哈族食管鳞癌中PLCE1基因启动子甲基化水平的实验研究

目的探讨PLCE1基因启动子甲基化与食管鳞癌发生发展的关系。方法分别用免疫组化(IHC)和甲基化特异PCR(MSP)方法检测51例新疆哈萨克族食管鳞癌及相应癌旁正常组织中PLCE1蛋白表达水平及其启动子甲基化水平,分析其与病理资料相关性;分别用Western blot及MSP检测食管鳞癌细胞在5-aza-dC作用前后PLCE1蛋白表达及启动子甲基化变化情况。结果新疆哈萨克族食管鳞癌组织中PLCE1蛋白表达高于癌旁正常组织,而其基因甲基化水平则较低(P 0.001),且蛋白高表达的癌组织中其甲基化水平低于蛋白低表达的癌组织(P=0.028),PLCE1甲基化水平与其蛋白表达水平具有明显的相关性(χ~2=4.791,P=0.028),并与患者的淋巴结及远处转移(χ~2=7.242,P=0.027)和TNM分期(χ~2=7.883,P=0.019)明显相关;在食管鳞癌细胞系中PLCE1甲基化程度同样与蛋白表达水平成反比,5-aza-dC处理可抑制TE-1和Kyse150的PLCE1甲基化,提高其蛋白表达。结论食管鳞癌组织中PLCE1甲基化低与其蛋白表达高、淋巴结和远处转移及TNM分期相关,5-aza-dC处理可抑制PLCE1甲基化程度,增高其蛋白表达。     

结直肠腺癌患者外周血CNRIP1基因启动子甲基化的临床病理学分析

目的 分析结直肠腺癌患者外周血大麻素受体互作蛋白1(cannabinoid receptor interacting protein 1,CNRIP1)基因启动子甲基化程度与临床病理学参数的相关性,探讨外周血CNRIP1基因启动子甲基化检测在结直肠腺癌早期筛查及病程评估中的价值.方法 采用定量甲基化特异性PCR技术(quantitative methylation-specific PCR,qMSP)检测结直肠腺癌患者(50例)、结直肠腺瘤患者(20例)、健康志愿者(20例)外周血CNRIP1基因启动子CpG岛甲基化程度,并通过焦磷酸测序技术确定该基因启动子甲基化位点.登记结直肠腺癌患者临床病理参数.采用Fisher检验分析CNRIP1基因启动子CpG岛甲基化与结直肠腺癌临床病理参数的相关性.结果 结直肠腺癌、结直肠腺瘤患者及健康志愿者外周血CNRIP1基因启动子CpG岛的2246位点甲基化程度分别为(85.50±8.24)％、(81.33±5.81)％、(63.66％±3.61)％(P＜0.01);结直肠腺癌CNRIP基因启动子CpG岛2246位点甲基化程度分别与肿瘤直径、原发灶浸润深度、TNM分期具有显著相关性(P＜0.01),与腺癌分化程度、淋巴结转移具有一定相关性(P＜0.05).结论 CNRIP1基因启动子CpG岛2246位点甲基化程度与结直肠腺癌病程进展相对一致,可作为结直肠腺癌早期筛查及病程评估的标志物.     

食管鳞状细胞癌中FOXM1基因的表达及临床意义

目的探讨FOXM1基因在食管鳞状细胞癌中的表达和临床意义以及下调FOXM1表达对人食管鳞状细胞癌细胞株KYSE-30增殖活性的影响。方法采用qRT-PCR及免疫组化技术检测FOXM1基因在食管鳞状细胞癌及癌旁组织中的表达;通过RNA干扰技术(RNAi)下调KYSE-30细胞FOXM1表达,CCK-8法检测细胞的增殖活性。结果 qRT-PCR结果显示,食管鳞状细胞癌中FOXM1 mRNA表达显著高于对应癌旁组织(P0.01);FOXM1 mRNA在低分化食管鳞状细胞癌组织中的表达量显著高于高+中分化食管鳞状细胞癌组织(P0.01);FOXM1 mRNA过表达与食管鳞状细胞癌肿瘤分化程度(P=0.001)、淋巴结转移(P=0.000)、临床分期(P=0.004)显著相关;高表达FOXM1食管鳞状细胞癌患者生存率下降(P0.001)。免疫组化结果显示,FOXM1蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达显著增高并与其分化程度密切相关(P0.01);下调KYSE-30细胞中FOXM1表达后,细胞增殖速度受抑制(P0.01)。结论 FOXM1在食管鳞状细胞癌组织中呈高表达,并与食管癌分化程度、淋巴结转移、临床分期及预后密切相关,FOXM1可能参与调控人食管鳞状细胞癌细胞KYSE-30的增殖。     

Leptin基因甲基化与糖尿病的相关性研究

目的 探讨瘦素基因启动子区甲基化及蛋白表达与糖调节受损(impaired glucose regulation,IGR)以及2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的相关性.方法 采用甲基化特异性PCR对不同血糖水平的个体进行Leptin基因启动子区甲基化检测.用双抗体夹心ABC-酶联免疫吸附法检测血液标本中的瘦素蛋白表达量.结果 与正常对照组(59.2％)相比,T2DM和IGR组Leptin基因的甲基化率偏低(分别为31.5％和43.6％),差异具有统计学意义(x2分别为22.499,5.109,P值均＜0.05).T2DM与IGR组相比甲基化率偏低(x2=3.962,P＜0.05),差异具有统计学意义.患者的瘦素含量相对于正常人均偏高,但仅T2DM组与正常人差异具有统计学意义(q=6.81,P＜0.01).直线回归分析提示,瘦素含量随DNA甲基化程度的降低有增高的趋势,两者呈显著负相关(r=-0.95,P＜0.01).结论 Leptin基因启动子区甲基化与瘦素代谢紊乱可能参与糖尿病的发生和发展.检测IGR和T2DM患者Leptin基因启动子区的甲基化状态和基因蛋白表达,对于早期干预、延缓病程具有一定的参考价值.     

食管鳞癌组织中TIG1基因甲基化及其mRNA表达的研究

 目的：探讨他扎罗汀诱导基因1（tazarotene-induced gene-1, TIG1）基因甲基化及表达与食管鳞癌发生、发展的关系。方法：采用甲基化特异性PCR检测43例食管鳞癌组织、20例癌旁组织和15例正常组织中TIG1基因甲基化状态;实时荧光定量PCR法法检测TIG1 mRNA的表达。结果：食管鳞癌组织TIG1基因启动子甲基化率为25.6%（11/43）,癌旁组织5.0%（1/20）,正常组织中未检测到其甲基化,差异有统计学意义（P<0.05）;其甲基化水平与患者性别、年龄、肿瘤生长部位和分化程度无关（P>0.05）,但与患者TNM分期（P<0.01）及淋巴结转移（P<0.05）有关。鳞癌组织TIG1 mRNA显著低于癌旁组织（P<0.05）及正常组织（P<0.01）,甲基化组织TIGI mRNA表达显著低于非甲基化组织（P<0.01）。结论：甲基化可能是食管鳞癌中TIG1基因失活的重要机制,与患者病理分期及淋巴结转移有关。     

p28GANK的表达与食管鳞癌转移的相关性

目的 研究p28GANK表达在食管鳞癌转移中的意义.方法 免疫组化检测p28GANK在78例食管鳞癌及对应的癌旁组织中的表达水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测p28 GANK在两株食管癌高低转移细胞中的表达差异.结果 免疫组化结果提示p28GANK在食管癌组织中阳性表达率为67.95％ (53/78),显著高于对应癌旁组织阳性表达率11.42％ (8/78)(P＜0.01);统计分析提示,p28GANK在癌组织表达水平与患者分期、淋巴结转移、淋巴管浸润、远处转移有显著相关性(P＜0.01或P＜0.05);qRT-PCR及Western blot法结果提示p28GANK mRNA及蛋白在两株高转移食管癌细胞株表达水平均显著高于对应的低转移细胞系(P＜0.05).结论 p28GANK在高转移性食管癌组织及细胞系中表达显著上调.     

PLAC1/CP1基因在原发结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨PLAC1/CP1基因在原发结直肠腺癌组织中的表达及意义.方法 通过组织芯片和免疫组织化学检测PLAC1/CP1基因在97例结自肠腺癌配对癌组织、癌旁组织中的蛋白表达.结果 PLAC1/CP1基因在97例原发结直肠腺癌组织中的表达率为56.7%(55/97).PLAC1/CP1蛋白的胞核表达率为27.8%(27/97),胞质表达率为43.3%(42/97).女性患者的PLAC1/CP1蛋白胞核表达率显著高于男性患者(x2=6.567,P=0.010).PLAC1/CP1蛋白的胞核表达率随组织学分化程度的降低而升高(x2=8.321,P=0.016);TNM Ⅲ+Ⅳ期的胞核表达率明显高于Ⅰ+Ⅱ期(x2=18.726,P=0.000);有淋巴结转移的原发灶的胞核表达率明显高于无淋巴结转移的病灶(x2=17.407,P=0.000),随淋巴结转移灶数日的增多,胞核表达率升高(x2=22.632,P=0.000).结论 PLAC1/CP1蛋白在原发结直肠腺癌组织中的表达率高,细胞核定位表达与原发结直肠腺癌的组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移及转移程度有关,证明CP1基因在结直肠癌中具有较高的免疫原性,是结直肠癌较理想的免疫治疗靶点.

Abstract：

Objective To study the expression and significance of PLAC1/CP1 genes in patients with primary colorectal carcinoma. Methods The expression of PLAC1/CP1 genes in 97 cases of colorectal carcinoma was studied using tissue chip technology and immunohistochemistry. Results The rate of PLAC1/CP1 proteins expression in the cases studied was 56. 7% (55/97), with 27. 8% (27/97) being nuclear staining and 43. 3% (42/97) being cytoplasmic staining. The percentage of expression was higher in women than in men (x2 = 6. 567, P= 0.010). The expression in poorly differentiated colorectal carcinoma was significantly higher than that in the well or moderately differentiated carcinoma (x2 =8. 321,P =0. 016). The expression was also significantly higher in stage TNM Ⅲ or Ⅳ tumors than in stage TNM Ⅰ or Ⅱ tumors ( x2 = 18. 726, P =0. 000). The rate was higher in cases with lymph node metastasis than in those with negative lymph nodes ( x2 = 17. 407, P =0. 000), and was higher as the number of metastasisincreasing (x2 = 22. 632, P = 0. 000). Conclusion The expression of PLAC1/CP1 genes correlates with various clinical and pathologic parameters. It carries prognostic significance and may represent a potentialtarget for immunotherapy.     

血浆miR-193b和miR-199a在食管癌诊治中的临床价值

目的 探讨miRNA-193b和miRNA-199a在血浆中的表达对食管鳞癌的诊治价值.方法 选取2014年9月至2015年6月之间食管鳞癌患者56例,同期健康体检者30例.采用qRT-PCR技术(TaqMan探针法)检测食管鳞癌患者和健康者血浆中miRNA-193b、miRNA-199a的表达水平,以及检测食管鳞癌患者术前、术后1w血浆中miRNA-193b、miRNA-199a的表达水平,并结合临床病理资料,探讨它们与食管鳞癌的关系.结果 食管鳞癌患者血浆中miR-193b和miR-199a的表达量均明显低于健康体检者(P＜0.05);食管癌患者术后血浆中miR-193b和miR-199a的表达量均明显高于术前(P＜0.05);血浆中miR-193b的表达与肿瘤TNM分期有关(t=-5.332,P=0.000),表现为随着TNM分期越晚,表达逐渐下调的趋势,与患者年龄、性别、肿瘤分化程度、淋巴结转移无明显关联(P＞0.05).miR-199a的表达与肿瘤分化程度、肿瘤TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05),表现为随着分化程度越低、TNM分期越晚和出现淋巴结转移,表达逐渐下调的趋势,而与患者年龄、性别无明显关联(P＞0.05).结论 miRNA-193b、miRNA-199a在食管鳞癌患者血浆中表达下调,可能作为抑癌基因参与食管鳞癌的发生发展.     

E-cad、CK14、Apollon表达与食管癌患者病理特征的关系研究

目的:探讨食管癌(Esophageal Cancer,EC)患者E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、细胞角蛋白 14(Cytokeratin 14,CK14)、凋亡抑制蛋白Apollon(Inhibitor of Apoptosis Protein Apollon,IAP Apollon)表达及其与病理参数的相关性.方法:选取我院2018 年 1月至 2020年 1 月期间收治的 87 例EC患者作为研究对象.分别取患者EC组织和癌旁组织.采用免疫组化法检测E-cad、CK14、Apollon在EC组织和癌旁组织中的表达.分析比较不同病理学参数EC组织中E-cad、CK14、Apollon的表达情况.分析EC组织中E-cad、CK14、Apollon表达与临床病理学参数相关性.探讨E-cad、CK14、Apollon表达与EC患者预后关系.结果:EC组织中CK14、Apollon阳性表达率显著高于癌旁组织,Ⅰ-Ⅱ期显著低于Ⅲ-Ⅳ期,高分化＜中分化＜低分化,无淋巴结转移显著低于有淋巴结转移(P＜0.05).EC组织中E-cad阳性表达率显著低于癌旁组织,Ⅰ-Ⅱ期显著高于Ⅲ-Ⅳ期,高分化＞中分化＞低分化,无淋巴结转移显著高于有淋巴结转移(P＜0.05).EC 组织中 E-cad 阳性表达率与肿瘤转移(Tumor Node Metastasis,TNM)分期、淋巴结转移呈负相关,与分化程度呈正相关.CK14、Apollon阳性表达率与TNM分期、淋巴结转移呈正相关,与分化程度呈负相关(P＜0.05).E-cad 阳性 EC 患者 3 年生存率高于 E-cad 阴性患者,CK14 阳性、Apollon阳性EC患者3年生存率分别低于CK14阴性、Apollon阴性患者(P＜0.05).结论:EC患者癌组织中CK14、Apollon呈现高表达,E-cad呈现低表达,与EC发生、发展、分化程度、TNM分期、淋巴转移及预后有紧密联系.     

探讨多基因甲基化检测评估非小细胞肺癌的临床诊断价值

目的探讨多基因甲基化水平与非小细胞肺癌(NSCLC)发生相关性及其诊断价值。方法收集60例确诊的NSCLC患者并设置为实验组,另取60名健康人群作为对照组,采集所有患者清晨空腹血,通过甲基化特异PCR(MSP)技术,检测血清DAPK、P16、Runx3基因甲基化情况,并评估比较NSCLC患者临床病理特征与单基因甲基化检测和多基因甲基化联合检测的关系。结果 NSCLC患者血清DAPK、P16、Runx3基因甲基化率明显高于正常人群。基因甲基化联合检测呈现出更高的检出率、特异性和准确度。DAPK基因启动子甲基化与NSCLC患者分化程度有关(P=0.03);P16和Runx3基因启动子甲基化在年龄、病理分型和TNM分期差异有统计学意义(P<0.05),而多基因甲基化比例仅与NSCLC患者年龄相关(P=0.028)。结论 DAPK、P16、Runx3基因高甲基化水平为NSCLC发生的高危因素,且其基因甲基化检测能够更准确的应用于早期NSCLC诊断。     

原癌基因c-myb与抑癌基因P27在子宫内膜癌中的表达及意义

目的 探讨原癌基因c-myb与抑癌基因P27在子宫内膜癌中的表达及意义.方法 采用免疫组化染色SP法对85例子宫内膜癌和63例同期因子宫肌瘤行子宫切除的正常子宫内膜组织中c-myb、P27蛋白进行检测,结合临床病理指标进行分析.结果 85例子宫内膜癌组织中c-myb的阳性率74.12％明显高于63例正常子宫内膜组织15.84％(x2=49.108,P＜0.001);而子宫内膜癌组织中P27的阳性率47.06％明显低于正常子宫内膜组织88.89％(x2=27.779,P＜0.001).在临床分级Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期表达的阳性率中,c-myb分别为64.71％和88.24％,差异有统计学意义(x2=5.887,P=0.015);P27分别为52.94％和38.24％,差异无统计学意义(x2=1.770,P=0.183).在组织学分级中,c-myb在分化程度越低的子宫内膜癌组织中表达越高,差异有统计学意义(x2=6.569,P=0.037);P27在分化程度越低的子宫内膜癌组织中的表达越低,差异也有统计学意义(x2=8.178,P=0.017);c-myb、P27表达在肌层浸润深度及有无淋巴结转移间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 c-myb参与子宫内膜癌发生、发展,P27抑制、阻滞子宫内膜癌细胞增生,两者可能作为子宫内膜癌基因治疗的靶位点,为子宫内膜癌的治疗提供新的思路.     

TIMP-3基因甲基化与结直肠癌临床病理的关系

目的：探讨TIMP-3基因甲基化与结直肠癌临床病理指标和转移复发的关系。 方法： 采用巢式甲基化特异性PCR技术（nMSP法）检测100例结直肠癌组织和100例癌旁非癌组织TIMP-3基因甲基化；采用RT-PCR检测100例结直肠癌组织和100例癌旁非癌组织TIMP-3 mRNA的表达。 结果： 肿瘤组织TIMP-3 mRNA的表达阳性率为64%，肿瘤组织TIMP-3 mRNA的表达率明显低于癌旁非癌组织（P＜0.01）；TIMP-3 mRNA的表达率无淋巴结转移组（34/42）高于淋巴结转移组（30/58）（P＜0.01），甲基化阳性率Duke’s C+D期伴淋巴结转移组明显高于Duke’s A+B期不伴淋巴结转移组（P＜0.05）。结肠近端、分化程度差的结直肠癌组织甲基化阳性率明显高于远端直肠和分化程度高者（P＜0.05）。 结论： TIMP-3基因甲基化容易发生在结肠近端、Duke’s C、D期、伴淋巴结转移、细胞分化差和浸润型结直肠癌患者。     

SEL1L基因在食管癌中的表达及意义

目的探讨SEL1L（human Sel-1-like）mRNA及其蛋白在食管癌组织中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测90例手术切除的食管鳞状细胞癌、35例距癌灶边缘5am以上切缘的正常黏膜、60例癌旁黏膜及20例内窥镜活检的食管鳞状上皮不典型增生组织中SEL1L蛋白的表达;运用原位分子杂交技术检测上述癌组织、正常黏膜、癌旁黏膜中SEL1L mRNA的表达。结果（1）SEL1L mRNA在食管鳞状细胞癌的表达率为80．0％（72／90）,较正常黏膜的14．3％（5／35）和癌旁黏膜的16．7％（10／60）高（P〈0．01）;SEL1L mRNA在有淋巴结转移组的表达阳性率为92．7％（38／41）比无淋巴结转移组69．4％（34／49）高（P〈0．01）。（2）SEL1L蛋白在鳞状细胞癌的表达阳性率为87．8％（79／90）,在鳞状上皮不典型增生中的表达阳性率为90．0％（18／20）。分别较正常黏膜的14．3％（5／35）和癌旁黏膜的13．3％（8／60）高（P〈0．01）。SEL1L蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤位置、大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期均无明显相关性（P〉0．05）。（3）食管鳞状细胞癌组织中SEL1L mRNA和SEL1L蛋白的表达呈明显正相关（r=0．492,P〈0．01）。结论（1）SEL1L蛋白表达的调控主要在转录水平,SEL1L蛋白表达水平的升高主要是相应转录水平上调的结果。（2）SEL1L蛋白过表达可能是食管鳞状细胞癌发生的早期表现,SEL1L蛋白的检测可作为识别食管癌高风险患者的生物标记物。     

非小细胞肺癌中窖蛋白1基因的蛋白表达和甲基化及其意义

目的 检测窖蛋白1(Car-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的蛋白表达以及启动子的甲基化状况,探讨Cav-1基因在NSCLC中的作用及其临床意义.方法 应用免疫组织化学(sP法)和量子点Qd600染色检测123例NSCLC组织、17例良性病变肺组织中Cav一1蛋白表达和亚细胞定位.亚硫酸氢钠处理DNA,甲基化特异性PCR(MSP)检测Cav-1基因启动子区域的甲基化水平.结果 Cav-1蛋白在肺支气管黏膜上皮细胞、肺泡上皮细胞、毛细血管内皮细胞、成纤维细胞、平滑肌细胞的胞质和胞膜高表达.癌旁组织(对照)组和肺癌组中Cav-1蛋白的阳性率分别为17/17、43.1%(53/123),两组间差异有统计学意义(P=0.001);Cav-1蛋白在NSCLC不同的组织学类型(P=0.552)和分化程度(P=0.160)中差异均无统计学意义.Cav-1蛋白阳性率与NSCLC的TNM分期(P=0.001)以及淋巴结转移(P=0.001)均相关.在40例Cav-1蛋白表达为阴性的肺癌组织和12例癌旁肺组织,MSP法均未检测到Cav-1因启动子区域的甲基化.结论 Cav-1蛋白失表达的机制可能与启动子区是否甲基化无关.Cav-1蛋白高表达预示NSCLC恶化进展和高侵袭性.     

p73基因在卵巢上皮性肿瘤中的表达及甲基化研究

目的 探讨卵巢上皮性肿瘤中p73蛋白的表达和基因启动子的甲基化情况,并观察其与临床病理学特征的关系.方法 制备包括68例卵巢癌、37例卵巢交界性肿瘤和21例卵巢良性肿瘤的组织芯片,用免疫组织化学EnVision法检测上述组织中p73蛋白表达情况,用亚硫酸氧盐修饰后测序法检测13例新鲜卵巢癌组织及5例新鲜卵巢交界性肿瘤组织的p73基因启动子甲基化情况.结果 92.6％ (63/68)的卵巢癌表达p73,p73蛋白总体表达率均值为32％(p73表达率指p73阳性细胞数所占的百分比),其中浆液性癌( 26/26)的表达率均值为40％,高于其他组织类型的癌(P=0.006).按照卵巢癌发病模式区分,Ⅱ型卵巢癌p73表达率均值(40％)高于Ⅰ型卵巢癌(24％),P=0.010.卵巢癌中p73的表达与临床分期及组织学分级无相关性(均P＞0.05).卵巢交界性肿瘤组(30/37)和良性肿瘤组(12/21)p73的总体表达率均值分别为16％和15％,该两组肿瘤中浆液性肿瘤表达率均值均高于黏液性肿瘤(P-0.003,P=0.026).卵巢癌组的p73阳性表达率均值明显高于交界性肿瘤组和良性肿瘤组(均P ＜0.05),交界性肿瘤组与良性肿瘤组比较差异无统计学意义(P＞0.05).浆液性肿瘤( 49/53)中,卵巢癌组(26/26) p73阳性表达率均值明显高于交界性肿瘤组(12/14)和良性肿瘤组(11/13;P =0.024和P=0.002),而卵巢交界性肿瘤组和良性肿瘤组比较差异无统计学意义(P=0.428).黏液性肿瘤(15/27)中,卵巢癌组(6/7)p73阳性表达率均值高于良性肿瘤组( 1/8;p=0.032),而卵巢癌组与卵巢交界性肿瘤组(8/12)、交界性肿瘤组与良性肿瘤组比较,差异均无统计学意义(P=0.234和P=0.201).p73启动子的甲基化结果显示,13例卵巢癌有8例发生甲基化,但每例样本甲基化频率有所不同,总体甲基化频率均值为8.0％.5例交界性肿瘤有2例发生甲基化,总体甲基化频率均值为9.0％,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).卵巢癌组p73甲基化额率与组织类型、发病模式、组织学分级及临床分期均无相关性(均P＞0.05).结论 卵巢上皮性肿瘤多数表达p73,卵巢癌p73的表达率均值明显高于交界性肿瘤和良性肿瘤,浆液性肿瘤高于其他组织类型;p73蛋白表达率与p73基因甲基化程度不存在简单线性相关关系.     

非小细胞肺癌中ASPP1和ASPP2基因启动子甲基化的意义

目的 检测非小细胞肺癌(NSCLC)中ASPP1和ASPP2基因启动子CpG岛的甲基化状态和相应的蛋白表达,及癌细胞的凋亡水平和p53蛋白的表达,探讨ASPP基因在NSCLC中的作用及其临床意义.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)检测90例NSCLC组织、25例癌旁肺组织中ASPP1、ASPP2基因启动子的甲基化水平,并测序证实其甲基化位点;免疫组织化学EnVision法检测NSCLC组织中ASPP1、ASPP2和p53蛋白的表达;原位末端转移酶标记检测法(TUNEL)检测癌细胞凋亡,计算其凋亡指数(AI).结果 ASPP1基因启动子甲基化率在NSCLC中为42.2%(38/90),癌旁组织中为16.0%(4/25),二者比较差异有统计学意义(P=0.019);ASPP1基因启动子甲基化与患者年龄、性别、组织类型和分化程度无相关性(均P＞0.05),但与患者的TNM分期和淋巴结转移存在相关性(P=0.031,P=0.030);90例肺癌组织中ASPP1甲基化者其蛋白表达率明显低于ASPP1未甲基化者(P=0.002);ASPP1蛋白阳性组的AI值高于阴性组(P=0.022).90例NSCLC和25例癌旁组织中均未检测到ASPP2基因启动子甲基化;ASPP2蛋白表达阳性组和阴性组之间AI值差异也无统计学意义(P=0.282).ASPP1和p53表达呈负相关,(r=-0.259,P＜0.01),ASPP2和p53的表达状态无关(r=-0.119,P＞0.05).结论 NSCLC中ASPP1基因启动子甲基化可能是ASPP1蛋白表达下调的原因,高甲基化可能与NSCLC的恶性进展有关,ASPP1蛋白的表达能促进细胞凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the methylation status of CpG islands in the promoter region and the protein expression of ASPP1 and ASPP2 genes in non-small-cell lung cancer (NSCLC) and their relationship with cellular apoptosis and p53 gene expression. Methods The 5'CpG island methylation patterns of ASPP1 and ASPP2 were evaluated by methylation specific polymerase chain reaction (MSP) followed by confirmation of sequencing. Immunohistochemistry was used to detect the expression of ASPP1,ASPP2 and p53 in lung carcinoma tissue samples ( n= 90) and adjacent non-neoplastic lung tissue samples (n = 25 ) . TUNEL assay was used to detect the apoptotic activity. Results The presence of ASPP1 methylation was significantly higher in NSCLC than that in the adjacent non-neoplastic lung tissue [42. 2%(38/90) vs. 16. 0% (4/25), P =0. 019]. ASPP1 promoter methylation had a close relationship with TNM stage and lymph node metastasis( P =0. 031, P =0. 030), but was not related to the age, sex, histological types and the grades of tumor differentiation (P =0. 389, P =0. 278, P =0. 570, and P =0. 103). Tumors with ASPP1 promoter methylation demonstrated a lower expression of ASPP1 as compared with those without the methylation (P =0. 002). ASPP1 expression was associated with a higher apoptotic index (AI) (P =0. 022) and a decreased p53 expression( r = -0. 259, P ＜ 0. 01 ). Methylation in the promoter region of ASPP2 gene was not detected in lung cancer (n = 90 ) or adjacent non-neoplastic lung tissue (n = 25 ).Expression of ASPP2 protein did not correlate with AI ( P = 0. 282 ) and p53 status in NSCLC. Conclusions High methylation of ASPP1 gene promoter regions is one of the important mechanisms that down-regulate its protein expression in NSCLC. ASPP1 promoter methylation may be associated with the malignant progression of the tumor, and ASPP1 expression promotes cellular apoptosis.     

乳腺癌和乳腺导管内增生性病变Notch1基因甲基化的检测及临床意义

目的 探讨Notch1基因甲基化与乳腺浸润性导管癌(IDC)及乳腺导管内增生性病变的相关性.方法 用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱仪(MALDI-TOF MS)对89例乳腺IDC、20例导管原位癌(DCLS)、11例不典型导管增生(ADH)及20例普通型导管增生(UDH)组织进行Notch1基因甲基化的定量检测.采用...     

HIF-1α和VEGF-C在胃癌中的表达及意义

目的 探讨胃癌中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在胃癌中的表达及其临床意义.方法 应用SP免疫组织化学技术检测44例胃癌和20例胃正常组织标本中HIF-1α和VEGF-C的表达,并分析其与胃癌临床病理学特征的关系.结果 HIF-1α在胃癌中的阳性表达率为59.09%(26/44),正常胃黏膜组织中的阳性表达率为25.00%(5/20),两者比较差异有统计学意义(x2=6.59,P＜0.05);其中淋巴结转移阳性组的阳性表达率为72.41%(21/29),淋巴结转移阴性组的阳性表达率为33.33%(5/15)(x2=6.25,P＜0.05),提示HIF-1α与胃癌转移相关.VEGF-C在胃癌中的阳性表达率为52.27%(23/44),正常胃黏膜组织中的阳性表达率为20.00%(4/20),两者比较差异显著(x2=4.73,P＜0.05);其中淋巴结转移阳性组的阳性表达率为65.52%(19/29),淋巴结转移阴性组的阳性表达率为26.67%(4/15),两者比较有统计学意义(x2=4.53,P＜0.05).胃癌中HIF-1α和VEGF-C的表达与肿瘤淋巴结转移和浸润深度有关,而与肿瘤部位、患者性别、年龄无关.HIF-1α与VEGF-C在胃癌组织中的表达呈正相关.结论 胃癌中HIF-1α和VEGF-C的表达上调且二者的表达均与淋巴结转移相关,有望成为胃癌治疗及判断预后的重要指标.     

干扰表皮生长因子受体磷酸化过程对乳腺癌的抑制效应

目的 探讨干扰表皮生长因子受体(EGFR)的磷酸化过程对裸鼠乳腺癌移植瘤生长的影响及其作用机制.方法 建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型,成型后随机分为Ad5-hSulf1组、Ad5-EGFP组和对照组,干预治疗后,测量计算移植瘤生长率,采用免疫组化法检测各组裸鼠移植瘤hSulf-1、EGFR和p-EGFR阳性表达,采用Western blot法检测各组裸鼠移植瘤hSulf-1、EGFR和p-EGFR蛋白表达.结果 Ad5-hSulf1组裸鼠注射治疗后第14天、21天和28天的肿瘤生长率[(165.9±23.8)％,(172.6±25.9)％,(377.3±30.5)％]明显小于同期的对照组,差异均具有统计学意义(t=12.153,21.247,14.587;P =0.000).Ad5-hSulf1组裸鼠移植瘤p-EGFR阳性表达率(46.7％)和蛋白表达[(52.7±7.4)％]明显低于Ad5-EGFR组和对照组,差异均有统计学意义(x2=8.146,t=7.384,7.587;P =0.004、0.000、0.000).结论 使用hSulf1基因抑制乳腺癌细胞的EGFR磷酸化过程,可产生明显的肿瘤抑制效应,对寻求肿瘤基因治疗的一个很有潜力的靶点具有很好的借鉴参考意义.