IL-1β对鼠心肌成纤维细胞增殖和p27蛋白表达的影响

目的 :观察 IL - 1β对基础状态及精氨酸加压素 （AVP）诱导心肌成纤维细胞 （CFs）增殖和 p2 7蛋白表达的影响。方法 :采用胰酶消化 ,差速贴壁法培养 CFs,四氮唑盐 （MTT）比色法检测细胞增殖 ,碘化丙啶 （PI）标记细胞DNA,间接免疫组化染色标记细胞内的 p2 7蛋白 ,用流式细胞分析仪 （FCM）技术测定细胞周期和 p2 7蛋白表达的阳性率。结果 :11× 10 - 7mol/ L AVP组 MTT法测定的 CFs的吸收 （A）值 （0 .386± 0 .0 11）较基础状态 （0 .32 4± 0 .0 0 7）明显升高 （P<0 .0 1） ;1× 10 5 U/ L IL - 1β单独作用组 （0 .2 98± 0 .0 30 ）和 AVP+IL - 1β组 （0 .332± 0 .0 41）的 A值均分别较基础状态和 AVP组显著降低 （均 P<0 .0 1） ;2 IL- 1β组和 AVP+IL- 1β组 CFs的 S期细胞百分率和细胞增殖指数 （PI）分别较基础状态组和 AVP组明显降低 ,而 G0 / G1 期细胞百分率则分别高于上述两组 （均 P<0 .0 1） ;3IL- 1β组和 AVP+IL- 1β组 CFs的 p2 7蛋白表达阳性率分别为 （95 .0 3± 1.0 2 ） % ,（88.2 3± 2 .87） % ,分别高于基础状态 （78.45± 1.91） %和 AVP组 （6 3.30± 1.85 ） % ,并且有统计学意义 （均 P<0 .0 1）。结论 :IL - 1β通过升高细胞内 p2 7蛋白表达水平参与 CFs增殖的负调控过程。     

p27蛋白表达对精氨酸加压素介导心脏成纤维细胞增殖的影响

目的 :观察精氨酸加压素 （AVP）作用下 p2 7蛋白表达在心脏成纤维细胞 （CFs）中的变化 ,探讨 p2 7蛋白调控AVP促 CFs增殖的作用。方法 :以培养的新生 SD大鼠 CFs为实验动物模型 ,采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFs,四氮唑盐 （MTT）比色法检测细胞增殖 ,碘化丙啶标记细胞 DNA ,p2 7蛋白的单抗和标记了 FITC的二抗标记细胞内的 p2 7蛋白 ,采用流式细胞分析仪技术测定细胞周期及 p2 7蛋白表达的阳性率。结果 :1随 AVP浓度的增加 ,MTT法测得的 CFs的 A值呈递增趋势 ,其中 10 - 7,10 - 6 m ol/ L AVP组分别为 0 .30 7± 0 .0 0 9,0 .337± 0 .0 0 7,均明显地高于对照组 （0 .2 98± 0 .0 0 9） ,并有统计学意义 （分别 P<0 .0 5 ,P<0 .0 1） ;2随 AVP浓度的增加 ,CFs的 S期细胞百分率和细胞增殖指数 （PI）逐渐增加 ,G0 / G1 期百分率下降 ,10 - 7,10 - 6 mol/ L AVP组与对照组比较差异非常显著 （P<0 .0 1） ;3CFs的 p2 7蛋白表达阳性率随 AVP浓度的增加而呈递减趋势 ,其中 10 - 7,10 - 6 m ol/ L AVP组 （分别为 71.6 %± 2 .2 % ,6 3.1%± 2 .3% ）明显低于对照组 （86 .5 %± 2 .3% ） ,并有统计学意义 （P<0 .0 1）。结论 :p2 7蛋白是 AVP促 CFs增殖过程的重要负性调节因子 ,AVP通过下调 p2 7蛋白发挥促 CFs增殖作用 ,这可     

白细胞介素-6对血管升压素调控心脏成纤维细胞增殖及p27蛋白表达的干预效应

目的 :观察白细胞介素 6 （interleukin 6 ,IL 6 ）对血管升压素 （argipressin ,AVP）诱导的心脏成纤维细胞 （CFs）增殖及p2 7蛋白表达的影响。方法 :以培养的新生Sprague Dawley（SD）大鼠CFs为实验模型 ,四氮唑盐 （MTT）比色法检测细胞增殖 ,流式细胞分析仪 （FCM）技术测定细胞周期及p2 7蛋白表达阳性率。结果 :① 10 0 0 0U/mlIL 6作用于CFs 4 8h ,MTT法A值 （0 .38± 0 .0 1）显著高于基础状态组 （0 .32± 0 .0 1,P <0 .0 1） ;10 -7mol/LAVP和 10 0 0 0U/mlIL 6共同作用组CFs的A值 （0 .4 1± 0 .0 1）也明显高于AVP单独作用组 （0 .39± 0 .0 1,P <0 .0 1）。②IL 6作用组CFs的S期细胞百分率 （13.0 %± 3.5 % ）和细胞增殖指数 （PI） （2 9.4 %± 1.9% ）均高于基础状态组 （7.5 %± 1.0 %和 2 6 .0 %± 1.0 % ,P <0 .0 1） ,G0 /G1期细胞百分率 （70 .6 %± 1.9% ）低于基础状态组 （74 .0 %± 1.0 % ） ;AVP +IL 6组CFs的S期细胞百分率和PI分别为 18.8%± 1.5 %和 35 .2 %± 1.6 % ,明显高于AVP组 （15 .5 %± 1.4 %和 31.4 %± 1.5 % ,P<0 .0 1） ,而G0 /G1期细胞百分率 （6 4 .8%± 1.6 % ）明显低于AVP组 （6 8.6 %± 1.5 % ,P <0 .0 1）。 （3）IL 6组CFsp2 7蛋白表达阳性率 （72 .6 %± 2 .5 % ）明显低于基础状态组 (78.4 %±     

IL—6对IFN—γ、IL—1诱导人脑膜成纤维细胞IDO抗弓形虫作用的影响

目的：研究IL-6对IFN-γ诱导人脑膜成纤维细胞（Human meninx fibrobiasts，HMF）产生吲哚胺2，3-双加氧酶（mdoleamine 2,3-dioxygenase，IDO）抗弓形虫作用的影响。方法：采用^3H-尿嘧啶(^3H-U)特异标记的弓形虫在HMF内的增殖实验，以及通过反相高效液相色谱仪检测IDO活性。结果：IL-6能诱导HMF产生IDO降解胞内必需氨基酸色氨酸，由于弓形虫发生“色氨酸饥饿”而被抑制生长；加入抗IL-6抗体可逆转IFNγ、IL-1对弓形虫的抑制作用。结论：IL-6可诱导HMF产生IDO抑制弓形虫生长；IL-1单独或协同IFN-γ抗弓形虫增殖都是通过IL-6诱导HMF产生IDO而介导的。     

糜酶介导心脏成纤维细胞增殖中转化生长因子β1的作用

目的 探讨糜酶对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的影响及其与转化生长因子β1(TGF-β1)信号的关系.方法 用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠的CFs.采用四氮唑盐(MTT)比色法(A4go值)测定细胞数目,[3H]脱氧胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)掺入法测定CFs的DNA合成速率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β1的mRNA表达水平.结果 糜酶以剂量依赖方式增加CFs数目与DNA合成速率.15、30和60 ng/mL糜酶组的A490值分别为0.263±0.033、0.348±0.031和0.387±O.026,均明显高于对照组的A490值(O.201±0.019,P相似文献   

葡萄糖和醛固酮对大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响

目的研究葡萄糖和醛固酮对大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响。方法差速贴壁法培养新生大鼠心脏成纤维细胞,不同葡萄糖浓度培养液及醛固酮干预24h后,采用水溶性磷酸化四唑盐（WS T-1）、溴尿苷5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入法同步测定细胞的代谢活性和DNA合成。结果低糖组WST-1和BrdU两种方法测得的A_（450/690）值分别为0.270±0.016,0.206±0.018。与低糖组相比,高糖组细胞的代谢活性[WS T-1：（0.385±0.028）vs（0.417±0.034）]和DNA合成[BrdU：（0.270±0.029）vs（0.279±0.045）]均显著增加（P〈0.01）,两高糖组间细胞的代谢活性和DNA合成差异无统计学意义。低糖培养时,醛固酮（10~（-7）mol/L）显著促进成纤维细胞的增殖（WST-1：0.317±0.023,P〈0.01;BrdU：0.235±0.018,P=0.019）。高糖培养时,醛固酮的刺激成纤维细胞增殖作用不明显（P〉0.05）。在不同糖浓度,螺内酯均能显著抑制醛固酮引起的细胞代谢活性增强（P〈0.05）,但对DNA合成的抑制并不明显（P〉0.05）。进一步分析表明,葡萄糖和醛固酮对成纤维细胞的DNA合成有交互作用（P=0.012）。结论葡萄糖及醛固酮均可促进大鼠心脏成纤维细胞增殖;当以较高浓度的葡萄糖对心脏成纤维细胞培养时,醛固酮的刺激增殖作用可被掩盖。     

Urocortin对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成作用的影响

目的 :探讨 urocortin对大鼠心肌成纤维细胞 （CFs）增殖和胶原合成作用的影响。方法 :消化法培养新生Sprague-Dawley （SD）大鼠的 CFs,采用四氮唑盐 （MTT）比色法测定细胞数目 ,流式细胞分析仪 （FCM）检测细胞周期 ,EL ISA法检测 型胶原合成 ,分别观察不同浓度 urocortin对 CFs增殖和胶原合成的影响。结果 :1随着 uro-cortin浓度的增高 ,CFs MTT比色法 A490 值呈明显的递增趋势 ,其中 10 - 10 、10 - 9、10 - 8、10 - 7和 10 - 6 mol/L组的 A490值分别为 0 .183± 0 .0 0 4、0 .2 2 2± 0 .0 0 4、0 .2 51± 0 .0 0 7、0 .2 80± 0 .0 0 6和 0 .3 17± 0 .0 0 2 ,均较对照组 （A490 值 0 .167± 0 .0 0 4）显著升高 （P均 <0 .0 1）。 2 FCM细胞周期分析结果表明 ,10 - 7mol/L urocortin作用 48h,CFs的 G0 /G1期细胞百分率均较对照组显著降低 （P<0 .0 1） ,S期细胞百分率、G2 /M期细胞百分率和增殖指数则较对照组显著增高 （均 P<0 .0 1）。 3 CFs的 型胶原分泌随着 urocortin作用浓度的增高呈明显的递增趋势 ,其中 10 - 10、10 - 9、10 - 8、10 - 7和 10 - 6 m ol/L urocortin组的 型胶原 A值分别为 0 .576± 0 .0 10、0 .614± 0 .0 0 8、0 .771± 0 .0 47、0 .83 9±0 .0 54和 0 .90 8± 0 .0 0 6,均较对照组     

辛伐他汀对血管升压素诱导鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的探讨辛伐他汀（S imvastatin,S im）对血管升压素（AVP）诱导的新生SD大鼠心脏成纤维细胞（CF）增殖和胶原合成作用的影响,为防治高血压左室肥厚提供理论依据。方法以培养的新生SD大鼠CF为实验模型,采用胰酶消化、差速贴壁法培养CF,运用MTT比色法和3H-脯氨酸掺入法分别观察不同浓度S im对AVP诱导CF增殖和胶原合成的作用及甲羟戊酸（m evalonate,MVA）干预的影响。结果①CF的3H-脯氨酸掺入率随着S im干预浓度的增加而降低,其中1μmol/L和10μmol/L S im组的3H-脯氨酸掺入率分别为（3.67±0.39）mBq/cell和（2.35±0.36）mBq/cell,明显低于对照组（5.01±0.58）mBq/cell（P<0.01）;②MTT比色法A490值随S im浓度的增加而降低,其中1μmol/L和10μmol/L S im组的A490值分别为0.221±0.038和0.163±0.021,均较对照组A490值（0.395±0.039）显著降低（P<0.01）;③10μmol/L S im+1 mmol/L MVA组的3H-脯氨酸掺入率和MTT比色法A490值分别为（5.38±0.72）mBq/cell和0.419±0.051,均显著高于同组10μmol/L S im（P<0.01）。结论S im抑制AVP诱导的CF增殖和胶原合成,其机制可能通过MVA代谢途径实现。     

基底刚度对新生大鼠心脏成纤维细胞增殖和粘附的影响

目的探讨细胞培养基底刚度对心肌成纤维细胞增殖和粘附的影响。方法制备不同配比聚丙烯酰胺凝胶模拟不同基底刚度,采用细胞计数和MTT法检测细胞增殖,免疫荧光成像和免疫印迹方法检测细胞粘着斑分布及其相关蛋白表达。结果采用自重弯曲法测得0.03%、0.13%和0.26%聚丙烯酰胺凝胶的弹性模量为7～33Kpa。在此刚度范围内,随着基底刚度增加心脏成纤维细胞数量显著增加,粘着斑面积占细胞总面积的百分比增加,粘着斑纽蛋白的荧光强度增加,但纽蛋白和桩蛋白的表达量不变。结论基底刚度增加能促进新生大鼠心脏成纤维细胞的增殖和改变粘着斑蛋白的分布。     

糜酶介导心脏成纤维细胞增殖中转化生长因子β_1的作用

目的探讨糜酶对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的影响及其与转化生长因子β_1(TGF-β_1)信号的关系。方法用胰酶消化法分离、培养新生 SD 大鼠的 CFs,采用四氮唑盐(MTT)比色法(A_(490)值)测定细胞数目,[~3H]脱氧胸腺嘧啶核苷([~3H]-TdR)掺入法测定 CFs 的 DNA 合成速率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β_1的 mRNA 表达水平。结果糜酶以剂量依赖方式增加 CFs 数目与 DNA 合成速率。15、30和60 ng/mL 糜酶组的 A_(490)值分别为0.263±0.033、0.348±0.031和0.387±0.026,均明显高于对照组的 A_(490)值(0.201±0.019,P<0.01)。15、30和60 ng/mL 糜酶组的[~3H]-TdR 掺入率均显著高于对照组(P<0.01);糜酶抑制剂预处理抑制糜酶引起的 CFs 数量与[~3H]-TdR 掺入率的增加。糜酶以剂量依赖方式增加 CFs 的 TGF-β_1 mRNA 表达水平。其中15和30 ng/mL 糜酶组的 TGF-β_1 mRNA 表达水平分别为0.650±0.040和0.84...     

白细胞介素-1β和白细胞介素-6对妊娠相关血浆蛋白-A表达的影响

目的探讨炎性因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)对人冠状动脉平滑肌细胞(human coronary artery smooth muscle cell,HCASMC)表达妊娠相关血浆蛋白-A(pregnancy-associated plasma pro-tein-A,PAPP-A)的影响。方法应用20μg/L的IL-1β、10μg/L的IL-6各自刺激HCASMC,共同培养0、2、4、8、243、6 h后收集细胞。应用不同浓度的IL-1β(0、5、20、40μg/L)I、L-6(0、5、10、50μg/L)刺激HCASMC,共同培养6 h后收集细胞。应用实时定量聚合酶链反应的方法检测细胞内PAPP-A基因的表达量。结果在同剂量IL-1βI、L-6刺激下,PAPP-A的表达量在2 h时就开始发生上调,8 h达高峰,而后开始下降;在不同剂量IL-1βI、L-6刺激下,PAPP-A的表达量在实验剂量范围内随着剂量的加大呈上升趋势(IL-1β:r=0.972,P=0.000;IL-6:r=0.941,P=0.000)。结论炎性因子IL-1βI、L-6能促进HCASMC中斑块稳定相关标记物PAPP-A的表达,可能是炎症在急性冠状动脉综合征发生发展中的重要作用机制之一。     

大鼠血管球囊损伤后平滑肌细胞的增殖与雷帕霉素的干预

目的:研究经皮穿刺血管内成形术后大鼠腹主动脉血管平滑肌细胞增殖程度与p27蛋白水平的关系,及国产雷帕霉素（Rapamyc in）对血管平滑肌细胞增殖的抑制,探讨防治经皮冠状动脉内成形术（PTCA）后再狭窄的有效途径和指标。方法:流式细胞计数法测定p27蛋白、CDK2、cyc lin E在大鼠再狭窄血管平滑肌细胞及对照组的表达水平。结果:雷帕霉素干预后p27蛋白表达水平在PTCA术后各组与对照组相比均有上移,减轻血管狭窄程度（P<0.01）。结论:p27蛋白在增殖的血管平滑肌细胞中表达水平与狭窄程度负相关,国产雷帕霉素可上调p27蛋白水平从而抑制血管狭窄形成。     

p27Kip1在大鼠动脉粥样硬化斑块中的表达及法舒地尔的干预作用

目的 观察p27Kip1在大鼠动脉粥样硬化斑块中的表达及盐酸法舒地尔的干预作用.方法 将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为三组:正常对照组、动脉粥样硬化组和法舒地尔组.正常对照组大鼠行假球囊损伤手术后给予正常饮食,动脉粥样硬化组和法舒地尔组大鼠给予维生素D3右下肢肌肉注射后用球囊行动脉拉伤,在基础饲料中加入胆固醇、胆酸钠、丙基硫氧嘧啶、维生素D3粉剂、猪油等饲养,法舒地尔组同时给予法舒地尔腹腔注射.喂养9周后抽血并处死,自主动脉弓下约1 cm处留取动脉组织行HE染色,用免疫组织化学法检测主动脉壁中Rho激酶和p27Kip1蛋白的表达.结果 HE染色显示,动脉粥样硬化组均形成了典型的粥样斑块;免疫组织化学检测发现,Rho激酶在正常的血管壁即有表达,在动脉粥样硬化组的表达明显高于正常对照组和法舒地尔组(P<0.01),在法舒地尔组的表达明显高于正常对照组(P<0.05).p27Kip1蛋白在正常血管壁表达较多,在动脉粥样硬化组的表达明显低于正常对照组和法舒地尔组(P<0.01),在法舒地尔组的表达明显低于正常对照组(P<0.05).结论 动脉粥样硬化病变时,粥样硬化灶内Rho激酶表达明显增加,p27Kip1蛋白的表达明显下调;法舒地尔明显抑制粥样硬化灶内的血管平滑肌细胞增殖,抑制Rho激酶的表达上调及p27Kip1蛋白的表达下调.     

丝裂原活化蛋白激酶在醛固酮诱导心室成纤维细胞增殖中的作用

目的:探讨醛固酮诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖的信号转导机制.方法:用胰酶消化法分离、培养新生大鼠CFs,采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法、western-blotting技术从DNA合成、蛋白表达等方面观察MAPK活化与醛固酮促CFs增殖的关系.结果:①醛固酮剂量依赖性促CFs DNA合成,10-5mol/L PD98059 [(782±152)个·min-1] 可逆转 10-7mol/L醛固酮 [(1879±169)个·min-1]的作用;②10-7mol/L醛固酮对活化MAPK蛋白表达有显著增强作用,在4 h达峰作用(8.11±0.46),10-7mol/L 醛固酮的作用(8.11±0.46)被10-5mol/L PD98059 (1.21±0.10, P<0.01)阻断.结论:醛固酮能激活CFs的MAPK,MAPK表达及活化参与醛固酮诱导的CFs增殖.     

曲古菌素A对血管平滑肌细胞p27kip1表达的调控机制研究

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A（Trichostatin A，TSA）对血管平滑肌细胞（VSMC）的p27kip1表达的影响和调控机制。方法半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测p27kip1的mRNA水平，蛋白印迹测定p27kip1和S-phase kinase—associated protein-2（skp2）蛋白表达，荧光分光光度法测定20S蛋白酶体活性。结果100ng／ml TSA不影响VSMC中p27kip1的mRNA水平。100ng／ml TSA显著抑制血清诱导的p27kip1蛋白下调，并延长p27kip1蛋白的半衰期。100ng／mlTSA抑制血清诱导的skp2表达上调，且skp2表达与相应时点p27kip1蛋白呈负相关。100ng／ml TSA对20S蛋白酶体活性物影响。结论TSA对VSMC的p27kip1表达调控不是在转录水平上，而是通过翻译后机制抑制血清诱导VSMC的p27kip1蛋白降解，其机制可能与TSA抑制泛素连接酶亚单侍skp2表达有关．     

C-Reactive Protein as a Prognostic Variable That Reflects Uncontrolled Up-Regulation of the IL-1-IL-6 Network System in Colorectal Carcinoma

Up-regulation of the IL-1-IL-6 network stimulates systemic expression of C-reactive protein (CRP). This cytokine network system plays a pivotal role in inducing angiogenic growth factors in intestinal mucosa. Serum CRP level and tissue concentrations of cytokines in colorectal cancer patients were determined and an in vitro model was employed to determine the time course of induction of IL-6 in Caco-2 cells. Increased serum CRP was associated with recurrent disease and shorter survival time. Intense surgical stress and the presence of an acute phase reactant were independently associated with overexpression of IL-6 in the tumor. Enhanced IL-6 protein expression in Caco-2 cells induced by the initial treatment with IL-1beta or lipopolysaccharide could be abrogated by additional presupplementation of IL-1ra. The presence of an acute phase reactant reflects uncontrolled up-regulation of the local IL-1-IL-6 network system in the tumor, which may enhance the survival and proliferation of remnant cancer cells after tumor resection.     

Effect of granulocyte colony-stimulating factor on IL-12 p40 production during chemotherapy for B-cell lineage non-Hodgkin's lymphoma patients

Interleukin (IL)-12 is a 70-kDa cytokine comprised of two disulfide-linked proteins (p35 and p40) and is essential for the initiation of effective immune response. Granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) affects the balance in the production of anti-inflammatory cytokines. We investigated the serum IL-12 p40 and IL-12 Mix (p40 and p70) production in 28 patients with B-cell lineage non-Hodgkin's lymphoma (NHL) treated with chemotherapy (e.g., CHOP regimen) with or without G-CSF administration and eight healthy volunteers. We found that serum levels of IL-12 p40 (191.2 +/- 150.0 pg/mL) and IL-12 Mix (277.4 +/- 274.5 pg/mL) in the patients before chemotherapy were higher than those in the healthy volunteers (IL-12 p40: 76.4 +/- 25.3 pg/mL, IL-12 Mix: 48.5 +/- 33.4 pg/mL) (P = 0.04 and 0.02, respectively). Next, we examined the serum IL-12 p40 and IL-12 Mix levels in nine patients receiving chemotherapy with administration of G-CSF (CG group, n = 9) and without G-CSF (C group, n = 9). Serum IL-12 p40 and IL-12 Mix levels were decreased on 10 d after chemotherapy in both groups, and those in CG groups were significantly lower than those in C group. These results indicated that administration of G-CSF decreased serum IL-12 p40 and IL-12 Mix levels. Overall survival (OS) at 24 months was not significantly different in the two groups (58.3% in group C vs. 80.0% in group CG, P = 0.67). However, the survival rate of patients at clinical stages III and IV in CG group (n = 6, 66.0%) was significantly better than that of patients in C group (n = 4, 25.0%) (P = 0.02). Long-term administration of G-CSF appears to influence the survival rate by reducing immunosuppressive IL-12 p40 production.