牙源性角化囊性瘤的研究进展

牙源性角化囊性瘤(keratocystic odontogenic tumour,KCOT),以往称为牙源性角化囊肿(odontogenic keratocyst,OKC),是一种常见的颌骨牙源性病损,具有较高的增殖潜能,生长方式特殊,保守性手术后易复发[1-3].2005年WHO对头颈部肿瘤的新分类中,将其归为牙源性良性肿瘤[4].     

牙源性角化囊肿37例临床分析

减少牙源性角化囊肿的复发率。方法 对３７例牙源性角化囊肿进行回顾性分析。结果３７例术后病理表现属正角化型角化囊肿，除１例上颌窦根治术，１例行方块切骨术，其余均进行手术刮除加碘酚烧灼术，经１０年随访，无１例复发。结论牙角化囊肿应早期彻底手术，以减少复发。     

牙源性角化囊肿的诊断和治疗

牙源性角化囊肿(OKCs)是一种好发于下颌角及升支部的发育性囊肿。与其他牙源性囊肿相比,OKCs中上皮细胞增殖活性较高、基因片断PTCH突变率高、有丝分裂计数升高,CK16、CK17、CK19等肿瘤标志物高表达。故而,认为OKCs是一良性囊性肿瘤。OKCs的诊断主要依靠影像学、病理学的检查。OKCs的治疗推荐外科的摘除术、周围骨切除术等侵袭性方法,但青年患者OKC病变涉及颌骨及牙的发育时,为了避免侵袭性方法的不良反应,袋形缝合术、减压或冲洗疗法等保守疗法在治疗OKCs中有诸多优点。     

牙源性角化囊肿的临床X线诊断

牙源性角化囊肿1956年由 Philipsen命名,1963年 Pindorg 和 Hansen 详细描述了本病的特征,到1971年世界卫生组织(WHO)在国际肿瘤分类中则将始基囊肿改称为角化囊肿;但有的学者认为两者有一定的区别,角化囊肿常含有大量的角化物,表面覆有不全角化或正角化层等特点。我们收治14例,现结合复习文献进行分析讨论。     

42例颌骨牙源性角化囊肿临床分析

牙源性颌骨囊肿在口腔外科门诊中较为多见，其中角化囊肿的比例较大，复发率较高且易与其他牙源性囊肿及肿瘤相混淆。因此，为了提高对本病的认识，进一步准确的为临床提供诊断和治疗依据，笔者对我院1995年以来收治的42例角化囊肿加以分析并讨论如下。     

儿童牙源性角化囊肿的临床特点

目的：探讨儿童牙源性角化囊肿的临床表现、诊断、治疗及预后;方法：收集１９８４年至１９９８年本院收治的儿童牙源性角化囊肿１９例进行分析;结果：本组资料中,最小发病年龄６岁,发生部位以下颌骨升枝部及磨牙后区多见。对１７例进行随访,１例复发,复发率５．９％;结论：儿童牙源性角化囊肿临床表现有其特点,手术彻底刮除囊肿是主要治疗方法。     

26例未成年人牙源性角化囊肿临床分析

目的:讨论未成年人牙源性角化囊肿的临床特点。方法:收集年龄在18岁以下牙源性角化囊肿(Odontogenic keratocyst,OKC)患者的临床资料,对其性别构成、年龄分布、发病部位及临床表现等进行分析。结果:①男女比例为1.6:1;②平均发病年龄为13岁,10岁以上患者占73.1%;③颌骨不同部分OKC发病情况:上颌骨:下颌骨=1.2:1;左侧:右侧=1.2:1;左上颌前牙区发病频次最高,占10.2%;④多发OKC占26.9%,家族史阳性者占9.7%。结论:①未成年男性较未成年女性更易发生牙源性角化囊肿;②未成年人OKC的年龄分布符合整体人群OKC发病特点;③未成年人颌骨不同部位OKC发病的机率相对平均,其发病规律与成年人有差异。     

复发性牙源性角化囊肿的临床和影像学特点

目的:报告复发性牙源性角化囊肿的临床、影像学特点以及治疗的结果.方法:在本院接受剜治术并随访1年以上的复发性牙源性角化囊肿19例,回顾性分析了患者的就诊年龄、患病部位、肿瘤累及范围、影像学表现、受累牙齿的处理、组织病理学发现和治疗结果.结果:19例复发性牙源性角化囊肿,12例为男性,7例为女性.首诊时的平均年龄为30....     

颌骨牙源性角化囊性瘤的研究

牙源性角化囊性瘤(keratocystic odontogenic tumor,KCOT),其传统的命名为牙源性角化囊肿(odontogenickeratocyst),是一种常见的颌骨牙源性囊性病损,具有较高的增殖潜能,生长方式特殊,保守性手术后易复发,有时可伴发痣样基底细胞癌综合征(nevoid basal cell carcinoma syndrome,NBCCS).2005年WHO对头颈部肿瘤的新分类中[1],已将其归为牙源性良性肿瘤.近年来,我们对KCOT的临床和基础若干方面进行了系列研究,以下结合相关文献进行综述.     

牙源性角化囊性瘤骨吸收相关因子组织化学及免疫组织化学双重染色表达

目的：应用组织化学及免疫组化双重染色法研究几种骨吸收相关因子如细胞核因子,κβ受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor-κB ligand, RANKL）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、白细胞介素1α（interleukin 1α, IL-1α）、甲状旁腺激素相关蛋白（parathyroid hormone-related protein, PTHrP）和破骨细胞标志物抗酒石酸磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase staining,TRAP）在牙源性角化囊性瘤（KCOT）囊壁组织上的表达特点。方法：20例KCOT石蜡标本连续切片5张,1张HE染色核实诊断,其余4张采用组织化学和免疫组织化学双重染色法,分别检测TRAP、 RANKL、OPG、IL-1α和PTHrP抗体在KCOT囊壁组织上的表达。结果：KCOT囊壁组织上分别有TRAP、RANKL、OPG、IL-1α和PTHrP的阳性表达,其中TRAP和RANKL主要表达在囊壁结缔组织与骨交界面位置。10例有TRAP阳性表达,12例RANKL阳性表达可位于纤维结缔组织内、血管腔周围和上皮层。TRAP和RANKL双阳性表达5例。OPG在囊肿上阳性表达少。IL-1α在上皮层和纤维结缔组织层均有表达,但阳性细胞主要是棘细胞层和表层细胞。PTHrP也可在上皮细胞层和结缔组织层表达。结论：RANKL、IL-1α和 PTHrP等骨吸收相关因子参与调节牙源性角化囊性瘤中破骨细胞的分化和活化,导致骨吸收。     

体外培养口腔粘膜白斑上皮细胞

目的：建立稳定的人口腔粘膜白宽上皮细胞体外培养体系。方法：用离解蛋白酶（DispaseⅡ）分离上皮及皮下组织。采用改良的无血清及无3T3细胞的培养体系培养口腔粘膜白斑上皮细胞。结果：用DispaseⅡ可成功分离上皮和皮下组织。细胞生长曲线显示改良无血清角化细胞培养液（Defined K-SFM）可明显促进口腔粘膜白斑上皮细胞的分裂增殖。此实验上皮细胞可传6～7代。结论：Defined K-SFM可显著促进口腔粘膜白斑上皮细胞的分裂和成熟,为癌前病变研究提供足够寿命的体外细胞。     

PTCH1基因突变对牙源性角化囊性瘤上皮细胞增殖的影响

目的：研究牙源性角化囊性瘤（keratocystic odontogenic tumour, KCOT）中PTCH1基因突变与上皮细胞中bcl 2、丝聚合蛋白和兜甲蛋白表达的关系,探讨PTCH1基因突变对肿瘤上皮细胞增殖、分化的影响。方法：采用PCR直接测序法筛选出有PTCH1基因突变的KCOT患者及无突变者各20例,用免疫组织化学方法检测上皮细胞增殖相关蛋白bcl 2、丝聚合蛋白、兜甲蛋白在KCOT上皮细胞中的表达情况。结果：20例PTCH1基因发生突变的KCOT患者中,bcl 2强阳性12例（12/20, 60%）、中度阳性4例（4/20, 20%）、弱阳性4例（4/20, 20%）,非突变组中强阳性4例（4/20, 20%）、弱阳性10例（10/20, 50%）、阴性6例（6/20, 30%）,两组之间差异有统计学意义（U=72, P=0.001）。丝聚合蛋白表达于上皮浅层1~4层细胞,突变组中丝聚合蛋白表达弱阳性11例（11/20, 55%）、阴性9例（9/20, 45%）,未见强阳性和中度阳性表达,非突变组中丝聚合蛋白表达中度阳性6例（6/20, 30%）、弱阳性8例（8/20, 40%）、阴性6例（6/20, 30%）,无强阳性表达病例,两组之间差异无统计学意义（U=182,P=0.48）。兜甲蛋白在突变组和非突变组KCOT衬里上皮细胞全层均呈阳性表达,两组差异无统计学意义。结论：PTCH1基因突变与KCOT肿瘤上皮细胞中bcl 2蛋白的表达水平相关,提示PTCH1基因突变可能促进肿瘤上皮细胞的增殖和分化。     

人羊膜上皮细胞的原代及传代培养

目的 建立体外培养人羊膜上皮细胞的方法,观察体外培养的羊膜上皮细胞的生物学特性.方法 取足月剖宫产术后羊膜,经胶原酶和胰蛋白酶消化后,获取的羊膜上皮细胞接种于含10%胎牛血清培养基中进行原代和传代培养,探索其合适的培养条件,用倒置显微镜观察培养的人羊膜上皮细胞体外生长的特征.用苏木精-伊红染色、扫描电镜和细胞角蛋白免疫组织化学染色的方法对培养细胞进行形态学观察和鉴定.结果 人羊膜上皮细胞可以在体外成功的培养传代,体外可连续传8～10代.体外培养细胞呈多角形,长满后呈上皮细胞特有的铺路石样外观.扫描电镜观察细胞表面有丰富的微绒毛.细胞角蛋白keratin单克隆抗体染色阳性.结论 人羊膜上皮细胞在体外可成功进行原代和传代培养,体外培养的人羊膜上皮细胞在一定时间内可维持增殖能力.     

人胎脑神经干细胞的体外分离、培养与鉴定

目的探索人胎脑神经干细胞的体外分离培养条件,从而在体外大量增殖神经干细胞,并观察神经干细胞增殖和分化的特点。方法采用含碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和表皮细胞生长因子（EGF）的无血清培养技术,从14周自愿水囊引产人胎脑海马皮质中分离出神经干细胞,并进行培养、传代、分化观察,应用免疫荧光细胞化学技术对培养的细胞及其分化的细胞进行鉴定。结果从14周人胎脑皮质中成功分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞,在无血清培养时细胞呈悬浮状态生长,形成神经球,该细胞具有连续增殖能力,可传代培养,表达神经巢蛋白抗原（Nestin）;在含血清培养时诱导神经干细胞分化,分化后的细胞表达神经元细胞和胶质细胞的特异性抗原。结论在含有EGF和bFGF的无血清培养液中,从人胎脑能分离培养出具有自我复制和分化潜能的神经干细胞,并能在体外扩增,可进一步用于基础及临床研究。     

人表皮干细胞的体外分离培养和鉴定

目的:探讨人表皮干细胞的体外快速分离培养及鉴定方法.方法:中性蛋白酶和胰蛋白酶两步法从手术切除的人包皮组织中分离表皮层和真皮层,并获得表皮单细胞悬液,采用Ⅳ型胶原铺板选择性黏附、分离和角质细胞无血清培养基(K-SFM)培养表皮干细胞.倒置显微镜下观察培养细胞的生长状况,检测细胞克隆形成率,免疫组化染色观察表皮干细胞标志物β1整合素和角蛋白19(K19)的表达;以角质形成细胞作为对照.结果:组织学观察显示,培养24h后细胞呈克隆状生长;所分离、培养细胞的克隆形成率高于对照角质形成细胞;免疫组化染色显示,培养细胞β1整合素及K19均呈阳性表达.结论:运用Ⅳ型胶原黏附结合K-SFM培养可以实现人表皮干细胞的体外快速分离和培养.     

人牙龈结合上皮细胞和口腔龈上皮细胞生物学特性的比较

目的：从人口腔龈上皮细胞中分选出P-钙黏蛋白（P-cadherin）阳性表达和阴性表达的细胞,并将之与人牙龈结合上皮细胞的黏附、增殖和迁移的生物学特性进行比较。方法：分离培养人口腔龈上皮细胞,通过磁珠从中分选出P-钙黏蛋白阳性表达和阴性表达的细胞;分离培养人牙龈结合上皮细胞;测定人牙龈结合上皮细胞、口腔龈上皮细胞及从中分选出的P-钙黏蛋白阳性表达和阴性表达细胞的黏附、增殖和迁移能力。结果：P-钙黏蛋白阳性表达细胞占全部口腔龈上皮细胞的20%。P-钙黏蛋白阳性表达的口腔龈上皮细胞和人牙龈结合上皮细胞表现出较强而相似的黏附和迁移能力,但前者增殖较旺盛（0.72±0.06）, 后者增殖较慢（0.60±0.05,P<0.05）; 而P-钙黏蛋白阴性表达的口腔龈上皮细胞与牙龈结合上皮相比,表现出的黏附（48%±6% vs. 87%±11%,P<0.05）、增殖（0.36±0.04 vs. 0.60±0.05,P<0.05）和迁移能力［（10.3±2.7）个 vs. （23.4±4.8）个,P<0.05］均较弱。结论：P-钙黏蛋白阳性表达的口腔龈上皮细胞与牙龈结合上皮细胞在生物学特性方面有一定相似性而又有区别,提示口腔龈上皮细胞转化为牙龈结合上皮细胞的过程中,可能不仅仅是部分细胞的简单迁移,其中可能牵扯到更为复杂的基因、蛋白表达方面的改变。     

胎儿骨髓间充质干细胞的培养及鉴定

目的从胎儿骨髓中分离培养纯化骨髓间充质干细胞(MSC),并进行细胞表面标志的检测,探讨MSC的培养方法。方法采用全骨髓培养、贴壁筛选法分离培养MSC,采用差速贴壁培养方法纯化细胞,采用流式细胞仪检测细胞表面标志,并观察不同方法处理的培养界面对细胞贴壁和生长的影响。结果通过分离纯化培养,光镜下细胞形态以长梭形、不规则多角形为主;IV型胶原包被和Co60照射(照射量6GY)处理的培养瓶更利于MSC的贴壁、生长;流式细胞仪检测结果显示CD44( )、Stro-1( )、CD14(-)、CD34(-)、CD45(-)、CD11b(-)。结论采用贴壁筛选法和差速贴壁法结合可获得较高纯度的MSC,并且细胞生长良好,在体外具有较强的扩增能力。     

小鼠神经干细胞的分离和培养及其鉴定

目的：探讨体外分离和培养及鉴定小鼠神经干细胞,为相关的实验研究奠定基础。方法：利用神经干细胞条件培养基和单细胞克隆技术,从胚胎小鼠大脑皮质分离并体外培养胚胎期小鼠大脑皮质细胞,连续稳定传代20代后,以免疫荧光细胞化学法检测克隆细胞Nestin和分化后细胞中胶质原纤维酸性蛋白、β-tublin和半乳糖苷酶的表达。结果：从小鼠大脑皮层分离的细胞群具有连续形成克隆能力,其Nestin表达阳性。分化后的细胞可表达神经元、星形胶质细胞和寡突胶质细胞的特异性抗原。结论：成功分离并获得了小鼠皮层神经干细胞,该细胞可连续稳定传代,具备多向分化潜能,可用于进一步的实验研究。     

体外培养人胚晶状体上皮细胞生长特性的研究

目的观察体外培养人胚晶状体上皮细胞的生物学特性。方法组织块贴壁法培养人胚晶状体上皮细胞,通过倒置相差显微镜、透射电子显微镜,采用免疫细胞化学法分析人胚晶状体上皮细胞的生长特性。结果体外培养的原代人胚晶状体上皮细胞在组织块贴壁48～72 h后从组织块边缘长出,具有上皮细胞的形态特点,第10天达到融合。第二代人胚晶状体上皮生长曲线近＂S＂形,经过1～2 d的潜伏期后进入对数生长期,需10 d左右达到融合,细胞形态呈六角形或椭圆形、超微结构保持正常,免疫细胞化学SABC法染色结果显示细胞浆内α-晶状体蛋白染色阳性。结论人胚晶状体上皮细胞具有增殖能力,第二代人胚晶状体上皮细胞是进行白内障相关研究的合适实验对象。