猪软骨Ⅱ型胶原的制备及理化性能分析

目的建立一套完善的提取、纯化、检测Ⅱ型胶原的生产系统,供临床和科研应用.方法选取新鲜的猪透明软骨,经盐酸胍、胃蛋白酶等多步抽提,以及DEAE纤维素的柱层析,制备出高纯度的Ⅱ型胶原.结果通过SDS-PAGE电泳、氨基酸成分分析及羟脯氨酸的测定、紫外最大吸收光谱、电镜检测证实本法所制备的Ⅱ型胶原比Sigma(9007-34-5)公司的产品纯度高.结论用此方法制备的Ⅱ型胶原,材料来源广泛,程序简便,产品纯度高,易于大批量生产.     

抗原捕获ELISA检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒的方法建立

目的 建立检测卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)的抗原捕获ELISA方法,初步探讨其临床应用的可行性. 方法 以纯化的抗gpK8.1单克隆抗体(McAb)和多克隆抗体(PcAb)配对作为包被抗体和检测抗体,建立和优化抗原捕获ELISA检测方法,评价其敏感性、特异性和重复性,并初步用于3例已知KSHV阳性血清和257例临床血清样品中抗原的检测. 结果 包被的McAb浓度为5μg/ml、检测抗体浓度为1.6 μg/ml时,P/N值最高,检测的敏感度为31.28 ng/ml,且与EB病毒(ESV)、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、单纯疱疹病毒2型(HSV-2)等抗原无交叉反应,特异性高.检测3例KSHV阳性患者血清均为阳性,在257例临床血清样品中,4例捕获到KSHV抗原. 结论 建立了检测KSHV的抗原捕获ELISA方法,为可能的KSHV检测试剂研制提供重要实验依据.     

呼吸道合胞病毒抗原酶联免疫吸附测定检测方法的建立及应用

目的建它呼吸道合胞病毒抗原酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法,应用其对来源于本院的临床样本进行检测.方法建立ELISA方法,检测标本中的呼吸道合胞病毒,与呼吸道合胞病毒细胞培养检测方法进行对照,并利用该方法进行该病毒2007年在广州市的流行性分析.结果本方法的灵敏度略高于呼吸道合胞病毒的细胞培养检测方法,对甲型流感病毒(H3N2亚型、H1N1亚型)、乙型流感病毒、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、呼吸道腺病毒(Ⅲ型、Ⅶ型)无特异性反应.结论本呼吸道合胞病毒抗原ELISA检测方法可用于呼吸道合胞病毒感染的临床诊断和鉴别诊断.     

LNA探针同时检测人副流感病毒1,2,3型多重荧光定量RT-PCR方法的建立

目的 人副流感病毒1,2,3型是呼吸道感染的主要病原.本研究建立了特异、快速、灵敏的多重荧光定量RT-PCR方法用于人副流感1,2,3型病毒临床标本检测.方法 针对人副流感1,2,3型病毒设计特异性引物探针,优化荧光RT-PCR反应条件.应用体外转录方法分别制备人副流感1,2,3型病毒的标准品.验证荧光定量RT-PCR方法的特异性,敏感性和稳定性.结果 该方法对人副流感1,2,3型病毒核酸检测有高度特异性,检测的灵敏度HPIV1为10个拷贝,HPIV2为100个拷贝,HPIV3为100个拷贝.可从临床患者鼻咽吸出物标本中直接检出.结论 本研究建立的LNA探针同时检测人副流感病毒1,2,3型多重荧光定量RT-PCR方法具有较高的特异性和敏感性.适用于临床早期诊断和实验室病原谱筛查.     

彩色多普勒在糖尿病患者下肢动脉病变检测中的应用价值

目的 探讨彩色多普勒超声检测Ⅱ型糖尿病患者下肢动脉病变的临床应用价值.方法 应用彩色多普勒超声检测685例糖尿病患者下肢动脉情况,并与235例健康体检者对照分析.结果 糖尿病组粥样斑块发生率高于对照组.糖尿病患者粥样斑块为硬斑和混合斑为多,而对照组粥样块以纤维扁平斑为多,少量硬化斑,糖尿病以血管弥漫性病变为多,而对照组以较局限性病变为主.结论 糖尿病患者下肢动脉病变以粥样硬化斑形成、血流速度减低、血管阻力指数增高为主要特点.彩超可直观反映病变的分期、轻重程度,具有重要的临床价值.     

菏泽市2011年手足口病病原学检测分析

目的 明确2011年引起菏泽市手足口病(HFMD)的病原体型别及分布特征.方法 采集临床诊断为手足口病病例的粪便或咽拭子样本,用Real-time PCR方法进行肠道病毒通用(EV)型、EV71型、CoxA16型的核酸检测,并对结果进行分析.结果 389例HFMD临床诊断病例样本检测,肠道病毒核酸阳性376例,检出率9...     

三例酪氨酸血症Ⅰ型患者的临床表现及基因突变分析

目的 分析酪氨酸血症Ⅰ型患儿的临床资料和基因突变情况,探讨基因型与临床表型的关系.方法 采用串联质谱检测血酪氨酸、苯丙氨酸和琥珀酰丙酮水平,气相质谱检测尿琥珀酰丙酮及有机酸,确诊酪氨酸血症工型,对确诊患儿进行基因突变检测分析.结果 确诊的3例患者中2例为急性型,1例为亚急性型,表现为肝肿大,血酪氨酸和琥珀酰丙酮显著增高.基因突变分析检测到5种突变类型:c.455G>A(W152X)、 c.520C>T(R174X)、c.974_976delCGAinsGC、c.1027 G>A(G343R)、c.1100 G>A(W367X),其中c.455G>A(W152X)、c.974_976delCGAinsGC、c.1100 G>A(W367X)为新突变.结论 应用串联质谱检测血酪氨酸及琥珀酰丙酮水平、气相质谱检测检测尿琥珀酰丙酮可诊断酪氨酸血症工型.基因突变检测结果为遗传咨询以及后续研究提供依据.     

扎伊尔型埃博拉病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究

目的 建立扎伊尔型埃博拉病毒的核酸检测方法,以期用于埃博拉出血热临床标本的检测.方法 针对扎伊尔型埃博拉病毒核蛋白和糖蛋白基因设计引物和探针,建立单重和双重实时荧光RT-PCR检测方法,利用体外转录病毒RNA和埃博拉病毒系列参考品RNA评价其敏感性,利用马尔堡病毒、健康人、登革热患者和发热伴血小板减少综合征患者血清评价其特异性.结果 所建立的实时荧光RT-PCR检测方法扩增效率在95％～105％,可特异性地检测扎伊尔型埃博拉病毒核蛋白和糖蛋白基因,与马尔堡病毒、登革热和发热伴血小板减少综合征病毒均无交叉反应,体外转录的病毒RNA可检出10～100拷贝/μl.双重检测方法通过细胞培养的扎伊尔型埃博拉病毒RNA验证,可检出100 pfu/ml病毒.结论 本研究建立的检测扎伊尔型埃博拉病毒的实时荧光RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可用于埃博拉出血热临床标本的检测.     

乳腺浸润性导管癌分子亚型与临床病理特征及预后的关系

目的 检测乳腺浸润性导管癌的临床病理特征及特定蛋白的表达情况,对其进行分型,探讨各哑型与预后的关系.方法 采用免疫组织化学EnVision法检测128例浸润性导管癌ER、PR、HER2和CK5/6的表达,参考文献报道的免疫分型方法 对其分型,并对HER2过表达型9例进行FISH检测.结果 ER、PR、HER2和CKS/6在本组128例浸润性导管癌中的阳性表达率分别为67%(86/128)、45%(58/128)、27%(34/128)和27%(34/128),并将128例分为5种免疫哑型,管腔A型55%(70/128),管腔B型20%(25/128),HER2过表达型7%(9/128),基底细胞样型10%(13/128),无法分类型8%(11/128).FISH检测HER2过表达型9例均为HER2基因扩增.各分子亚型间预后差异具有统计学意义,管腔A型预后最好,基底细胞型预后较差.多因素分析,乳腺癌临床分期和免疫分型是独立的预后因素.月经状态在乳腺癌各免疫亚型中的分布差异有统计学意义.结论 通过检测ER、PR、HER2和CK5/6的表达可以将乳腺浸润性导管癌分成具有不同生物学行为的5个免疫亚型,对于评估预后,指导治疗具有一定的意义.     

乳腺浸润性导管癌分子亚型与临床病理特征及预后的关系

目的 检测乳腺浸润性导管癌的临床病理特征及特定蛋白的表达情况,对其进行分型,探讨各哑型与预后的关系.方法 采用免疫组织化学EnVision法检测128例浸润性导管癌ER、PR、HER2和CK5/6的表达,参考文献报道的免疫分型方法 对其分型,并对HER2过表达型9例进行FISH检测.结果 ER、PR、HER2和CKS/6在本组128例浸润性导管癌中的阳性表达率分别为67%(86/128)、45%(58/128)、27%(34/128)和27%(34/128),并将128例分为5种免疫哑型,管腔A型55%(70/128),管腔B型20%(25/128),HER2过表达型7%(9/128),基底细胞样型10%(13/128),无法分类型8%(11/128).FISH检测HER2过表达型9例均为HER2基因扩增.各分子亚型间预后差异具有统计学意义,管腔A型预后最好,基底细胞型预后较差.多因素分析,乳腺癌临床分期和免疫分型是独立的预后因素.月经状态在乳腺癌各免疫亚型中的分布差异有统计学意义.结论 通过检测ER、PR、HER2和CK5/6的表达可以将乳腺浸润性导管癌分成具有不同生物学行为的5个免疫亚型,对于评估预后,指导治疗具有一定的意义.     

乳腺浸润性导管癌分子亚型与临床病理特征及预后的关系

目的 检测乳腺浸润性导管癌的临床病理特征及特定蛋白的表达情况,对其进行分型,探讨各哑型与预后的关系.方法 采用免疫组织化学EnVision法检测128例浸润性导管癌ER、PR、HER2和CK5/6的表达,参考文献报道的免疫分型方法 对其分型,并对HER2过表达型9例进行FISH检测.结果 ER、PR、HER2和CKS/6在本组128例浸润性导管癌中的阳性表达率分别为67%(86/128)、45%(58/128)、27%(34/128)和27%(34/128),并将128例分为5种免疫哑型,管腔A型55%(70/128),管腔B型20%(25/128),HER2过表达型7%(9/128),基底细胞样型10%(13/128),无法分类型8%(11/128).FISH检测HER2过表达型9例均为HER2基因扩增.各分子亚型间预后差异具有统计学意义,管腔A型预后最好,基底细胞型预后较差.多因素分析,乳腺癌临床分期和免疫分型是独立的预后因素.月经状态在乳腺癌各免疫亚型中的分布差异有统计学意义.结论 通过检测ER、PR、HER2和CK5/6的表达可以将乳腺浸润性导管癌分成具有不同生物学行为的5个免疫亚型,对于评估预后,指导治疗具有一定的意义.     

泛耐药肺炎克雷伯菌株的医院内流行特性的研究

目的 了解华山医院泛耐药肺炎克雷伯菌株及其流行的特点.方法 收集2006年8月-2009年12月对CLSI推荐常规检测药物均耐药的肺炎克雷们菌临床分离株,共57株.所有菌株都进行药物敏感试验、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)初筛及表型确证试验、改良Hodge试验、等电聚焦电泳,聚合酶链反应及其产物测序、接合试验、肠杆菌基因间重复共有序列PCR(ERIC-PCR)和多位点序列分型(MLST).结果 所有菌株都携带blaKPC-2、blaCTX-M-14、blaSHV12和blaTEM-1及qnrB和aac(6')-I b-cr基因.57株细菌中ST423型5株,MIST ST11型52株.ST423型散发,而ST11型呈医院内流行.57株细菌都对替加环素耐药,对多黏菌素、米诺环素和多西环素部分敏感.结论 本次泛耐药肺炎克雷们流行主要为ST11型菌株;不同的肺炎克雷伯菌株,播散能力不同;检出泛耐药肺炎克雷伯菌时应增加检测药物的种类.     

泛耐药肺炎克雷伯菌株的医院内流行特性的研究

目的 了解华山医院泛耐药肺炎克雷伯菌株及其流行的特点.方法 收集2006年8月-2009年12月对CLSI推荐常规检测药物均耐药的肺炎克雷们菌临床分离株,共57株.所有菌株都进行药物敏感试验、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)初筛及表型确证试验、改良Hodge试验、等电聚焦电泳,聚合酶链反应及其产物测序、接合试验、肠杆菌基因间重复共有序列PCR(ERIC-PCR)和多位点序列分型(MLST).结果 所有菌株都携带blaKPC-2、blaCTX-M-14、blaSHV12和blaTEM-1及qnrB和aac(6')-I b-cr基因.57株细菌中ST423型5株,MIST ST11型52株.ST423型散发,而ST11型呈医院内流行.57株细菌都对替加环素耐药,对多黏菌素、米诺环素和多西环素部分敏感.结论 本次泛耐药肺炎克雷们流行主要为ST11型菌株;不同的肺炎克雷伯菌株,播散能力不同;检出泛耐药肺炎克雷伯菌时应增加检测药物的种类.     

用于人乳头瘤病毒基因分型悬浮芯片法的建立和应用

目的 建立一种适合于临床应用的人乳头瘤病毒(HPV)基因分型检测新方法.方法 利用HPV型特异性探针和MY09/11通用引物,制备可对HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73及82型等18种高危型和6、11、34、40、42、43、44、54、61、67、70及84型等12种低危型HPV进行分型检测的悬浮芯片检测方法;并以E7型特异性PCR法和DNA测序法作为"金标准",来验证悬浮芯片检测方法的准确性.结果 在810例临床样本中发现HPV感染病例243例,其中包括高危的HPV16、18、26、31、33、39、45、51、53、56、58、59、66、68、73和82型,以及低危的HPV6、11、34、54、61、67、70和84型,既有单一型感染也有混合型感染;经"金标准"证实,本研究建立的HPV悬浮芯片检测方法的一致率为90.9%,灵敏度为10个拷贝的HPV DNA分子.结论 利用悬浮芯片技术建立的HPV悬浮芯片检测方法可以简便、有效地检测18种高危型和12种低危型HPV,并能明确其基因类型,适用于l临床HPV感染的实验室诊断与流行病学研究.     

双重荧光定量RT—PCR在快速检测A、B型流感病毒上的应用

目的 建立双重荧光定量RT-PCR技术同时快速检测A、B型流感病毒,并应用于临床样本的检测.方法 在A型流感病毒M基因和B型流感病毒HA基因的保守区序列分别设计特异性引物和Taqman探针,建立优化双重荧光RT-PCR反应体系,评价所建双重RT-PCR反应体系的特异性、敏感性和稳定性,并应用于疑似流感含漱液标本检测.结果 该方法对A、B型流感病毒检测具有高度特异性,检出限分别为0.1TCID50和0.01TCID50,具有较好的稳定性.可从疑似流感患者含漱液中直接检测到流感病毒核酸.结论 本研究建立的双重荧光定量RT-PCR可以同时准确分型A、B型流感病毒,灵敏度高,稳定性好,是一种快速检测流感病毒的新方法.     

甲基丙二酸血症患儿MUT基因突变分析

目的 检测甲基丙二酸血症(methylmalonic acidemia,MMA)患儿MUT基因突变类型及突变频率,探讨基因型与临床表型之间的关系.方法 依据串联质谱检测血酰基肉碱、气相色谱-质谱检测尿甲基丙二酸以及维生素B_(12)负荷试验等,诊断21例单纯MMA患儿;采用聚合酶链反应和直接测序法对这些患儿进行MUT基因突变检测分析.结果 在21例单纯MMA患儿中14例检测到17种MUT基因突变,其中8种为未报道突变.以c.323G>A(R108H)、c.729_730insTT(D244LfsX39)与c.1630_1631GG>TA(G544X)较为常见,突变频率分别为14.3%、10.7%及14.3%,以错义突变多见(64.7%).14例MUT突变患儿中10例为早发型,1例为迟发型,3例由新生儿出生筛查检出;11例为维生素B_(12)无效型,3例为有效型.结论 揭示了中国MMA患儿中MUT基因的部分突变谱,MUT基因突变患儿发病较早,多为维生素B_(12)无效型.     

1号染色体扩增与胸腺上皮性肿瘤WHO组织学分型的关系研究

目的 探讨1号染色体扩增与胸腺上皮肿瘤WHO组织学分型、临床分期的关系.方法 应用间期荧光原位杂交技术检测60例胸腺上皮性肿瘤(A型2例,AB型19例,B1型4例,B2型14例,B3型11例,化生型胸腺瘤2例,胸腺癌8例)和11例正常胸腺组织中1号染色体扩增情况.结果 (1)60例胸腺上皮性肿瘤中19例显示1号染色体多体,阳性率31.7％.11例正常胸腺对照组织均未显示1号染色体多体.统计学分析显示胸腺上皮性肿瘤发生1号染色体多体的阳性率显著高于其在非瘤胸腺组织的阳性率(P＜0.05).(2)1号染色体多体的阳性率在胸腺上皮性肿瘤不同组织学类型之间存在统计学差异(P＜ 0.05),其中胸腺癌阳性率最高,为6/8,B3型次之,为6/11,A型为1/2,AB型为4/19,B2型为2/14,B1型为阴性.统计学分析显示B3型胸腺瘤阳性率显著高于其他亚型胸腺瘤(P＜0.05),B3型胸腺瘤与胸腺癌的阳性率之间差异无统计学意义(P＞0.05).(3)不同临床分期胸腺上皮性肿瘤之间1号染色体多体的阳性率差异有统计学意义(P=0.023).Ⅲ期和Ⅳ期1号染色体多体的阳性率明显高于Ⅰ期和Ⅱ期(P=0.003).Ⅰ期和Ⅱ期1号染色体多体的阳性率差异无统计学意义(P =0.750).结论 1号染色体多体在胸腺上皮性肿瘤中的阳性率显著高于非瘤胸腺组织,胸腺癌和B3型胸腺瘤中的阳性率明显高于其他亚型胸腺瘤.B3型胸腺瘤具有与其他亚型胸腺瘤不同的遗传学特点.间期荧光原位杂交技术检测1号染色体扩增对胸腺上皮性肿瘤鉴别诊断和预后判断有一定帮助.     

TCT、高危型HPV检测筛查诊断宫颈癌及癌前病变的病理学对照研究

目的:研究液基薄层细胞学检测(Thinprep cytologic test,TCT)、高危型人乳头瘤状病毒(Human papillomavirus,HPV)检测筛查诊断宫颈癌及癌前病变的病理学对照.方法:回顾性分析2020年1月至2021年1月期间于我院进行宫颈癌筛查的127例女性患者临床资料,分别进行TCT、高危型HPV、宫颈组织检测.以病理学结果为金标准,对比TCT、高危型HPV检出率以及诊断准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值.结果:经检查127例进行宫颈癌筛查女性经宫颈活体组织检查确诊为宫颈病变者51例,其中LSIL19例、HISL32例;宫颈癌患者9例;其余67例未发现宫颈癌及癌前病变.TCT检出37例,检出率为61.67％;高危型HPV检出40例,检出率为66.67％,组间比较差异无统计学意义(P>0.05).TCT检测的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阳性预测值略低于高危型HPV检测,但组间比较差异无统计学意义((P>0.05).结论:TCT、高危型HPV检测在宫颈癌及癌前病变筛查中具有重要价值,临床可根据患者个人情况进行选择.     

肺炎支原体抗原酶联免疫检测方法的建立

目的采用ELISA技术,建立肺炎支原体（Mycoplosma pneumonia）抗原检测方法。方法制备肺炎支原体的多克隆抗体,建立酶联免疫吸附法,检测标本中的肺炎支原体,对其敏感性和特异性进行检测。结果本方法可以检测毒株的1／2^12的稀释样品,对甲型流感病毒（H3N2亚型、H1N1亚型）、乙型流感病毒、副流感病毒（Ⅰ型、Ⅲ型）、呼吸道腺病毒（Ⅲ型、Ⅶ型）、肺炎衣原体无特异性反应。结论本肺炎支原体抗原检测方法可用于疑似肺炎支原体感染样品的临床诊断和鉴别诊断。     

一种新型基因芯片技术在人乳头瘤病毒(HPV)高通量基因分型检测的应用研究

目前应用比较多的采用反向点杂交/线性杂交方法的人乳头瘤病毒(HPV)基因分型检测方法,操作比较繁琐.该文通过设计针对29种HPV基因型的引物对和特异性探针,对HPV样品进行PCR扩增后,将反向引物生物素标记的PCR产物与固定在HPV基因芯片上的HPV DNA探针杂交、清洗和酶标显色,再对芯片进行图像分析转化为数字信号、确定HPV型别,建立HPV高通量基因分型方法(HPG).HPV基因芯片大小为0.36 cm2,每个芯片可在96孔板内的小孔中进行杂交和显色.与HCII方法检测的203例样本比较,对13种高危型检测的结果表明,HPG和HCII方法的一致性较好(kappa值0.663),HPG的分析灵敏度更高.显示了高通量快速检测的在大规模流行病调查、疫苗试验和常规诊断的临床应用前景.