生物钟基因Period2对裸鼠卵巢癌移植瘤生长和血管生成抑制作用的机制研究

目的:探讨生物钟基因Period2对卵巢癌裸鼠移植瘤生长转移和血管生成的作用及可能机制。方法:利用卵巢癌细胞株构建裸鼠卵巢癌皮下移植瘤,利用基因转染技术,外源性导入重组基因Period2,使之在肿瘤组织成功稳定表达,分别采用Real-time定量PCR和Western blot检测移植瘤中Period2表达,治疗期间测量移植瘤体积,治疗2周后处死裸鼠,称取瘤重,免疫组化检测肿瘤组织中血管内皮生长因子/血管通透性因子(VEGF/VPF)、血管内皮生长因子受体1(VEGFR1)、微血管密度(MVD)(CD34标记)的表达情况,Western blot检测肿瘤转移相关基因(MTA1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9),以及PI3K/Akt信号通路的表达。结果:(1)外源性导入Period2基因在裸鼠移植瘤肿瘤组织中成功稳定表达。(2)Period2组移植瘤体积与其他两组相比较,差异有统计学意义(F=23.469,P0.001)。转染后2周,Period2组移植瘤重量明显低于空质粒组和对照组(P0.05),Period2组抑瘤率达到38.9%。(3)免疫组化结果表明,Period2组的VEGF/VPF、VEGFR1表达下降(F=46.80/48.09,P0.001),MVD计数(CD34标记)显著减少(F=138.4,P0.001)。(4)Western blot结果表明,Period2组MTA-1和MMP-9表达明显少于其他组(P0.05),自噬与凋亡相关信号通路PI3K/Akt中标志性蛋白PI3K、Akt表达明显下调(P0.05)。结论:(1)外源性导入Period2过表达可使卵巢癌生长速度减慢,抑瘤率明显提高。(2)Period2可能通过抑制VEGF/VPF、MTA-1、MMP-9表达而抑制卵巢癌的血管新生和浸润转移。(3)Period2可能通过干扰PI3K/Akt信号通路影响凋亡,抑制肿瘤血管形成来发挥抑瘤作用。     

基质金属蛋白酶-9及基质金属蛋白酶组织抑制物-1表达失衡与宫颈癌局部肿瘤血管生成的关系

目的 :探讨基质金属蛋白酶 - 9(MMP 9)和基质金属蛋白酶组织抑制物 - 1(TIMP 1)在宫颈癌局部肿瘤血管生成中的作用。方法 :采用免疫组织化学SP法检测 75例早期宫颈癌 (ICC)、18例宫颈上皮内瘤样病变 (CIN)和 15例癌旁正常宫颈上皮 (NCE)中MMP 9和TIMP 1的表达情况 ,并检测其中微血管密度 (MVD ,CD3 4 标记 )。结果 :从NCE组到CIN组再到ICC组 ,MMP 9的阳性表达率显著升高 (P <0 0 5 )而TIMP 1未见升高 (P >0 0 5 ) ,并且TIMP 1在ICC组的阳性表达率显著低于MMP 9(P <0 0 1)。MMP 9在ICC组中表达与MVD显著正相关 (r =0 2 87,P <0 0 5 ) ,而TIMP 1与MVD无显著相关性 (r=0 195 ,P >0 0 5 )。宫颈癌中MMP 9表达高于TIMP 1者 ,其MVD显著高于MMP 9表达低于TIMP 1者 (P <0 0 5 )。结论 :MMP 9和TIMP 1表达失衡可能在宫颈癌局部肿瘤血管生成中起重要作用 ,MMP 9表达增强而TIMP 1表达降低 ,其血管生成能力可能显著增强 ,但并非唯一决定因素。检测宫颈癌中MMP 9和TIMP 1表达对进一步了解宫颈癌局部血管生成情况有一定的应用价值。     

血管抑素基因治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的:研究血管抑素(Angiostatin)基因转染治疗人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的作用及其相关机理。方法:使用人卵巢癌细胞株SKOV3建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型。随机将荷瘤裸鼠分为基因治疗组、空质粒组和空白对照组,分别于瘤体注射Angiosta-tin/PCDNA3、空质粒PCDNA3和无菌生理盐水,质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。观察各组动物的肿瘤生长曲线,检测各组肿瘤Angiostatin、VEGF的表达和微血管密度(MVD),利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析,计算细胞凋亡指数(AI)。结果:基因治疗组裸鼠的肿瘤生长在早期受到明显抑制,大约1周后生长速度有所加快,肿瘤组织中Angiostatin蛋白局部高表达,VEGF的表达高于空质粒组和空白对照组,AI(4.21±0.49)高于空质粒组和空白对照组,MVD(19.3±3.2)低于空质粒组。结论:Angiostatin基因可以通过抑制血管生成而在一定程度上抑制肿瘤生长,其作用的发挥是独立于VEGF的。     

肿瘤抑素抗血管活性相关肽对宫颈癌Hela细胞生长和转移抑制作用的实验研究

目的研究改造后的血管生成抑制相关肽（21肽）抗血管生成活性及对人宫颈癌Hela细胞皮下移植裸鼠模型的抑制作用,探讨其抑瘤作用机制。方法2005年8月至2006年2月哈尔滨医科大学第一临床医学院进行Hela细胞株皮下接种裸鼠造模,21肽治疗3周后,处死动物剥离肿瘤,称重并计算抑瘤率。免疫组化方法检测21肽对肿瘤组织的微血管密度（MVD）、增殖细胞核抗原（PCNA）和血管内皮生长因子（VEGF）的影响。结果21肽组平均抑瘤率可达51.89%,肿瘤组织微血管密度明显降低,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;21肽组肿瘤组织的PCNA、VEGF呈低表达,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论21肽具有显著的抗血管生成活性,可明显地抑制裸鼠宫颈癌细胞的生长,其抑制宫颈癌的作用机制可能与其降低新生血管形成和调解血管生成相关因子的表达有关。     

白细胞介素24对裸鼠人宫颈癌Hela细胞移植瘤抑制作用的探讨

目的：探讨基因重组质粒pDC316-hIL-24对裸鼠人宫颈癌模型的肿瘤生长及凋亡的作用。方法：于5周龄裸鼠腋窝外侧皮下注射1×107个/mL Hela细胞悬液100 μL,将15只构建成功的人宫颈癌Hela细胞裸鼠模型随机分为3组,分别于瘤体内注射转染试剂Lipofectamine 2000与基因重组质粒pDC316-hIL -24（A组）、空质粒pDC316（B组）以及磷酸盐缓冲液（C组）,比较干预后各组移植瘤的体积及抑瘤率。应用RT-PCR法测定移植瘤中hIL-24的表达,HE染色观察各组肿瘤组织形态学变化,免疫组化方法研究肿瘤细胞凋亡情况。结果：①IL-24基因成功转染入肿瘤细胞并在其中成功表达,至实验结束时,B组和C组移植瘤体积大于A组（F=63.395,P ＜0.05）;A组的平均抑瘤率高于B组（t=130.920,P ＜0.01）。②病理学观察见A组宫颈癌细胞有局灶性坏死,细胞变大,胞质疏松,核深染,可见核固缩、核溶解、核碎裂,染色质成团状。③免疫组化结果显示,A组BCL-2蛋白表达低于其他2组（F=6.164,P ＜0.05）,而其同源蛋白BAX表达高于其他2组（F=58.426,P ＜0.05）。结论：基因重组质粒pDC316-hIL-24对宫颈癌裸鼠模型肿瘤生长具有明显的抑制作用,其可能通过激活细胞凋亡通路而诱导肿瘤细胞凋亡。     

白细胞介素24对裸鼠人宫颈癌Hela细胞移植瘤抑制作用的探讨

目的：探讨基因重组质粒pDC316-hIL-24对裸鼠人宫颈癌模型的肿瘤生长及凋亡的作用。方法：于5周龄裸鼠腋窝外侧皮下注射1×10 7个／mLHela细胞悬液100uL,将15只构建成功的人宫颈癌Hela细胞裸鼠模型随机分为3组,分别于瘤体内注射转染试剂Lipofectamine2000与基因重组质粒pDC316-hIL-24（A组）、空质粒pDC316（B组）以及磷酸盐缓冲液（C组）,比较干预后各组移植瘤的体积及抑瘤率。应用RT-PCR法测定移植瘤中h／L-24的表达．HE染色观察各组肿瘤组织形态学变化。免疫组化方法研究肿瘤细胞凋亡情况。结果：①IL-24基因成功转染人肿瘤细胞并在其中成功表达,至实验结束时,B组和C组移植瘤体积大于A组（F=63．395,P〈0．05）;A组的平均抑瘤率高于B组（t=130．920,P〈0．01）。②病理学观察见A组宫颈癌细胞有局灶性坏死,细胞变大,胞质疏松,核深染,可见核固缩、核溶解、核碎裂,染色质成团状。⑧免疫组化结果显示,A组BCL-2蛋白表达低于其他2组（F=6．164,P〈0．05）,而其同源蛋白BAX表达高于其他2组（F=58．426,P〈0．05）。结论：基因重组质粒pDC316-hIL-24对宫颈癌裸鼠模型肿瘤生长具有明显的抑制作用,其可能通过激活细胞凋亡通路而诱导肿瘤细胞凋亡。     

酞胺哌啶酮对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的作用

目的 :观察酞胺哌啶酮对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的抑制作用。方法 :于裸鼠背部右侧皮下接种SKOV3 瘤源 ,随机分为 4组 :治疗组 - 1和对照组 - 1,皮下移植后次日开始分别给予酞胺哌啶酮 2 0 0mg kg .d-1、等体积 0 .5%羧甲基纤维素钠腹腔内注射 ,共 4周。治疗组 - 2和对照组 - 2 ,皮下移植第 15天开始分别给予酞胺哌啶酮 2 0 0mg kg .d-1和等体积 0 .5%羧甲基纤维素钠 ,共 2周。定期检测皮下瘤体积和裸鼠体重。用免疫组化方法检测肿瘤组织微血管内皮细胞的表达情况 ,在光学显微镜高倍视野下 (2 0 0× )分别计数肿瘤组织的微血管密度 (MVD)。结果 :治疗组裸鼠皮下瘤体积较对照组明显减小 :治疗结束时 ,治疗组 - 1抑瘤率为 4 0 .2 % (P <0 .0 1) ;治疗组 - 2抑瘤率为 2 8.5% (P <0 .0 5)。治疗组裸鼠体重与对照组无明显差异 (P >0 .0 5)。两治疗组皮下瘤的MVD明显降低 ,治疗组 - 1的抑制率为 4 3.7% (P <0 .0 1) ,治疗组 - 2的抑制率为4 2 .1% (P <0 .0 5)。结论 :酞胺哌啶酮能抑制人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤生长及微血管生成 ,其生长抑制作用以早期应用效果显著 ,且其副作用不明显     

Ang-1、Ang-2和AS在稽留流产患者血清和蜕膜组织中的表达及意义

目的:检测血管生成素1(Ang-1)、血管生成素2(Ang-2)及血管抑素(AS)在稽留流产(MA)患者血清和蜕膜组织中的表达,对血管生成的影响,探讨其与稽留流产的关系。方法:选取稽留流产患者62例和同期自愿要求终止妊娠的正常孕妇60例。酶联免疫吸附法检测患者血清中Ang-1、Ang-2和AS水平免疫组化法检测蜕膜组织中Ang-1、Ang-2、AS及CD31表达,计数两组微血管密度(MVD)。结果:稽留流产患者血清中Ang-1、Ang-2表达水平低于对照组,AS表达水平高于对照组,但差异无统计学意义。稽留流产患者蜕膜组织中Ang-1、Ang-2、CD31表达水平明显低于对照组(P<0.01或P<0.05),AS表达水平明显高于对照组(P<0.01)。对照组患者蜕膜组织中Ang-1、Ang-2表达水平与CD31呈正相关(r=0.535,r=0.466,P<0.01),Ang-1、Ang-2、CD31表达水平与AS呈负相关(r=-0.395,r=-0.506,r=-0.460,P<0.01或P<0.05);稽留流产患者蜕膜组织中Ang-1、Ang-2表达水平与CD31呈正相关(r=0.678,r=0.473,P<0.01),Ang-1、Ang-2、CD31表达水平与AS呈负相关(r=-0.610,r=-0.402,r=-0.491,P<0.01或P<0.05)。结论:蜕膜组织中Ang-1、Ang-2、AS表达与血管生成密切相关,Ang-1、Ang-2的低表达及AS的高表达参与稽留流产胚胎血管生成障碍。     

抑制VEGF-B表达对人绒毛膜癌裸鼠移植瘤影响的研究

目的:研究RNA干扰下调血管内皮生长因子-B(VEGF-B)表达对人绒毛膜癌裸鼠移植瘤生长、侵袭转移及血管生成的影响。方法:将构建的含VEGF-B shRNA的质粒转染人绒毛膜癌细胞JEG-3,建立裸鼠皮下移植瘤模型。观察shRNA干扰VEGF-B表达对JEG-3裸鼠移植瘤生长及侵袭转移能力的影响,并采用免疫组化技术检测移植瘤组织中VEGF-B的表达变化及其所含CD34标记的肿瘤微血管密度(MVD)的差异。结果:(1)抑制VEGF-B表达可减小裸鼠皮下肿瘤大小(P0.05),并降低肿瘤细胞肺转移的发生率(P0.05);(2)免疫组化结果提示,VEGF-B shRNA转染组移植瘤中VEGF-B表达及MVD均低于空白对照组和阴性对照组(P0.05);(3)相关性分析显示,VEGF-B蛋白表达水平与绒毛膜癌MVD高低成正相关。结论:VEGF-B基因在绒毛膜癌的体内生长、侵袭转移中起重要作用,shRNA下调其表达能抑制绒毛膜癌细胞的体内生长、侵袭转移,可能与其调控瘤组织内的微血管形成有关。     

分化抑制因子-1在宫颈癌组织中表达及其与微血管密度的关系

目的探讨分化抑制因子-1(Id-1)在宫颈癌组织中的表达及其与肿瘤发生、发展以及血管生成的关系。方法 2009年2月至2010年6月在吉林大学第二临床医院采用免疫组化法检测35例宫颈浸润癌(ICC)组织及20例正常宫颈上皮组织(NCE)中Id-1和微血管密度(MVD)的表达。结果 Id-1蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率为71.43%,正常宫颈上皮组织中阳性表达率为0,两组比较有统计学意义(P<0.01),ICC组Id-1高表达与组织分化程度、间质浸润深度和盆腔淋巴结转移相关(P﹤0.05),而与FIGO分期无关(P﹥0.05);MVD计数在宫颈癌组织中表达为46.57±10.291,在正常宫颈上皮组织中为12.40±3.761,两组比较有统计学意义(P<0.05),MVD的表达在ICC组内与盆腔淋巴结转移、组织分化程度有关(P﹤0.05),而与FIGO分期、间质浸润深度无关(P﹥0.05);ICC组中Id-1表达强度与MVD呈正相关(r=0.648,P﹤0.01)。结论 Id-1因子通过促进肿瘤血管生成,从而参与宫颈癌的发生发展;子宫颈癌组织中的MVD值随着Id-1因子表达强度的增加而增高。阻断Id-1因子在子宫颈癌中的表达,有望成为治疗宫颈癌的途径之一。     

EFEMP1 expression promotes angiogenesis and accelerates the growth of cervical cancer in vivo

Objective

The study was to investigate the role of EFEMP1 in angiogenesis and growth of cervical carcinoma in vivo.

Methods

Effects of EFEMP1 on proliferation of Hela cells and HUVECs, invasion of Hela cells and migration of HUVECs, and adhesion of Hela cells to HUVECs were evaluated by MTT, Transwell chamber assay and adhesion assay, respectively. EFEMP1 overexpression in Hela cells was achieved by stable EFEMP1 gene transfection into Hela cells by Lipofectamin™ 2000 and the effectiveness of transfection was verified with western-blotting. The effect of EFEMP1 transfection upon the VEGF expression of Hela cells was detected with ELISA. The nude mouse models bearing cervical cancer were established with Hela cells transfected with EFEMP1 gene to observe the role of EFEMP1 in angiogenesis and growth of cervical cancer in vivo. VEGF expression and microvascular density of cervical cancer tissues were detected with immunohistochemistry and CD34 labeling respectively to elucidate the pathway by which EFEMP1 influences the growth of cervical cancer.

Results

Proliferation and invasion of Hela cells were promoted by the EFEMP1 protein. The EFEMP1 gene transfection into Hela cells was successful and EFEMP1 gene obtained stable high expression in Hela cells. Compared to the control, the tumors with EFEMP1 overexpression showed a faster growth rate and had a higher level of VEGF expression and microvascular density. EFEMP1 gene transfection elevated the VEGF protein level in Hela cells and EFEMP1 protein facilitated the adhesion of Hela cells to HUVECs. However, no direct effect of EFEMP1 was observed on proliferation, migration and tube formation of HUVECs.

Conclusions

EFEMP1 promoted the angiogenesis and accelerated the growth of cervical carcinoma in vivo through a VEGF up-regulation pathway.     

人参皂甙Rg3对荷卵巢癌的严重联合免疫缺陷鼠的抗肿瘤血管生成作用的研究

目的　研究人参皂甙Rg3体内抗卵巢癌血管生成的作用。方法　建立荷卵巢癌的严重联合免疫缺陷 (SCID)鼠腹腔移植瘤模型 ,分为 3组。空白组 :SCID鼠荷瘤后不干预 ;对照组 :荷瘤SCID鼠予磷酸盐缓冲液 (PBS)灌胃 ;实验组 :荷瘤SCID鼠予人参皂甙Rg3和PBS混悬液灌胃。分别采用逆转录聚合酶链反应技术、酶联免疫吸附法、免疫组织化学法检测 3组荷瘤SCID鼠的血管内皮生长因子 (VEGF)mRNA、蛋白及微血管密度 (MVD)。结果　 (1)人参皂甙Rg3处理后 ,荷瘤SCID鼠体内无腹水形成 ,腹腔中肿块播散减少。 (2 )实验组肿瘤组织VEGFmRNA表达的相对量为 119± 16 ,显著低于空白组、对照组 (分别为 2 5 4± 4和 2 73± 4 4 ,P均 <0 0 5 )。 (3)实验组血中VEGF蛋白的表达量为(14 6± 0 7)pg/ml,显著低于空白组和对照组 [分别为 (18 5± 2 1)和 (2 0 5± 1 7)pg/ml,P均 <0 0 5 ]。(4)实验组肿瘤组织中MVD为 (43± 7)个 /mm3 ,显著低于空白组和对照组 [分别为 (6 5± 12 )个 /mm3 和(73± 10 )个 /mm3 ,P均 <0 0 5 ]。结论　人参皂甙Rg3通过下调肿瘤VEGFmRNA及蛋白的表达量 ,阻滞肿瘤血管生成从而抑制肿瘤生长和转移     

Smac基因转染对卵巢癌SKOV3/DDP裸鼠移植瘤顺铂敏感性及微血管生成的影响

目的:探讨转染Smac基因对卵巢癌SKOV3/DDP裸鼠移植瘤顺铂敏感性及微血管生成的影响。方法:建立卵巢癌SKOV3/DDP裸鼠移植瘤模型,随机分为5组,分别给予不同药物干预:(1)对照组:移植瘤内注射生理盐水;(2)DDP组:腹腔内注射顺铂;(3)空质粒+DDP组:移植瘤内注射空质粒,24h后腹腔内注射顺铂;(4)Smac组:移植瘤内注射Smac重组质粒;(5)Smac+DDP组:移植瘤内注射Smac重组质粒,24h后腹腔内注射顺铂。顺铂浓度为0.5mg/m1,给药剂量按3mg/kg计算。观察各组裸鼠移植瘤体积变化,计算抑瘤率。TUNEL法检测移植瘤组织标本的凋亡指数,免疫组化法检测CD34并计算微血管密度(MVD)。结果:Smac+DDP组的移植瘤体积最小,平均抑瘤率72.94%,与其他组比较差异有统计学意义(P0.05)。对照组、DDP组、空质粒+DDP组、Smac组、Smac+DDP组的凋亡指数分别为(19.90±3.18)%,(21.82±4.40)%,(22.64±3.81)%,(30.23±4.06)%,(48.59±4.47)%,MVD计数分别为(24.8±5.36),(21.2±3.11),(19.8±3.70),(14.4±3.85),(11.6±2.70)。其中,Smac+DDP组的凋亡指数最高,MVD最低,与其他组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:Smac基因转染可增强卵巢癌耐药移植瘤对顺铂的敏感性,同时减少微血管生成。     

WWOX基因转染对卵巢上皮性癌细胞生长的影响

目的 研究抑癌基因WWOX对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞生长的影响,寻求卵巢癌基因治疗的新途径.方法 将携有WWOX基因的真核表达载体体外转染卵巢癌细胞系HO8910细胞(重组质粒组),筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染空载质粒(空质粒组)及未经转染(空白对照组)的HO8910细胞作为对照,用蛋白印迹法检测重组质粒组细胞中WWOX蛋白的表达情况.体外实验:分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、体外侵袭实验、琼脂克隆形成实验及流式细胞仪等分析WWOX基因对HO8910细胞生物学活性的影响.体内实验:将转染细胞接种于BALB/c裸鼠腹腔,观察裸鼠生存时间和肿瘤生长情况.结果 (1)重组质粒组细胞中WWOX蛋白能稳定表达,空质粒组及空白对照组细胞未检测到WWOX蛋白的表达.(2)MTT比色法检测显示,重组质粒组各时间点的细胞增殖能力较空质粒组及空白对照组明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)重组质粒组细胞的琼脂克隆形成率(19.8%)明显低于空质粒组(54.5%)及空白对照组(56.0%),差异有统计学意义(P＜0.05).(4)流式细胞仪检测显示,重组质粒组中(72.08±0.39)%的细胞被阻滞于G0/G1期,分别与空质粒组[(41.02±1.08)%]及空白对照组[(39.31±0.67)%]比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(5)体外侵袭实验显示,重组质粒组穿膜细胞数为(89.7±3.1)个,分别与空质粒组[(91.2±1.3)个]及空白对照组[(91.4±1.3)个]比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(6)裸鼠体内实验表明,重组质粒组裸鼠体内的成瘤能力(包括转移灶数目、转移灶重量及移植瘤最大直径、腹水量)明显低于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 抑癌基因WWOX可干扰卵巢癌细胞的细胞周期并抑制其生长增殖,可为卵巢癌的基因治疗提供一种新方法.     

沙立度胺对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤血管生成的影响

目的　探讨沙立度胺(Thd;商品名:反应停)对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的影响。方法　建立 15只人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成 3组: (1)Thd组:腹腔内注射Thd(200mg·kg-1·d-1,浓度为 62 5mg/L); (2 )Thd+环磷酰胺 (CTX)组:按上述Thd剂量,加入浓度为 100mg/L的CTX(100mg·kg-1·d-1 ),腹腔内注射; (3)生理盐水组:腹腔内注射 0 2ml生理盐水。观察各组裸鼠皮下移植瘤生长情况、裸鼠体重的变化,并采用RT PCR、酶联免疫吸附法、及Picture二步免疫组化法检测各组瘤组织中血管内皮生长因子 (VEGF)mRNA、外周血中VEGF含量及瘤组织中微血管密度(MVD)。结果　 ( 1 )Thd组、Thd+CTX组皮下移植瘤体积明显小于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Thd组瘤组织中VEGFmRNA为 55±9,血中VEGF含量为(29±10)pg/ml;Thd+CTX组瘤组织中VEGFmRNA为 26±7,血中VEGF含量为(12 ±6)pg/ml;生理盐水组瘤组织中VEGFmRNA为 79±7,血中VEGF含量为(71±16)pg/ml。Thd组、Thd+CTX组瘤组织中VEGFmRNA和血中VEGF含量分别与生理盐水组比较,差异均有统计学意义 (P<0.01)。(3)Thd组MVD计数为 (12.6±3.3)条,Thd+CTX组为 (10.6±1.9)条,均明显低于生理盐水组的(19 3±2 8)条(P<0 01)。结论　Thd有抗卵巢癌皮下移植瘤血     

微小RNA-21表达在卵巢癌细胞生长和凋亡过程中的作用

目的;探讨微小RNA-21( miR-21)在卵巢癌细胞生长、凋亡中的作用及调节机制。方法构建表达miR-21的重组干扰载体pSIREN-miR-21质粒,采用酶切鉴定和测序法证实。实验分为3组,即转染组：卵巢癌细胞株OVCAR3细胞转染重组干扰载体pSIREN-miR-21质粒;阴性对照组：OVCAR3细胞转染阴性对照pSIREN-miR-21-Neg质粒;空白对照组：OVCAR3细胞不转染质粒。采用茎环实时荧光定量逆转录(RT)-PCR技术检测3组细胞中miR-21的表达,蛋白印迹法检测3组细胞中程序性细胞死亡因子4( PDCD4)蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪检测3组细胞的增殖及凋亡情况。结果成功构建了表达miR-21的重组干扰载体pSIREN-niR-21质粒,并经酶切鉴定和测序法证实。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAR3细胞中niR-21的表达水平分别为0.26±0.08、1.26±0.21和1.00,转染组明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.01)。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAR3细胞中PDCD4蛋白的灰度值分别为1443 ±33、858±19和846±16,转染组明显高于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.01)。转染组、阴性对照组和空白对照组OVCAP3细胞增殖的A值分别为0.661±0.015、0.848±0.150、0.935±0.133,转染组明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.01)。转染48 h后,转染组细胞的早期凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组[分别为(25.821±0.763)％、(0.010 ±0.003)％、(0.238±0.023)％;P ＜0.01];转染72 h后,转染组细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率均明显高于阴性对照组和空白对照组[早期凋亡率分别为( 30.480±0.821)％、(7.792±0.312)％、(7.033±0.257)％,P＜0.01;晚期凋亡率分别为(3.558±0.211)％、(1.557±0.067)％、(1.049±0.028)％,P＜0.05]。结论miR-21参与调节卵巢癌细胞的生长和凋亡过程,可能通过调控PDCD4蛋白的表达而发挥作用。