脑星形细胞瘤中水通道蛋白-4表达的研究

目的:探讨在脑星形细胞瘤中的水通道蛋白-4(AQP-4)表达异常与瘤周水肿、肿瘤分级的关系。方法:采用免疫组化染色法检测正常脑组织和星形细胞瘤中AQP-4蛋白的表达,并进行脑水肿的相关性分析。结果:星形细胞瘤AQP-4蛋白的表达较正常脑组织上调(P<0.05),高、低级别星形细胞瘤的AQP-4蛋白表达有显著性差异(P<0.05)。AQP-4蛋白的表达和星形细胞瘤瘤周水肿指数呈显著负相关(r=-0.8247,P<0.05)。结论:AQP-4在星形细胞瘤中的高表达与瘤周水肿的发生密切相关;随着肿瘤的级别增加,AQP-4表达的上调也越明显。     

刺伤对星形胶质细胞胶质酸性蛋白表达的影响

目的观察刺伤对星形胶质细胞及其胶质酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的影响。方法用腹腔注射速眠新和氯胺酮联合麻醉,微型钻钻孔造模,利用免疫组织化学方法和图像分析仪,观察刺伤后的星形胶质细胞的密度及其胶质酸性蛋白表达的变化,并与未刺伤组作对照分析。结果 GFAP阳性细胞在二组星形胶质细胞中均有分布;刺伤组星形胶质细胞的密度比未刺伤组增加（P〈0.05）,GFAP阳性细胞的平均光密度值（OD值）,刺伤组高于未刺伤组（P〈0.01）。结论刺伤星形胶质细胞后可以引起其数量及其胶质酸性蛋白的表达增加,可能是星形胶质细胞对刺伤的一种保护性反应。     

异丙酚对氨处理的大鼠脑皮质星形胶质细胞水肿及水通道蛋白-4表达的影响

目的 探讨异丙酚对氨处理的大鼠脑皮质星形胶质细胞水肿及水通道蛋白-4(AQP4)表达的影响.方法 原代培养SD大鼠脑皮质星形胶质细胞.分别用氯化铵(5 mmol/L)共培养细胞6、12、24、48 h;二甲亚砜及异丙酚(10 μmol/L)预处理细胞30 min后与氯化铵共培养24 h,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测星形胶质细胞AQP4蛋白表达,光学显微镜观察细胞形态,3-4,5-二甲基噻唑-2,5-二酚四唑溴化物(MTT)检测各组细胞活性.结果 氯化铵处理星形胶质细胞12 h后AQP4表达开始上调,一直持续到48 h,其中24 h时AQP4表达上调最为明显,异丙酚预处理组AQP4表达较NH4Cl-24 h组明显降低(P<0.05);光学显微镜观察发现NH4Cl-24 h组细胞较正常组和异丙酚预处理组细胞肿胀明显;MTT检测显示异丙酚预处理组细胞活性较NH4Cl-24 h组和二甲亚砜组明显增高(P<0.05).结论 异丙酚预处理能抑制氯化铵引起的大鼠脑皮质星形胶质细胞AQP4表达的上调,减轻细胞肿胀程度,提高星形胶质细胞活性.     

醒脑静对大鼠脑出血病灶周围星形胶质细胞表达水通道蛋白-4的影响研究

目的:探讨醒脑静对大鼠脑出血病灶周围星形胶质细胞表达水通道蛋白-4(AQP-4)的影响。方法:建立胶原酶VII定位注射诱发大鼠尾壳核脑出血模型,随机分成醒脑静治疗组和对照组。建模后给予一次药物治疗。醒脑静治疗组大鼠给予腹腔注射醒脑静注射液2 ml/kg,对照组大鼠给予腹腔注射等容量生理盐水。治疗72 h后对比两组大鼠生存率、行为学改变,处死取材测定脑组织含水量变化,观察脑实质组织学及星形胶质细胞超微结构的改变;逆转录PCR检测AQP-4 mRNA的表达;蛋白免疫印迹检测AQP-4蛋白的表达。含血清培养大鼠星形胶质细胞,随机分成5 ml/L、10 ml/L、20 ml/L醒脑静组和对照组,培养基中分别加入5 ml/L、10 ml/L、20 ml/L的醒脑静和等容量的生理盐水,逆转录PCR检测AQP-4 mRNA的表达;蛋白免疫印迹检测AQP-4蛋白的表达。结果:醒脑静治疗组大鼠生存率、行为学评分均较对照组明显改善;电镜下显示醒脑静治疗可减轻模型大鼠病灶周围星形胶质细胞水肿,上调脑组织表达AQP-4蛋白与mRNA的表达,细胞实验显示,随着培养基中加入醒脑静浓度增加,星形胶质细胞的AQP-4蛋白与mRNA的表达增加。结论:经醒脑静治疗后的脑出血大鼠无论在生存率还是在肢体对称平衡方面均得到改善,其机制可能是醒脑静可直接刺激星形细胞上调AQP-4蛋白及mRNA的表达,从而缓解脑出血后血管源性脑水肿的进展,这为未来醒脑静用于治疗脑出血后脑水肿治疗提供新的理论支持。     

局部亚低温对大鼠脑出血后水通道蛋白4表达的影响

目的观察局部亚低温对大鼠自体血注入法脑出血模型水通道蛋白4(AQP-4)mRNA及蛋白质表达的影响,探讨局部亚低温减轻脑出血后水肿的可能机制。方法雄性W istar大鼠240只,随机分为脑出血(ICH)组和脑出血加局部亚低温(ICH+H)组。每组分为对照、脑出血后6、24、72 h,5、7 d共6个亚组,ICH+H组于注血后给予4 h的局部亚低温治疗,各亚组分别进行血脑屏障(BBB)通透性、脑水含量的检测以及应用逆转录(RT)-PCR及W estern印迹对AQP-4进行测定。结果ICH组大鼠脑组织水含量、BBB通透性以及AQP-4 mRNA表达的增加始于脑出血后6 h,AQP-4蛋白质表达的增加始于脑出血后24 h,均至72 h达高峰(P<0.01)。AQP-4 mRNA及蛋白质表达的变化与BBB通透性的变化呈正相关(r=0.78和r=0.76)。ICH+H组的脑组织水含量和BBB通透性在各时间点与ICH组相比明显下降,而AQP-4 mRNA吸光度值(A)在脑出血后48 h与ICH组相比开始较低,在72 h,由ICH组的1.25±0.03降至1.04±0.02(P<0.01),AQP-4蛋白质A值在各时间点与ICH组相比明显下降,在72 h,由ICH组的0.77±0.08下降至0.25±0.04(P<0.01)。结论脑出血后BBB完整性的破坏可以导致AQP-4表达的上升。局部亚低温可以抑制脑出血后AQP-4 mRNA和蛋白质表达的增加。局部亚低温可能既通过减轻BBB完整性的破坏在转录水平抑制AQP-4 mRNA表达的增加,也可以在翻译水平直接抑制AQP-4蛋白质的表达,来减轻脑出血后的脑水肿形成。     

水通道蛋白4在缺氧缺糖后水肿星形胶质细胞中的作用

目的 探讨水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)在缺氧缺糖培养后水肿星形胶质细胞中的表达变化与作用.方法 星形胶质细胞分为正常组和缺氧缺糖组,缺氧缺糖组细胞经过5 h缺氧缺糖后恢复正常条件培养至0.5、2、8、24 h和48 h 5个时间点时,用光镜观察细胞形态变化,RT-PCR及免疫荧光法测定AQP4的mRNA及蛋白的表达变化.结果 ①在缺氧缺糖后0.5 h,细胞肿胀逐渐形成并继续加重,2 h肿胀达到高峰,至8 h和24 h时肿胀逐渐消退,48 h细胞基本恢复正常形态.②RT-PCR和免疫荧光检测:在缺氧缺糖后0.5 h,AQP4 mRNA和蛋白的表达均较正常组明显下降(P<0.05),2 h回升,8 h明显超过正常水平,达最高值(P<0.05),24 h有所下降,但仍明显高于正常水平(P<0.05),至48 h时mRNA和蛋白的表达均基本恢复正常水平.结论 缺氧缺糖后星形胶质细胞水肿形成及消退期AQP4的不同表达变化可能都是细胞的一种自身保护机制,从而尽量维持细胞的正常形态和功能.     

水通道蛋白1、4在培养大鼠星形胶质细胞、BT325细胞及人脑胶质瘤组织中的表达

目的 水通道蛋白作为细胞膜特异性水转运蛋白在脑内分布广泛,参与脑内水平衡调节,与脑肿瘤、脑创伤等多种疾病导致的脑水肿有关.本实验主要研究水通道蛋白1、4在培养大鼠星形胶质细胞、人多形性胶质母细胞瘤系BT325细胞及人脑胶质瘤组织中的表达情况.方法 应用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色鉴定培养大鼠星形胶质细胞及BT325细胞.应用反转录PCR法检测GFAP、AQP1及AQP4在不同组织细胞中的表达.结果 实验中培养大鼠星形胶质细胞及BT325细胞GFAP免疫细胞化学染色阳性.体外培养大鼠星形胶质细胞、人胶质母细胞瘤组织及对照组标本均有GFAP表达,同时也有AQP1及AQP4表达.BT325细胞只有GFAP表达,无AQP1及AQP4表达.结论 AQP1、4在培养大鼠星形胶质细胞及胶质瘤组织中均有表达,可能对脑功能的维持及肿瘤性脑水肿的发生、消散有重要影响.     

低渗状态下星形胶质细胞AQP8的表达变化

目的 探讨低渗透压作用下,星形胶质细胞水通道蛋白8(aquaporin8,AQP8)的表达变化规律.方法 原代培养大鼠星形胶质细胞,随机分为对照组(常规培养液)和低渗组(268、254、240 mmol/L),每组分别作用1、3、6、12、24 h,共5个时间点.通过MTT比色法检测细胞活力,免疫细胞化学、免疫荧光、Real time-PCR研究AQP8及其mRNA的表达变化.结果 对照组星形胶质细胞的细胞形态、细胞活性、AQP8及其mRNA的表达在各时间点均无明显变化(P>0.05).低渗组中,星形胶质细胞水肿,细胞活性下降;AQP8及其mRNA的表达水平随低渗程度的下调和低渗作用时间的延长而增强.低渗液(268、254、240 mmol/L)作用后,免疫细胞化学显示星形胶质细胞的AQP8表达从低渗作用1 h的(0.258 3±0.009 8, 0.280 0±0.010 9, 0.281 7±0.007 5) 到低渗作用24 h的(0.385 0±0.010 9, 0.406 7±0.007 0, 0.425 0±0.010 4) (P<0.05);Real time PCR显示:AQP8与beta-actin 的mRNA水平比从低渗作用1 h的(0.127 5±0.011 8,0.134 4±0.032 4, 0.167 5±0.007 8)上升到(3.278 0±0.121 2,5.410 4±0.104 1,8.351 0±0.288 0).结论 低渗作用下,AQP8介导的水分子运输可导致星形胶质细胞肿胀,继而引发细胞结构、功能的损伤; AQP8的表达上调可能是导致星形胶质细胞水肿形成和发展的重要分子机制之一.     

MAPKs信号通路干预对体外培养大鼠星形胶质细胞划痕损伤后水通道蛋白4表达的影响

目的研究体外培养大鼠星形胶质细胞划痕损伤后水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)表达变化,并观察丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路特异性抑制剂对此变化的影响。方法利用传代培养10d左右的大鼠星形胶质细胞制作划痕损伤模型,部分实验于划痕损伤前1h分别加入ERK抑制剂U0126,p38MAPK抑制剂SB203580及JNK抑制剂SP600125。观察细胞形态变化、GFAP免疫细胞化学染色变化,并用实时荧光定量PCR法检测AQP4mRNA表达变化。结果划痕损伤后12h,细胞形态由扁平形变为不规则形,部分细胞突起向划痕区伸出,划痕区出现GFAP免疫化学染色阳性细胞,AQP4mRNA表达水平明显降低(P<0.05),而U0126,SB203580和SP600125预处理均能阻止此种变化(P<0.05)。结论划痕损伤引起培养星形胶质细胞AQP4mRNA表达下调,MAPKs抑制剂可对抗此作用,提示MAPKs信号通路参与星形胶质细胞损伤后AQP4表达变化的调节。     

实验性肝损伤大鼠脑星形胶质细胞水通道蛋白-4和胶质原纤维酸性蛋白表达与脑水肿关系研究（摘要）

目的观察不同肝损伤大鼠脑星形胶质细胞（AS）中水通道蛋白-4（AQP-4）和胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）表达变化与动脉血氨、脑磁共振信号及脑水肿的关系，探讨肝损伤时脑水肿的发生机制极其在肝性脑病中的作用．方法：SD大鼠随机分为3组：急性肝衰竭组（n=25）10％硫代乙酰胺（TAA）溶浓300mg／kg连续3d腹腔注射成模．肝硬化组（n=25）10％硫代乙酰胺溶液150mg／kg腹腔注射每周3次连续14周成模．[第一段]     

水通道蛋白-5与鼻息肉手术疗效的相关性

目的观察水通道蛋白-5（aquaporin-5,AQP5）在鼻息肉术后未复发及复发患者鼻息肉组织中的表达及分布,初步探讨AQP5在鼻息肉中的表达程度与鼻息肉手术疗效的相关性。方法选取鼻息肉患者63例,两侧病变以病重侧计,所有病例均在鼻内镜下行鼻息肉摘除及窦口开放术。取63例鼻息肉组织,用4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,应用HE染色和免疫组织化学技术检测AQP5在未复发和复发鼻息肉组织中的阳性细胞的表达,对AQP5表达程度和手术疗效进行相关性统计学分析。结果AQP5在鼻息肉术后未复发组中的阳性细胞表达显著降低,与复发组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论AQP5的高表达可能与术后鼻息肉复发有一定关系;鼻息肉的AQP5的表达程度可以作为预测鼻息肉患者预后指标之一。     

星形胶质细胞水通道4表达变化与胶质瘤性脑水肿的关系

目的研究脑胶质瘤细胞对体外血脑屏障模型水转运及星形胶质细胞水通道4的影响。方法利用重水的荧光特性及高效液相系统检测体外血脑屏障模型对水转运的变化。采用半定量RT-PCR的方法分析胶质瘤细胞作用后星形胶质细胞水通道4的表达变化。结果胶质瘤细胞可以明显增强体外血脑屏障模型对水由内皮细胞腔面至基底面的扩散。这一过程不依赖于白蛋白等大分子物质的通透性变化。同时,胶质瘤细胞明显降低了胶质细胞水通道4的表达水平。结论胶质瘤细胞可以明显增强体外血脑屏障模型对水由内皮细胞腔面向基底面的扩散。胶质瘤性脑水肿不一定是血浆中大分子物质通透性增加的结果。胶质瘤细胞对胶质细胞水通道4的影响可能是胶质瘤性脑水肿产生的分子机制之一。     

Relationship between aquaporin-4 expression in astrocytes and brain edema caused by glioma]

OBJECTIVE: To investigate the relationship between aquaporin-4 (AQP4) water channel expression in astrocytes and brain edema caused by glioma. METHODS: The changes of water transport in in vitro blood-brain barrier models were examined using high-performance liquid chromatography (HPLC), and the expression level of AQP4 was assayed by semiquantitative RT-PCR. RESULTS: The water transport of the in vitro blood-brain barrier model from the luminal side to basolateral side was increased after coculture with glioma cells, which induced significantly decreased expression level of AQP4 in the astrocytes. CONCLUSIONS: Glioma cells can promote water transport in in vitro blood-brain barrier model from the luminal side to abluminal side, and the brain edema induced by the glioma cells may not necessarily be the result of hyperpermeability of the blood-brain barrier to macromolecules in the plasma. The decreased expression level of AQP4 induced by glioma cells may be a molecular mechanism for neoplastic brain edema in patients with glioma.     

体外培养大鼠皮层神经元和星形胶质细胞氧糖剥夺后DDR1的表达情况

目的:探讨DDR1蛋白在氧糖剥夺后的神经元细胞及星形胶质细胞中的表达情况,推测可能机制。方法:采用SD孕鼠的胚鼠皮层培养神经元,采用新生SD大鼠皮层培养星形胶质细胞。建立氧糖剥夺(OGD)损伤模型并随机分为神经元正常对照组、神经元OGD组、星形胶质细胞正常对照组和星形胶质细胞OGD组。噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活性;免疫荧光染色及Western blot方法检测各组DDR1的表达情况。结果:与正常对照组相比,OGD组细胞形态发生明显改变,MTT法测得细胞活性值降低;与神经元正常对照组相比,神经元OGD组的DDR1蛋白表达水平增加(P<0.05);与星形胶质细胞正常对照组相比,星形胶质细胞OGD组的DDR1蛋白表达水平无明显增加(P>0.05)。结论:OGD处理可诱导DDR1蛋白在大鼠皮层神经元中的表达,提示DDR1蛋白可能参与OGD后细胞凋亡等病理生理过程。     

脂多糖、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β对鼠肺微血管内皮细胞水通道蛋白-1表达的影响

目的　通过观察脂多糖 (LPS)、肿瘤坏死因子 α(TNF- α)、白细胞介素 1β(IL- 1β)对鼠肺微血管内皮细胞水通道蛋白 1(AQP- 1)表达的影响 ,为研究急性肺损伤时肺水异常代谢的机制提供实验依据。方法　在体外培养大鼠肺微血管内皮细胞 ,分为LPS组、TNF α组、IL- 1β组和对照组 ,前三组分别给予LPS 10 0ng/mL、TNF -α 10 0 0U/mL、IL -1β10 0 0U/mL刺激 4h ,应用半定量RT- PCR法以及免疫细胞化学染色法检测AQP- 1的表达。结果　刺激组AQP -1的表达显著低于对照组 (P <0 . 0 1)。结论　LPS、TNF -α、IL- 1β刺激下AQP- 1表达下降 ,提示AQP -1在急性肺损伤时可能与肺水代谢异常有关。     

早期食道癌的低张双对比造影检查的X线诊断价值

目的:研究探讨早期食道癌的影像学诊断及低张双对比造影的价值。方法:收集69例早期食道癌X线低张双对比造影的影像资料和双对比造影的影像资料及临床病理资料,分析发现低张双对比造影检出率最高达到92.75%。糜烂型和乳头型早期癌症易检出,斑块型次之,平坦型X线难显示。结果:癌组织浸润黏膜下层X线低张双对比造影全部检出,浸润黏膜层检出87.5%,原位癌只有37.5%的检出率,而且不能确诊。结论:食道癌的X线检出以低张双对比造影检出率最高,结合内镜检查能准确进行分型,结合CT检查能了解周围浸润情况。     

高渗液对大鼠胸膜间皮细胞水通道蛋白1表达的影响

目的 观察高渗液对胸膜间皮细胞水通道蛋白1（AQP1）表达的影响。方法 体外培养Wistar大鼠胸膜间皮细胞,鉴定后将细胞随机分为对照组和高渗组,对照组以D-MEM／F-12培养液培养,高渗组以含不同浓度NaCl的高渗培养液培养,100mmol／LNaCl组分为6、12、18及24h4个时间组,应用Western印迹、RT-PCR方法检测细胞中AQP1表达变化。结果含25、50、75、100、150mmol／LNaCl的高渗培养液作用细胞24h后,AQP1蛋白表达量（A值）分别为24．0±1．8、27．8±2．4、31．7±2．5、89．7±6．2及107．7±9．3,均高于对照组（10．8±1．5）（t值分别为16．1、17．1、20．2、35．1、29．0,均P〈0．01）;含100mmol／LNaCl高渗液培养细胞6、12、18及24h后,AQP1表达量（A值）分别为42．1±2．6、78．9±3．6、109．6±7．6及123．4±8．6,均高于对照组（12．9±1．9）（t值分别为25．7、45．5、34．8、35．3,均P〈0．01）。结论高渗液能上调胸膜间皮细胞AQP1的表达,AQP1可能参与胸水的转运。     

护理干预联合低张力水充盈CT增强扫描对胃肿瘤影像质量的影响

目的:探讨通过护理干预联合低张力水充盈CT增强扫描对胃肿瘤诊断的影响。方法:将100例行CT增强扫描的胃肿瘤患者随机分两组,扫描前均行低张力水充盈。对照组50例于检查前予心理护理及检查介绍;观察组给予增强扫描前、中、后全过程中实施护理干预。结果:观察组50例患者胃壁轮廓显示清晰,质量优良,患者的依从性及影像质量优于对照组(P<0.05)。结论:护理干预联合低张力水充盈CT增强扫描可提高胃肿瘤的影像质量。     

慢性肺源性心脏病并发低渗性脑病临床分析

目的探讨慢性肺源性心脏病并发低渗性脑病的病因及防治方法。方法对37例出现神经精神症状的慢性肺源性心脏病患者,测定其血浆渗透压和血气分析,并根据测定结果进行有针对性的治疗。结果37例慢性肺源性心脏病患者血气分析排除了呼吸衰竭所致的肺性脑病,其血浆渗透压为206-259mmol／L,均明显降低,经补充电解质和综合治疗,35例（94．6％）恢复正常或接近正常,2例（5．4％）因并发多器官功能衰竭死亡。结论慢性肺源性心脏病患者出现神经精神症状时,不应只考虑肺性脑病、脑血管意外等疾病,应常规测电解质、血浆渗透压,了解是否合并低渗性脑病,以免误诊。一旦发现低渗性脑病,应立即补充电解质,综合治疗,以尽可能获得满意疗效。