前房相关免疫偏离对内毒素诱发的大鼠眼葡萄膜炎的影响

目的　探讨前房相关免疫偏离 (ACAID)形成前后对内毒素诱发的葡萄膜炎 (EIU)的影响及机制。方法　将 5 μl光感受器间维生素A类结合蛋白 (IRBP) ( 10 μg/ μl)注射至SD大鼠前房诱导ACAID的动物模型 ,于前房注射IRBP后 3d( 3d组 ,n =18)、7d( 7d组 ,n =18)行足底注射 2 0 0 μg伤寒杆菌内毒素 (LPS)。同时进行迟发性超敏反应 (DTH)的检测以监测ACAID的形成。酶联免疫吸附分析 (ELISA)法检测血清白细胞介素 10 (IL 10 )水平 ,并取脾组织行逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和Western免疫印迹 ,检测GATA 3基因及蛋白表达的变化 ,进行半定量分析。LPS注射后 2 4h观察EIU的临床表现 ,并摘取眼球行组织学检查。LPS单纯注射组作对照组 (n =2 4 )。结果对照组和 3d组DTH呈阳性反应 ,血清中未测出IL 10 ,GATA 3基因和蛋白表达无增加 ;7d组DTH呈阴性反应 ,血清中IL 10升高 ( 7 1pg/ml± 1 3pg/ml,P <0 0 1) ,GATA 3基因和蛋白表达升高。临床检查可发现 ,对照组和 3d组于LPS注射后 2 4h眼部炎症达高峰 ,瞳孔中央完全被纤维素样渗出膜遮盖 ,7d组大鼠眼部充血、渗出明显减轻 ;组织学检查发现 7d组较对照组和 3d组虹膜及睫状体基质内、前房、后房和玻璃体内细胞渗出明显减少。结论　前房注射抗原 7d后 ,GATA 3及IL 10的表     

伤寒杆菌内毒素对GATA-3表达及前房相关免疫偏离形成的影响

目的　观察眼部炎症时前房注射抗原后GATA 3表达的变化以及对前房相关免疫偏离(ACAID)形成的影响。方法　将 5 μl光感受器间维生素A类结合蛋白 (IRBP) ( 10g/L)注射至SD大鼠前房诱导ACAID的动物模型 ,于前房注射IRBP前 4d( - 4d组 )、2 4h( - 2 4h组 )、0h( 0h组 )以及前房注射IRBP后 3d( 3d组 )、7d( 7d组 )从足底注射 2 0 0 μg伤寒杆菌内毒素 (LPS)。各组于前房注射IRBP后第 8天 ,采用酶联免疫吸附分析 (ELISA)法检测血清白细胞介素 4 (IL 4 )水平 ,以监测ACAID的形成 ,并取脾组织行逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和Western免疫印迹 ,检测GATA 3基因及蛋白表达的变化 ,进行半定量分析。每组 6只 ,每个样品实验重复 3次。结果　 - 2 4h组和 0h组LPS注射后 2 4h眼部炎症到达高峰 ,前房注射IRBP 8d后血清中测不出IL 4 ,GATA 3基因和蛋白表达无明显增加 ;- 4d组LPS注射 4d后眼部炎症消退 ,此时前房注射IRBP ,8d后血清中IL 4水平显著升高( 10 4pg/ml± 3 4pg/ml,P <0 0 1) ,GATA 3基因和蛋白表达增加 ;3d组前房注射IRBP 8d后血清中未测出IL 4 ,GATA 3基因和蛋白表达无增加 ;7d组前房注射IRBP 8d后血清中IL 4升高 ( 10 0pg/ml± 2 5pg/ml,P <0 0 1) ,GATA 3基因和蛋白表达增加。结论　LPS诱导眼部炎     

前房相关免疫偏离中调节性T细胞的变化

目的：探索前房相关免疫偏离（ACAID）机制中调节性T细胞的变化,为进一步研究其具体机制创造条件。方法：将C57BL／6小鼠分为ACAID实验组、阳性对照组和正常组。实验组将2μL卵白蛋白（OVA,50mg／mL）前房注射,阳性对照组和正常组以2μL PBS行前房注射,7d后实验组和阳性对照组足底皮下免疫OVA100μL（2．5mg／mLOVA与CFA等体积充分乳化）,正常对照组不予处理。14d后检测耳廓迟发型超敏反应（DTH）,流式分析脾细胞中CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞以及CD8^＋Foxp3CF细胞的数量和比例。结果：DTH结果显示,实验组的耳廓肿胀值较阳性对照组明显减小。CD4＋CD25＋Foxp3CF细胞和CD8^＋Foxp3q^＋细胞比例较阳性对照组和正常组均升高。结论：CD4^＋CD25＋Foxp3^＋T细胞和CD8^＋＋Foxp3^＋＋T细胞在ACAID机制中发挥重要作用。     

血必净注射液对严重脓毒症患者免疫调理机制的影响

目的 观察血必净注射液对严重脓毒症患者Th1细胞转录因子T-bet mRNA和Th2细胞转录因子GATA-3 mRNA表达的影响,探讨其能否通过影响Th1/Th2漂移来调理严重脓毒症患者的免疫紊乱.方法 将15例严重脓毒症患者分为血必净治疗组(n=9)和常规治疗组(n=6).常规治疗组给予脓毒症的一般治疗,包括液体复苏、抗感染、必要时呼吸机辅助治疗以及营养支持等.血必净治疗组在相同的常规治疗基础上加用血必净注射液(100 mL,2次/d,应用7 d).两组分别于入院当天(0 d)和入院后第1、3和7 天抽外周静脉血;应用Real-time RT-PCR检测T-bet和GATA-3 mRNAs;ELISA法检测血Th1分泌的IFN-γ和Th2分泌的IL-4;并同时进行APACHE II评分.结果 常规治疗组患者入院第3 天和第7 天的血IFN-γ、T-bet mRNA、T-bet/GATA-3、IFN-γ/IL-4均明显高于0 d(均P<0.05),GATA-3 mRNA和IL-4明显低于0 d(均P<0.05);血必净注射液治疗后第3 天和第7天患者的血IFN-γ、T-bet mRNA、T-bet /GATA-3、IFN-γ/IL-4明显低于常规治疗组(均P<0.05),GATA-3 mRNA和IL-4明显高于常规治疗组(均P<0.05).血必净注射液治疗后第7 天 APACHE II评分较常规治疗组显著下降(18.22±1.99 vs.22.67±2.16,P=0.042).结论 严重脓毒症患者存在Th1/Th2 失衡;血必净注射液能通过抑制T-bet mRNA表达和促进GATA-3 mRNA表达来改善Th1/Th2 失衡和缓解病情的严重程度.     

左归丸对阴虚阳亢大鼠Th1/Th2细胞漂移特异性转录因子T—bet及GATA-3mRNA的干预作用

目的：观察阴虚阳亢大鼠Th1／Th2细胞漂移现象、两类细胞特异性转录因子T—bet及GATA-3mRNA地表达及左归丸对阴虚阳亢大鼠Th1／Th2细胞漂移特异性转录因子T-bet及GATA-3mRNA的干预作用。方法：30只大鼠随机分成空白对照组（A组）、阴虚阳亢组（B组）、左归丸组（C组）,B、C两组采取腺嘌呤法建立阴虚阳亢模型,然后C组用左归丸滤液灌胃,A、B两组大鼠用生理盐水灌胃,RT—PCR法分别检测用药后大鼠脾脏T—bet及GATA-3mRNA的表达。结果：B、C组造模后、用药前T-bet mRNA表达明显上调,而GATA-3mRNA表达下调,经左归丸组干预后,T-betmRNA表达明显下调,而GATA-3mRNA表达上调。结论：左归丸干预Th1／Th2细胞漂移的途径可能是通过下调Th1细胞特异性转录因子T—betmRNA表达,上调Th2细胞特异性转录因子GATA-3mRNA表达,使阴虚阳亢大鼠Th1／Th2细胞达到一种新的平衡。     

骨癌痛模型大鼠脊髓背根神经节P2X3受体的表达变化

目的:观察骨癌痛模型大鼠脊髓背根神经节中P2X3受体及其mRNA的表达变化,初步探讨其可能的意义。方法:60只雌性Wistar大鼠随机分为3组（每组n=20）：空白对照（C）组;骨癌痛模型（CP）组,左胫骨内接种含2×105个Walker-256大鼠乳腺癌细胞的悬液10 μl;假手术（S）组,左侧胫骨骨髓腔内注入等体积的生理盐水。在接种后第4、7、10、14、17、21天进行疼痛行为学测试,在第14、21天各组分别选10只大鼠,取背根神经节,5只行免疫组化染色,另5只抽提RNA行实时PCR,检测背根神经节中P2X3受体及其mRNA的表达。结果:CP组大鼠在胫骨内接种肿瘤后第10天开始出现痛觉过敏,第14~21天最为明显。CP组接种肿瘤后第14、21天患侧背根神经节神经元中P2X3受体免疫阳性细胞率明显增高（P<0.05）,mRNA表达水平显著增高（P<0.05）。结论:骨癌痛模型大鼠存在痛觉敏化,可能与P2X3受体表达增高有关。     

同种异系抗原不同途径诱导大鼠免疫低反应性的研究

目的　比较同种异系抗原通过不同途径接种后机体对该抗原免疫反应状态的变化,探讨口服耐受的机制。方法　以SD大鼠为供者,Wistar大鼠为受者,将SD大鼠脾细胞,分别以口服、联合(口服+门静脉注射)两种途径接种于Wistar大鼠,测定供受体之间单向混合淋巴细胞培养(MLC)和受体对供体抗原的迟发性超敏反应(DTH)。结果　两种途径与对照组相比MLC (A)、DTH脚掌厚度增值均显著降低,其差异有显著性(P<0 .0 5 )。结论　两种途径均可诱导机体对该抗原的免疫低反应性。     

MCMV感染对小鼠脾细胞调节性T细胞比率和Th1/Th2转录因子T-bet/GATA-3表达的影响

目的 在整体水平研究小鼠巨细胞病毒(MCMV)急慢性感染对小鼠脾细胞中调节性T细胞(Treg)比率和Th1/Th2特异性转录因子T-bet/GATA-3蛋白表达的影响.方法 建立MCMV播散型感染模型,60只模型鼠分别于接种病毒后第1、3、7、14、28.45、60、75、90和120天各处死6只,分离脾细胞;另设60只正常小鼠作为模拟感染对照.流式细胞术检测Treg比率,Western印迹法检测T-bet/GATA-3蛋白表达水平.结果 Treg比率在急性感染末期(28 d)明显低于模拟感染对照组[(1.46±0.27)%vs(2.78±0.29)%,P<0.05];在感染慢性期持续表达上调,60 d时显著高于模拟感染对照组[(4.51±0.24)%vs (2.69±0.12)%,P<0.05].T-bet和GATA-3蛋白表达在感染后3 d分别增至(0.618±0.053)和(0.836±0.061),均显著高于模拟感染对照组水平[(0.205±0.026)和(0.398±0.022)];但是进入感染慢性期后均持续表达下调,在75、90和120 d时均明显低于模拟感染对照组水平.结论 感染急性期McMV上调T-bet和GATA-3的蛋白表达;感染慢性期McMV诱导Treg增殖活化,抑制Th1和Th2分化扩增,CMV诱导Treg扩增可能是其抑制宿主抗病毒免疫,导致慢性持续性感染的重要原因.     

地塞米松对哮喘大鼠转录因子GATA-3表达的影响

目的：观察地塞米松对哮喘大鼠转录因子GATA-3表达的影响。方法：36只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）和地塞米松组（C组），每组12只。以卵蛋白腹腔注射并雾化吸人制备大鼠哮喘模型，以动物呼吸机测定气道反应性评价造模效果。采用免疫组化半定量法测定肺组织GATA-3含量。结果：予乙酰胆碱（Ach）激发后，比较各组大鼠呼气相气道阻力（Re），显示造模成功；B组、C组的GATA-3表达量显著高于A组（P〈0．01）；C组GATA-3表达量和B组比较．差异有显著性（P〈0．01）。结论：支气管哮喘大鼠存在GATA-3高表达。地塞米松减低气道高反应性，抑制GATA-3的表达．纠正Th1/Th2失衡，从而对支气管哮喘有疗效。     

RT-PCR检测穹窿海马伞切割后大鼠海马内Lhx8 mRNA的表达变化

目的:探讨切割穹隆海马伞大鼠海马与正常海马内Lhx8 mRNA表达的差异。方法:36只SD大鼠随机分成6组,每组6只。1组为正常对照组,其余5组分别为切割穹窿海马伞后3、7、14、21和28 d组。取各组大鼠的海马组织,提取总RNA,采用半定量RT-PCR法分析穹隆海马伞切割后海马内Lhx8 mRNA的表达变化。结果:海马内Lhx8 mRNA的表达量在切割后第3 d开始升高,7 d时达到最高水平,以后逐渐下降,于28 d时恢复至正常水平。结论:切割穹窿海马伞后海马中Lhx8 mRNA表达的增高可能与神经干细胞向胆碱能神经元分化的再生机制有关。     

高原低氧对解偶联蛋白2mRNA表达的影响

目的探讨高原低氧对Wistar大鼠白色脂肪组织（White Adipose Tissue,WAT）解偶联蛋白2（Uncoupling Protein2,UCP2）mRNA表达的影响。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分成6组,每组10只,分为对照组、低氧1天组、低氧3天组、低氧7天组、低氧15天组和低氧30天组。分别在西宁和可可西里地区（1天、3天、7天、15天和30天）采集WAT标本,应用半定量逆转录一聚合酶链式扩增反应（RT-PCR）方法检测UCP2mRNA的表达水平。结果低氧1天组、低氧3天组、低氧7天组、低氧15天组和低氧30天组的UCP2 mRNA表达水平降低,尤以30天组降低明显。血红蛋白值与UCP2 mRNA的表达呈较高的负相关。结论随着低氧时间的延长,UCP2mRNA的表达水平逐渐降低是对低氧环境的一种适应性反应。     

IL-11对ITP患者Th1、Th2细胞及T-bet、GATA-3 mRNA的影响

目的：研究白细胞介素-11 （IL-11）对免疫性血小板减少症（ITP）患者Th1、Th2细胞亚群及其调控因子T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达的影响.方法：从10例ITP患者静脉中抽取外周血提取单个核细胞,加入不同浓度IL-11（0、25、50、100、200 ng/mL）培养4d后,应用流式细胞术和实时荧光定量反转录-多聚酶链反应法检测Th1、Th2细胞亚群比例及T-bet mRNA、GATA-3 mRNA表达水平.结果：当IL-11浓度为100 ng/mL时,与浓度为0的对照组差异最明显,表现为Th1比例及Th1/Th2比值下降,Th2比例升高,差异有统计学意义（P＜0.01）,同时T-bet mRNA表达下降,GATA-3 mRNA表达增加,T-bet/GATA-3比值显著下降,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论：一定浓度的IL-11在体外培养中能促使ITP患者Th1细胞向Th2细胞转化,同时GATA-3 mRNA表达增加、T-bet mRNA表达下降.     

GATA-3在哮喘大鼠肺组织中的表达及地塞米松对其表达的影响

目的探讨转录因子 GATA-3在哮喘大鼠模型肺组织中的表达及其气道炎症中的作用,并观察地塞米松对 GA-TA-3的表达及气道炎症的影响。方法 30只 Wista 大鼠随机分为3组(正常对照组,哮喘组,地塞米松治疗组),常规方法制作哮喘模型,并用地塞米松进行治疗,用免疫组化检测肺组织 GATA-3的表达,用 HE 染色的方法观察肺组织气道炎症的改变。结果与正常对照组比,哮喘组大鼠肺组织中 GATA-3的表达明显增加(P<0.05),同时气道粘膜和周围肺组织内可见明显的嗜酸粒细胞浸润。地塞米松能明显降低大鼠肺组织中 GATA-3的表达及气道炎症反应。结论转录因子 GATA-3在哮喘大鼠肺组织中的过度表达可能参与了哮喘气道炎症的发生及病理过程。     

痰热清注射液对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道黏液高分泌的影响?

目的：观察痰热清注射液对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型大鼠气道黏液高分泌的影响,探讨“清热化痰”的效应机制。方法采用简单随机法将 SD 大鼠60只分为正常组、模型组和痰热清组,每组20只。采用香烟烟熏加气道内滴注脂多糖的方法建立 COPD 大鼠模型,于实验第41日开始,痰热清组予痰热清注射液、模型组及正常组予生理盐水腹腔注射,1次/d,连续10 d。运用实时荧光定量聚合酶链式反应法(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测大鼠肺组织中黏蛋白5AC(MUC5AC)mRNA 水平,并观察肺组织病理形态的变化。结果RT-PCR 检测显示,痰热清组 MUC5AC mRNA 的表达程度较模型组低(P <0.05)。病理学检测(HE 染色)示模型大鼠肺组织出现肺泡壁破裂、肺泡腔扩大、肺泡融合,并伴有炎细胞浸润。过碘酸雪夫染色(AB-PAS)下可见痰热清组大鼠支气管黏膜上皮内杯状细胞较模型组明显减少,痰热清组PAS 阳性区域面积明显小于模型组(P <0.05)。结论痰热清注射液能抑制 COPD 模型大鼠 MUC5AC mRNA 的表达,并可能藉此减轻气道黏液高分泌,改善气道阻塞。     

平喘宁对哮喘大鼠肺组织cAMP/cGMP及TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:研究平喘宁对寒性哮喘大鼠肺组织中cAMP/cGMP及TGF-β1表达水平的影响。方法:雄性Wistar大鼠70只,随机分为空白对照组、模型组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组以及平喘宁高、中、低剂量组。以卵蛋白致敏及寒冷刺激复制大鼠哮喘模型,造模7 d后,各治疗组开始给药,空白对照组、模型组每天给予等量蒸馏水灌胃。4 w后取出肺组织,采用ELISA法检测大鼠肺组织cAMP、cGMP含量,并计算cAMP/cGMP;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量检测TGF-β1 mRNA表达丰度。结果:与模型组比较,平喘宁高、中、低剂量组cGMP含量降低,cAMP/cGMP上升,TGF-β1 mRNA表达水平降低(P<0.01,P<0.05)。结论:平喘宁可明显减轻哮喘大鼠气道炎症反应,逆转气道重构。     

转录因子T-bet和GATA-3对再生障碍性贫血免疫失衡的作用

目的探讨外周血中T-bet和GATA-3基因的表达在再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)中发病机制及意义。方法选择23例AA患者为再障组,其中重型再障(severe aplastic anemia,SAA)13例,轻型再障(mediate aplastic anemia,mAA)10例,再选择22例健康体检为对照组,对纳入对象采用流式细胞术检测其外周血Th1和Th2,同时运用RT-PCR技术检测外周血单个核细胞(PBMCs)中转录因子T-bet和GATA-3 mRNA基因表达。结果与对照组相比,再障组的lg(T-bet/β-actin)和Th1(%)升高,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01),lg(GATA-3/β-actin)和Th2(%)降低,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.05);其中SAA组的lg(T-bet/β-actin)、lg(GATA-3/β-actin)和Th1(%)、mAA组的lg(T-bet/β-actin)、Th1(%)相比对照组明显升高(P<0.05、P<0.01、P<0.01、P<0.05、P<0.05);SAA组的Th2(%)、mAA组的lg(...