实时荧光定量PCR检测肾透明细胞癌hIRS-1和hIRS-2的表达及临床意义

[目的]本研究检测hIRS-1 mRNA和hIRS-2 mRNA在肾透明细胞癌组织和对应癌旁正常组织中的表达,分析其与临床病理参数之间的关系,评价hIRS-1和hIRS-2的临床意义.[方法]应用实时荧光定量PCR法对hIRS-1及hIRS-2基因在43例肾透明细胞癌组织和对应癌旁正常组织中的表达进行检测,分析其与临床病理指标的关系.[结果]hIRS-1mRNA在肾透明细胞癌和癌旁组织中均存在表达,hIRS-1基因在肾透明细胞癌组织和对应癌旁正常组织中比较无显著差异(0.612±0.127vs 0.645±0.116,P>0.05);而hIRS-2基因在肾透明细胞癌中存在高表达,hIRS-2基因在肾透明细胞癌组织和对应癌旁正常组织中比较有显著差异(1.016±0.143 vs 0.792±0.136,P<0.05);hIRS-1 mRNA的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、病理分级及临床分期无关(P>0.05);hIRS-2 mRNA的表达与肿瘤大小及临床分期有关(P<0.05),与患者年龄、性别、及病理分级无关(P>0.05).[结论]hIRS-1 mRNA在肾透明细胞癌和癌旁组织中均存在表达,两者比较差异无统计学意义;MRS-2 mRNA在肾透明细胞癌中存在高表达,提示hIRS-2基因在肾透明细胞癌细胞癌变过程中可能发挥重要作用.     

锌指蛋白23在卵巢癌中的表达

目的:分析ZnF23 mRNA在卵巢癌组织和细胞中的表达情况,以探讨其与细胞凋亡的关系.方法:采用实时荧光定量RT-PCR法检测22例卵巢癌患者癌组织和其癌旁正常组织中ZnF23表达水平.结果:22例卵巢癌患者癌组织及其癌旁正常组织标本中ZnF23相对表达量(ZnF23/GAPDH)分别为(0.2±0.15)和(1.0±0.1),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:卵巢癌患者中ZnF23蛋白表达水平显著下降,可能与卵巢癌的发生发展有密切的关系.     

人源幼虫巨大致死性基因在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的研究人源幼虫巨大致死性基因Hugl-1表达与人肺癌临床病理生理特征的关系,探讨Hugl-1基因表达与肺癌肿瘤细胞发生、侵袭的相关性。方法对50例NSCLC标本(含癌旁组织)和10例肺良性病变组织应用单克隆抗体、免疫组化SP法检测Hugl-1基因的蛋白表达情况。结果(1)肺癌肿瘤组织中Hugl-1基因表达水平显著低于癌旁组织和肺良性病变组织(P<0.05)。(2)肺癌组织中Hugl-1基因表达水平降低与肿瘤分期、淋巴结转移程度存在相关性(P<0.05),与肺癌组织学类型、细胞分化程度以及患者的性别、年龄无关。结论Hugl-1基因表达下降与肺癌的发生、发展过程有关。     

雌激素受体β1和β2在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨乳腺癌组织中雌激素受体(ER)β1、ERβ2基因和蛋白的表达及其临床意义。方法应用Western印迹法检测乳腺癌组织、癌旁组织及正常组织中ERβ1和ERβ2蛋白的表达情况,荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测ERβ1、ERβ2mRNA的表达情况。结果乳腺癌组织和癌旁组织中的ERβ1mRNA、ERβ2mRNA检出率与蛋白检出率相同。乳腺癌组织中的ERβ1蛋白检出率显著低于癌旁组织(P=0.029)和正常组织(P=0.029);乳腺癌组织中的ERβ1蛋白表达量为47.06±8.94,显著低于癌旁组织中的55.33±9.59及正常组织中的54.47±9.65(P=0.009及0.019)。乳腺癌组织中的ERβ1mRNA检出率显著低于癌旁组织(P=0.029);乳腺癌组织中的ERβ1mRNA表达量为0.026±0.014,显著低于癌旁组织中的0.041±0.020(P=0.015)。乳腺癌组织中,ERβ1mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.635(P=0.008),ERβ2mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.714(P=0.004);癌旁组织中,ERβ1mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.506(P=0.012),ERβ2mRNA与蛋白表达量的相关系数为0.926(P=0.000),ERβ1mRNA、ERβ2mRNA与蛋白水平之间存在相关性。结论全长野生型ERβ1可能是避免乳腺癌发生的保护性因子,ERβ1有助对乳腺癌预后的预测。     

肺癌组织中α1,3 FUCT Ⅶ mRNA的表达及其与转移的关系

目的 探讨α1,3 FUCT Ⅶ基因mRNA在肺癌组织、癌旁正常肺组织中的表达及其与临床病理因素的关系.方法 应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测α1,3 FUCT Ⅶ基因mRNA在92例肺癌组织、20例癌旁正常肺组织中的表达.结果 α1,3 FUCT Ⅶ基因mRNA在肺癌组织中表达量为(0.67±0.15),在癌旁正常肺组织表达量为(0.45±0.11),差异有统计学意义(P<0.05).其中在腺癌组织(0.79±0.19)中表达最强,小细胞肺癌组织(0.68±0.17)中表达次之,鳞癌组织(0.51±0.12)中表达最弱,差异有统计学意义(P<0.05).α1,3 FUCT Ⅶ基因mRNA表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移、组织学类型有关,与年龄、性别无关(P>0.05).结论 α1,3 FUCT Ⅶ基因mRNA表达可能与肺癌的发生及转移相关.     

SYBR荧光实时定量PCR检测NSCLC中ERCC1基因表达

目的:建立检测核苷酸切除修复基因ERCC1mRNA的SYBR Green I实时定量PCR的方法,了解肺癌组织及其癌缘肺组织中ERCC1的表达水平,研究肺癌组织中ERCC1的表达水平与各种临床病理特征之间的关系.方法:应用SYBR荧光实时定量PCR(Real-time PCR)技术检测30例肺癌组织和离肿瘤边缘5cm处正常癌旁组织中的ERCC1mRNA表达水平,同时分析ERCC1表达水平在不同肺癌临床分期和病理类型各组间的关系.结果:肺癌中ERCC1mRNA的表达(5.16±2.51)低于正常癌旁组织(11.17±4.79)(P<0.05).但在不同肺癌临床分期、组织类型各组之间差异均无统计学意义.结论:所建立的SYBR Green I实时定量PCR方法可以成功地检测ERCC1基因的表达量.     

TIMP-1在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)在食管鳞状细胞癌及其癌旁正常组织中的表达及与临床病理因素间的关系。方法:100例新鲜离体手术切除食管癌标本,每例分别各取癌组织及对应癌旁组织1份,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法分别检测TIMP-1mRNA在癌及癌旁正常组织中的表达;采用Western Blot法检测TIMP-1蛋白在癌及癌旁正常组织中的表达。结果:TIMP-1mRNA在癌及癌旁正常组织中的表达分别为0.736 4±0.082 9和0.516 0±0.056 0,差异有统计学意义(t=2.203,P=0.029);TIMP-1mRNA在T1+T2期及T3+T4期食管癌组织中的表达分别为0.536 6±0.097 9和0.695 0±0.075 4,差异有统计学意义(t=2.006,P=0.043);TIMP-1mRNA在高、中、低分化食管癌组织中的表达分别为0.396 6±0.074 3,0.907 2±0.128 1和0.548 5±0.089 8,差异有统计学意义(F=3.520,P=0.033);TIMP-1mRNA在有无淋巴结转移、不同大体病理类型、不同性别及不同年龄食管癌间比较,差异均无统计学意义。随机选取的5例标本的Western Blot的检测结果与RT-PCR结果一致,肿瘤组织内的表达高于癌旁正常组织中的表达。结论:TIMP-1在食管鳞状细胞癌浸润生长方面可能发挥了促进作用,与食管癌分化程度可能有关,但与食管鳞状细胞癌淋巴结转移可能无关。     

KISS1在胃癌的表达及临床意义

目的 探讨肿瘤转移抑制基因KISS1mRNA在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法 用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测52例胃癌、52例癌旁组织及12例正常胃组织中KISS1mRNA的表达,半定量分析RT-PCR产物电泳条带密度。结果 在52例胃癌及其相应癌旁组织中KISS1mRNA表达水平分别为（0.425±0.046）和（0.825±0.028）;12例正常胃组织表达水平分别为（0.856±0.044）;胃癌组织KISS1mRNA的表达水平明显低于癌旁组织、和正常胃组织（P〈0.01）。KISS1mRNA的表达水平与患者肿瘤病理类型及临床分期无关（P〉0.05）,而淋巴结有转移者其表达水平低于无淋巴结转移（P〈0.05）。结论 KISS1mRNA在胃癌组织中表达水平下降;其表达与胃癌淋巴结转移有关,可能成为胃癌转移和预后的指标之一。     

非小细胞肺癌组织中p33ING1b mRNA表达水平及生物学意义

目的探讨p33ING1b mRNA的表达水平与非小细胞肺癌(Non-small Cell Lung Cancer,NSCLC)临床病理特征的关系及其在NSCLC发生发展中的可能作用及生物学意义。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测58例NSCLC患者中的癌组织及其癌旁组织p33ING1b mRNA表达水平。结果NSCLC组织中p33ING1b mRNA表达强度(0.408±0.156)低于癌旁组织(0.601±0.326),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组织中p33ING1b mRNA表达水平与病理分级、临床分期、淋巴结转移有密切关系(P<0.05),而与年龄、性别、吸烟与否、组织学类型无关(p>0.05)。结论p33ING1b mRNA低水平表达在NSCLC发生发展过程中起重要作用,P33ING1b低水平表达可作为一个预测NSCLC转移潜能以及不良预后的生物学指标。     

转移抑制基因NM23-H1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因(nm23-H1)mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC临床病理特征间的关系。方法采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time qRT-PCR)方法检测48例NSCLC癌组织、10例癌旁正常肺组织以及10例良性疾病肺组织中nm23-H1 mRNA的表达水平。结果 nm23-H1 mRNA在NSCLC组的表达水平为(0.599±0.566),明显低于癌旁组的(1.232±0.328)及良性疾病肺组的(1.443±0.427)(P<0.01);NSCLC组中NM23-H1的低表达与肿瘤病理类型、癌细胞分化程度、淋巴结转移和临床分期有关(P<0.05),而与患者年龄、性别以及吸烟情况无关(P均>0.05)。结论 NSCLC组织中nm23-H1低表达,其表达量降低与NSCLC的侵袭、转移和预后有关。     

卵巢浆液性囊腺癌组织中β-连环蛋白的表达及其意义

目的：研究卵巢浆液性囊腺癌组织中β-连环蛋白（β-catenin）的表达,阐明β-连环蛋白在卵巢浆液性囊腺癌诊断中的临床意义。方法：采用RT-PCR法检测36例卵巢浆液性囊腺癌、10例卵巢浆液性囊腺瘤及10例正常卵巢组织β-连环蛋白mRNA的表达量。应用免疫组织化学方法检测β-连环蛋白在60例卵巢浆液性囊腺癌、24例卵巢浆液性囊腺瘤及24例正常卵巢组织中的表达率。结果：β-连环蛋白mRNA在卵巢浆液性囊腺癌组表达量为1.001±0.192,在正常卵巢组为0.588±0.128,在卵巢浆液性囊腺瘤组为0.600±0.262,卵巢浆液性囊腺癌组β-连环蛋白mRNA的表达量显著高于正常卵巢组和卵巢浆液性囊腺瘤组,差异有显著性（P<0.05)。β-连环蛋白主要在细胞质中表达,在卵巢浆液性囊腺癌组的β-连环蛋白阳性表达率为88.33%,明显高于正常卵巢组的20.83%和卵巢浆液性囊腺瘤组的33.33%（P<0.05);在卵巢癌组临床分期Ⅰ的卵巢癌β-连环蛋白阳性表达率为77.77%,临床分期Ⅳ期的卵巢癌β-连环蛋白阳性表达率为93.87%,两者比较差异有显著性（P< 0.05）;在卵巢癌病理分级G1、G2及G3组的β-连环蛋白阳性表达率分别为85.00%、89.28%和91.63%,组间比较差异无显著性（P>0.05）。结论：卵巢癌组织中β-连环蛋白mRNA和蛋白表达均增高,β-连环蛋白表达程度与卵巢癌临床分期相关,与病理分级无关,β-连环蛋白在卵巢癌诊断中起重要作用。     

死亡相关蛋白激酶基因在胃癌组织中的表达

目的:研究死亡相关蛋白激酶(DAPk)基因在原发性胃癌组织中的表达,探讨其在胃癌发生发展中可能的作用。方法:收集62例原发性胃癌及相对应的癌旁正常组织。应用RT-PCR检测DAPk mRNA表达,免疫组化方法检测DAPk蛋白表达。结果:RT-PCR方法显示DAPk mRNA表达水平在胃癌组织中明显低于癌旁正常组织(OD值为0.2863±0.2027比0.5736±0.1968,P<0.0001)。免疫组化分析显示,DAPk在所有癌旁正常组织中表达均为阳性,积分范围为2-12,平均8.61±2.89;而在胃癌组织中表达则明显减弱或缺失,积分范围为0-9,平均2.90±3.38。DAPk在癌旁正常组织中的表达水平显著高于胃癌组织(P<0.0001)。结论:在原发性胃癌组织中,DAPk mRNA和蛋白表达明显缺失或低下。     

人激肽释放酶10在卵巢癌组织中的表达及其意义

目的：研究人激肽释放酶10（hK10）在卵巢癌组织中的表达,探讨hK10基因在卵巢癌早期诊断研究中的意义。方法：①应用4 097靶基因点基因芯片对5例卵巢浆液性囊腺癌及5例正常卵巢组织进行基因表达谱分析,筛查差异表达基因。②应用RT-PCR检测32例卵巢浆液性囊腺癌组织、20例卵巢浆液性囊腺瘤组织及16例正常卵巢组织中hK10表达并对比分析。结果：①基因芯片筛查出差异表达基因58个,其中表达增高（上调趋势）基因30个,表达降低（下调趋势）基因28个,hK10基因为表达上调基因（Cy5/Cy3＝3.031）。②hK10基因在正常卵巢及卵巢瘤组织中有弱表达(0.023±0015和0.023±0.045),在卵巢癌组织中表达明显增强(0.106±0.045),hK10基因在卵巢癌组的表达明显高于正常卵巢组及卵巢瘤组（P<0.01）。结论：基因芯片能够用于筛查卵巢癌差异表达基因;hK10基因在卵巢癌组织表达明显增强,有望成为卵巢癌的肿瘤标志物。      

卵巢浆液性囊腺癌组织中prostasin基因的表达及意义

目的：研究卵巢浆液性囊腺癌组织中prostasin基因的表达,探讨prostasin基因在卵巢浆液性囊腺癌发生和发展中的意义。方法：应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测10例卵巢浆液性囊腺癌、10例卵巢浆液性囊腺瘤及10例正常卵巢组织中prostasin mRNA的表达量。应用免疫组织化学方法检测prostasin蛋白在60例卵巢浆液性囊腺癌、24例卵巢浆液性囊腺瘤及24例正常卵巢组织中的表达率。结果：prostasin mRNA在卵巢浆液性囊腺癌组织中表达量显著增高（0.415±0.177）,与正常卵巢组（0.192±0.128）及卵巢浆液性囊腺瘤组（0.237±0.232）比较,差异均有显著性（P<0.05)。prostasin蛋白主要在细胞质中表达,在卵巢浆液性囊腺癌组的阳性表达率(65.0%)明显高于正常卵巢组(12.5%)及卵巢浆液 性囊腺瘤组(25.0%)（P<0.01);卵巢浆液性囊腺癌病理分级越高、临床分期越晚组织中prostasin蛋白表达率越高（P<0.05)。结论： prostasin 基因在卵巢癌发生和发展中起促进作用。     

锌指蛋白217在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨锌指蛋白217(zinc finger protein 217,ZNF217)在胃癌组织中的表达及临床意义。 方法 收集2013年3月—2014年7月间于浙江省台州市立医院胃肠外科行胃癌根治术的58例胃癌及对应癌旁组织,同期收集临床疑似诊断为胃癌但经活检病理证实为良性疾病的胃黏膜组织30例。采用qRT-PCR检测ZNF217 mRNA在胃癌及癌旁组织中的表达,免疫组织化学染色检测ZNF217蛋白表达。收集2组患者的临床病理资料,分析ZNF217蛋白表达与胃癌患者临床及病理特征间的相关性及诊断价值。 结果 ZNF217 mRNA在胃癌组织中表达水平(6.911±0.139)显著高于对应癌旁组织(1.372±0.205),P＜0.001;ZNF217蛋白在胃癌组织中也呈现异常高表达状态(χ2=39.910,P＜0.001),并且胃癌组织中ZNF217蛋白高表达与肿瘤体积增大(χ2=5.810,P=0.016)、淋巴结转移(χ2=5.778,P=0.016)及高TNM分期(χ2=4.806,P=0.028)呈显著正相关。ROC分析提示:ZNF217的表达作为诊断胃癌的价值较高,灵敏度和特异性均在0.8附近。 结论 ZNF217 mRNA及蛋白在胃癌组织中表达上调,高水平ZNF217蛋白表达与胃癌患者恶性临床及病理特征有关。ZNF217在胃癌早期诊断及分子靶向治疗方面具有一定的科研及临床研究价值。      

微管相关蛋白1A在前列腺癌中的表达与其临床特征的关系

目的 探讨微管相关蛋白1A（microtubule associated protein 1A,MAP1A）在前列腺癌中的表达与其临床特征的关系。方法 通过免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）染色检测人前列腺癌组织和非癌前列腺组织中MAP1A蛋白质的表达水平,应用实时荧光定量聚合酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测MAP1A基因在前列腺癌与正常前列腺组织中mRNA的表达差异,进一步使用癌症基因信息数据库（the Cancer Genome Atlas,TCGA）统计分析MAP1A基因表达水平与前列腺癌患者的临床病理学特征之间的关联。结果 免疫组化染色结果分析显示,与癌旁正常组织相比,前列腺癌组织中MAP1A的蛋白表达显著降低[免疫组化染色评分（immunoreactive score,IRS）：前列腺癌组织为4.08±1.58,癌旁正常组织为4.91±1.46（P<0.001）]。MAP1A在前列腺癌及癌旁正常组织中的阳性表达率分别为58.6%和82.7%,两者差异具有统计学意义（χ²=12.225,P=0.001）。使用RT-qPCR检测MAP1A mRNA表达,发现其在前列腺癌中表达显著低于正常前列腺组织（P=0.019）。通过对TCGA数据库进行分析,笔者发现MAP1A在不同临床特征的肿瘤组织中的表达差异具有统计学意义,如患者Gleason评分（P<0.001）,临床病理分期（P=0.009）,是否转移（P=0.008）,总体生存率（P=0.049）。结论 MAP1A在前列腺癌中表达下调且与肿瘤组织的分期有关,分期越晚,MAP1A的表达越低,这提示其可能参与了前列腺癌的发生、发展。     

p85α基因在卵巢癌中表达及临床意义研究

目的：观察p85α基因在卵巢癌组织中的表达,探讨其与卵巢癌发生的关系及用于卵巢癌的早期诊断与治疗的临床意义。方法选取检测卵巢癌组织（66例）、癌旁组织（66例）及正常卵巢组织（17例）三个不同组织作为检测对象,采用免疫组化检测技术检测p85α基因表达产物及探讨p85α基因表达与卵巢癌临床特征的关系。结果 p85α基因在卵巢癌组织、癌旁组织、正常卵巢组织中的表达率分别为68.2%、59.1%、11.8%,即为该基因在卵巢癌组织中与癌旁组织、正常卵巢组织相比都较高,差异有统计学意义（P〈0.05）,p85α基因表达与卵巢癌的发病年龄关系差异无统计学意义（P〉0.05）,而与不同的临床分期、淋巴结的转移情况比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 PI3K p85α基因的异常表达可以作为卵巢癌早期诊断和判断其生物学特性的指标。     

TSC2基因的表达产物tuberin在结直肠癌中的表达及其意义

目的研究TSC2基因的表达产物tuberin在结直肠癌中mRNA和蛋白水平的表达及其与临床病理特征的关系,探讨其在结直肠癌发生中的作用。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法检测40例结直肠癌与癌旁正常肠黏膜组织中tuberin mRNA的表达,应用免疫组织化学方法检测60例结直肠癌与癌旁正常肠黏膜组织tuberin蛋白的表达,分析tuberin mRNA和蛋白表达与临床病理特征的关系。结果40例结直肠癌中tuberin mRNA表达量与患者年龄、性别、肿瘤大小、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、远处转移无相关性（P〉0.05）,但显著低于癌旁正常组织,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）。tuberin蛋白在60例结直肠癌与癌旁正常肠黏膜组织中的阳性表达率分别为41.6%、75%,差异有统计学意义（P﹤0.05）。tuberin蛋白阳性表达率与性别、组织学分级相关。结论tuberin在结直肠癌中表达下调,可能参与结直肠癌的发生。     

BRMS1 mRNA在直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨乳腺癌转移抑制基因1(BRMS1)mRNA在直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法应用RT-PCR法检测80例直肠癌组织及其40例癌旁正常黏膜组织中BRMS1 mRNA的表达。结果 BRMS1 mRNA在直肠癌中低表达(0.467±0.045),在癌旁组织中呈高表达(0.991±0.054),两者相比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。直肠癌组织中BRMS1 mRNA的表达水平与直肠癌患者年龄、性别无关(P>0.05),与直肠癌患者的组织分化、淋巴结转移和临床分期有关(P<0.05)。结论BRMS1 mRNA在直肠癌中低表达,且其低表达可能与直肠癌的临床分期、病理分化以及淋巴结转移有关。