华蟾酥毒基对肝癌HepG2细胞c-Src基因表达的影响

目的观察华蟾酥毒基作用于HepG2细胞后,c-Src基因的表达改变。方法华蟾酥毒基作用于HepG2细胞6 h后,提取细胞RNA和蛋白,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测c-Src mRNA的表达变化,Western blot法检测c-Src蛋白的表达。结果华蟾酥毒基作用于HepG2细胞6 h后,c-Src mRNA和蛋白的表达均降低。结论华蟾酥毒基可在转录和翻译水平上抑制HepG2细胞c-Src的表达。     

氯通道在三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨氯通道在三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)诱导人鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡中的作用。方法:采用流式细胞术检测CNE-2Z细胞经As_2O_3作用24及48 h的凋亡率;应用膜片钳技术记录As_2O_3激活的细胞膜电流,并分析其电流特性;采用流式细胞术检测氯通道阻断剂DIDS对As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡的抑制作用。结果:(1)5μmol/L As_2O_3能够时间依赖性地诱导的CNE-2Z细胞凋亡;(2)CNE-2Z细胞外灌流含5μmol/L As_2O_3的等渗溶液能够激活一个具有外向整流特征的电流,激活的电流无明显的时间及电压依赖性失活,翻转电位接近氯平衡电位;(3)As_2O_3激活的电流能够被氯通道阻断剂DIDS和NPPB完全抑制,细胞外灌流47%的高渗溶液能够完全抑制As_2O_3激活的电流;(4)氯通道阻断剂DIDS能够抑制As_2O_3诱导的CNE-2Z细胞凋亡。结论:As_2O_3可以激活CNE-2Z细胞的容积敏感性氯通道。氯通道在As_2O_3诱导的CNE-2Z凋亡中发挥重要作用。     

华蟾酥毒基对肝癌HepG2细胞c-Src基因表达的影响北大核心CSCD

目的观察华蟾酥毒基作用于HepG2细胞后,c-Src基因的表达改变。方法华蟾酥毒基作用于HepG2细胞6 h后,提取细胞RNA和蛋白,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测c-Src mRNA的表达变化,Western blot法检测c-Src蛋白的表达。结果华蟾酥毒基作用于HepG2细胞6 h后,c-Src mRNA和蛋白的表达均降低。结论华蟾酥毒基可在转录和翻译水平上抑制HepG2细胞c-Src的表达。     

华蟾酥毒基通过调控circNFIX/miR-577通路抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭

目的：研究华蟾酥毒基（CnBu）对乳腺癌细胞MDA-MB-231恶性生物学行为的影响,并探讨其机制是否与调控环状RNA核因子IX(circNFIX)和miR-577表达相关。方法：将MDA-MB-231细胞分为对照（Con）组、CnBu-低剂量（L）组、CnBu-中剂量（M）组、CnBu-高剂量（H）组、si-NC组、si-circNFIX组、pcDNA组、pcDNA-circNFIX组、CnBu+pcDNA组、CnBu+pcDNAcircNFIX组。MTT、Transwell实验分析细胞增殖、迁移和侵袭能力,Westernblot分析Ki-67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达。RT-qPCR分析circNFIX、miR-577表达量。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR验证circNFIX和miR-577的靶向调控关系。结果：CnBu以剂量依赖方式下调Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白和circNFIX表达（P<0.05）,上调miR-577表达（P<0.05）,减弱MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05）。miR-577...     

蟾酥胶囊诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的观察蟾酥胶囊对人肝癌细胞凋亡的诱导作用.方法采用中药血清药理学方法,选择不同浓度含药血清作为实验组,分别与人肝癌BEL-7402细胞共同孵育24h、48h,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期变化及Apo2.7蛋白的阳性表达率;均与10%无药血清组做对照.结果流式细胞仪检测可见,各实验组细胞G1、S期下降,G2/M期升高,产生凋亡峰（sub-G1期）,细胞凋亡率与作用时间、含药血清浓度有一定的时效和量效关系.结论蟾酥胶囊含药血清可以诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡,提示蟾酥胶囊是一种有潜力的治疗肝癌药物.     

蟾酥胶囊含药血清诱导人肝癌细胞凋亡的检测

目的观察蟾酥胶囊含药血清对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的诱导作用。方法采用中药血清药理学方法,选择不同浓度含药血清作为实验组,分别与人肝癌BEL-7402细胞共同孵育24h、48h,流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期变化及Ap02．7蛋白的阳性表达率;琼脂糖凝胶电泳测定DNA Ladder;均与10％无药血清组做对照。结果流式细胞仪检测可见,各实验组细胞G、S期下降,Q／M期升高,产生凋亡峰(sub-G1期),Apo2．7蛋白表达的阳性峰明显增高,细胞凋亡率与作用时间、含药血清浓度有一定的时效和量效关系;孵育48h,可见DNA Ladder出现。结论蟾酥胶囊含药血清可以诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡,提示蟾酥胶囊是一种有潜力的治疗肝癌药物。     

线粒体氯通道蛋白在过氧化氢诱导C6细胞损伤中的作用

目的：利用过氧化氢(H₂O₂)复制神经胶质瘤C6细胞损伤模型，探讨线粒体氯通道蛋白/CLIC4的变化。方法:应用MTT法检测H₂O₂作用的C6细胞生存率；紫外分光光度法检测培养液上清LDH释放率；RT-PCR检测CLIC4的mRNA表达；Western blotting方法检测CLIC4的蛋白水平。结果:500 μmol/L H₂O₂作用C6细胞存活率与对照组相比未见明显差异；LDH释放率高于对照组；CLIC4蛋白水平明显强于对照组。而1000 μmol/L H2O2作用的C6细胞存活率明显低于对照组；LDH释放率明显高于对照组；CLIC4蛋白水平强于对照组。结论:CLIC4可能参与H₂O₂诱导神经胶质瘤细胞损伤的机制。     

含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡并下调Bcl-2的表达

目的 探讨含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的作用机制.方法 用中药血清药理学方法,不同浓度含药血清加入体外培养的人肝癌BEL-7402细胞,分别孵育24h、48h,显微镜下观察细胞形态学变化,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状条带,免疫细胞化学染色检测Bc...     

线粒体神经酰胺对细胞凋亡的诱导作用

凋亡诱导期,线粒体内神经酰胺水平升高,当每纳摩尔线粒体膜磷脂内含4～6皮摩尔神经酰胺时,神经酰胺即在线粒体外膜形成稳定的跨膜通道,从而使外膜通透性增加,线粒体膜间蛋白释放,启动细胞凋亡.神经酰胺通道只能在线粒体外膜形成,它是由神经酰胺柱组成的桶装结构,神经酰胺的反式双键具有增加通道的稳定性的作用.[     

电压门控氯通道生物学功能与疾病的关系

电压门控氯通道是表达于细胞膜或细胞器质膜上的一类阴离子跨膜通道蛋白,具有调节细胞容积、参与细胞迁移、增殖与凋亡以及氧化应激等生物学功能,本综述总结近年来该通道生物学功能及其与疾病的相关研究进展。     

蟾蜍灵激活低分化鼻咽癌细胞氯通道

目的: 研究蟾蜍灵(bufalin)对低分化鼻咽癌(CNE-2Z)细胞氯通道的激活作用以及通道的特性。方法: 采用全细胞膜片钳技术记录蟾蜍灵激活CNE-2Z细胞膜电流并分析其电流特征。结果: 细胞外灌流1 μmol/L 的蟾蜍灵可诱发CNE-2Z细胞产生一个氯电流,该电流潜伏期较长,为(12.1 ± 6.4)min, 其翻转电位接近氯离子平衡电位。该电流具有较明显的外向优势,没有明显的时间依赖性失活和电压依赖性失活。氯通道阻断剂他莫昔芬(tamoxifen)可完全抑制该电流, 细胞外灌流高渗液也可完全抑制该电流。结论: 蟾蜍灵可以激活CNE-2Z细胞氯通道产生氯电流,与容积激活性氯电流相比,该电流的潜伏期较长,并且有更明显的外向优势。     

氯通道在不同生长周期的鼻咽癌细胞迁移中的作用

目的：研究不同生长周期的鼻咽癌低分化上皮细胞（CNE-2Z）的迁移能力及氯通道在迁移过程中所起的作用。 方法： 运用血清饥饿法、化学药物双阻断法、有丝分裂药物阻断及摇落法分别将CNE-2Z细胞同步化至细胞周期的G1、S、M期，流式细胞仪检测其同步化效果。结合应用迁移小室和图像分析法，测定迁移率。台盼蓝活细胞染色法测定药物的细胞毒性。 结果： 不同生长周期的细胞迁移能力不同，G1期细胞迁移能力最强，随后是M期， S期迁移能力最弱。氯通道阻断剂（ATP、NPPB、tamoxifen）抑制CNE-2Z细胞迁移，但不同的氯通道阻断剂对不同生长周期CNE-2Z细胞迁移的阻滞效应不相同。 结论： CNE-2Z细胞的迁移能力与其所在的生长周期密切相关，氯通道在各期CNE-2Z细胞的迁移过程中起着重要作用。     

顺铂激活的低分化鼻咽癌细胞氯电流

目的： 研究抗癌药顺铂对低分化鼻咽癌细胞（CNE-2Z）氯通道的激活作用以及该电流的特性。方法：采用膜片钳技术记录顺铂激活的CNE-2Z细胞全细胞电流;离子置换法等方法分析通道的特性。结果：细胞外灌流5 μmol/L的顺铂诱发CNE-2Z细胞产生一个有明显外向优势的电流,电流的翻转电位为(-6.69 ± 0.51) mV,接近氯离子平衡电位(-0.9 mV)。该电流的激活依赖于细胞内ATP。顺铂激活的细胞膜氯通道对阴离子的通透性顺序为：I-≥Br->Cl->gluconate。氯通道阻断剂tamoxifen完全抑制该电流。结论：抗癌药顺铂可以激活一个电流特征与容积激活性氯通道相似的氯通道。     

乙醇激活的鼻咽癌细胞氯电流的分子机制

 目的：研究乙醇对低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞氯通道的影响并探讨其分子机制。方法：MTT检测乙醇对细胞生长的影响;全细胞膜片钳技术记录乙醇对氯电流的影响;应用氯通道阻断剂分析该电流的特性;siRNA干扰技术分析乙醇敏感氯通道的分子本质。结果：在等渗灌流液中记录到微弱的背景氯电流,随灌流液中乙醇浓度（0.17~170 mmol/L）的升高,所激活的氯电流呈倒U型曲线状,17 mmol/L的乙醇激活电流达到峰值,电流呈较明显的外向优势,能被高渗液及氯通道阻断剂5-nitro-2-(3-phenylpropylamino)benzoic acid（NPPB）所阻断;干扰ClC-3氯通道基因表达后乙醇激活的氯电流明显减小。结论：乙醇可能通过激活CNE-2Z细胞的ClC-3氯通道,诱导氯电流的产生。     

抑制氯通道阻抑鼻咽癌细胞周期和细胞增殖

目的:研究Cl^-通道在鼻咽癌细胞调节性容积回缩(RVD)、增殖及细胞周期分布中的作用。方法:活细胞图像分析低分化鼻咽癌细胞(CNE－2Z)RVD,用台盼蓝拒染法检测细胞存活率,MTT法检测细胞增殖能力。用流式细胞仪测定细胞周期不同时相细胞百分率。结果:Cl^-通道抑制剂硝基苯丙胺基苯甲酸(NPPB)剂量依赖性抑制RVD和细胞增殖,100μmol/LNPPB明显阻抑细胞周期进程,使细胞停滞于G₁期,G₁期细胞百分率从54%提高到71%,但对细胞存活率没有显著性影响。结论:阻抑Cl^-通道可阻滞细胞于G₁期而抑制细胞增殖。提示Cl^-通道和RVD的激活是促进细胞从G₁期进入S期和维持增殖所必需的因素。     

Antisense oligonucleotides suppress cell-volume-induced activation of chloride channels

Cell volume regulation is an essential feature of most cells. After swelling in hypotonic media, the simultaneous activation of potassium and chloride channels is believed to be the initial, time-determining step in cell volume regulation. The activation of both pathways is functionally linked and enables the cells to lose ions and water, subsequently leading to cell shrinkage and readjustment of the initial volume. NIH 3T3 fibroblasts efficiently regulate their volume after swelling and bear chloride channels that are activated by decreasing extracellular osmolarity. The chloride current elicited in these cells after swelling is reminiscent of the current found in oocytes expressing an outwardly rectifying chloride current termed I_Cln. Introduction of antisense oligodeoxynucleotides complementary to the first 30 nucleotides of the coding region of the I_Cln channel into NIH 3T3 fibroblasts suppresses the activation of the swelling-induced chloride current. The experiments directly demonstrate an unambiguous link between a volume-activated chloride current and a cloned protein involved in chloride transport.     

Small-conductance chloride channels activated by calcium on cultured endocrine cells from mammalian pars intermedia

Porcine intermediate lobe (IL) endocrine cells maintained in primary culture have been studied using patch-clamp derived configurations to record unitary activity on outside-out vesicles. Solutions were devised so as to record Cl current in isolation and to fix cytoplasmic Ca concentration [Ca]_i between 0.1 M and 3 M. Between [Ca]_i 0.5 and 1 M, the chloride permeability was restricted to single events with a small amplitude, that varied linearly with the membrane potential. Mean slope conductance of this chloride channel was 2.5 pS. Single channel analysis yielded two mean open time values of 10 and 55 ms at –80 mV. Relaxations of chloride currents on outside-out patches was examined at different [Ca]_i. Relaxation was negligible at 0.15 M [Ca]_i, whereas at higher [Ca]_i, the current exhibited relaxation in response to voltage jumps the kinetic of which could be fitted by two exponentials. At 0.5 M [Ca]_i, the fast relaxation time constant was shown to be voltage insensitive with a value of about 10 ms. The slow relaxation time constant had a mean value of 75 ms at –60 mV and increased with membrane depolarization with a twofold change over 120 mV. Another voltage effect was to favour the slow opening mode at the more depolarized potentials: the ratio of fast to slow relaxations being 5:1 at –60 mV as compared to 11 at +80 mV). Finally the estimated probability of opening (p _o) linearly increased with voltage.p _o displayed a bell-shaped dependence on [Ca]_i, so that full activation of the channels was not achieved.     

Cl-在鼻咽癌细胞调节性容积回缩中的作用

目的:研究鼻咽癌细胞的调节性容积回缩(RVD)及Cl^-在其中所起的作用。方法:活细胞图像分析低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)在细胞外低渗刺激时的细胞容积改变,用离子置换法和通道阻断法阐明Cl^-在RVD中所起的作用。结果:细胞外低渗刺激使细胞膨胀并诱发RVD。在160-230mOsmol/L范围内,RVD与细胞膨胀程度正相关。用葡萄糖酸取代灌流液Cl^-时RVD增强,细胞内Cl^-耗竭时RVD消失。氯通道阻断剂阻抑RVD,但不同的阻断剂对RVD的阻抑率有明显差异。结论:Cl^-是CNE-2Z细胞RVD的关键离子,Cl^-通道激活,Cl^-外流是RVD的主要机制。     

Chloride channels activated by hypotonicity in N2A neuroblastoma cell line

 By using the patch-clamp technique we have shown that, in hypotonic extracellular solutions, the mouse neuroblastoma cells Neuro2A (N2A) develop ionic currents mediated by a chloride-selective channel which is also permeable to other anions in accordance with the permeability sequence: I^–>Br^–>Cl^–>gluconate^–>glutamate^–. The currents persist for several hours when Mg-ATP is present in the recording pipette but occur only transiently in the absence of Mg-ATP. Typical blockers of anions channels such as La³⁺ and Zn²⁺ do not affect the hypotonicity-activated channel; conversely, the stilbene sulfonate-derivatives, 4-acetamido-4′-isothiocyanatostilbene-2,2′-disulfonic acid (SITS) and 4,4′-diisothiocyanatostilbene-2,2′-disulfonic acid (DIDS), reversibly inhibit the channel in a voltage-dependent manner. Also intact cells exposed to hyposmotic solutions activate volume-regulation mechanisms which decrease the transient volume increase that develops immediately after the application of the hyposmotic challenge. Since N2A neurons have been used as an expression system of exogenous channels, the presence of osmolarity-regulated channels in these cells is an important aspect that deserves the attention of researchers who may wish to express and study the properties of transport proteins in this cell line. Received: 29 January 1998 / Accepted: 7 August 1998