高糖促进肾小球系膜细胞纤维连接蛋白合成的实验研究

为观察高糖状态下人类肾小球系膜细胞（GMC）增殖及纤维连接蛋白（FN）合成情况，体外培养GMC，以噻唑蓝掺入法（MTT）和细胞计数观察GMC增殖，用RT－PCR及双抗夹心ELISA方法检测FN的基因及蛋白质水平变化。结果发现，高糖对GMC增殖有抑制作用，对FN的合成呈浓度及作用时间依赖性增高。提示高血糖在糖尿病肾病的发生发展过程中起重要作用。     

高糖促进肾小球系膜细胞纤维连接蛋白合成的实验研究

目的 观察高糖状态下肾小球系膜细胞（GMC）增殖及纤维连接蛋白（FN）合成情况。方法 采用体外GMC培养,噻唑蓝（MTT）掺入法和细胞计数观察GMC增殖,用RT－PCR及双抗夹心ELISA方法检测FN的基因及蛋白质水平变化。结果 高糖对GMC增殖有抑制作用,对FN的合成呈浓度及作用时间依赖性增高。结论 高血糖在糖尿病肾病的发生发展过程中起重要作用。     

甘草酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎性因子及纤维化因子的影响

目的 探讨甘草酸(GA)对高糖诱导的肾小球系膜细胞(SV40 MES13)炎性因子及纤维化因子的影响。方法 将培养的小鼠肾小球系膜细胞(SV40 MES13)分为对照(NG)组(5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖(HG)组(30 mmol/L葡萄糖)及HG+GA组(30 mmol/L葡萄糖+200μmol/L GA)。采用Western blotting检测各组细胞炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-8及纤维化因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平,免疫荧光检测各组IL-1β、TNF-α、α-SMA在细胞内的荧光表达强度,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-8的表达水平。结果 Western blotting检测结果显示,与NG组比较,HG组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8及α-SMA蛋白的表达水平明显升高(P<0.01);与HG组比较,HG+GA组IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8和α-SMA蛋白表达量降低(P<0.05)。细胞免疫荧光结...     

肾康注射液致过敏反应1例

患者,女,57岁。因尿频、尿急、尿痛、腰痛不适2月余,于2011-10-26入院。患者入院前2个月出现尿频、尿急、尿痛,每天解小便约20余次,全程尿痛,疼痛为钝痛,能耐受,不向其他部位放散,伴腰部钝痛不适,活动后腰痛加重,无畏寒、发热,亦无排尿等待及尿排不尽感。在家自服阿莫西林胶囊0.5 g/次,2～3/d,治疗1周后,尿频、尿急、尿痛明显减轻,腰痛时好时坏。查体:体温36.3℃,脉搏76/min,     

肾舒胶囊对阿霉素肾病大鼠系膜的影响

目的探讨肾舒胶囊对阿霉素肾病（AN）大鼠系膜细胞增殖、系膜基质增多的影响及其机制。方法将雄性wistar大鼠36只随机分至正常对照组（N组）、非治疗组（M组）、肾舒胶囊治疗组（S组）,采用单次尾静脉注射阿霉素建立AN模型,研究肾舒胶囊对AN大鼠24h尿蛋白排泄率、血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、血浆内皮素（ET）、降钙素基因相关肽（CGRP）等的影响。自动图像分析仪测定各组肾小球的定量指数、系膜基质指数;用免疫组化法观察肾组织增殖性细胞核抗原的表达。结果与M组比,S组大鼠24h尿蛋白排泄率第7d始明显降低（P〈0.05,P〈0.01）,4周末血清TP、ALB升高（P〈0.05）,TC、TG降低（P〈0.05）,降钙素基因相关肽（CGRP）升高（P〈0.01）,血浆内皮素（ET）降低（P〈0.01）,24h尿蛋白排泄率明显下降（P〈0.05）,系膜面积显著减少（P〈0.05）,PCNA阳性细胞数减少（P〈0.05）。结论肾舒胶囊具有调整ET和CGRP的病理性改变,改善或修复病理性改变,减少系膜基质的增多及系膜细胞的增殖,从而对AN肾病大鼠具有保护作用。     

肾复康胶囊治疗糖尿病肾病66例临床观察

近年来 ,笔者在临床上应用本院自制肾复康胶囊治疗糖尿病肾病 6 6例 ,取得较好疗效 ,现将结果报告如下。1　对象与方法1.1　对象　本组 96例糖尿病肾病患者均符合诊断标准[1] ,男 5 2例 ,女 4 4例 ,年龄 4 9～ 75岁 ,平均 6 2岁 ;病程10～ 18年。随机分成两组 ,治疗组 6 6例 ,对照组 30例 ,两组患者基线资料具有可比性。1.2　治疗方法　治疗组注射胰岛素 ,口服肾复康胶囊 ,6粒 /次 ,3次 /ｄ。对照组注射胰岛素 ,口服苯那普利。一个疗程 90ｄ。2　结果　　由表 1可见 ,治疗组治愈率与对照组比较 ,有显著性差异 ,提示治疗组优于对照组。表 1　…     

肾康注射液治疗慢性肾功能衰竭临床疗效观察

目的：观察肾康注射液治疗慢性肾功能衰竭的临床疗效。方法：将62例慢性肾功能衰竭患者分为治疗组和对照组。对照组给予常规综合治疗,治疗组则在此治疗基础上加用肾康注射液,平行治疗4周后判定疗效。结果：治疗组与对照组在临床疗效、临床生化指标及24h尿蛋白定量方面存在显著性差异,前者优于后者。结论：肾康注射液治疗慢性肾功能衰竭疗效确切,不良反应少。     

延肾制剂对系膜细胞产生ICAM-1和VCAM-1的影响

 目的观察中药复方制剂延肾(以下简称延肾制剂,YSH)对重组人白细胞介素-1β(rhIL-1β)刺激后体外培养的人肾小球系膜细胞产生细胞间粘附分子-1(Intercellular adhesion moleculeI,ICAM-1)和血管细胞粘附分子-1(Vascular cell adhesion molecule,VCAM-1)的影响,冀以从细胞生物学水平探讨延肾防治慢性肾功能衰竭(Chronic renal failure,CRF)的作用机制.方法采用双抗夹心ELISA法,分别加入重组rhIL-1β及rhIL-1β+YSH大鼠血清.观察体外培养的人肾小球系膜细胞在rhIL-1β刺激后,ICAM-1和VCAM-1的生成及YSH对ICAM-1和VCAM-1生成的影响.结果 rhIL-1β可明显刺激人肾小球系膜细胞产生ICAM-1和VCAM-1,YSH大鼠血清对rhIL-1β刺激后人肾小球系膜细胞所产生的ICAM-1和VCAM-1有抑制作用,其抑制程度与药物浓度有一定的量效关系.结论延肾对rhIL-1β刺激后肾小球系膜细胞所产生的ICAM-1和VCAM-1有明显的抑制作用,提示YSH抑制系膜细胞自分泌ICAM-1和VCAM-1是预防肾小球硬化发生发展的重要作用机制之一.     

α-硫辛酸对高糖诱导的系膜细胞核因子-κB活性的抑制作用

目的探讨α-硫辛酸对高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖及核因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法在体外条件下采用正常糖(NG)、高糖(HG)及HG 不同浓度α-硫辛酸处理大鼠系膜细胞;噻唑蓝法(MTT)测定系膜细胞增殖;采用凝胶电泳迁移率改变法检测NF-κB的活性。结果50~300μmol/L的α-硫辛酸可抑制系膜细胞增殖。HG刺激系膜细胞1h可引起NF-κB活性增强2·2倍(P<0·01),高糖诱导的NF-κB的活化可被α-硫辛酸(200μmol/L)所抑制(0·6±0·3vs2·2±0·2,P<0·01)。结论一定浓度的α-硫辛酸可抑制高糖诱导的系膜细胞增殖,并可降低NF-κB的DNA结合活性。     

延肾口服液对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖及产生白细胞介素-8的影响

 目的观察具有补气、活血、化浊作用的中药复方延肾口服液(以下简称延肾)对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖及产生白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)的影响,从细胞生物学水平探讨延肾防治慢性肾功能衰竭(Chronic renal failure,CRF)的作用机制.方法采用MTT比色法和双抗夹心ELISA法,观察延肾大鼠血清对体外培养的人肾小球系膜细胞增殖和IL-8生成的影响.结果脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)可明显刺激人肾小球系膜细胞增殖和产生IL-8,延肾大鼠血清对LPS刺激后人肾小球系膜细胞增殖和产生IL-8有抑制作用,其抑制程度与药物浓度有一定的量效关系,即随药物浓度的增加对系膜细胞增殖和产生IL-8的抑制率也相应增加.结论延肾对LPS刺激后肾小球系膜细胞增殖和产生IL-8有明显的抑制作用,提示延肾抑制系膜细胞增殖和自分泌IL-8是预防肾小球硬化发生发展的重要作用机制之一.     

贝那普利联合银杏达莫治疗早期糖尿病肾病的疗效观察

目的探讨贝那普利联合银杏达莫注射液治疗早期糖尿病肾病的临床疗效。方法40例早期糖尿病肾病患者随机分为两组,治疗组给予贝那普利（10mg,每日1次,口服）和银杏达莫注射液（20ml加入生理盐水250ml中,每日1次,缓慢静滴）,对照组单用贝那普利（10mg,每日1次,口服）,疗程4周,观察治疗前后24小时尿微量白蛋白（U-Alb）、肌酐（Scr）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、血液流变学变化。结果两组患者治疗后U-Alb明显降低（P〈0.05,P〈0.01）,但Scr无明显变化（P〉0.05）;治疗后U-Alb、TC、TG、全血黏度、血浆黏度、纤维蛋白原的下降治疗组较对照组明显,且差异有显著性（P〈0.05,P〈0.01）。结论贝那普利联合银杏达莫注射液治疗早期糖尿病肾病,不仅降低蛋白尿,还具有降血脂、降低血液黏度,纠正血液高凝状态的作用,在保护肾功能方面具有显著的临床疗效。两药合用在延缓DN进展方面能够发挥各自的优势,起到协同作用。     

醛固酮自分泌环在高糖致人系膜细胞损伤中的作用

目的研究高糖环境下人系膜细胞(HMC)中醛固酮自分泌环及活性氧(ROS)、癌胚纤连蛋白(FN)表达水平的变化,进一步探讨醛固酮自分泌环与ROS、癌胚FN mRNA表达的关系。方法常规培养HMC,取对数生长期细胞分为5组:正糖组(5mmol/L D-葡萄糖),渗透压对照组(5mmol/L D-葡萄糖+20mmol/L L-葡萄糖),正糖+依普利酮组(5mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L依普利酮),高糖组(25mmol/L D-葡萄糖),高糖+依普利酮组(25mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L依普利酮)。采用RT-PCR法检测醛固酮合酶(CYP11B2)、11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅱ(11βHSD2)、癌胚FN mRNA表达水平,Western blotting检测CYP11B2蛋白表达水平,放射免疫法分析细胞培养液中醛固酮水平,通过激光共聚焦显微镜观察盐皮质激素受体(MR)蛋白表达及转位情况,荧光显微镜和荧光酶标仪检测细胞内ROS水平。结果与正糖组比较,高糖组HMC细胞CYP11B2 mRNA及蛋白表达上调,ROS和癌胚FN mRNA表达亦上调,培养液中醛固酮浓度升高(P<0.05)。高糖可促进MR蛋白发生核转位,定量分析显示高糖组胞质/胞核荧光强度比值较正糖组降低30%(P<0.05)。与高糖组比较,高糖+依普利酮组ROS及癌胚FN mRNA表达下调(P<0.05)。结论高糖负荷可通过激活HMC局部醛固酮自分泌环而导致HMC损伤。     

Ox-LDL诱导人肾小球系膜细胞凋亡在慢性肾炎中的作用

目的 :探讨氧化低密度脂蛋白 (Ox-LDL)诱导肾小球系膜细胞凋亡的调控机制及其在慢性肾炎中的作用。方法 :通过人肾小球系膜细胞体外培养 ,采用原位末端标记和DNA凝胶电泳检测低浓度的Ox -LDL (0、 2 5、 5 0、10 0 μg/ml)对系膜细胞凋亡的影响 ,免疫组化维生素E干预前后Ox-LDL对系膜细胞Bax/Bcl- 2表达的影响 ;按血浆LDL水平 ,把有不同程度肾小球硬化的慢性肾炎患者肾标本分为LDL正常组和LDL升高组 ,分别采用DNA原位末端标记和免疫组化 ,检测肾小球细胞凋亡及Bax/Bcl- 2蛋白表达。结果 :低浓度Ox-LDL (0～ 10 0 μg/ml)以剂量依赖方式促进肾小球系膜细胞凋亡 ,并使肾小球系膜细胞Bax的蛋白表达呈时间 -剂量依赖性增加 ,P <0 0 1,Bcl- 2的蛋白表达轻度升高后呈时间 -剂量依赖性下降 ,P <0 0 1,导致Bax/Bcl- 2比值增大 ;维生素E干预后这种变化不明显 ,P >0 0 5。LDL升高组肾小球凋亡和Bax蛋白表达明显增加 ,P <0 0 1;Bcl- 2变化不明显 ,P >0 0 5 ,血LDL水平与肾小球硬化指数、凋亡指数、Bax/Bcl- 2比值有显著正相关关系。结论 :Ox -LDL能诱导肾小球系膜细胞凋亡 ;Bax/Bcl- 2比值上升可能是Ox -LDL诱导肾小球系膜细胞凋亡的重要机制 ;脂质异常可能是导致肾小球硬化中细胞减少的重要原因     

肾衰宁对肾小球系膜细胞产生细胞外基质成分的影响

 目的观察中药复方制剂肾衰宁灌肠液(以下简称肾衰宁,SSN)对体外培养的人肾小球系膜细胞产生细胞外基质成分的影响,冀以从细胞生物学水平探讨肾衰宁防治慢性肾功能衰竭(Chronic renal failure,CRF)的作用机制.方法采用双抗夹心ELISA法和放免法,观察SSN大鼠血清对体外培养的人肾小球系膜细胞产生纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和胶原Ⅵ(Col Ⅳ)的影响.结果肾衰宁灌肠液大鼠血清可抑制体外培养的人肾小球系膜细胞产生FN、LN和ColⅣ,其抑制程度与药物浓度有一定的量效关系,即随药物浓度的增加对系膜细胞产生FN、LN和ColⅣ的抑制率也相应增加.结论肾衰宁对体外培养的人肾小球系膜细胞产生FN、LN和ColⅣ有明显的抑制作用,提示肾衰宁抑制系膜细胞产生细胞外基质是预防肾小球硬化发生发展的重要作用机制之一.     

醋酸铅对人肾小球系膜细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的探讨醋酸铅对人肾小球系膜细胞(HRMC)凋亡及Caspase-3表达的影响。方法取对数生长期的HRMC,分别采用含0、5、10、20μmol/L醋酸铅的完全培养液培养,于6、12、24、48h后以MTT法检测细胞增殖情况,并于培养24h后采用Hochest33342-PI染色法观测细胞的形态学变化,RT-PCR检测Caspase-3 mRNA的表达,细胞免疫化学法和Western blotting检测Caspase-3蛋白的表达。结果与对照组(0μmol/L)相比,5、10、20μmol/L的醋酸铅可不同程度地抑制HRMC的增殖(P<0.01)。Hochest33342-PI染色显示醋酸铅作用后HRMC呈凋亡形态学改变,细胞数量减少,核染色质凝集,核膜破裂。RT-PCR显示醋酸铅作用后Caspase-3 mRNA表达升高。细胞免疫化学和Western blotting检测显示醋酸铅作用后Caspase-3蛋白表达升高。结论醋酸铅可促进人肾小球系膜细胞凋亡,Caspase-3参与了该过程。     

雷公藤多甙对糖尿病大鼠肾脏Desmin、Synaptopodin表达的影响

目的探讨雷公藤多甙对糖尿病大鼠肾脏Desmin、Synaptopodin表达的影响。方法30只雄性SD大鼠随机分为对照组（n=10）、糖尿病组（DM组,n=10）、治疗组（n=10）3组。治疗组将雷公藤多甙片以50mg·kg-1·d-1灌胃。于12周末检测24h尿蛋白量、血糖（Glu）、血肌酐（Scr）、血胱抑素C（Cys-C）。HE染色观察肾脏病理改变;免疫组化检测肾脏Desmin、Synaptopodin的表达情况。结果3组大鼠24h尿蛋白、Scr和Cys-C差异有统计学意义。治疗组24h尿蛋白、Scr和Cys-C均较糖尿病组低（P〈0．05）,差异有统计学意义。与对照组比较,糖尿病组肾小球体积增大、系膜区基质明显增生、肾小球毛细血管袢受压、基底膜增厚,而治疗组较糖尿病组有所改善。免疫组化显示：3组大鼠肾组织Desmin、Synaptopodin蛋白表达差异有统计学意义,糖尿病组Desmin表达较对照组高、Synaptopodin表达较对照组低（P〈0．05）;治疗组Desmin表达较糖尿病组低、Synaptopodin表达较糖尿病组高（P〈0.05）。结论雷公藤多甙可能通过下调糖尿病大鼠肾脏Desmin的表达、同时上调Synaptopodin表达,保护足细胞,减少尿蛋白,保护肾脏。     

Gates法测定2型糖尿病肾病患者肾小球滤过率

目的 探讨2型糖尿病肾病患者99Tcm-DTPA GFR测定的时间影响及GFR对2型糖尿病肾功能异常早期诊断的临床意义.方法 招募健康志愿者11名,其中男6名,女5名,年龄47～79(61.45±7.90)岁;社区2型糖尿病肾病患者56例,其中男31例,女25例,年龄45～75(60.98±6.96)岁,均应用99Tcm-DTPA肾动态显像测定GFR.分别取注药后第2分钟和第3分钟图像勾画ROI,根据Gates分析方法,计算总肾及分肾GFR.利用SPSS 15.0软件对数据进行Pearson相关分析和两样本t检验.结果 2型糖尿病肾病患者的GFR与SCr[(84.90±14.38) μnol/L]呈负相关:注射99Tcm-DTPA后第2分钟双肾、左肾和右肾GFR均与SCr呈负相关(r=-0.599、-0.553和-0.529,均P＜0.001);第3分钟双肾、左肾和右肾GFR也均与SCr呈负相关(r=-0.652、-0.636和-0.470,均P≤0.001).2型糖尿病肾病患者双肾、左肾和右肾第3分钟GFR分别为(69.77±11.00)、(33.12±5.74)和(37.34±9.81) ml/min,低于健康对照组[(97.89±5.98)、(46.60±4.91)和(51.28±4.20) ml/min;t=-8.212、-7.233和-4.069,均P＜0.001].结论 建议对2型糖尿病肾病患者选择注射99Tcm-DTPA后第3分钟的放射性计数测定GFR;GFR测定对糖尿病肾病患者肾功能异常早期诊断具有重要意义.