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1.
目的 研究犬骨髓间充质干细胞(MSC)体外诱导分化为胰岛样细胞的可能性.方法 分离纯化犬骨髓MSC,予EGF、bFGF和β细胞调节素、尼克酰胺、B27添加剂诱导.双硫腙染色、 Western blot、免疫荧光染色、胰岛素分泌量测定和葡萄糖刺激胰岛素释放试验鉴定诱导前后的细胞功能.结果 未诱导细胞呈长梭形贴壁生长,诱导第2周细胞逐渐变圆,聚集成团,双硫腙染色呈棕红色;Western blot检测诱导后细胞表达PDX-1;免疫荧光染色显示诱导后细胞表达胰岛素、胰升血糖素、生长抑素; ELISA结果表明诱导后细胞可分泌胰岛素,体外葡萄糖刺激胰岛素释放试验阳性.结论 犬骨髓MSC在体外能被诱导分化为胰岛样细胞. 相似文献
2.
传统的药物治疗不能阻止糖尿病患者胰岛β细胞的进行性衰竭.骨髓间充质干细胞是一个缺乏造血干细胞的细胞群,具有自我更新能力以及多向分化潜能,可定向诱导分化为胰岛素分泌细胞,分泌胰岛素,从而可能用于糖尿病及其并发症的治疗.胰-十二指肠同源盒因子-1可提高其分化效率.本文主要对骨髓间充质干细胞治疗糖尿病及其并发症作一综述. 相似文献
3.
骨髓间充质干细胞是存在于骨髓中的一群具有自我更新和多向分化潜能的细胞。新近研究表明,骨髓间充质干细胞在体内微环境及体外细胞因子的作用下不仅能够分化为胰岛β样细胞,而且具有一定的β细胞分泌功能,能够降低血糖,克服了胰岛移植治疗糖尿病所面临的供体细胞缺乏和免疫排斥反应问题,从而为临床糖尿病细胞治疗开辟了一条新的途径。 相似文献
4.
目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)诱导后促进胰腺损伤修复的方法.方法 应用贴壁法分离、纯化大鼠MSCs,经bFGF、EGF、HGF、2%B27、activeA、β巯基乙醇、尼克酰胺诱导12~14 d,RT-PCR鉴定后,以DAPI标记治疗胰腺损伤模型大鼠.治疗1 w后激光共聚焦显微镜观察胰岛样细胞的迁移、定位,RT-PCR鉴定参与胰腺损伤修复的细胞来源.结果 MSCs经诱导12~14 d,分化为可表达Ins1、Ins2的胰岛样细胞,经DAPI标记后治疗胰腺损伤模型大鼠1 w,使炎性细胞浸润明显、细胞结构不清、胰岛结构崩解的损伤区的胰腺组织结构开始恢复,胰岛再建;RT-PCR检测Sry进一步证实损伤区胰腺组织内存在输注的胰岛样细胞.结论 MSCs可诱导分化成胰岛样细胞,该细胞参与损伤胰腺组织的修复. 相似文献
5.
目的 观察胰腺提取物诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)为胰岛样细胞(IC)的变化及其自体移植对糖尿病猕猴的影响.方法 分离猕猴BMSC,纯化、扩增、鉴定后分别用Ⅰ液[含20 ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、20 ng/ml干细胞生长因子(SCF)、2%B27和2%新生牛血清的DMEM/F12]和Ⅱ液(Ⅰ液加10%胰腺提取物和20 mmol/L尼克酰胺)诱导培养,镜检法观察细胞形态的变化,免疫细胞化学法鉴定相关蛋白的表达.将IC自体移植到链脲佐菌素(STZ)所致糖尿病猕猴胰腺,观察移植对血糖、胰岛素和C肽分泌的影响.结果 分离到CD105阳性的BMSC,经体外诱导后,由长梭形变为神经元样细胞(nestin染色阳性),随后细胞逐渐聚集呈丛状排列的IC(胰岛素和C肽染色阳性).自体移植IC后,糖尿病猕猴血糖浓度逐渐降低,而胰岛素与C肽浓度则逐渐升高,3个月后分别与移植前的浓度相比差异均具有统计学意义(P<0.01),但仍未恢复到注射STZ前的正常水平.结论 BMSC可以在体外被含有10%胰腺提取物的条件培养基诱导为IC,自体移植IC到糖尿病猕猴后可以纠正血糖、胰岛素和C肽的分泌. 相似文献
6.
血管紧张素Ⅱ诱导人骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞 总被引:9,自引:2,他引:9
目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)作用于人骨髓间充质干细胞(hMSCs)后,心肌特异蛋白及细胞外信号调节激酶(ERK 1/2)的表达变化。方法第8代hMSCs用0.1μmol/L AngⅡ孵育24 h。倒置显微镜下观察细胞形态变化,免疫细胞化学法标测心肌肌钙蛋白I(cTnI)、间隙连接蛋白43(connexin 43)及α肌动蛋白(α-actin)表达情况,反转录PCR法检测细胞cTnI表达,透射电镜观察分化的心肌样细胞内是否有肌丝存在,W estern b lot法检测细胞ERK 1/2总蛋白表达,流式细胞仪测定心肌样细胞分化率。结果与对照组比较,AngⅡ组hMSCs诱导后细胞形态改变,第2周开始表达α-actin及connexin 43,第3周开始表达cTnI,AngⅡ组细胞ERK 1/2的蛋白表达水平逐渐增加,流式细胞仪测得心肌样细胞分化率为(23±3)%。结论AngⅡ在体外可能经ERK通路诱导hMSC向心肌样细胞分化。 相似文献
7.
目的探讨体外培养、扩增骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法,诱导MSCs向神经元样细胞定向分化。方法取大鼠骨髓,采用贴壁培养筛选法分离MSCs,进行培养扩增,观察其生物学特性;用IBMX诱导MSCs向神经元样细胞分化,并通过细胞免疫化学法鉴定分化细胞。结果大鼠MSCs可通过贴壁法成功分离,并可在体外大量扩增,经IBMX诱导,MSCs可向神经元样细胞分化,出现胞体和突起,细胞免疫化学染色神经元特异性烯醇化酶和巢蛋白呈阳性。结论MSCs易分离和培养,体外培养条件下生长良好,可连续传代,诱导剂作用下可分化出神经元样细胞。 相似文献
8.
人骨髓间充质干细胞体外分化为肝细胞样细胞 总被引:12,自引:3,他引:12
目的 探讨人骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养及特异性诱导为肝细胞样细胞的能力。方法 骨髓标本来源于健康志愿者的胸骨,年龄2~35岁,采用淋巴细胞分离液(密度1.077)分离人MSCs,并分别采用HGF、FGF4、HGF FGF4以及无生长因子四种处理因素体外诱导第三代人MSC向肝细胞样细胞分化。通过流式细胞术分析鉴定.MSCs的纯度,于诱导培养的0、7、14、21、28天时留取细胞检测CK18、AFP和白蛋白的表达情况,同时进行糖原染色验证细胞功能。结果 用淋巴细胞分离液分离出的人MSCs纯度可达90%,采用HGF、FGF4及HGF FGF4三种处理因素均可在体外诱导人MSCs特异分化为具有肝细胞样细胞表型和功能的细胞。结论 人MSCs能在体外扩增并定向诱导为肝细胞样细胞。 相似文献
9.
骨髓间充质干细胞是存在于骨髓中的一群具有自我更新和多向分化潜能的细胞.新近研究表明,骨髓间充质干细胞在体内微环境及体外细胞因子的作用下不仅能够分化为胰岛β样细胞,而且具有一定的β细胞分泌功能,能够降低血糖,克服了胰岛移植治疗糖尿病所面临的供体细胞缺乏和免疫排斥反应问题,从而为临床糖尿病细胞治疗开辟了一条新的途径. 相似文献
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目的 研究成人骨髓间充质干细胞(hMSC)体外定向诱导可否分化为神经元样细胞。方法 Percoll分离液离心分离hMSC,体外扩增,采用两种方法:①含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24小时,甲氧酚(BHA)和二甲亚枫(DMSO)联合诱导6小时;②2-巯基乙醇(2-ME)预诱导24小时,BHA和DMSO诱导6小时。免疫组化检测神经元样细胞表达神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结果 hMSC在体外扩增传至5代后,流式细胞仪显示hMSC表面抗原CD29、CD44、CD90表达阳性率分别为99.5%,97.8%,98.8%。采用两种方法诱导hMSC后,胞体收缩,突起伸出,较密的部分神经元拉成网状;免疫组化显示诱导的神经元样细胞能特异性表达NSE、NF,不表达GFAP。结论 成人骨髓hMSC在体外可以分化为神经元样细胞。 相似文献
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目的胰升糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)、胃泌素协同促进大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)转分化的胰岛素分泌细胞(insulin-producing cells,IPCs)分化。方法(1)制备IPCs模型:胰十二指肠同源盒1(pancreatic duodenal homeobox 1,Pdx-1)、神经元素3(neurogenin 3,Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(V-type tendon fibrosarcoma oncogene homolog A,MafA)共转染BMSCs转分化为IPCs;(2)IPCs分为4组:A组,未诱导组;B组,GLP-1诱导组;C组,胃泌素诱导组;D组,GLP-1联合胃泌素诱导组,高糖培养基培养7 d,RT-PCR检测各组胰岛素2(insulin2)、葡萄糖激酶(GK)、巢蛋白(nestin)、胰升糖素(glucagon)及Pdx-1表达水平,ELISA检测各组胰岛素分泌情况。结果在高糖条件下培养7 d,各组IPCs形态出现明显变化,逐渐聚集并形成散在细胞团块,联合诱导组形成大型细胞团块,双硫棕染色呈红棕色;各组在诱导第0、3、5、7、9天胰岛素分泌水平逐渐提高,且联合诱导组升高最为明显(P<0.05);与A组相比,B、D组Insulin2和GK表达明显上调,D组glucagon表达下调,C组Pdx-1表达下调,glucagon表达上调,(P<0.05);与B组相比,C组insulin2表达下调,glucagon表达水平明显上调,D组insulin2和GK表达水平明显上调,glucagon表达水平下调(P<0.05);与C组相比,D组Pdx-1、insulin2和GK表达水平明显上调,glucagon表达水平下调(P<0.05)。结论GLP-1和胃泌素通过上调insulin2和GK,下调glucagon协同促进IPCs向胰岛β细胞分化。 相似文献
12.
骨髓间充质干细胞在胰腺生理更新和病理再生中的作用 总被引:8,自引:1,他引:7
目的:探讨骨髓间充质干细胞在胰腺生理更新和病理再生中的作用. 方法:将60只SD大鼠随机分为5组,每组12 只.A组为正常阴性对照组,不作任何处理,B 组为自体骨髓回输对照组,C组为雨蛙肽致轻度胰腺炎(MAP)模型组,D组为L-精氨酸致重度胰腺炎(SAP)模型组,E组为粒细胞集落因子(G-CSF)预处理组(SAP GSF):在造模前3 d,sc G-CSF 40μg(kg·d),共3 d,其余处理同 D组.造模前3 d用核染料Hoechst33258标记自体骨髓间充质干细胞(MSC),并回输到自体骨髓腔.于骨髓干细胞回输后的2 wk和8 wk,分批处死大鼠,采集胰腺,立即进行冰冻切片, 荧光显微镜下直接观察胰腺组织中是否有呈现黄绿色荧光的细胞,选择有上述黄绿色荧光的冰冻切片进行免疫荧光染色,观察有无 Cytokeratin 19、胰岛素和胰高血糖素染色呈阳性的细胞.结果:A组的胰腺冰冻切片未见有黄绿色荧光.造模后2 wk,B、C、E和D组存活大鼠可见标记的MSC出现在正常胰腺组织和损伤胰腺组织中,在正常胰腺组织中偶见,而在损伤胰腺组织中多见,尤以GSF预处理组最多见, C、D、E组一直持续到8 wk仍可见到黄绿色荧光.A和D组死亡大鼠未见Cytokeratin 19、胰岛素和胰高血糖素染色呈阳性的细胞.造模后2 wk,B、C、E和D组存活大鼠掺入损伤胰腺中的MSC均有分化为Cytokeratin 19染色阳性的细胞,未见胰岛素和胰高血糖素染色呈阳性的细胞.造模后8 wk,胰岛素和胰高血糖素染色呈阳性的细胞在C、D组偶见,E组散见.结论:自体骨髓间充质干细胞参与胰腺的生理更新和病理再生. 相似文献
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骨髓间充质干细胞在小鼠肝脏局部分化为肝细胞的实验研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 探讨小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)在肝内分化为肝细胞的可行性。方法腹腔注射丙烯醇致雌性C57BL/6小鼠全肝损伤后局部接受雄性同品系绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞移植。移植后3周取骨髓嵌合小鼠肝脏做冰冻切片,荧光显微镜下观察GFP阳性细胞在肝内分布,石蜡切片行GFP抗体和白蛋白(albumin,Alb)抗体免疫组化双标法检测GFP阳性细胞在受体小鼠肝内的分化情况。结果移植后3周小鼠肝内可见GFP阳性细胞,并可见GFP和Alb双阳性细胞。结论异体骨髓间充质干细胞可在小鼠肝内分化为表达Alb的肝细胞,为肝组织的再生和修复提供了新思路,显示了其在肝病治疗中的应用潜力。 相似文献
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目的研究信号蛋白Smad3在TGF-β1促大鼠骨髓间充质干细胞分化成平滑肌样细胞中的作用。方法运用免疫细胞化学、RT—PCR证实BMSC中存在TGF-β1/smad3信号传导通路的基础上,运用反义Smad3进行干预。实验分三组:反义Smad3组(反义Smad3腺病毒转染大鼠BMSC),空载对照组(空载腺病毒转染大鼠BMSC)及未转染组;一组均予10ng/mL浓度的TGF-β1诱导1W。通过免疫细胞化学和实时定量PCR比较反义Smad3干预后各组SMut=actin的表达变化。结果经免疫细胞化学法、RT-PCR检测证明BMSC中存在TGF-β1/smad3表达。运用针对靶基因Smad3的反义技术干预后,经10ng/mLTGF-β1诱导,相比未转染组及空载组,反义smad3腺病毒转染组SMα-actin阳性细胞表达数明显减少。实时定量PCR也显示反义smad3组SMα-actinmRNA的相对含量明显低于未转染组(O.460±0.259VS2.932±0.375,P〈0.01),而空载组与未转染组相比无明显统计学差异。结论TGF-β1促BMSC成平滑肌样细胞分化的过程中受Smad3选择性调节,Smad3可能是TGF-β1促BMSC分化成平滑肌样细胞的细胞内信号途径。 相似文献
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体外诱导成人骨髓间充质干细胞转化为神经元细胞的实验研究 总被引:1,自引:1,他引:0
目的探讨成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在体外特定的诱导条件下,转化为神经元细胞的规律、效率及长期存活的条件.方法采用β-巯基乙醇为诱导剂,在体外诱导6 h后,改用诱导维持液使诱导后的细胞在诱导维持液中存活6 d.用细胞化学及免疫组织化学、Western blot方法检测神经元细胞、星形胶质细胞标记蛋白的表达.结果诱导6 h,诱导后的细胞尼氏染色胞浆中可见深蓝色的尼氏体形成;细胞表达NSE、NF-M,而不表达GFAP;NSE、NF-M阳性细胞数超过80%以上.Western blot结果显示:诱导6 h,诱导后的细胞表达Nestin,而无MAP-2的表达,随着时间的延长,Nestin的表达逐渐减少,而出现了MAP-2的表达.结论β-巯基乙醇在体外可定向诱导hMSCs经神经干细胞转化为神经元细胞,而且诱导后的神经元细胞逐渐趋于成熟. 相似文献
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骨髓间充质干细胞是一种来源于骨髓基质的具有多向分化能力的干细胞,在特定条件下,可以分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、神经元样细胞及肝细胞等.近年研究表明,骨髓间充质干细胞能抑制和减轻肝纤维化,并且具有免疫抑制和诱导免疫耐受的作用.因此,在细胞移植治疗终末期肝病方面具有广阔的临床应用前景. 相似文献
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目的研究原代培养的人肺成纤维母细胞体外分化特性。方法于2006年3月至2006年10月在清华大学第一附属医院中心实验室,将原代培养的人肺成纤维母细胞分别在成骨细胞培养基(含地塞米松,维生素C和β-磷酸甘油)和成脂肪细胞培养基(含马血清,地塞米松和胰岛素)作用下进行分化诱导。组织化学方法行碱性磷酸酶和钙化斑块染色,Westernblotting法测定骨桥蛋白表达,油红染色鉴定脂肪细胞形成。结果在成骨细胞培养基诱导下,细胞内碱性磷酸酶表达增加,于第14天可见大量钙盐沉积和骨桥蛋白表达增加。在成脂肪细胞培养基作用第14天,部分细胞内出现脂肪小滴聚集。结论人肺成纤维母细胞具有多分化潜能,能够在一定条件下向成骨细胞和脂肪细胞分化,表现出骨髓间充质干细胞的特性。 相似文献
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Objectives To treat myocardial infarction with MSCs transplantation combined with VEGF gene therapy in rabbits and to study its mechanisms. Methods Forty-eight rabbits were randomly divided into MI group (n=12), MSCs group (n=12), VEGF group (n = 12), MSCs VEGF group (M V group, n = 12). Rabbit myocardial infarction models were founded by the ligation of left anterior descending artery. 107 MSCs were injected into the infarct-zone in four sites 2 weeks later in MSCs and M V group. phVEGF gene were injected in infarct-zone in VEGF group and MSCs transfected with phVEGF gene were injected in M V group. Heart function including LVEDP, LVSP, LVDP, -dp/dtmax dp/dtmax, were measured in vivo. The hearts were harvested at 4 weeks after transplantation and sectioned for HE stain, immunohistochemical stain of BrdU andⅧfactor antigen. Results The left ventricular hemodynamics parameters showed that heart function were improved more in M V group than MSCs group, MI group and VEGF group. The numbers of BrdU positive cells in M V group(61±8)were more than in MSCs group (44±8, P < 0.01). The numbers of vessels in infarcted zone were more in M V group (49±8) than in MSCs group (33±6, P < 0.01 ),VEGF group(30±8, P<0.01)and MI group (18±4, P<0.01). Conclusions VEGF- expressing MSCs transplantation could improve heart function after myocardial infarction, and they were more effective than sole MSCs transplantation. Keeping more MSCs survival and ameliorating the blood supply of infarct-zone might be involved in the mechanisms. 相似文献