p27和TGF-β在大鼠肾间质纤维化中的表达及关系

目的:研究单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织p27的表达, 同时观察TGF-βmRNA在各组的变化, 探讨UUO模型中 TGF-β与p27的关系.方法:60只SD大鼠随机分成假手术组(SOR)、 UUO模型组.于术后第7、 14、 21天分别处死各组大鼠10只.用HE染色动态观察肾脏病理变化, 免疫组织化学法测定p27的蛋白表达及动态变化, RT-PCR法测定p27mRNA和TGF-βmRNA的水平.结果:SOR组肾小管上皮细胞p27蛋白及肾皮质p27mRNA的表达均强, UUO组随着间质纤维化程度的加重, p27的表达逐渐减弱, 而TGF-βmRNA随着肾间质纤维化程度的加重, 其表达呈上升趋势;UUO组TGF-βmRNA与p27mRNA成负相关.结论:p27参与了UUO大鼠肾间质纤维化的发病过程;UUO大鼠肾间质纤维化模型中TGF-β促纤维化机制可能与p27的下调相关.     

硒与苯那普利抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化

目的研究亚硒酸钠与苯那普利对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化(RIF)的保护作用及其机制。方法将大鼠随机分为假手术组、UUO组(结扎单侧输尿管建立UUO模型)、UUO+硒组(亚硒酸钠0.2 mg/kg·d灌胃)和UUO+苯那普利组(苯那普利10 mg/kg·d灌胃),每组18只。术后第7、14和21天,各组随机处死6只大鼠,肾组织行HE和Masson染色,观察RIF程度;免疫组化法检测结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅲ型胶原(ColⅢ)的表达;Western blot检测CTGF和TGF-β1蛋白表达;比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量。结果术后第7、14和21天,硒组和苯那普利组RIF较UUO组明显减轻(P<0.05);肾组织CTGF、TGF-β1、α-SMA、ColⅢ表达强度和MDA含量明显低于UUO组(P<0.01或P<0.05);GSH-Px和SOD含量明显高于UUO组(P<0.05)。两干预组之间各项指标无明显差异。UUO组TGF-β1、CTGF、α-SMA、ColⅢ的表达和RIF指数与MDA含量呈正相关(P<0.05),与SOD和GSH-Px含量呈负相关(P<0.05);CTGF与α-SMA、ColⅢ的表达呈正相关(P<0.05),CTGF、α-SMA和ColⅢ表达与RIF病变程度呈正相关(P<0.05)。结论亚硒酸钠与苯那普利均可减轻UUO模型大鼠RIF。     

依那普利干预后TGF-β、p27在大鼠肾间质纤维化中的表达

目的:研究单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠血管紧张素转化酶抑制剂依那普利干预后肾组织中TGF-β和p27表达的变化, 并探讨干预后两者之间的关系, 以进一步阐述其抗纤维化机制.方法:30只SD大鼠随机分成假手术组(sham-operated rates, SOR)、 UUO模型组、依那普利治疗组(UUO+ Enalaparil treated group , T-UUO).于术后第14天分别处死各组大鼠10只.用HE染色动态观察梗阻肾脏病理变化, 免疫组织化学法测定TGF-β、 p27, RT-PCR法测定TGF-β、 p27mRNA的水平.结果:T-UUO组的肾间质损伤指数明显降低;T-UUO组与UUO组比较TGF-β的表达减弱( P <0.05), p27的表达增强( P <0.01), T-UUO组TGF-β与p27成负相关.结论:依那普利能减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度;UUO大鼠肾间质纤维化模型中, 依那普利抗间质纤维化机制可能与下调了肾组织中TGF-β的表达, 继而使p27的表达上调有关.     

转染的miR-1908通过靶向转化生长因子β1抑制肾脏纤维化

目的探讨miR-1908在肾纤维化中的调控作用。方法运用实时定量PCR检测纤维化进程中人肾组织中miR-1908和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的水平;运用生物学信息分析和萤光素酶报告基因技术探索miR-1908对TGF-β1的靶向调控关系;体外转染miR-1908腺病毒表达载体后,运用Western blot法检测人原代肾间质细胞中TGF-β1、smad2/3和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白水平;对早期肾纤维化模型小鼠腹腔注射miR-1908腺病毒表达载体6周后,Masson染色观察肾纤维化情况。结果 miR-1908在人肾纤维化过程中水平逐渐降低,与TGF-β1 mRNA水平变化趋势相反;过表达miR-1908后,原代肾间质成纤维细胞中TGF-β1、smad2/3和MMP-2的蛋白水平均显著下调;注射miR-1908腺病毒表达载体6周后,与未注射组相比,小鼠肾纤维化症状明显缓解。结论 miR-1908通过靶向TGF-β1,对抑制肾脏纤维化有一定作用。     

结缔组织生长因子在单侧输尿管梗阻大鼠肾脏中的表达及其意义

目的： 观察结缔组织生长因子（CTGF）在单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型中的动态表达，探讨CTGF在肾小管间质纤维化中的作用机制。方法： 将48 只Wistar大鼠随机分为UUO组和假手术（SO）组，采用左输尿管结扎术复制UUO模型，于术后1、3、7、14 d分别处死2组大鼠取左肾。采用Masson染色评定肾小管间质损伤程度；逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 方法检测肾组织转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、CTGF、Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）mRNA表达；免疫组织化学方法测定TGF-β₁、CTGF、ColⅠ、PAI-1表达；Western blotting方法检测CTGF蛋白表达量的变化。结果: UUO术后1d，梗阻肾TGF-β₁ mRNA表达开始升高，第3-14d时升高更显著（P<0.01），CTGF、ColⅠ、PAI-1 mRNA水平随之逐渐升高。免疫组织化学染色发现，UUO大鼠肾小管和间质区域CTGF表达随病程进展逐渐增强；相关分析显示，UUO术后第7d，CTGF表达量与肾小管间质损伤指数、肾小管间质TGF-β₁、ColⅠ、PAI-1表达强度均呈正相关，相关系数（r）分别为0.62、0.85、0.78和0.76（均P<0.01）。Western blotting结果显示，CTGF蛋白水平在术后第3d开始上升，随病程进展更显著。结论: CTGF可通过促进细胞外基质产生和抑制细胞外基质降解双重途径诱导肾小管间质纤维化的发生和进展。     

HSP47在单侧输尿管梗阻大鼠模型肾脏组织的表达及作用

目的:观察HSP47在单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠模型肾脏组织的表达情况,探讨HSP47在肾小管间质纤维化中的作用.方法:将SD大鼠随机分为模型组(UUO组)和假手术组(Sham组),每组8只.采用单侧(左)输尿管结扎方法,建立梗阻性肾小管间质纤维化大鼠模型.术后第14天处死动物.观察两组间蛋白尿和血肌酐水平, 运用HE和Masson染色观察肾脏组织形态学改变,采用免疫组织化学方法检测HSP47、胶原Ⅳ(Collagen Ⅳ)的表达.结果:与Sham组比较,UUO组大鼠血肌酐水平升高,蛋白尿差异无统计学意义.光镜下UUO组大鼠肾组织出现不同程度的肾小管扩张、间质炎症细胞浸润,间质面积增宽、部分肾小管萎缩、肾小管上皮细胞空泡样变性.Masson染色结果显示UUO组大鼠肾组织胶原在肾小管周围、间质区显著增多.免疫组织化学结果显示UUO组大鼠肾组织HSP47表达显著增加,在肾小管周围、间质区表达增加最明显;Collagen Ⅳ表达显著增加,在肾小管基底膜、间质区表达增加最明显.结论:HSP47在UUO大鼠模型肾脏组织中表达上调,且与胶原表达部位一致,提示HSP47促进肾间质纤维化,且该作用与其促进胶原蛋白的合成有关.     

单侧输尿管结扎对大鼠肾间质PI3K/AKT表达的影响

目的探讨PI3K/AKT信号通路是否参与肾间质纤维化的发病过程。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组,模型组行左侧输尿管结扎术。术后5、10和15 d分别处死各组中的5只大鼠,取左肾行HE和Masson染色,并用免疫组化方法检测肾小管-间质中TGF-β1、AKT1、磷酸化AKT1的表达。结果模型组大鼠肾小管-间质细胞增多,肾小管基底膜增厚皱缩,纤维化明显,随时间进展而加重。不同时间的UUO模型组肾组织AKT1、磷酸化AKT1、TGF-β1表达显著高于假手术组(P<0.01);于第10天模型组AKT1表达达高峰,于第15天磷酸化AKT1、TGF-β1表达达高峰;UUO大鼠肾组织第5天和第15天TGF-β1的表达与AKT1活性呈正相关,第10天和第15天梗阻肾的AKT1活性与肾小管-间质纤维化指数呈正相关(均P<0.05)。结论AKT1、磷酸化AKT1在大鼠梗阻性肾病模型肾小管-间质中表达及AKT1活性明显增加,提示PI3K/AKT信号通路可能参与肾小管-间质纤维化的过程。     

EMMPRIN在大鼠肾间质纤维化过程中的表达变化

目的 检测细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)在大鼠肾间质纤维化模型中的表达变化.方法 64只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham组)和模型组(UUO组),每组16只.假手术组,仅游离输尿管不结扎,模型组,行单侧输尿管结扎术,分别于术后3、7、14 d处死大鼠并留取肾脏组织.肾脏标本行HE、Masson染色方法检测间质纤维化损伤的程度.应用免疫组织化学方法检测肾组织中EMMPRIN,α-SMA,E-cadherin的表达.结果 HE染色显示:UUO术后肾间质肾小管萎缩、扩张,胞外基质沉积,炎细胞浸润增加.Masson染色显示:UUO术后大鼠肾组织胶原纤维组织增生,出现明显的间质纤维化改变.免疫组织化学结果显示:与假手术组相比,UUO模型3d组的EMMPRIN表达显著增高,同时有α-SMA表达升高和E-cadherin表达显著下降(P＜0.05);随着梗阻时间的延长,模型7d组EMMPRIN的表达逐渐减弱(P＜0.05).结论 EMMPRIN可能参与了UUO大鼠肾间质纤维化的早期上皮间质转分化过程,而随着纤维化程度加重,后期表达逐渐减少.     

百令胶囊联合还原型谷胱甘肽对单侧输尿管梗阻模型大鼠肾脏纤维化的影响

目的:观察百令胶囊与还原型谷胱甘肽联合干预单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠对其肾脏纤维化的影响。方法:SD大鼠28只随机分为假手术组(n=7)、UUO模型组(UUO组,n=7)、百令胶囊治疗组(n=7)和百令胶囊联合还原型谷胱甘肽组(联合治疗组,n=7)。HE、SPA染色观察各组肾脏组织结构,Masson染色检测肾脏组织纤维化程度;免疫组织化学染色检测肾组织I型胶原蛋白、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)和a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)表达。结果:UUO组肾组织结构、肾间质纤维化和I型胶原蛋白、TGF-β_1、a-SMA蛋白表达等病理变化均较假手术组严重,通过百令胶囊或百令胶囊联合还原型谷胱甘肽治疗后,百令胶囊治疗组和联合治疗组上述病变均明显改善,尤以联合治疗组改善更显著。结论:百令胶囊联合还原型谷胱甘肽治疗明显改善肾间质纤维化。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对小鼠肾间质纤维化及CTGF的影响

目的观察丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对UUO小鼠肾间质纤维化(RIF)的影响及其作用机制。方法清洁级雄性CD1小鼠20只,随机分为:A组(单纯对照组)、B组(UUO造模组)、C组(STS低剂量组)、D组(STS高剂量组)。每组各5只,行右侧输尿管结扎术,单纯对照组只找到输尿管并不结扎,STS组小鼠在手术前3天开始腹腔内注射STS,低、高剂量组STS浓度分别为15 mg/kg.d、30 mg/kg.d,其他2组予同等剂量的生理盐水。UUO 7天后处死小鼠提取肾组织,Masson染色观察肾小管间质胶原纤维分布,Realtime PCR观察肾组织中结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原、α-SMA的mRNA表达,Western blot观察肾组织中α-SMA蛋白质表达。结果与对照组相比,UUO小鼠Ⅰ型胶原、α-SMA、CTGF的表达增加,RIF明显(P<0.01),STS可明显抑制UUO小鼠肾组织Ⅰ型胶原、α-SMA、CTGF的表达(P<0.05),减轻RIF。结论 STS具有抑制UUO小鼠肾间质纤维化的作用,且这种作用可能与其对CTGF的抑制有关。     

p-Smad2/3、Smad7在大鼠实验性肾间质纤维化模型中的表达

目的观察TGF-β1/Sm ads信号传导途径在大鼠肾间质纤维化中的表达。方法W istar大鼠分为对照组、假手术组及模型组。行单侧输尿管结扎术(UUO)建立肾梗阻模型,分别于术后第3、6、14和28天处死动物。MASSON染色观察肾间质病变程度,免疫组化检测TGF-β1、p-Sm ad2/3、I型胶原以及α-SMA的改变,W estern b lot和RT-PCR方法分别检测TGF-β1、p-Sm ad2/3、Sm ad7蛋白及其mRNA表达水平。结果与对照组、假手术组相比,模型组于术后3天肾TGF-β1蛋白及mRNA、p-Sm ad2/3蛋白水平开始升高,Sm ad7蛋白表达开始减少而mRNA水平却升高,同时I型胶原、α-SMA水平升高。第14天TGF-β1、Sm ad7的变化达到峰值(P<0.01),在第28天有所回落。结论TGF-β1/Sm ads信号传导途径在肾间质纤维化形成中可能起着重要促细胞外基质沉积的作用。     

胰激肽原酶减轻单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化

目的:探讨胰激肽原酶(PK)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致肾间质纤维化大鼠肾脏的保护作用。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠建立UUO模型后随机分为4组:UUO7组、UUO14组、UUO+PK7组和UUO+PK14组,其中UUO+PK7组和UUO+PK14组给予腹腔注射PK(7.2 U·kg^-1·d^-1)治疗14 d,分别于第7天和第14天处死大鼠;假手术组给予生理盐水。采用Masson染色、HE染色和透射电镜观察各组大鼠的肾间质纤维化程度;免疫组化和Western blot法分别检测炎症因子、致纤因子、氧化应激、细胞凋亡及细胞自噬调控因子的表达。结果:PK治疗明显减轻UUO大鼠肾小管间质纤维化程度,并呈时间依赖性,这种改善伴随着炎症介质[单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和Toll样受体2(TLR-2)]及致纤因子[转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)]的表达下调。UUO所致氧化应激表现为氧化酶[NADPH氧化酶2(NOX-2)和NOX-4]的表达增加和抗氧化酶[超氧化物岐化酶1(SOD1)和SOD2]的表达...     

结缔组织生长因子在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达

目的：检测大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）模型不同时期，肾组织中结缔组织生长因子（CTGF）、转化生长因子β1（TGF-β1）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达，观察比较在间质纤维化不同阶段，3者的动态变化及关系。 方法： 采用雄性SD大鼠36只，分为假手术组和模型组，模型组行左侧输尿管结扎术，再分3、7、14、21和28 d共6组，每组6只，于各时点处死大鼠，取肾组织，常规HE、Masson染色，按小管间质损害的特征进行半定量评分。免疫组化检测CTGF、TGF-β1和α-SMA表达。 结果： 随梗阻时间的延长，小管间质纤维化加重，28 d间质已基本被纤维化组织所代替。随间质纤维化程度的加重，CTGF和α-SMA表达逐渐增加，两者与小管间质损害积分呈正相关，CTGF与α-SMA的表达之间也呈正相关。TGF-β1表达在7-14 d达高峰后，逐渐减少，但仍高于对照组。 结论： UUO致CTGF表达增加可能与TGF-β升高有关，CTGF可能通过促进间质中肌成纤维细胞的形成而参与肾间质纤维化。     

抗纤灵方对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1-Smad通路的影响

目的:研究中药复方抗纤灵对单侧输尿管梗阻(UUO)所致肾纤维化大鼠TGF-β1-Smad通路的影响,借以初步探讨其发挥疗效的作用机制。方法:雄性SD大鼠18只随机分为3组,假手术组、模型组、中药治疗组。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,抗纤灵治疗两周后检测梗阻肾羟脯氨酸含量;HE染色和电镜观察肾组织病变;采用RT-PCR检测肾组织TGF-β1 mRNA水平;蛋白免疫印迹法检测肾组织转化生长因子I型受体(TβRI)、转化生长因子II型受体(TβRII)、Smad2蛋白表达及磷酸化变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显增多;病理观察可见肾小球毛细血管基底膜明显增厚,间质成纤维细胞和胶原沉积明显增多;肾组织TGF-β1mRNA及TβRI、TβRII蛋白表达显著增多,Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均显著增多。与模型组比较,中药干预组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显减少;肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚,间质成纤维细胞和胶原沉积较模型组减轻;肾组织TβRI、TβRII蛋白表达明显下调,Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均明显下调。结论:抗纤灵可抑制单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1-Smad通路,抑制梗阻肾TβRI、TβRII、Smad2蛋白表达及Smad2蛋白磷酸化,从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化,减少纤维化肾脏中胶原蛋白含量。     

Akt信号蛋白在阿托伐他汀作用于UUO大鼠肾小管-间质中的表达

目的： 探讨PI3K/Akt信号通路是否参与了阿托伐他汀延缓UUO大鼠肾小管-间质纤维化过程。方法: 将45只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及阿托伐他汀治疗组（简称阿乐组）。模型组与阿乐组大鼠均行左侧输尿管梗阻（UUO）术。阿乐组于术前3 d开始阿托伐他汀（10 mg·kg^-1·d^-1）灌胃，其余两组予等量生理盐水灌胃。术后第5、10、15 d分别处死各组中的5只大鼠，取左肾行HE和Masson染色，并用免疫组化方法检测肾小管间质中TGF-β₁、Akt1、磷酸化Akt1的表达。结果: 模型组大鼠肾小管间质细胞增多，纤维化明显。阿乐组大鼠肾小管间质病变程度较同期模型组明显减轻（P<0.05）。模型组大鼠梗阻肾小管-间质中Akt1、磷酸化Akt1、TGF-β₁表达较假手术组明显增加（P<0.01），Akt1活性增加（P<0.01）。阿乐组大鼠上述指标在肾小管-间质的表达程度均较同期模型组明显减轻（P<0.05）。梗阻肾术后第5 d和第15 d肾组织Akt1活性与TGF-β₁表达呈正相关（r=0.63, P<0.05；r=0.64, P<0.05）。结论: 阿托伐他汀可减少输尿管梗阻后磷酸化Akt1、总的Akt1、TGF-β₁的表达，抑制Akt1活性，提示PI3K/Akt信号通路可能参与了阿托伐他汀延缓UUO大鼠肾小管-间质纤维化的过程。     

大鼠肾间质纤维化早期的差异蛋白质筛选与annexin A5表达的动态分析

目的:分析肾间质纤维化(RIF)早期的蛋白质组表达变化情况,为探讨干预RIF的新靶点奠定基础。方法:(1)48只雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照(control)组(6只)、假手术(sham)组(6只)和单侧输尿梗阻(UUO)模型组(36只)。UUO组行右侧输尿管结扎,并分别于术后第3、7、11、14、21和28天各处死6只,取肾脏标本行HE染色和Masson染色,光镜下观察病理变化;control组不作任何处理,sham组开腹后只分离右输尿管但不结扎,两组均于第28天取肾脏标本作病理观察;(2)取UUO术后第7天大鼠梗阻侧和健侧肾组织的蛋白质提取液行双向凝胶电泳,两侧对照找出差异蛋白质,选取部分差异蛋白点进行质谱鉴定;(3)Western blot检测UUO大鼠肾脏组织膜联蛋白A5(annexin A5)表达的动态变化。结果:(1)UUO各组梗阻肾脏逐渐出现肾小管扩张、炎症细胞浸润、肾小管上皮细胞萎缩、间质胶原纤维沉积等变化,其中,肾梗阻后第7天开始出现间质纤维化;(2)与健侧肾比较,UUO术后第7天的梗阻侧肾出现≥1.5倍的差异蛋白质166个,其中上调81个,下调85个,质谱成功鉴定出19种差异蛋白质;(3)Western blot显示,各时段UUO组大鼠梗阻侧肾组织中annexin A5表达均明显高于sham组(P0.05),其中以梗阻第3天组的表达量最高,随后逐渐下降,但仍高于sham组。结论:(1)RIF早期存在大量表达差异的蛋白质;(2)RIF的annexin A5表达显著增加,可能与某些病理变化存在密切关系。     

PAX2-siRNA在梗阻性肾病大鼠体内的作用研究

目的 通过RNA干扰和基因转染技术,研究沉默PAX2基因对UUO大鼠肾间质纤维化的影响.方法 将PAX2-siRNA转染至UUO大鼠肾脏被膜下,将64只幼年雄性大鼠随机分为:阴性对照组(NC)32只;沉默组(RNAi) 32只,于转染后3、5、7、14天分为4组,每组8只,留取肾组织标本,应用Real-Time PCR及Western blot检测肾皮质PAX2 mRNA及其蛋白的沉默情况,HE染色和Masson染色方法在光镜下观察肾小管损伤情况和肾间质纤维化程度.结果 ①沉默组与对照组比较PAX2 mRNA和PAX2蛋白表达量降低,有统计学意义(P＜0.05),②HE和Masson染色观察到对照组随梗阻时间延长,肾小管损伤逐渐明显,肾间质中可见胶原蛋白逐渐增加.沉默组与对照组比较在7d以前无明显变化(P＞0.05);在梗阻14d沉默组与对照组比较肾小管损伤减轻、肾间质病变减低、胶原纤维沉积减少(P＜0.05).结论 在UUO大鼠模型中,梗阻早期沉默PAX2基因对肾间质纤维化进程无明显影响,梗阻晚期可减轻肾小管损伤及肾间质纤维化病变,对肾间质纤维化有明显治疗作用.     

益赛普介导TNF-α调控UUO小鼠肾组织C3在肾间质纤维化中的作用机制

目的探索TNF-α是否通过调控UUO小鼠肾小管上皮细胞补体3(complement 3,C3)水平介导肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)及相关机制,而TNF-α受体拮抗剂益赛普(etanercept)能否拮抗TNF-α作用减轻RIF。方法将野生型(wide type,WT)与C3基因敲除(C3 knock out,C3KO)小鼠分别设置假手术(Sham)组、单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)组;另外,给WT UUO鼠腹腔注射不同浓度etanercept。观察WT UUO鼠及C3KO UUO鼠肾组织中TNF-α、C3的表达及TNF-α与表达C3肾小管的相关性及RIF程度;观察etanercept处理WT UUO鼠后各组肾小管上皮细胞表达TNF-α受体(TNF-αreceptor,TNFR)、NF-κB p65、肾小管C3表达及RIF程度。结果 UUO鼠肾组织几乎所有肾小管上皮细胞均表达TNF-α受体(TNF-αreceptor,TNFR)及UUO后肾组织高表达TNF-α,部分肾小管上皮细胞表达C3,表达C3肾小管周围有强阳性表达TNF-α细胞浸润;C3KO UUO组RIF程度较WT UUO组减轻(P0.01);经etanercept处理WT UUO鼠,肾小管C3和肾组织NF-κB p65表达均明显下降(P0.01),RIF减轻(P0.01)。结论 UUO术后TNF-α、C3均参与RIF,TNF-α可能通过调控肾小管上皮细胞转录因子NF-κB p65的表达介导肾小管上皮细胞C3产生参与RIF,而etanercept可能拮抗TNF-α减轻RIF。     

TRPC6介导的钙离子紊乱通过激活STAT3促进肾小管上皮细胞损伤后炎症反应及肾间质纤维化

目的:采用动物及细胞实验探讨肾小管上皮细胞(TECs)中瞬时受体电位阳离子通道C亚族成员6(TRPC6)介导的钙离子(Ca~(2+))紊乱对肾脏纤维化过程中炎症反应及细胞外基质合成的影响及机制。方法:(1)在体实验:建立小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型,分为假手术组及UUO模型组,分别向两组小鼠腹腔注射TRPC6抑制剂BTP2或溶媒,在手术后14 d取肾组织留检。通过激光共聚焦检测TECs内Ca~(2+)浓度;通过HE染色及Masson染色检测肾组织病理改变;Western blot法检测TRPC6、纤维化相关蛋白I型胶原(COL1)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)及p-STAT3的表达水平;real-time PCR法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。(2)体外实验:应用TGF-β刺激人肾脏近曲小管上皮细胞株HK-2,向HK-2细胞转染TRPC6质粒或TRPC6 siRNA,Western blot法检测TRPC6、COL1、STAT3及p-STAT3的表达水平;real-time PCR法检测炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA水平。结果:(1)UUO模型中,TECs内Ca~(2+)浓度较假手术组显著升高;腹腔注射BTP2可减轻肾小管损伤及肾脏炎症细胞浸润,显著降低肾组织炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA水平,降低肾组织COL1及p-STAT3蛋白水平(P0.05)。(2)体外实验中,TGF-β刺激下,HK-2细胞中炎症因子IL-1β、IL-6及TNF-α的mRNA水平和COL1表达增多,高表达TRPC6进一步增加炎症因子及COL1的表达,沉默TRPC6则降低炎症因子及COL1的表达(P0.05)。结论:在UUO模型及体外培养的TECs实验中,TRPC6介导的Ca~(2+)紊乱通过促进STAT3磷酸化,加重肾脏炎症反应及肾间质纤维化水平。     

抗纤灵方对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1-Smad通路的影响

目的： 研究中药复方抗纤灵对单侧输尿管梗阻（UUO）所致肾纤维化大鼠TGF-β₁-Smad通路的影响，借以初步探讨其发挥疗效的作用机制。方法: 雄性SD大鼠18只随机分为3组，假手术组、模型组、中药治疗组。用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型，抗纤灵治疗两周后检测梗阻肾羟脯氨酸含量；HE染色和电镜观察肾组织病变；采用RT-PCR检测肾组织TGF-β₁ mRNA水平；蛋白免疫印迹法检测肾组织转化生长因子I型受体（TβRI）、转化生长因子II型受体（TβRII）、Smad2蛋白表达及磷酸化变化。结果: 与假手术组比较，模型组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显增多；病理观察可见肾小球毛细血管基底膜明显增厚，间质成纤维细胞和胶原沉积明显增多；肾组织TGF-β₁ mRNA及TβRI、TβRII蛋白表达显著增多，Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均显著增多。与模型组比较，中药干预组大鼠梗阻肾羟脯氨酸含量明显减少；肾小球和肾小管基底膜仅见轻度增厚，间质成纤维细胞和胶原沉积较模型组减轻；肾组织TβRI、TβRII蛋白表达明显下调，Smad2蛋白磷酸化及总蛋白表达水平均明显下调。结论: 抗纤灵可抑制单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β₁-Smad通路，抑制梗阻肾TβRI、TβRII、Smad2蛋白表达及Smad2蛋白磷酸化，从而改善梗阻性大鼠的肾间质纤维化，减少纤维化肾脏中胶原蛋白含量。