黄芪对卵蛋白致敏大鼠肺组织中信号转导子和转录激活子6及mRNA表达的影响

 目的观察黄芪(Radix Astragali,RA)对支气管哮喘大鼠支气管信号转导子和转录激活子6(STAT6)及其mRNA表达的影响。方法用卵清白蛋白建立哮喘模型,SD大鼠随机分成4组:正常对照组、模型组、低剂量RA组和高剂量RA组。留取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行嗜酸性粒细胞(EOS)和分类计数;采用免疫组化法和原位杂交法分别检测STAT6蛋白和STAT6 mRNA的表达。结果①模型组BALF中EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比(EOS％)均显著高于正常对照组(P<0.01), 黄芪组上述指标均显著低于模型组(P<0.01);②免疫组化和原位杂交显示,模型组支气管STAT6蛋白和STAT6 mRNA表达均显著高于正常对照组,黄芪组较模型组均明显减弱(均为P<0.01),其主要表达细胞是上皮细胞;③支气管STAT6蛋白、STAT6 mRNA分别与BALF中的EOS绝对值呈显著正相关。结论黄芪有抑制哮喘气道EOS性炎症的作用,其机制可能与其下调 STAT6及其mRNA的表达有关。     

喘敷灵穴位贴敷对哮喘模型大鼠疗效机制的探讨

目的:探讨喘敷灵巴布剂防治哮喘的作用机制.方法:将30只雌性SD犬鼠随机分为正常组(生理盐水腹腔注射+空白敷贴+生理盐水雾化)、模型组(卵蛋白生理盐水腹腔注射+空白敷贴+卵蛋白生理盐水雾化)、敷贴组(卵蛋白生理盐水腹腔注射+喘敷灵巴布剂敷贴+卵蛋白生理盐水雾化),每组10只.观察各组大鼠发生点头呼吸的潜伏期、哮喘发作症状;检测各组大鼠白介素4信使RNA(IL-4 mRNA),γ-干扰素信使RNA(γ-IFN mRNA)的表达;观察右肺中叶肺组织病理变化.结果:①与正常组比较,模型组外周血单核细胞(PBMC)中IL-4 mRNA表达增强、肺组织充血渗出及嗜酸性粒细胞(EOS)浸润严重(P＜0.01);②与模型组比较,敷贴组PBMC中IL-4 mRNA降低,第5、7次诱喘发生点头呼吸的潜伏期延长、频率减少、肺组织EOS浸润减轻(P＜0.05),而肺组织充血渗出无显著差异(P＞0.05).结论:喘敷灵巴布剂能抑制哮喘大鼠PBMC中IL-4基因的转录及气道内EOS释放炎症介质、细胞因子,减轻气道上皮损伤和气道高反应性.     

右归丸经IL-6/STAT3信号通路对膝骨关节炎模型大鼠软骨组织退变的调控机制

目的:观察右归丸对膝骨关节炎(KOA)模型鼠软骨组织信号转导和转录激活因子3(STAT3)和白细胞介素-6(IL-6)表达水平的影响。方法:将大鼠随机分为假手术组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组、右归丸高、中、低剂量组,每组10只。采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃,右归丸高、中、低剂量组分别给予右归丸4.8,2.4,1.2 g·kg^-1灌胃,硫酸氨基葡萄糖组给予硫酸氨基葡萄糖0.17 g·kg^-1灌胃,连续给药8周。干预结束24 h后股动脉采血处死各组大鼠,取鼠膝关节软骨,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组软骨的病理改变,并进行Mankin评分;免疫组化法检测各组关节软骨组织中STAT3,超氧化物歧化酶3(SOD3)和Wnt抑制因子1(WIF1)的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测软骨组织中IL-6 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组关节软骨组中WIF1蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织Makin评分明显升高,软骨组织STAT3在蛋白水平上的表达明显增加和IL-6 mRNA水平上的表达显著增加,WIF1在蛋白水平上的表达显著降低(P<0.01);模型组关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与模型组比较,右归丸高剂量干预组大鼠软骨组织Makin评分,STAT3的在蛋白水平上的表达明显降低,右归丸各干预组IL-6 mRNA水平上的表达显著降低,WIF1在蛋白水平上的表达显著增加(P<0.05,P<0.01),软骨结构趋于正常,软骨细胞分布仅偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论:右归丸能显著改善KOA大鼠的关节软骨退变,抑制KOA中软骨组织的炎症反应,这可能与其抑制STAT3和IL-6的表达有关。     

黄芪-当归配伍对气道变应性炎症大鼠 IFN-γ,IL-4,STAT6,STAT4的影响

目的:通过研究黄芪-当归配伍对气道变应性炎症模型大鼠血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)含量及肺组织信号转导因子和转录活化因子4( STAT4)、信号转导因子和转录活化因子6(STAT6)表达的影响,探讨黄芪-当归配伍治疗气道变应性炎症的作用机制.方法:采用卵清蛋白(OVA)致敏及喷雾激发的方法造成大鼠气道变应性炎症模型,分别用黄芪、当归、黄芪-当归配伍灌胃给药治疗.应用ELISA方法测定血清中IFN-γ、IL-4含量.应用Western blot方法检测肺组织STAT4、STAT6表达.结果:模型组血清IFN-γ含量降低,IL-4含量升高.黄芪组血清中IFN-γ含量增加,当归组血清中IL-4含量降低,芪归配伍组可增加血清中IFN-γ含量,降低IL-4含量.模型组肺组织STAT6、磷酸化信号转导因子和转录活化因子6( p-STAT6)表达增加,STAT4、磷酸化信号转导因子和转录活化因子4(p-STAT4)表达减少.黄芪组可降低STAT6,p-STAT6表达,增加p-STAT4表达.当归组可降低p-STAT6表达.芪归组可降低STAT6,p-STAT6,增加STAT4,p-STAT4表达.结论:黄芪-当归配伍可能通过抑制STAT6、促进STAT4,调节气道变应性炎症中Th1/Th2细胞因子平衡,从而对气道变应性炎症有抑制作用.     

清金化痰颗粒对COPD急性期(痰热郁肺型)大鼠肺组织STAT1,STAT3的调控作用

目的:研究清金化痰颗粒对慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性期(痰热郁肺型)大鼠肺组织中信号转导与转录激活因子1,3(STAT1,STAT3)的调控作用。方法:采用烟熏+脂多糖(LPS)气管注射方法建立COPD痰热郁肺证大鼠模型(正常组除外),随机分为正常组,模型组,罗红霉素组(0.031 5 g·kg~(-1)),清金化痰颗粒低、高剂量组(9.4,37.6 g·kg-1),每组8只。每日ig给药1次,连续给药2周。观察各组大鼠的一般行为活动和病理学变化特点,采用大鼠肺功能检测仪测定各组大鼠相关肺功能指标:0.3 s用力肺活量(FEV0.3),用力肺活量(FVC),FEV0.3/FVC,肺活量(VC),采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法测定肺组织白细胞介素-6(IL-6),STAT1及STAT3 mRNA表达,免疫组化法检测肺组织IL-6,STAT1及STAT3蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组肺组织中IL-6,STAT1及STAT3 mRNA表达显著升高(P0.01);与模型组比较,罗红霉素组、清金化痰颗粒低、高剂量组均能显著降低大鼠肺组织IL-6,STAT1及STAT3 mRNA表达(P0.01),罗红霉素组和清金化痰高剂量组减低更明显,二者之间无明显差异。各组大鼠肺组织中IL-6,STAT1及STAT3蛋白的表达中,与正常组比较,模型大鼠肺组织中的IL-6,STAT1及STAT3平均积分吸光度IA值显著升高(P0.01);与正常组比较,模型组大鼠肺功能参数FEV0.3,FVC,FEV0.3/FVC,VC值均降低(P0.01);与模型组比较,各给药组肺功能参数FEV0.3,FVC,VC值均有升高(P0.01,P0.05);与模型组比较,罗红霉素组、清金化痰颗粒低、高剂量组能显著降低大鼠肺组织IL-6,STAT1及STAT3平均IA值(P0.01),罗红霉素组和清金化痰颗粒高剂量组减低更明显,二者之间差异无统计学意义。结论:清金化痰颗粒可下调JAK/STAT信号通路中STAT1,STAT3的过度表达和持续活化,来抑制IL-6的水平的升高,减轻气道炎症,抑制COPD急性发作与加重。     

参苓白术散对NAFLD大鼠肝细胞mTORC1/STAT3信号通路的影响

目的:观察参苓白术散对高脂饮食饲养的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mTORC1)/细胞信号转导因子及转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响,从炎症角度揭示参苓白术散抗大鼠NAFLD的作用机制。方法:取SD大鼠80只,随机分为4组,分别为正常组、模型组、参苓白术散高、低剂量组(30,10 g·kg^-1),每组20只。采用高脂饲料喂养大鼠8周,建立NAFLD大鼠模型,各药物干预组大鼠灌服相应剂量的参苓白术散,8周后取血和肝组织样本,全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)定量;对肝组织进行油红O,苏木素-伊红(HE)染色;采用Ⅳ型胶原酶离体循环灌注法分离肝细胞;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-1β,IL-5及IL-6含量变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝细胞mTORC1,STAT3 mRNA及蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠病理组织学改变表明,肝组织炎症及脂肪蓄积显著,血清ALT,AST,TC,TG及LDL-C含量显著升高,HDL-C显著下降,肝细胞TNF-α,IL-1β,IL-5及IL-6水平显著升高,mTORC1,STAT3 mRNA及蛋白相对表达量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,参苓白术散高、低剂量组肝组织脂质蓄积明显改善,血清ALT,AST,TC,TG及LDL-C含量明显下降,肝细胞TNF-α,IL-1β,IL-5及IL-6水平明显下降,肝细胞mTORC1,STAT3 mRNA及蛋白相对表达量明显降低;参苓白术散高剂量组在改善脂质蓄积,抑制肝组织炎症反应方面,效果优于参苓白术散低剂量组,mTORC1,STAT3 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:参苓白术散能够改善高脂饮食诱导的NAFLD大鼠脂肪代谢紊乱、减轻肝脏脂质蓄积及炎症反应,其作用机制可能与抑制肝细胞内mTORC1/STAT3通路相关mRNA及蛋白表达有关。     

参苓白术散对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病大鼠Kupffer细胞m TORC1/STAT3信号通路的影响

目的观察参苓白术散对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠Kupffer细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(m TORC1)/细胞转导子和转录活化子3(STAT3)信号通路的影响。方法将80只SD大鼠按照随机数字表法分为4组,空白组、模型组及参苓白术散低、高剂量组,每组20只。除空白组外,其余各组采用高脂饲料喂养复制大鼠NAFLD模型,同时参苓白术散低、高剂量组均按10 m L/kg给予相应剂量参苓白术散灌胃,参苓白术散低剂量组生药含量1.0 g/m L,参苓白术散高剂量组生药含量3.0 g/m L,每日1次,连续8周。实验期间观察大鼠体态毛色、行为能力、食欲、大小便及对外界刺激的反应情况。在第8周末次给药后,观察各组大鼠肝组织病理学改变;比较各组大鼠血脂指标总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)变化;比较各组大鼠Kupffer细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-5、IL-6变化;比较各组大鼠Kupffer细胞m TORC1、STAT3 mRNA及蛋白表达。结果模型组大鼠体型肥胖,肝组织病理学观察肝脏存在明显的脂质蓄积及炎性病变,说明高脂饮食饲养8周能诱导大鼠NAFLD表现。模型组大鼠血清TC、TG及Kupffer细胞TNF-α、IL-1β、IL-5及IL-6均较空白组升高(P<0.05),说明造模成功。参苓白术散低、高剂量组大鼠血清TC、TG及Kupffer细胞TNF-α、IL-1β、IL-5、IL-6均较模型组降低(P<0.05),说明治疗有效,其中参苓白术散高剂量组降低更明显(P<0.05)。模型组大鼠Kupffer细胞m TORC1、STAT3 mRNA及蛋白表达均较空白组升高(P<0.05);参苓白术散低、高剂量组大鼠Kupffer细胞m TORC1、STAT3 mRNA及蛋白表达均较模型组降低(P<0.05),参苓白术散高剂量组降低更明显(P<0.05)。结论参苓白术散可能通过抑制m TORC1、STAT3相关基因及蛋白表达,减轻肝脏炎性反应及脂质蓄积,发挥防治NAFLD的作用,m TORC1、STAT3相关基因及蛋白可能是防治NAFLD的有效药理作用靶点。     

艾灸对类风湿性关节炎大鼠关节滑膜组织转录信号转导因子1、细胞因子信号负调控因子基因表达的影响

目的:观察艾灸对类风湿性关节炎(RA)大鼠关节滑膜组织转录信号转导因子1(STAT 1)、细胞因子信号负调控因子(SOCS)mRNA表达的影响,进一步探讨艾灸治疗RA的作用机制。方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、针刺组、红外组,每组8只。采用"病证结合"的造模方法复制RA模型。艾灸组造模3d后开始艾灸两侧"肾俞"穴,针刺组造模3d后开始针刺两侧"肾俞"穴,红外组造模3d后用改装后远红外线理疗仪照射两侧"肾俞"穴,均隔日1次,共治疗10次,每次20min。测量各组大鼠足跖肿胀度,放射免疫法检测血清白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素2(IL-2)的含量,RT-PCR法检测关节滑膜组织STAT 1、SOCS mRNA表达情况。结果:模型组大鼠足跖与踝部呈急性炎性红肿,跖围较正常组明显增粗,血清中IL-1含量升高,IL-2水平降低,关节滑膜组织STAT 1、SOCS mRNA表达下降(均P0.01)。经治疗后,艾灸组、针刺组和红外组跖围减小,血清中IL-1含量降低,IL-2水平升高,关节滑膜组织STAT 1、SOCS mRNA表达明显增加(P0.05,P0.01)。针刺组、红外组IL-2含量,STAT 1、SOCS mRNA表达明显低于艾灸组(均P0.01)。结论:艾灸"肾俞"穴能抑制RA大鼠继发性足肿胀,与其抑制血清中致炎因子IL-1的释放,提高免疫调节因子IL-2含量,增强RA大鼠关节滑膜组织的STAT 1和SOCS mRNA表达有关。