大鼠微小RNA miR-16的克隆及其慢病毒表达载体的构建

目的 克隆微小RNA rno-miR-16,构建其慢病毒表达载体pLV-miR-16并包装成慢病毒颗粒,为进一步研究miR-16的功能奠定了实验基础.方法 从大鼠细胞基因组中用PCR 的方法扩增miR-16 的前体,构建了miR-16的重组表达载体pLV-miR-16,脂质体法将重组慢病毒载体和包装质粒混合物(pPACK-GAG、pPACK-REV和pVSV)共转染包装细胞293TN细胞,包装产生慢病毒,以293TN细胞绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达水平测定病毒滴度.结果 经PCR扩增检测阳性菌落和测序证实,成功构建携带大鼠miR-16基因重组慢病毒载体.倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293TN呈绿色荧光,并测得108＞ifu/ml.结论 成功构建大鼠慢病毒载体pLV-miR-16,为深入研究rno-miR-16的生物学功能奠定了基础.     

慢病毒载体构建小鼠CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞系

背景：趋化素在动脉粥样硬化时的表达水平上调,趋化素及其受体CMKLR1可能参与了动脉粥样硬化的病理过程。 目的：建立CMKLR1基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株。 方法：以小鼠CMKLR1基因mRNA序列作为干扰靶点,设计3组靶向CMKLR1基因的shRNA序列,构建慢病毒载体,筛选出干扰最佳的shRNA,在293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养小鼠血管平滑肌细胞,转染慢病毒形成CMKLR1基因缺陷性血管平滑肌细胞株,用real-time PCR检测感染慢病毒后细胞中CMKLR1 mRNA水平。 结果与结论：基因测序结果表明慢病毒载体构建成功,慢病毒的滴度约为8.7×10⁶ TU/mL,pLVX-shRNA3对CMKLR1基因的抑制效果最显著(P < 0.001)。将pLVX-shRNA3转染至血管平滑肌细胞中形成基因缺陷细胞株,用real time PCR血管平滑肌细胞中CMKLR1 mRNA水平,该细胞株中CMKLR1 mRNA水平显著下降(P < 0.001),表明慢病毒介导的siRNA可有效沉默小鼠血管平滑肌细胞中CMKLR1基因的表达。     

心肌素在心脏发育及平滑肌细胞分化中的作用

2001年6月29日。在Cell杂志上Da-Zhi Wang等的研究小组首次报道了心肌素（myocardin）的发现。一种心肌和平滑肌特异性的血清应答因子（Serum response factor，SRF）的辅助因子。心肌素的发现促进了人们对心肌特异性转录机制的更为深入的了解。同时发现心肌素在早期心脏形成中的重要性。随着研究的深入，发现心肌素也在血管平滑肌中表达，其中包括主动脉、肺流出道、胃肠及生殖泌尿道的平滑肌。心肌素在胚胎及成年心肌和平滑肌细胞中均有表达，是心肌和平滑肌细胞发育和分化所必需的，本文就今年来有关方面的研究进行综述。     

慢病毒载体构建及结构优化

慢病毒载体目前是基因治疗中研究较多的载体 ,与通常使用的逆转录病毒载体和腺病毒载体比较 ,它有感染非分裂期细胞及容纳外源性目的基因片段大等优点。对其结构的优化主要集中在提高生物安全性、提高转基因表达、转基因表达的调控及载体靶向性等方面。本文介绍了慢病毒载体构建及结构优化方面的研究进展作一综述     

细胞因子信号转导抑制因子1 RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定*☆

背景：以往关于细胞因子信号转导抑制因子1的研究多用脂质体或其他载体转染的技术,但存在效率低和安全性差等问题。 目的：构建细胞因子信号转导抑制因子1 RNA干扰慢病毒载体并进行鉴定。 方法：实验设计3组针对细胞因子信号转导抑制因子1的短发夹RNA序列,应用基因重组技术插入pPll3.7载体,测序正确的重组病毒质粒与包装质粒通过共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,感染A549细胞,western blot检测目的蛋白细胞因子信号转导抑制因子1在靶细胞中的表达。 结果与结论：实验通过对重组载体进行测序分析证实短发夹RNA插入慢病毒载体,慢病毒载体上清成功转染A549细胞后western blot检测结果显示该载体抑制了细胞因子信号转导抑制因子1蛋白在A549细胞有表达。说明实验成功构建了细胞因子信号转导抑制因子1 RNA干扰慢病毒载体。 关键词：细胞因子信号转导抑制因子1;慢病毒载体;RNA干扰;A549细胞;组织构建 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.07.030     

人BclGL基因慢病毒表达载体构建及其对T淋巴细胞凋亡的影响

目的 构建针对人BclGL的慢病毒表达载体,检测其对Jurkat T淋巴细胞系凋亡的影响,为进一步研究BclGL在细胞内信号转导及分子功能奠定基础.方法 RT-PCR方法扩增人全长BclGL基因,克隆于pGrP-N1质粒中构建BclGL绿色荧光蛋白融合基因(BclGL-GFP),将融合基因克隆于慢病毒载体FUGW并转染293FT细胞包装浓缩慢病毒颗粒.将浓缩慢病毒感染Jurkat细胞,同时设立PBS对照及FUGW病毒阴性对照组,流式细胞术及荧光定量PCR鉴定BclGL在Jurkat细胞中的表达,Annexin V-APC/PI双染检测细胞凋亡变化.结果 酶切及测序证实人BclGL慢病毒表达载体构建成功,转染Jurkat细胞72 h后Jurkat细胞凋亡明显增加.结论成功构建了高效稳定表达人BclGL的重组慢病毒转染系统,并证实其对Jurkat淋巴细胞的促凋亡效应,为进一步探讨BclGL的生物学功能奠定了基础.     

hsa-miR-128慢病毒载体的构建及其对胶质瘤细胞增殖的影响

目的:构建含hsa-miR-128-1和hsa-miR-128-2前体的慢病毒表达载体,建立能够稳定表达目的基因的人胶质瘤U87细胞株。研究hsa-miR-128对胶质瘤细胞增殖的影响。方法:扩增hsa-miR-128前体片段,克隆入Pentr3c载体,利用LR clonaseⅡ酶将目的片段转接于Plenti6.3质粒,包装病毒,以改构的Plenti6.3-mCherry载体包装的病毒为对照,感染人胶质瘤U87细胞,通过Blasticidin筛选出能够稳定表达抗生素抗性的细胞株。荧光显微镜观察mCherry的荧光表达,实时荧光定量检测miR-128的表达量,流式细胞仪检测细胞周期,MTT检测细胞增殖。结果:成功构建重组慢病毒载体Plenti6.3-miR-128-1和Plenti6.3-miR-128-2,经Blasticidin筛选细胞株、mCherry荧光表达和实时荧光定量PCR验证,成功包装出慢病毒。病毒滴度测定在1.1×107-8.3×107TU/mL之间,细胞周期和MTT结果提示miR-128-1和miR-128-2高表达的U87细胞株均表现增殖抑制。结论:成功构建了分别含有两种hsa-miR-128前体的慢病毒表达载体,筛选出稳定表达hsa-miR-128的U87细胞株。miR-128-1和miR-128-2均抑制胶质瘤U87细胞增殖。     

大鼠CD86基因RNAi慢病毒载体的构建与功能鉴定

目的 构建大鼠CD86基因的RNAi慢病毒载体并在大鼠原代培养树突状细胞(DC)上鉴定其基因沉默效率.方法 将筛选获得的大鼠CD86基因特异性siRNA靶点,合成短发卡结构shRNA序列并退火成双链DNA,与pgC-GFP慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,利用PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆.经由293T细胞包装shRNA慢病毒颗粒,随后将其感染原代培养的大鼠Dc细胞,采用real-time PCR和Western blot的方法检测靶基因在mRNA和蛋白水平的沉默效率.结果 构建的慢病毒载体shRNA的PcR鉴定和测序正确,shRNA慢病毒颗粒感染大鼠DC细胞后CD86基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组下降了90.6%;蛋白表达显著抑制.结论 成功构建了大鼠CD86基因的shRNA慢病毒表达载体,能够在大鼠DC细胞上有效沉默靶基因.     

附睾血管内皮生长因子基因慢病毒干扰载体的构建

目的：以血管内皮生长因子（VEGF）的mRNA 为靶点,设计、构建VEGF 的RNA干扰慢病毒载体,并 对其在大鼠附睾的沉默效果进行验证。 方法：构建3 种附睾VEGF-shRNA 慢病毒表达载体VEGF-shRNA-1、 VEGF-shRNA-2、VEGF-shRNA-3, 提取3 种阳性克隆质粒测序, 转染HEK293-T 细胞后产生慢病毒质粒。大鼠随 机分为空白对照组、NC-shRNA 阴性感染组、VEGF-shRNA-1 感染组、VEGF-shRNA-2 感染组、VEGF-shRNA-3 感染组,将病毒液分别注射到各组大鼠双侧附睾;实时荧光定量 PCR及蛋白免疫印迹检测各组大鼠附睾VEGF 的mRNA 及蛋白沉默效果。结果： 测序结果证明3 种慢病毒载体被包装成功。感染大鼠附睾后,VEGF 感染组 mRNA 及蛋白表达量均较阴性感染组和空白对照组明显降低,其中以VEGF-shRNA-3 感染组干扰效果更为有效。 结论：成功设计了VEGF 基因的RNA干扰靶点和制备了VEGF 基因的慢病毒载体,VEGF-shRNA-3 能有效抑制 附睾VEGF 的表达。     

慢病毒介导RNA干扰血管内皮生长因子基因增强K562细胞对STI571敏感性

目的： 探讨慢病毒载体介导RNA干扰（RNAi）抑制血管内皮生长因子（VEGF）基因表达对白血病细胞系K562增殖和凋亡的影响。 方法： 构建靶向VEGF基因的短发夹状RNA(shRNA)慢病毒载体,与慢病毒包装质粒通过脂质体转染至293T细胞,包装产生的病毒液感染K562细胞。采用实时荧光定量PCR、Western blotting、ELISA等方法检测RNAi对K562细胞VEGF mRNA和蛋白表达的影响;台盼蓝拒染法和MTT法分析转导VEGF-shRNA对K562细胞增殖的影响;流式细胞术检测经STI571(甲磺酸伊马替尼)作用后细胞凋亡变化情况。 结果： 构建VEGF基因shRNA慢病毒载体(pRNAT-shRNA),并成功将其导入K562细胞。与K562和K562-con（转导空载体）组细胞相比,转导pRNAT-shRNA的K562-shVEGF细胞VEGF mRNA和蛋白表达均显著下降;生长曲线提示K562-shVEGF细胞增殖速度减慢;在STI571作用下,K562-shVEGF细胞凋亡率较K562和K562 -con组细胞明显增高(P<0.05)。结论： 慢病毒载体介导的VEGF基因RNA干扰可有效抑制K562细胞增殖,并能够增强细胞对STI571的敏感性。     

降钙素基因相关肽对血管平滑肌细胞心肌素表达及细胞表型改变的作用

目的:研究降钙素基因相关肽(CGRP)对血管平滑肌细胞(VSMCs)心肌素表达的影响及对细胞表型改变的调节作用。方法:取大鼠胸主动脉,以组织块贴壁培养法获得VSMCs,分为对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组(加入AngⅡ处理)、CGRP组(加入AngⅡ和CGRP处理)和CGRP8-37组(在AngⅡ和CGRP基础上加入CGRP8-37)。Western blot法检测VSMCs中心肌素及细胞表型标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和骨桥蛋白(OPN)表达情况。结果:在VSMCs培养中,细胞心肌素表达水平随着培养时间延长逐渐降低,细胞培养48 h和72h时心肌素表达水平较基线水平显著降低(P0.05);而加入CGRP处理后,心肌素表达水平逐渐增加,与基线水平比较,加入CGRP培养后48 h和72 h时细胞心肌素水平显著增加(P0.05)。同时,在VSMCs培养48 h时,AngⅡ组细胞心肌素水平较对照组下降(P0.05),且α-SMA表达亦相应下降(P0.05),而OPN表达水平显著增加(P0.05);CGRP组VSMCs心肌素水平较AngⅡ组增加,伴随着α-SMA表达水平增加(P0.05),相反地OPN表达水平下降(P0.05);CGRP8-37组心肌素和α-SMA表达水平较CGRP+AngⅡ组降低(P0.05),而OPN表达较CGRP组增加(P0.05)。结论:CGRP通过促进VSMCs心肌素的表达而抑制细胞表型转换,使细胞维持收缩表型,且这一作用是CGRP通过与其受体结合后实现的。     

Myocardin重组蛋白表达及其在人骨髓间充质干细胞重编程为血管平滑肌细胞中的作用

目的:研究心肌素(myocardin)重组蛋白的表达及分离纯化方法,并探讨myocardin重组蛋白对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,h BMSCs)向血管平滑肌细胞转分化的作用。方法:构建myocardin原核表达载体,摸索最佳诱导myocardin重组蛋白表达的方法及优化分离纯化方式。使用纳米转导试剂包裹myocardin形成纳米-蛋白复合体,转染h BMSCs,观察蛋白转导效率;蛋白转导成功后,检测血管平滑肌的特异性标志物平滑肌肌球蛋白重链的表达情况,观察h BMSCs向平滑肌细胞转化情况。结果:与传统方法相比较,高浓度法诱导myocardin重组蛋白的表达量更高,新采用的洗脱方式能获取更多的myocardin重组蛋白;纳米-myocardin复合体可成功转染h BMSCs并诱导其向血管平滑肌样细胞转化。结论:Myocardin重组蛋白能被高效转导到细胞内,并促使h BMSCs重编程为血管平滑肌样细胞。     

RNA interference targeting ORC1 gene suppresses the proliferation of vascular smooth muscle cells in rats

Background

The proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) plays an important role in the pathogenesis of vascular diseases such as atherosclerosis and postangioplasty restenosis. The largest subunit of the origin recognition complex (ORC), ORC1, plays a critical role during the initiation of DNA replication in eukaryotes. However, the involvement of ORC1 in the initiation of DNA replication in VSMCs has not been studied yet.

Objective

The aim of this study was to silence ORC1 gene selectively by using RNA interference and analyze the effects of ORC1 gene on the proliferation and apoptosis of rat VSMCs.

Methods

Freshly isolated rat VSMCs were transfected with siRNA targeting ORC1 gene capsulated in liposome. ORC1 protein expression was determined by Western blotting and ORC1 mRNA level by RT-PCR. DNA synthesis was analyzed by ³H thymidine (³H-TdR) incorporation and cell proliferative activity and cell cycle distribution by flow cytometry. Two apoptosis-related proteins, Bax and Bcl-2, were examined immunohistochemically.

Results

Down-regulation of ORC1 mRNA and protein expression was observed in rat VSMCs at 24 h after transfection with the three pairs of siRNA targeting ORC1 gene and this reduction persisted at least 7 days post-transfection. Down-regulation of ORC1 mRNA (60%) and protein (80%) expression was observed at 72 h post-transfection in the cells transfected with B-ORC1 siRNA. A significant decrease in ³H thymidine incorporation was observed in rat VSMCs with ORC1 gene silencing after serum challenge, but not in the non-silenced control. A significant increase in the proliferation index and a significant decrease in the percentage of cells at G₀/G₁ phase after serum challenge were observed in the non-silenced control, but not in ORC1 gene silenced cells. A significant increase in the ratio of Bcl-2/Bax was observed after serum challenge in the non-silenced control, but only a slight increase was found in the ORC1 gene silenced cells. ORC1 gene silencing disappeared 7 days after transfection. Continuous serum challenge stimulated VSMCs to synchronously reenter the cell cycle as evidenced by increases in [³H] thymidine incorporation, the proliferation index, and the ratio of Bcl-2/Bax, as non-silenced cells were induced to resume cell cycle progression by the addition of 15% fetal bovine serum to the culture medium.

Conclusion

ORC1 gene silencing causes rat VSMCs to enter a reversible G₀ quiescent, growth arrested state; thus, ORC1 gene may be an important new target for suppressing VSMCs proliferation.     

心肌素与心血管疾病的研究进展

 心肌素（myocardin）是2001年发现的在心血管组织特异表达的转录辅助因子,心肌素与血清效应因子（SRF）共同控制着心肌和平滑肌细胞特异基因的表达,其活性的改变与人类主要心血管疾病如动脉粥样硬化、心肌肥大、高血压的发生发展关系非常密切。本文就心肌素分子结构、表达调控以及与心血管疾病关系的研究进展作一综述。     

载脂蛋白（a）对血管平滑肌细胞增殖及其信号通路的影响

目的： 探讨载脂蛋白（a）［apo（a）］对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制。方法：原代培养血管平滑肌细胞并给予传代以进行实验，并采用α-actin抗体进行免疫组化细胞鉴定；分别给予apo（a）、apo（a）+整合素αⅤβ3单克隆抗体LM609及单独LM609干预细胞，采用细胞计数和MTT实验观察细胞增殖情况，采用Western blotting分析相关信号蛋白的变化。结果：所用实验细胞经鉴定均为血管平滑肌细胞；apo（a）能促进血管平滑肌细胞增殖，但这一作用能被整合素αⅤβ3单克隆抗体LM609所对抗，单独的LM609干预对细胞生长并无影响；Western blotting显示apo（a）能促进黏附斑激酶（FAK）磷酸化，并使总的转化生长因子β1（TGF-β1）及其磷酸化形式均表达减少，而LM609能对抗apo（a）的这些作用。结论：Apo（a）促进血管平滑肌细胞增殖的作用是通过整合素αⅤβ3介导的， 以致FAK活化，进而TGF-β1表达及磷酸化均减少。     

分泌型hCREG蛋白抑制人血管平滑肌细胞增殖的量效关系研究

目的：探讨hCREG表达与人血管平滑肌细胞增殖的量效关系。方法： 构建强力霉素（Dox）调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体；分别经G418及潮霉素筛选表达pRevTet-On、pRevTRE-hCREG的人血管平滑肌细胞株-HITASY细胞克隆；RT-PCR鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达；Western blotting和免疫共沉淀检测不同浓度的强力霉素诱导后，HITASY细胞内及培养上清中hCREG的表达；流式细胞仪检测不同浓度的强力霉素诱导后，hCREG表达与细胞增殖的关系。结果：成功构建了强力霉素可调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体；筛选出稳定表达双抗性基因的HITASY-hCREG细胞克隆；RT-PCR检测证实细胞克隆中G418及插入基因表达均为阳性；Western blotting及免疫共沉淀检测发现随强力霉素诱导剂量的增加(0、0.01、0.1、1 mg/L)，HITASY-hCREG细胞及培养上清中hCREG表达均呈剂量依赖性增加；流式细胞周期分析提示，hCREG表达增加后，HITASY-hCREG细胞的G1期细胞明显增加。结论： hCREG蛋白通过剂量依赖方式抑制人血管平滑肌细胞的增殖。     

靶向MAG基因shRNA慢病毒载体的构建及其对MAG基因表达的沉默

 目的：设计以MAG基因为靶点的短发夹状RNA（shRNA）,构建重组慢病毒载体并鉴定此RNA干扰体系对MAG基因表达的影响。方法：将3条靶向大鼠MAG基因的shRNA片段插入至慢病毒载体pWPI,与pCDNA3-MAG-FLAG质粒用Lipofectamine　2000共转染293T细胞,Western blotting法鉴定出最有效的shRNA。此重组质粒与pAX2和pMD2G经293T细胞包装后,产生的重组慢病毒感染少突胶质细胞,48 h后Western blotting法检测MAG蛋白的表达情况。结果：经双酶切后测序鉴定,构建了MAG shRNA慢病毒载体pWPI-MAG,鉴定出shRNA-2为最为有效的shRNA。重组慢病毒能明显抑制少突胶质细胞中MAG的表达。结论：慢病毒介导的shRNA干扰技术可特异性阻断MAG的表达,为进一步探讨MAG特异性shRNA治疗神经系统髓鞘损伤奠定了基础。     

雌激素对大鼠血管平滑肌细胞囊泡素-1基因表达的影响

目的:探讨雌激素对血管平滑肌细胞囊泡素-1基因表达的影响。方法:取Wistar雌性大鼠,分为3组:假手术组,卵巢切除后皮下埋植雌激素组 (OVX+E组)及卵巢切除后皮下埋植安慰剂组(OVX+V组)。用药2周后处死大鼠,剥离主动脉平滑肌组织,提取总RNA进行半定量RT-PCR分析,检测雌激素对囊泡素-1(caveolin-1)基因表达的影响。为进一步明确雌激素是否直接调节血管平滑肌细胞caveolin-1基因表达,又采用100 nmol/L 17β-雌二醇(17β-E₂)处理培养的大鼠血管平滑肌细胞24 h,通过Northern blot分析检测雌激素对细胞caveolin-1 mRNA表达的影响。结果:OVX+E组大鼠主动脉平滑肌组织caveolin-1基因表达量明显高于OVX+V组,17β-E₂处理的培养细胞中caveolin-1基因mRNA表达量高于未用药的培养细胞。 结论:雌激素可促进血管平滑肌细胞caveolin-1基因表达,反映了雌激素心血管作用机理的一个方面。     

芥子酸对高糖诱导下大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨芥子酸对高糖诱导下大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和凋亡的影响及机制。方法:将培养的A7r5细胞随机分组处理,MTT法检测细胞活力,Brd U法检测细胞DNA合成,流式细胞术检测细胞周期进程和细胞凋亡,ELISA检测细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)生成,Western blot检测cyclin D1、P21和P27等蛋白的表达,以及蛋白激酶C(PKC)和P38的磷酸化水平。结果:与正常组比较,高糖组细胞活力显著升高,DNA合成加快,细胞周期加快,P21和P27表达降低,cyclin D1表达增加,ROS水平增加,细胞凋亡率降低,p-PKC和p-P38蛋白水平增加(P0.05)。而芥子酸(0.1、1和10μmol/L)处理引起细胞增殖活性降低,DNA合成减弱,细胞周期受阻,P21和P27表达增加,cyclin D1表达降低,ROS水平降低,细胞凋亡率升高,p-PKC和p-P38蛋白水平降低,且呈一定浓度依赖性(P0.05)。P38抑制剂SB203580和PKC抑制剂chelerythrine均显著抑制高糖诱导的PKC/P38活化和细胞活力(P0.05)。结论:芥子酸可通过抑制PKC/P38激活降低高糖诱导的VSMCs增殖,并促进细胞凋亡。     

CGRP修饰大鼠MSCs对血管平滑肌细胞增殖及表型转化的影响

 目的：探讨降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide, CGRP）修饰的大鼠间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）在体外对大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）增殖和表型转化的影响及其机制。方法：分离、培养及鉴定大鼠MSCs和VSMCs。CGRP重组慢病毒（Lv-CGRP-EGFP）转染MSCs后,real-time PCR和ELISA法检测MSCs中CGRP的表达。MSCs-CGRP与VSMCs共培养后MTT、台盼蓝染色及划痕实验评价VSMCs增殖、迁移能力及细胞存活率。Western blotting法检测VSMCs中α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin, α-SMA)和骨桥蛋白(osteopontin, OPN)的表达水平。结果：与MSCs组和空载病毒转染组（MSCs-EGFP）比较,CGRP修饰的MSCs（MSCs-CGRP组）中CGRP的mRNA和蛋白表达水平增高（均P<0.01）。MTT法和划痕实验显示,与MSCs组和MSCs-EGFP组比较,MSCs-CGRP组中VSMCs的增殖和迁移能力明显减弱（P<0.05）,而且台盼蓝染色显示,各组细胞存活率均大于90%。Western blotting结果显示,与MSCs-CGRP共培养的VSMCs中α-SMA较MSCs组和MSCs-EGFP组表达增加,OPN的表达减少（均P<0.05）。结论：CGRP修饰的MSCs能分泌CGRP蛋白,并且能抑制VSMCs的增殖和迁移,其机制可能通过抑制VSMCs的表型从收缩表型向合成表型转化有关。