氧化苦参碱对豚鼠单个心室肌细胞胞浆[Ca2+]i的影响

 目的 观察氧化苦参碱对急性分离的豚鼠单个心室肌细胞内游离钙离子浓度([Ca²⁺]_i)的影响。方法 采用酶解法分离豚鼠单个心肌细胞,用钙敏感的荧光指示剂Fluo-3/AM染色,以荧光强度(FI)来代表[Ca²⁺]_i,应用激光扫描共聚焦显微技术动态监测FI的变化。结果 在静息状态下,10μmol·L^-1氧化苦参碱对[Ca²⁺]_i无明显影响;但10μmol·L^-1氧化苦参碱对60mmol·L^-1KCl介导的外钙内流却有明显抑制作用(P<0.05)。结论 氧化苦参碱对电压依赖性钙通道(VDC)具有明显抑制作用,这可能是其抗心律失常作用机制之一。     

海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca2+]i的影响

目的：揭示海嘧啶诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法：采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i变化时Ca^2 的来源,采用定磷法测定海嘧啶对肿瘤细胞膜钙泵活性的影响。结果：海嘧啶可显著升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的浓度,[Ca^2 ]i升高时,Ca^2 同时来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。海嘧啶可显著降低肿瘤细胞膜钙泵活性。结论：海嘧啶通过升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的浓度,从而启动肿瘤细胞凋亡机制,诱导肿瘤细胞凋亡;海嘧啶升高肿瘤细胞内的作用是通过开放肿瘤细胞膜钙通道,引起肿瘤细胞内钙库释放,降低肿瘤细胞钙泵活性3条途径达到的。     

蚓激酶对活化血小板[Ca2+]i、JNK1和P-选择素表达的影响

 目的 研究蚓激酶(lumbrokinase, LK对大鼠血小板内钙离子浓度（intracellular calcium concentration, [Ca²⁺]_i、c-Jun氨基末端激酶-1 (c-Jun N-terminal kinase-1, JNK1以及人血小板P-选择素(P-selection, Ps表达水平的影响,阐明LK抗血小板活化的部分机制。方法 用荧光分光光度计测定LK对大鼠血小板活化过程中胞浆[Ca²⁺]_i的影响;免疫蛋白印记方法检测LK对大鼠血小板JNK1磷酸化水平的影响;流式细胞仪测定LK对人血小板活化过程中Ps表达水平的影响。结果 LK高剂量组（100 mg·L^-1和中剂量组（50 mg·L^-1大鼠血小板[Ca²⁺]_i分别为（425.49±37.4 nmol·L^-1和（509.65±35.67 nmol·L^-1,与诱导组血小板[Ca²⁺]_i （555.59±39.71 nmol·L^-1相比显著降低（P<0.01,P<0.05;LK高剂量组（100 mg·L^-1和中剂量组（50 mg·L^-1大鼠血小板JNK1磷酸化水平分别为（0.60±0.069和（0.79±0.048,与诱导组血小板JNK1磷酸化水平（0.87±0.037相比显著降低（P<0.01,P<0.05;LK高剂量组（100 mg·L^-1和中剂量组（50 mg·L^-1人血小板Ps水平为（42.99±2.69和（44.72±2.09,与诱导组（49.99±3.81相比显著降低（P<0.01,P<0.05。结论 体外实验表明LK能够抑制大鼠血小板胞浆[Ca²⁺]_i升高和JNK1的磷酸化,同时也能抑制人血小板Ps的表达水平的升高,从而起到抗血小板活化作用。     

芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖和细胞[Ca2+]i变化的影响

目的研究芦荟大黄素对植物血凝素(PHA)引起的大鼠T淋巴细胞增殖和细胞内Ca2 浓度([Ca2 ]i)变化的影响,探讨芦荟大黄素对T淋巴细胞增殖的作用和机制。方法采用MTT法检测细胞增殖,用单细胞钙成像系统记录细胞胞浆[Ca2 ]i。结果芦荟大黄素对PHA引起的细胞增殖有显著抑制作用,且其抑制作用与剂量有关;加入PHA引起细胞[Ca2 ]i迅速升高,并持续维持高[Ca2 ]i水平,芦荟大黄素对PHA引起的[Ca2 ]i升高有显著抑制作用,其作用途径包括阻断胞内Ca2 释放和抑制胞外Ca2 内流。结论芦荟大黄素可抑制T淋巴细胞增殖,其作用机制可能与抑制淋巴细胞内[Ca2 ]i升高相关。     

青龙衣多糖对S180小鼠红细胞Ca2+,Mg2+-ATP酶活性及[Ca2+]i的影响

目的考察青龙衣多糖对S180小鼠红细胞Ca2 ,Mg2 -ATP酶活性及[Ca2 ]i的影响。方法青龙衣多糖对S180小鼠ip给药7 d,比色法结合试剂盒测定S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶的活性,采用激光共聚焦显微镜结合Fluo-3/AM荧光探针测定红细胞内[Ca2 ]i。结果青龙衣多糖能提高S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶活性(P<0.05);降低S180小鼠红细胞[Ca2 ]i(P<0.05),并且青龙衣多糖的作用呈剂量依赖性,以高剂量组的作用最佳(P<0.01)。结论青龙衣多糖通过提高S180小鼠红细胞膜Ca2 ,Mg2 -ATP酶的活性,排除离子跨膜转运障碍,稳定其能量代谢和物质代谢,有利于维持细胞内Ca2 的正常浓度。     

甜菜碱对HepG2人肝癌细胞[Ca2+]i和细胞膜电位的影响

目的研究甜菜碱对肝癌HepG2细胞内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)和细胞膜电位的影响。方法Fluo-3/AM标记,激光扫描共聚焦显微镜观察HepG2细胞[Ca2 ]i,TMRE标记,激光扫描共聚焦显微镜测定细胞膜电位的影响。结果甜菜碱能够升高HepG2细胞[Ca2 ]i,降低细胞膜电位。升高[Ca2 ]i的强度具一定的剂量依赖性,随甜菜碱剂量的增大而升高。甜菜碱50、25mg/mL组与对照组比较差异非常显著(P<0.01),甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较差异显著(P<0.05)。给药48h时间段内细胞内的[Ca2 ]i升高的幅度较大,72h升高幅度相对较小。而降低膜电位上,在48h时间段内,甜菜碱50、25、12.5mg/mL各组膜电位均显著高于对照组(P<0.05),但在72h时间段内甜菜碱12.5mg/mL组与对照组比较没有显著性差异(P>0.05)。结论甜菜碱通过开放细胞膜上的通透性转换孔道(MPTP),从而升高HepG2细胞[Ca2 ]i,启动细胞凋亡机制,诱导HepG2细胞凋亡。     

芦荟大黄素对大鼠巨噬细胞[Ca2+]i和释放TNF-α的影响

目的研究芦荟大黄素对正常的和细菌脂多糖(LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞(PMφ)释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和细胞内自由Ca2 浓度([Ca2 ]i)的影响。方法应用MTT法检测TNF-α量和细胞钙离子成像系统检测单细胞内[Ca2 ]i的动态变化。结果芦荟大黄素可剂量依赖性活化正常PMφ释放TNF-α,同时诱发正常PMφ[Ca2 ]i呈波动式变化,[Ca2 ]i升高来源于胞外钙内流和胞内钙池释放钙。芦荟大黄素对LPS刺激PMφ升高[Ca2 ]i和释放TNF-α的影响有较复杂的剂量依赖性特征,即芦荟大黄素低浓度时对[Ca2 ]i升高有明确的抑制作用;其对TNF-α释放的抑制呈随浓度增高而减弱的趋势。大黄酸可增强芦荟大黄素对LPS升高[Ca2 ]i的抑制作用。结论芦荟大黄素对PMφ[Ca2 ]i和释放TNF-α表现出双向调节作用,其对[Ca2 ]i动力学的调制与其调节PMφ释放TNF-α间有明确的对应性。     

针刺对局灶性脑缺血大鼠海马神经元细胞[Ca2+]i的影响

[目的]研究脑缺血不同时点大鼠海马神经元内游离Ca2+浓度[Ca2+]i及醒脑开窍针刺对其影响,探讨醒脑开窍针刺法早期干预对脑缺血的治疗作用。[方法]建立大脑中动脉所致局灶性脑缺血(MCAO)模型,采用醒脑开窍针刺法治疗,采用激光扫描共聚焦显微技术动态观察脑组织海马CA1区锥体细胞[Ca2+]i在不同时间点的变化。[结果]与正常组大鼠相比,模型组大鼠脑组织海马CA1区锥体细胞内游离[Ca2+]i(以细胞内Ca2+相对荧光强度表示)在局灶性脑缺血1 h时升高,持续升高至缺血24 h时(P<0.05)。假手术组与正常组相比[,Ca2+]i变化差异无统计学意义(P>0.05)。相应时间点非穴位针刺组与模型组[Ca2+]i比较,无统计学意义(P>0.05)。在相应时间点,醒脑开窍针刺组[Ca2+]i低于模型组(P<0.01)。[结论]急性局灶性脑缺血后大鼠海马神经细胞[Ca2+]i随缺血时间的延长而持续升高,提示细胞内钙超载;醒脑开窍针刺组能有效调节缺血区的[Ca2+]i,提示在缺血后针刺治疗效果越早越好,为临床及早应用针刺治疗缺血性脑血管病提供了理论依据。     

野西瓜总生物碱诱导HepG2细胞凋亡与[Ca2+]i变化的相关性

目的 探讨野西瓜总生物碱(Capparis spinosa alkaloid,CSA)对人肝癌HepG2细胞的杀伤和诱导凋亡的作用机制.方法 MTT法研究CSA对人肝癌HepG2的杀伤作用;荧光显微镜观察HepG2细胞形态;流式细胞仪研究CSA对HepG2细胞的凋亡诱导作用;激光共聚焦显微镜检测CSA对HepG2细胞内[Ca~(2+)]i的影响.结果 CSA对人肝癌HepG2有明显细胞毒性作用,并且有剂量依赖性,IC_(50)为142.82 μg/mL;HepG2细胞在CSA作用后出现特征性凋亡形态特征,凋亡细胞比率明显高于自然凋亡率;且阻断细胞由S期向G_2期的移行,CSA明显升高HepG2细胞[Ca~(2+)]i,并与药物质量浓度呈量效正相关.结论 CSA对人肝癌HepG2有明显的杀伤和促凋亡作用,其机制可能与CSA造成肿瘤细胞内钙离子超载有关.     

化风丹中As2S2及As2O3的含量测定

目的:建立化风丹中不溶性砷盐和可溶性砷盐的含量测定方法,为该制剂的质量控制提供参考。方法:采用滴定法和紫外分光光度法分别测定18批化风丹中二硫化二砷和三氧化二砷的含量。结果:建立的二硫化二砷含量测定方法重复性好,平均加样回收率97.61%,RSD 2.0%。三氧化二砷在4~16μg与吸光度线性关系良好,平均回收率97.77%,RSD2.1%。18批化风丹中二硫化二砷质量分数0.012~0.021 3 g·g-1,平均质量分数0.018 4 g·g-1,差异系数13.3%;三氧化二砷质量分数75.24~124.55μg·g-1,平均质量分数92.99μg·g-1,差异系数15.3%。结论:建立的含量测定方法简单、准确,为化风丹质量标准提升提供实验依据。不同批次化风丹中二硫化二砷和三氧化二砷含量差异较大。     

三氧化二砷对豚鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响

 目的 研究三氧化二砷(As₂O₃)对豚鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响。方法Fluo-3／AM荧光探针标记豚鼠心室肌细胞游离钙离子,激光共聚焦显微镜实时测定不同浓度As₂O₃干预5 min后心室肌细胞的胞浆钙的变化。不同剂量的As₂O₃对正常台氏液中的豚鼠心肌细胞体外浓度递减性干预13 h后心肌细胞DNA片断化的情况。结果 不同浓度As₂O₃对心室肌细胞的胞浆钙影响不同。在正常台氏液中,低浓度As₂O₃引起一过性钙增高,高浓度的As₂O₃引起持续钙增高,并被钙通道阻滞剂维拉帕米不完全阻断。在无钙台氏液中,低浓度As₂O₃对胞浆钙无影响,高浓度的As₂O₃引起持续钙增高。10μmol·L^-1的As₂O₃体外浓度递减性干预13 h后,豚鼠心肌细胞发生DNA的片断化。低于10μmol·L^-1的As₂O₃体外浓度递减性干预13 h后,心肌细胞无明显的DNA片断化。结论 As₂O₃影响细胞外钙内流和细胞内钙库释放,导致心肌细胞内的游离钙升高,其机制可能有电压依赖性钙通道参与。低浓度引起胞内一过性钙升高;高浓度导致胞内持续性钙升高。后者可能是As₂O₃诱导细胞凋亡的机制之一。     

槲皮素对乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

槲皮素具有广泛的生理及药理活性 [1] ,因其扩张冠脉、调血脂、降低血管通透性被作为心血管药物而在临床广泛应用。已有文献报道槲皮素在体外对肿瘤的化学预防和治疗作用及其机制[2 ,3 ] 。此前 ,已对槲皮素抑制 DMBA (二甲基苯并蒽 )诱导的 SD大鼠乳腺癌的发生及增殖进行了研究并探讨机制 [4,5]。本实验采用 ER(雌激素受体 )阳性的乳腺癌细胞株 MCF- 7,初步观察槲皮素在体外对该细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响 ,为进一步探讨其作用机制及其应用于临床治疗乳腺癌提供部分依据。1　材料与方法1 .1　药物与细胞系 :Quercetin (槲皮素 ,…     

双苯氟嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后胞浆[Ca2+]i的影响

 目的研究双苯氟嗪(Dip)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑神经细胞胞浆Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i)变化的影响。方法将400pmol的内皮素-1(ET-1)灌注到大鼠大脑中动脉附近制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,以Fura-2/AM作为钙荧光指示剂,双波长荧光分光光度法检测灌注ET-1后不同时间大鼠大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆[Ca²⁺]_i的变化及Dip对灌注ET-1后4h胞浆[Ca²⁺]_i变化的影响,并采用TYC染色法观察了Dip对灌注ET-1后24h脑梗死范围的影响。结果灌注400pmolET-1诱发大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后,大鼠大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆[Ca²⁺]_i明显升高,并于灌注EF-1后4h达峰值,随着再灌注时间的延长,胞浆[Ca²⁺]_i逐渐降低;Dip20,40mg·kg^-1可以明显降低灌注ET-1后4h大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆[Ca²⁺]_i的升高(P<0.01),Dip10mg·kg^-1组虽表现出一定的降低胞浆[Ca²⁺]_i的作用,但与溶剂组比较,差异无显著性(P>0.05);对脑梗死范围的测定结果显示,Dip可以缩小脑梗死范围,其作用呈现明显的剂量依赖关系(r=0.9797,P<0.01)。结论Dip对抗脑缺血再灌注损伤后胞浆[Ca²⁺]_i升高可能是其产生神经保护作用的重要机制。     

针刺调控感光细胞凋亡大鼠视网膜JAK2及STAT3表达作用机制

目的:观察感光细胞凋亡模型大鼠视网膜JAK2和STAT3蛋白表达,探讨针刺对感光细胞凋亡引起的视网膜退行性病变的保护机制.方法:75只SD大鼠随机分为空白组、模型组、维生素A组、假针刺组和针刺组,每组15只.采用N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)方法建立感光细胞凋亡大鼠模型.各组干预1次/d,6次/周,共4周后,HE染色...     

羊栖菜多糖对SGC-7901人胃癌细胞内[Ca2+]i的影响

[目的]观察羊栖菜多糖对人胃癌细胞内Ca^2 含量的变化，揭示其诱导肿瘤细胞凋亡的机制。[方法]采用Fluo-3／AM探针标记，激光共聚焦技术观测细胞内[Ca^2 ]i。[结果]SFPS可使SGC-7901细胞内[Ca^2 ]i先升高然后下降，给CaCl2后，[Ca^2 ]i又升高。[结论]SFPS诱导肿瘤细胞凋亡是通过升高SGC-7901细胞内[Ca^2 ]i而达到的，[Ca^2 ]i升高时Ca^2 来源于细胞内钙库释放。     

西红花酸对过氧化氢诱发心肌细胞[Ca2+]i改变的作用

目的 观察西红花酸对H2O2诱发培养心肌细胞[Ca^2 ]i改变的效应，并探讨其机制。方法 应用Fluo-3／AM荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测不同因素处理的单个培养心肌细胞[Ca^2 ]i。结果 H2O2呈浓度依赖性地使单个培养心肌细胞[Ca^2 ]i增加，并不受细胞外环境是否存在Ca^2 的影响，L-型Ca^2 通道阻滞剂维拉帕米也不能完全中止[Ca^2 ]i的增加；不同剂量的西红花酸则能减低H2O2引发的单个培养心肌细胞[Ca^2 ]i增高的幅度。结论 西红花酸能明显抑制H2O2诱发培养心肌细胞[Ca^2 ]i增加的作用，可能与调整胞内钙库Ca^2 的释放和摄取、Ca^2 内流等机制有关。     

半夏泻心汤药物血清对ICC线粒体膜电位与[Ca~(2+)]i的影响

目的:观察半夏泻心汤对小鼠Cajal间质细胞(Interstitial Cells of Cajal,ICC)线粒体膜电位与细胞内Ca2+浓度的影响。方法:制备大鼠含半夏泻心汤药物血清,体外分离培养ICC,用药物血清处理ICC,作用24h后,采用ICC特异的c-kit抗体进行免疫荧光测定,利用激光共聚焦显微扫描技术和特异性荧光探针标记线粒体膜电位及[Ca2+]i。结果:半夏泻心汤药物血清能提高ICC线粒体膜电位,降低ICC[Ca2+]i。结论:半夏泻心汤可能通过提高ICC线粒体膜电位,降低ICC[Ca2+]i以促进胃肠运动。     

鲜生地黄对慢加急性肝衰竭大鼠JAK2/STAT3通路的影响

目的:观察鲜生地黄对慢加急性肝衰竭大鼠JAK2/STAT3通路的影响。方法:30只雄性Wistar大鼠按照1∶4比例随机分为对照组和实验组。实验组大鼠先用四氯化碳诱导成肝纤维化模型,再按照1∶1比例随机分为模型组和观察组,应用D氨基半乳糖进行急性攻击,建立慢加急性肝衰竭大鼠模型。观察组在急性攻击前7 d予以鲜生地黄连续灌胃。各组大鼠分别在急性攻击后24 h取材,检测血清内毒素、白细胞介素-6含量及肝脏组织中JAK2mRNA、STAT3mRNA的表达。结果:模型组大鼠肝组织中JAK2mRNA、STAT3mRNA表达低于对照组和观察组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组与对照组大鼠肝组织中JAK2mRNA、STAT3mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。模型组大鼠血清内毒素显著高于对照组和观察组,差异有统计学意义(P0.01);观察组与对照组比较,大鼠血清内毒素表达差异无统计学意义(P0.05)。模型组大鼠血清白细胞介素-6高于对照组和观察组,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:鲜生地黄能够降低肠道内毒素的吸收,促进JAK2/STAT3通路活化,但是介导物质可能并不是IL6,相关机制需要进一步完善。     

基于JAK2-STAT3途径探讨黄连素对高糖诱导足细胞损伤的修复机制

[目的] 从JAK2-STAT3途径探讨黄连素对高糖诱导足细胞损伤的修复机制。[方法] 培养MPC-5条件永生化小鼠足细胞,将细胞分为正常糖浓度组（5 mmol/L葡萄糖）、高糖浓度组（30 mmol/L葡萄糖）、高糖+10 μmol/L黄连素组、高糖+25 μmol/L黄连素组和高糖+50 μmol/L黄连素组。正常糖浓度组常规培养;其余各组采用相应培养基培养48 h。噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率;Transwell实验检测细胞的迁移能力;白蛋白流量率检测法测定足细胞屏障功能;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）法分别检测JAK2和STAT3 mRNA和蛋白表达。[结果] 与正常糖浓度组相比,高糖刺激后足细胞存活率明显降低,迁移能力提高,屏障功能下降,JAK2和STAT3 mRNA和蛋白表达量提高（均P<0.01）;黄连素各组能不同程度促进足细胞存活,降低迁移能力,提高其障功能,并降低JAK2和STAT3 mRNA和蛋白表达;且呈浓度依赖性（P<0.05,P<0.01）。[结论] 黄连素能保护高糖诱导的足细胞损伤,提高足细胞在高糖环境下的存活率、降低其迁移率,维持其屏障功能,其机制可能与调控JAK2和STAT3基因与蛋白表达有关。     

N-甲基-N-顺式-苯乙烯基-桂皮酰胺对青霉素诱发惊厥大鼠神经细胞内钙离子含量的影响

目的:检测黄皮核提取物N-甲基-N-顺式-苯乙烯基-桂皮酰胺(N-methyl-N-cis-styryl-cinnamamide,s-MSC)对皮层定位注射青霉素(Penicillin,PNC)诱发惊厥大鼠脑神经细胞内钙离子含量的影响,初步探讨其抗惊机理。方法:20只大鼠分为5组:正常对照组(20 ml/L吐温80+生理盐水)、模型对照组(20 ml/L吐温80+PNC)、丙戊酸钠120 mg/kg+PNC7、5 mg/kg s-MSC组(s-MSC 75 mg/kg+PNC)、150 mg/kg s-MSC组(s-MSC 150 mg/kg+PNC)。建立皮层定位注射PNC诱发大鼠癫痫模型,流式细胞术检测各组大鼠左侧大脑初级、次级躯体运动皮层及左侧海马神经细胞内钙离子含量。结果:皮层定位注射PNC后大鼠脑神经元内钙离子含量增加(P<0.01),丙戊酸钠及150 mg/kg的s-MSC均可使致癫大鼠脑神经元内钙离子含量降低(P<0.01)7,5 mg/kg s-MSC对于细胞内钙离子的降低无统计学意义。结论:黄皮核提取物N-甲基-N-顺式-苯乙烯基-桂皮酰胺对抗大鼠皮层定位注射PNC诱发的惊厥可能与其降低神经元内钙离子含量有关。