HPLC-MS法快速测定健康人体血浆中环维黄杨星D的浓度及其药代动力学研究

[目的]建立测定血浆中环维黄杨星D(C<,26>H<,46>N<,20)的液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS),并用于测定环维黄杨星D在健康人体中的药代动力学参数.[方法]血浆样品经液-液萃取后,进行色谱分离,在离子阱质谱仪上,以选择反应监测(SRM)方式进行定量分析,用于监测的离子为质核比(m/z)403→m/z 372(环维黄杨星D)和m/z 380→m/z 362(内标盐酸多奈哌齐).18名健康志愿者静脉滴注环维黄杨星D后,用液质联用法测定人血浆中环维黄杨星D的药物浓度.[结果]环维黄杨星D最低定量限为0.2 μg/L,线性范围为0.2～25μg/L,精密度与准确度符合生物样品分析要求.用该方法测得受试者滴注2.5、4.0、6.0 mL黄杨宁注射液的药峰浓度(Cmax)分别为(2.78±1.28)、(4.12±1.38)和(5.09±1.23)μg/L,药峰时间(Tmax)皆为(4.00±0)h,药一时曲线下面积(AUC<,0-28>)分别为(18.46±7.39)、(21.86±5.03)和(25.37±11.49) μg/L·h.[结论]该法灵敏、专一、快速,可作为环维黄杨星D的临床药代动力学检测的方法.     

血浆中环维黄杨星D的测定方法学研究

目的建立血浆中环维黄杨星D的浓度测定方法。方法在含有环维黄杨星D的血浆中加入内标盐酸多奈哌齐,碱化后液-液萃取,采用LC-MS联用技术,以环维黄杨星D的准分子离子（[M＋H]^＋,m/z403）和内标多奈哌齐的准分子离子（[M＋H]^＋,m/z 380）进行测定。色谱条件：Agilent SB C18（2.1 mm×50mm,3.5μm）,甲醇：醋酸盐缓冲液（80∶20）为流动相,流速：0.4 mL/min;质谱检测参数：大气压化学源（AP-CI）接口,气化室温度：350℃,鞘气流速：65 arb,辅助气流速：20 arb,放电电流：5.00μA,毛细管温度：200℃。结果环维黄杨星D在1-500 ng.mL^-1的范围内呈线性,最低检测限为0.1 ng.mL^-1。结论该测定方法具有灵敏、专一和快速的优点,可用于血浆中环维黄杨星D的含量测定。     

环维黄杨星D对麻醉犬血流动力学的影响

目的:探讨环维黄杨星D(CVB-D)对麻醉犬血流动力学的影响。方法:分别以0.1、0.2、0.4 mg/kg剂量的CVB-D静脉注射给予麻醉犬,观察给药后收缩压(SAP)、平均动脉压(MAP)、心率(HR)、心输出量(CO)、冠脉流量(CBF)、每搏输出量(SV)、总外周血管阻力(TPVR)等血流动力学指标的变化。结果:CVB-D中、高剂量能降低麻醉犬HR,增加CBF,降低TPVR。此外高剂量CVB-D能升高麻醉犬SAP,增加SV,与对照组比较具有显著性差异。而CVB-D各剂量组对麻醉犬MAP和CO均未见显著影响。结论:CVB-D能够显著改善麻醉犬血流动力学及心脏自身供血,这可能是其治疗心肌缺血性疾病的基础。     

反相离子对色谱法测定黄杨木中环维黄杨星D

黄杨木是黄杨科植物小叶黄杨Buxus micro-phylla Sieb.et Zucc.var.sinica Rehd.et Wils.的茎枝,明代《本草纲目》中已有记载。黄杨木粉是治疗心血管病的有效药物,其主要活性成分为甾体生物碱环维黄杨星D(cyclovirobuxium D),具有行气活血、通络止痛之功效。目前,环维黄杨星D已从黄杨木及其同属植物中提取分离[1],并与其制剂黄杨宁片一起收载于《中国药典》(2005年版)。黄杨木中环维黄杨星D的测定,目前尚无文献报道。本实验建立了一种反相离子对液相色谱法,测定了黄杨木中环维黄杨星D的量。1仪器、试剂与材料岛津LC-10ATvp液相色谱仪,…     

薄层扫描法测定黄杨宁片环维黄杨星D的含量

目的：测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量。方法：采用薄层扫描法，以氯仿-丙酮-二乙胺（25：20：2）为展开剂，测定波长为410nm，参比波长为700nm。结果：环维黄杨星D在1．017-10．17μg范围内线性关系良好，r=0．99570，平均回收率为97．31％，RSD：1．0％（n=5）。结论：该方法比传统的分光光度法简便快速、重现性好，可用于测定黄杨宁片的含量。     

HPLC-ELSD法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量

目的建立黄杨宁片中环维黄杨星D的HPLC-ELSD含量测定方法。方法色谱柱为Phenomenex luna C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.25mol/L甲酸铵溶液(甲酸调pH值至3.8)(40:60),流速为流速1.0 mL/min,检测器为ELSD,柱温为30℃。结果环维黄杨星D在0.662 0~10.432μg线性关系良好(r=0.999 0),平均回收率为(n=9)99.01%,RSD为1.51%。结论本法简单、准确、灵敏度高、重复性好,可用于控制该制剂质量。     

HPLC梯度洗脱法测定黄杨宁片中环维黄杨星D的含量

目的：建立黄杨宁中环维黄杨星D的含量测定方法。方法：采用Agilent zorbax extend C₁₈柱,以0.3％二乙胺的甲醇溶液-0.3％二乙胺的水溶液为流动相,梯度洗脱：0～9 min,0.3％二乙胺的甲醇溶液78％～95％,保持6 min；流速0.8 mL·min^-1；蒸发光散射检测器(ELSD)。结果：环维黄杨星D线性范围为0.57～11.44 μg,r=0.999 6,样品的平均加样回收率为97.2%,RSD 1.1%。结论：本法快速简便,专属性强,重复性好,可作为制剂的定量分析方法。     

环维黄杨星D抑制房颤犬心房结构重塑中的作用

目的?探讨环维黄杨星D（CVB-D）抑制房颤犬心房结构重塑中的作用。方法?18只比格犬随机分为对照组（CL）、假手术组（Sham）、房颤组（AF）、房颤加胺碘酮组（AF+AD）、房颤加环维黄杨星-D组（AF+CVB-D）及房颤加普罗布考组（AF+PB），每组3只。采用快速起搏心房4周建立房颤动物模型。彩超检查起搏前后犬心脏左房上下径（LAD）、左室舒张末内径（LVDd）及左室射线分数（LVEF）。HE染色观察心肌组织及间质变化；ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）、Col Ⅲ及赖氨酰氧化酶样蛋白2（LOXL-2）水平变化；Western Blot法检测左房心肌组织内肾素-血管紧张素系统相关的 c3 肉毒杆菌毒素底物1（Rac-1）蛋白表达量。 结果?起搏4周后，心肌细胞HE染色结果显示AF组心房肌细胞较CL组结构紊乱，细胞间隙增大，结构不完整。与本组起搏前比较，起搏4周后AF组LAD与LVDd增高（P<0.05），LVEF降低（P<0.05），血清TNF-α、ColⅠ、Col Ⅲ水平升高（P<0.05）。起搏4周后，分别与CL、Sham组比较，AF组LAD、LVDd、TNF-α、ColⅠ、Col Ⅲ、LOXL-2水平和心肌Rac-1蛋白表达升高，LVEF降低（P<0.05）。与AF组比较，AF+AD、AF+CVB-D及AF+PB组LAD、血清TNF-α、ColⅠ、Col Ⅲ、LOXL-2水平和心肌Rac-1蛋白表达降低，LVEF升高（P<0.05）。与AF+CVB-D组比较，AF+AD及AF+PB组血清LOXL-2水平升高（P<0.05）。 结论?CVB-D可以通过抑制炎症反应，调控细胞外基质纤维化关键过程，预防心房纤维化的发生及结构重塑。     

环维黄杨星D分离方法改进

目的：研究环维黄杨星D新的分离方法.方法：黄杨木总生物碱通过酰化、酸溶分离得到环维黄杨星D三乙酰化物，经水解得目标物。结果：用化学分离方法可得到纯度较高的环维黄杨星D。结论：改进后的工艺操作简单、成本低、产品质量稳定，适合工业化生产。     

聚乙二醇化环维黄杨星D对大鼠长期给药肝、肾毒性研究

目的观察聚乙二醇化环维黄杨星D及环维黄杨星D对大鼠长期静脉给药肝、肾毒性的影响,探讨聚乙二醇修饰小分子技术的减毒作用。方法SD大鼠50只,随机分为正常对照组、环维黄杨星D组及聚乙二醇化环维黄杨星D高、中、低剂量组,每组10只。各药物组大鼠尾静脉注射5mL／kg,对照组尾静脉注射等容量生理盐水,连续给药48d。测定大鼠体重,眼眶取血测定血液生化学指标,并取大鼠肝脏和肾脏进行病理组织学检查。结果与正常对照组比较,环维黄杨星D组尿酸含量较高,与正常对照组比较差异有统计学意义,而聚乙二醇化环维黄杨星D组与正常对照组比较未见差异。提示环维黄杨星D组可能对’肾功能有影响。环维黄杨星D组及聚乙二醇化环维黄杨星D组对肝脏有病理学改变,同等剂量下环维黄杨星D组肝毒性作用大于聚乙二醇化环维黄杨星D组。结论聚乙二醇修饰环维黄杨星D后可降低环维黄杨星D在体内的肝、肾毒性。     

LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中士的宁及其代谢物

目的建立LC-MS/MS法同时测定士的宁及其代谢物士的宁氮氧化物在大鼠血浆中的浓度。方法以盐酸麻黄碱为内标,甲醇沉淀法处理血浆样品。采用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(2.1 mm×150 mm,3.5μm)分离,以甲醇-10 mmol·L-1乙酸铵(用甲酸调p H=4)为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 m L·min-1,用电喷雾离子化和正离子多离子反应监测(MRM)模式检测士的宁和士的宁氮氧化物。结果士的宁及其氮氧化物的线性范围分别为0.510~306.3 ng·m L-1和0.102~306.0 ng·m L-1,定量下限分别为0.510,0.102 ng·m L-1,日内、日间相对标准偏差(RSD)均15%,准确度分别为(89.44±3.43)%~(97.45±6.25)%和(95.86±5.19)%~(106.41±7.43)%。结论该方法准确、灵敏、特异、简便,适用于血浆中士的宁及其代谢物士的宁氮氧化物含量的同时测定。     

环维黄杨星D对大鼠肾脏毒性的初步观察

目的观察环维黄杨星D连续注射给药对大鼠的肾脏毒性作用。方法环维黄杨星D不同剂量组连续给大鼠腹腔注射3个月,观察动物的一般状况、血液生化和肾组织病理变化。结果8mgk/g剂量组有3只动物给药期间出现精神萎糜、反应迟钝、活动呆板、呼吸急促、行走不稳等毒性反应。8mgk/g剂量组大鼠血清的BUN明显升高,4,8mg/kg剂量组部分动物出现肾脏的远曲小管上皮细胞变性、坏死及蛋白管型等病理改变,以8mg/kg剂量组较为严重。结论一定剂量的环维黄杨星D连续注射给药可致肾脏损伤。     

正交实验优化环维黄杨星D醇质体凝胶贴剂的制备研究

目的 优化环维黄杨星D醇质体凝胶贴剂的制备.方法 采用正交设计,以初粘力、持粘力、胶体性能为评价指标,优化处方中甘羟铝、酒石酸和甘油的配比.结果 优化处方中甘羟铝用量为0.15 g,酒石酸为0.1 g,甘油为12 g.结论 NP-700与环维黄杨星D醇质体具有良好相容性,通过优化处方配比,可制得方便适用的醇质体凝胶贴剂.     

环维黄杨星D对照品的建立

目的建立环维黄杨星D对照品.方法采用热分析、HPLC/MS、末端检测HPLC、紫外衍生HPLC、荧光衍生HPLC、TLC及非水滴定共7种方法测定环维黄杨星D对照品含量.结果热分析法不能用于环维黄杨星D纯度分析,HPLC/MS、紫外衍生HPLC、荧光衍生HPLC及末端检测HPLC四法测定的环维黄杨星D纯度一致.结论多种方法互相印证,表明该文建立的对照品分析方法可行.     

血浆中硫普罗宁的测定及其片剂人体生物等效性研究

 目的研究硫普罗宁片在健康人体内的相对生物利用度。方法采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)测定了18名健康男性受试者交叉po 200mg的硫普罗宁参比制剂和受试制剂后不同时间血浆中硫普罗宁的浓度,求出主要药动学参数,并进行方差分析和双单侧t检验。结果HPLC-MS测定血浆中硫普罗宁的线性范围为0.02～5mg·L^-1,定量下限为0.02mg·L^-1。日内、日间精密度(RSD)均小于13%,相对回收率介于96%～106%之间。硫普罗宁片参比制剂和受试制剂主要药动学参数:ρ_max分别为(3.54±0.75)和(3.27±1.03)mg·L^-1;t_max分别为(4.6±1.1)和(4.3±1.0)h;AUC_0-96h分别为(18.2±4.5)和(17.6±5.9)mg·h·L^-1;AUC_0-∞分别为(20.4±5.5)和(19.9±6.9)mg·h·L^-1;t_1/2分别为(39.4±14.3)和(41.8±16.5)h。t_max经非参数秩和检验,受试制剂与参比制剂无统计学显著性差异;ρ_max、AUC_0-96h、AUC_0-∞经对数转换后进行方差分析,受试制剂与参比制剂无统计学显著性差异,双向单侧t检验结果表明,受试制剂ρ_max的90%可信限落在参比制剂70%～143%之间,受试制剂AUC的90%可信限落在参比制剂80%～125%之间;以AUC_0-96h计算,受试制剂硫普罗宁片的相对生物利用度为(95.7±26.1)%。结论两种硫普罗宁片制剂具有生物等效性。     

大鼠血浆中的银杏内酯B的液相色谱-电喷雾串联质谱法测定

目的 建立快速、灵敏、简单的液相色谱-串联质谱( LC-MS/MS)法测定大鼠血浆中的银杏内酯B.方法 血浆样品经乙酸乙酯液-液萃取后,采用Symmetry C18(3.9 mm×150 mmID,5μm)柱分离,以甲醇-乙酸铵溶液(10 mmol·L-1) (85:15,V/V)为流动相,流速为0.8 ml·min-1.采用电喷雾离子化源(ESI)三重四级杆串联质谱,在负离子多反应监测(MRM)模式下进行检测.结果 血浆中银杏内酯B的线性浓度范围为1.0～200 ng·ml-1,定量下限为1.0ng·m1-1,日内、日间精密度(RSD)均小于4.88％,准确度(RE)在±2.61％范围内.未观察到GB明显的基质效应.结论 该方法操作简便、快速、灵敏度高,分析时间短,适用于银杏内酯B的大鼠药代动力学研究.