慢病毒介导的miRNA逆转胃癌细胞耐药性研究

目的:利用慢病毒介导的RNA干扰技术(RNAi),沉默SGC-7901/DDP胃癌耐药细胞株的多药耐药基因1(MDR-1)表达,逆转该细胞株对顺铂(DDP)的耐药性.方法:将前期筛选获得的MDR-1基因最佳干扰片段构建慢病毒表达载体,包装成慢病毒,感染SGC-7901/DDP耐药株,通过逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法验证干扰效果后进行DDP药物敏感度实验和细胞凋亡检测.结果:慢病毒介导的基因沉默效果较前期干扰质粒效果更明显,MDR-1mRNA表达抑制率为(51±3)％,且P糖蛋白表达下调至(47±8)％,干扰后的SGC-7901/DDP细胞IC50值下降至1.1 μg/mL,并且细胞株的凋亡率显著增加.结论:慢病毒介导的RNAi可有效抑制SGC-7901/DDP胃癌耐药细胞株的MDR-1基因表达,实现其DDP耐药性逆转.     

靶向COX-2的RNA干扰抑制胃癌细胞增殖及相关信号分子改变

目的:本研究初步探讨RNA干扰技术应用于胃癌基因治疗的特异性及作用机制。方法:设计靶向COX-2基因的siRNA,构建重组表达质粒pTZU6 1-siRNA-COX-2并导入胃癌SGC-7901细胞株,在体外诱导RNA干扰,采用RT-PCR和Western blot同时检测处理组和对照组COX-2基因表达,MTT检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞周期;并用Westernblot检测相关信号分子p53、PCNA及Ki67蛋白表达。结果:体外细胞实验显示,重组质粒pTZU6 1-siRNA-COX-2导入胃癌SGC-7901细胞株后,胃癌细胞生长明显被抑制;细胞周期相分布发生显著变化,G1/G0期细胞明显减少,S期细胞显著增加;与对照相比,COX-2 mRNA分别下调88.36%和86.24%,COX-2蛋白表达分别下调94.27%和91.59%。p53蛋白表达上调,PCNA及ki67蛋白表达均明显下调。对照组各指标均无明显变化。结论:siRNA明显抑制了COX-2的表达及胃癌SGC-7901细胞增殖,并引起细胞周期改变,可能与上调p53蛋白和下调PCNA及ki67蛋白表达有关。     

RNA干扰抑制胃癌SGC-7901细胞中Livin基因的表达

背景与目的： 利用RNA干扰(RNAi)技术在体外抑制Livin基因表达,探讨RNA干扰用于胃癌治疗的可行性。 材料与方法： 设计靶向Livin基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),构建重组表达质粒pTZU6＋1-siRNA-Livin,并导入SGC-7901细胞,在体外诱导RNA干扰。并分别采用流式细胞术检测细胞周期变化,RT-PCR和免疫化学技术检测Livin基因表达,末端标记细胞凋亡法(TUNEL)检测细胞凋亡。 结果： 重组质粒pTZU6＋1-siRNA-Livin导入SGC-7901细胞株后,细胞S期比例由对照组的42.78％降低至19.15％(P<0.05), G1/G0期细胞由对照组的52.68％增至72.98％(P<0.05);pL1-siRNA质粒处理组细胞的Livin mRNA表达水平明显低于对照组(P<0.05),并出现明显的诱导细胞凋亡。 结论： RNA干扰可抑制SGC-7901细胞靶基因Livin的表达及细胞增殖,并诱导细胞凋亡,为胃癌的基因治疗提供了新思路。     

沉默乙酰肝素酶对人胃癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探讨RNA干扰沉默乙酰肝素酶(heparanase, HPA)基因表达对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响.方法:根据人HPA基因序列转录RNA的位置及小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)设计原则,设计了4个靶位点,并构建了4个分别针对靶位点的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的质粒表达载体,同时合成了阴性和阳性对照质粒表达载体.采用阳离子脂质体法将以上质粒转染入人胃癌SGC-7901细胞,分别采用RT-PCR和Western印迹法检测转染前后HPA mRNA和蛋白表达的变化,选出对HPA沉默效果最佳的质粒,再应用Transwell小室基质侵袭实验和划痕损伤实验分别研究HPA表达沉默后对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移能力的影响.结果:质粒载体pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085沉默人胃癌SGC-7901细胞HPA mRNA和蛋白表达的效果最好.pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组中穿透Transwell小室基质的SGC-7901细胞数(289.90±18.11)明显高于对照组(44.00±15.22) (P<0.05),SGC-7901细胞的迁移距离在48、72和96 h内 pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组明显低于对照组(P<0.05). 结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌SGC-7901细胞中HPA mRNA和蛋白表达,从而抑制SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力.HPA可能是治疗胃癌侵袭和转移的一个新靶点.     

miR-138对人胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响

探讨microRNA-138（miR-138）对人胃癌SGC-7901细胞株增殖能力的影响及可能的机制。方法:采用阳离子脂质体Lipofectamine2000将miR-138 RNA转染人胃癌SGC-7901细胞株,采用荧光实时定量PCR检测miR-138表达丰度;采用流式细胞术检测转染后的细胞周期;采用MTT法检测细胞生长曲线;采用Western blotting检测人端粒酶逆转录酶（hTERT）蛋白的表达。结果:转染miR-138 RNA后,SGC-7901细胞内miR-138表达丰度升高,细胞增殖能力受到显著抑制,同时hTERT蛋白表达水平下调。结论:miR-138可抑制人SGC-7901细胞的增殖能力,机制可能是通过抑制靶基因hTERT蛋白的表达。      

慢病毒介导RNAi抑制胃癌细胞CDH17基因的表达对化疗药物敏感性的影响

[目的]探讨慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)沉默肝肠一钙黏连蛋白(CDH17)基因的胃癌细胞SGC-7901对化疗药物敏感性的影响.[方法]将制备好的siRNA-CDH 17慢病毒表达载体稳定转染SGC-7901细胞72h后,采用实时定量PCR法检测转染后SGC-7901细胞中CDH17基因的表达水平;Western blot检测CDH17蛋白的表达水平;利用流式细胞仪检测细胞周期,MTT法和平板克隆形成实验检测CDH17基因沉默后胃癌细胞SGC-7901对氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性.[结果] Real-time PCR及Western blot检测结果表明CDH17 mRNA及蛋白在SGC-7901细胞中表达下调;实验组SGC-7901细胞周期明显阻滞在Go/G1期,S期相对减少;5-FU处理SGC-7901细胞48h后,MTT法和平板克隆形成实验显示实验组增殖抑制显著高于另两组,差异有统计学意义(P＜0.001).CDH17基因沉默的SGC-7901细胞对5-FU的敏感性显著增强.[结论]以CDH17基因为靶标的RNA干扰能下调SGC-7901细胞中CDH17的表达,从而增强其对5-FU的化疗敏感性.     

双干扰质粒共转染对胃癌BAG-1基因亚型表达的抑制作用

目的 构建针对人BAG-1(Bcl-2-associated athanogene 1)基因的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒,探讨其对人胃癌SGC-7901细胞BAG-1主要亚型表达的抑制作用及对细胞生长的影响.方法 以人BAG-1 mRNA编码区为RNA干扰靶点,设计2条不同的位于BAG-1基因P29、P33、P46、P50亚型的两个通用外显子上64nt寡核苷酸干扰片段A、B及1条阴性对照片段S,将其定向克隆到带有卡那霉素抗性和增强绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1上,将其转染至SGC-7901细胞中,设空白对照组(未转染质粒SGC-7901-Un)、阴性对照组(转染阴性对照质粒pGensil-Neg)、干扰组(转染干扰质粒pGensil-BAG1-A和pGensil-BAG1-B),用RT-PCR、Western blot检测BAG-1基因的干扰效果.MTT法检测细胞生长情况并绘制生长曲线.结果 酶切及测序结果证实,pGensil BAG1-A和pGensil-BAG1 B干扰质粒及阴性对照质粒pGensil-S构建成功.质粒在SGC-7901细胞中的转染效率达40％～50％.阴性对照组细胞BAG-1基因表达与空白对照组无明显差异,干扰组细胞BAG-1基因表达较空白对照组显著下降(P＜0.01),表达抑制率在mRNA水平为(63±9.8)％,在蛋白水平对BAG1-P46、BAG1-P32亚型的抑制率分别为(94.3±1.08)％、(66.1±6.5)％.生长曲线表明细胞生长受到了抑制.结论 针对人BAG-1基因的shRNA真核表达质粒pGensil-BAG1-A和pGensil-BAG1-B共转染能高效特异的抑制胃癌SGC-7901细胞中BAG-1主要亚型的表达,并抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长.     

siRNA沉默mdm2基因对胃癌细胞SGC-7901增殖和Rb基因蛋白表达的影响

目的：应用RNA干扰技术（RNAi）研究针对mdm2基因的siRNA，抑制mdm2基因的表达并诱导胃癌细胞系SGC7901细胞的凋亡。方法：将mdm2siRNA转染入SGC7901中，通过RT-PCR检测转染前后各组细胞mdm2mRNA表达水平；Western-blot技术检测转染前后各组细胞mdm2、Rb蛋白表达水平；在转染后不同时间点收集细胞台盼蓝染色后，计数阳性细胞数，统计细胞增殖情况。结果：转染mdm2siRNA后的SGC7901细胞中mdm2基因mRNA水平及mdm2蛋白表达水平显著下降，Rb蛋白表达水平增加；细胞的增殖受到显著抑制。结论：特异性siRNA可以下调SGC-7901细胞中mdm2mRNA及蛋白表达水平，同时引起Rb蛋白表达上调，干涉后细胞凋亡明显增多。提示mdm2基因与Rb基因可能存在某种相互拮抗的作用。mdm2蛋白表达下调及Rb蛋白表达上调可能是凋亡发生的机制之一。mdm2基因可作为胃癌治疗的潜在靶点。     

Bmi-1基因RNAi对胃癌细胞SGC7901及AGS作用的初步研究

目的:构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,观察其对胃癌细胞SGC7901与AGS增殖、侵袭能力的影响.方法:利用慢病毒表达体系pHelper1.0/pHelper2.0/pGCL-GFP,构建Bmi-1基因的RNAi重组质粒vshRNA-Bmi-1.适时定量PCR和蛋白质印迹法分别检测稳定转染vshRNA-Bmi-1后胃癌细胞中Bmi-1 mRNA及蛋白的表达;MTT法及小室侵袭实验检测胃癌细胞增殖和侵袭能力的变化.结果:稳定转染vshRNA-Bmi-1后SGC7901及AGS细胞Bmi-1 mRNA表达均明显下降,抑制率分别为85%及80%.SGC7901细胞中Bmi-1蛋白表达无明显变化,而在AGS细胞中明显下降.Bmi-1干扰后SGC7901细胞的生长及侵袭能力无明显变化,而AGS细胞增殖减慢、侵袭能力减弱.结论:成功构建Bmi-1基因的RNAi表达载体,vshRNA-Bmi-1重组质粒明显下调Bmi-1 mRNA 在胃癌细胞SGC7901和AGS中的表达.Bmi-1基因的RNAi能抑制胃癌细胞AGS的增殖和侵袭能力.     

RNA干扰沉默PPARγ对人胃癌细胞生长的影响

目的:采用RNA干扰技术探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor γ, PPARγ)表达在人胃癌中的作用.方法:根据人 PPARγ基因序列设计获得3个小干扰RNA(small interfering nRNA,siRNA)靶位点,并构建了3个针对靶位点的一个载体编码一个短发夹状RNA(shRNA)的质粒表达载体(Y1、Y2和Y3),同时合成了1个阴性对照质粒表达载体(HK),采用阳离子脂质体将质粒转染人胃癌MGC803细胞,FCM法观察转染效率.分别采用RT-PCR和Western印迹法检测PPARγ mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖,相差倒置显微镜、Hoechst33342染色和FCM检测细胞凋亡.结果:RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默PPARγ表达后抑制人胃癌MGC803细胞增殖并诱导其凋亡.结论:PPARγ高表达可能通过促进细胞增殖和抑制细胞凋亡促进人类胃癌的形成,PPARγ有望成为治疗胃癌的新靶点.     

PCNA的shRNA的真核表达载体的构建及对子宫颈癌细胞的干预性研究

目的构建PCNA的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体并在Hela细胞表达,同时观察PCNA的shRNA对人Hela细胞株体外增殖的影响及生物学特性的改变。方法将PCNA的cD-NA的shRNA引物插入真核表达载体pGenesil-1,构建真核表达质粒pGenesil-1-PCNA1-4,并通过酶切和测序等方法进行鉴定,将真核表达质粒pGenesil-1-PCNA1-4转染子宫颈癌细胞,运用Westernblot检测PCNA的蛋白表达,流式细胞仪分析细胞周期变化。结果PCNA的shRNA能显著抑制人Hela细胞的生长,阻滞细胞G0/G1—S期,PCNA的蛋白表达同时受到抑制。结论PCNA的shRNA能显著抑制人Hela细胞的生长,其抑制作用可能通过阻断PCNA蛋白表达实现,实验结果为进一步研究PC-NA的shRNA对子宫颈癌的基因治疗奠定了基础。     

RNA干扰沉默Sp1基因抑制大肠癌SW620细胞的恶性增生

目的采用RNA干扰技术沉默大肠癌SW620细胞转录因子特化蛋白1（Sp1）的表达,观察其对细胞增生的影响。方法构建靶向人Sp1基因的干扰载体（pGenesil-1-Sp1）,脂质体介导转染SW620细胞,荧光倒置显微镜下观察转染效率,应用实时荧光定量PCR和Western blotting检测其对Sp1 mRNA及蛋白质水平的影响,MTT法检测SW620细胞增生活性的改变。结果成功构建针对Sp1的干扰载体,转染后能够有效抑制大肠癌SW620细胞中Sp1 mRNA和蛋白的表达,且在转染48h抑制作用最强,其对Sp1 mRNA和蛋白质抑制率分别为68．47％和73．82％,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。MTT实验显示,下调Sp1表达可显著抑制大肠癌SW620细胞的体外增生能力。结论Sp1基因沉默能够抑制人大肠癌SW620细胞的增生,为以Sp1为靶点的大肠癌基因治疗提供新的思路和手段。     

下调TSG101基因表达对胰腺癌细胞系PANC-1增殖的影响

目的:研究通过siRNA下调TSG101的表达对胰腺癌细胞系PANC-1生长、增殖及细胞周期的影响。方法:将合成的TSG101 siRNA片段插入至带有绿色荧光蛋白基因(GFP)的pGenesil-1质粒中,用lipo-fectamine 2000将质粒转入胰腺癌细胞系PANC-1后,Western blot鉴定siRNA对TSG101蛋白干扰效率。然后用MTT、流式细胞术检测TSG101下调的细胞生长、增殖能力及细胞周期的变化。结果:TSG101 siRNA有效下调其在胰腺癌细胞系PANC-1中的表达,下调TSG101基因的表达后显著抑制了PANC-1细胞的生长、增殖能力。与随机对照siRNA及阴性对照细胞相比,MTT分析显示有效转染TSG101 siRNA的细胞从第4天开始增殖能力明显下降(P<0.05),流式细胞术分析示细胞周期阻滞在G1期,增殖指数(PI)下降(P<0.05)。结论:下调TSG101在胰腺癌细胞系PANC-1表达后能够导致细胞周期的阻滞并有效抑制细胞生长、增殖。利用RNA干涉技术下调内源性TSG101表达有望成为一种有效的胰腺癌基因治疗方法。     

Stable RNA interference of hexokinase II gene inhibits human colon cancer LoVo cell growth in vitro and in vivo

The purpose of this study is to investigate the effect of silencing hexokinase II (HK II) gene with RNA interference (RNAi) technique on colon cancer LoVo cell proliferation in vitro and in vivo. A short hairpin RNA (shRNA) eukaryotic expression vector against HK II gene was constructed, named as plasmid pGenesil-1-HK II, and transfected into LoVo cells. The expression of HK II gene was detected by RT-PCR and Western blot analysis respectively. Then, tumor colony formation was observed, and cell cycle was also assessed by flow cytometry and the contents of intracellular adenosine triphosphate (ATP) by high performance liquid chromatography (HPLC). Furthermore, LoVo cells were injected subcutaneously into nude mice. After a 4-week follow-up period, the sizes and weights of tumors were measured. Moreover, the expression of Ki67 protein was observed by immunohistochemical technique, and cell apoptosis by terminal deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling (TUNEL). Consequently, the expression of HK II gene was efficiently blocked by RNAi. Downregulation of HK II gene expression significantly suppressed cloning efficiency and cell cycle of LoVo cell in vitro and tumor growth in vivo. Compared with untransfected LoVo cells, LoVo cells transfected with pGenesil-1-HK II plasmids showed significant decrease in the cellular ATP contents and Ki67 expression, and obvious increase in the apoptosis indexes. Our results suggest that HK II gene can act as a crucial therapeutic target for slowing colon cancer growth.     

Stathmin siRNA表达载体的构建及对LM8细胞生物学行为的影响

背景与目的:Stathmin在多种恶性肿瘤细胞中都有高水平表达,通过抑制其表达可以干扰恶性肿瘤细胞的分裂,影响肿瘤细胞的增殖与凋亡。本研究构建并观察stathmin基因RNA干扰表达载体转染LM8细胞系后对stathmin表达及细胞生物学行为的影响。方法:构建靶向stathmin干扰质粒pGenesil-1-Stathmin和通用对照质粒pGenesil-1-HK,以脂质体法将2个重组质粒分别转染骨肉瘤LM8细胞系。实时荧光定量PCR和Western印迹技术检测各组LM8细胞系stathmin在mRNA和蛋白水平的表达,MTT(噻唑蓝)法比色分析检测细胞体外生长抑制率,软琼脂集落形成实验观察单个细胞体外增殖活力,细胞HE染色观察细胞形态学的变化,Hoechst染色观察细胞凋亡特征并计算凋亡率,流式细胞术定量分析细胞周期变化,C3H小鼠移植瘤实验显示肿瘤细胞成瘤能力。结果:DNA测序证实成功构建pGenesil-1-Stathmin重组质粒。转染LM8细胞后,明显抑制stathmin基因表达;细胞体外生长抑制率显著增加;单个细胞体外增殖活力显著下降;细胞HE染色部分细胞呈典型的凋亡细胞形态学改变;Hoechst染色显示细胞凋亡特征,细胞凋亡率明显高于对照组;流式细胞术检测显示细胞周期阻滞于G2/M期,明显高于对照组;C3H小鼠移植瘤实验显示特异转染组致瘤率下降,肿瘤生长减缓。结论:成功构建的靶向干扰质粒pGenesil-1-Stathmin能有效抑制stathmin基因在骨肉瘤LM8细胞的表达并影响其相关生物学行为,其抑制骨肉瘤细胞的增殖与生长,为stathmin基因应用于骨肉瘤的基因治疗研究奠定了理论基础。     

Oncogenic tyrosine kinase NPM/ALK induces activation of the MEK/ERK signaling pathway independently of c-Raf

The mechanisms of cell transformation mediated by the highly oncogenic, chimeric NPM/ALK tyrosine kinase remain only partially understood. Here we report that cell lines and native tissues derived from the NPM/ALK-expressing T-cell lymphoma (ALK+ TCL) display phosphorylation of the extracellular signal-regulated protein kinase (ERK) 1/2 complex. Transfection of BaF3 cells with NPM/ALK induces phosphorylation of EKR1/2 and of its direct activator mitogen-induced extracellular kinase (MEK) 1/2. Depletion of NPM/ALK by small interfering RNA (siRNA) or its inhibition by WHI-154 abrogates the MEK1/2 and ERK1/2 phosphorylation. The NPM/ALK-induced MEK/ERK activation is independent of c-Raf as evidenced by the lack of MEK1/2 and ERK1/2 phosphorylation upon c-Raf inactivation by two different inhibitors, RI and ZM336372, and by its siRNA-mediated depletion. In contrast, ERK1/2 activation is strictly MEK1/2 dependent as shown by suppression of the ERK1/2 phosphorylation by the MEK1/2 inhibitor U0126. The U0126-mediated inhibition of ERK1/2 activation impaired proliferation and viability of the ALK+ TCL cells and expression of antiapoptotic factor Bcl-xL and cell cycle-promoting CDK4 and phospho-RB. Finally, siRNA-mediated depletion of both ERK1 and ERK2 inhibited cell proliferation, whereas depletion of ERK 1 (but not ERK2) markedly increased cell apoptosis. These findings identify MEK/ERK as a new signaling pathway activated by NPM/ALK and indicate that the pathway represents a novel therapeutic target in the ALK-induced malignancies.     

Bmi-1在食管鳞癌细胞株EC9706中的表达及初步功能研究

Background and Objective:Previous studies have shown that Bmi-1 is overexpressed in a variety of tumors,suggesting that Bmi-1 plays an important role in tumorigenesis.In this study,we investigated the effect of Bim-1 siRNA on cell proliferation,cell cycle,cell apoptosis and migration of human esophageal carcinoma EC9706 cells,and explored its potential mechanisms.Methods:Bmi-1 small interfering RNA(siRNA) was transferred into EC9706 cells.Then,cell proliferation was measured using cell counting kit-8(CCK-8)...     

RNA干扰对MDA-MB-231乳腺癌细胞株骨保护素基因表达的抑制作用

目的 构建针对骨保护素（OPG）基因的一个载体编码三条短发夹RNA（shRNA）的真核表达质粒,观察其对MDA—MB-231乳腺癌细胞株OPG表达的抑制作用。方法选择3个针对OPG基因的RNA干扰（RNAi）位点,分别设计合成3对编码相应shRNA的DNA单链,每对单链连接形成双链后分别与线性化载体pGenesil-1．1、pGenesil-1．2、pGenesil-1．3连接形成pGenesil-1．1-shRNAl、pGenesil-1．2-shRNA2、pGenesil-1．3-shRNA3,对以上重组载体反复酶切连接,构建成重组质pGenesil—1．1—1．2-1．3-shRNA1-shRNA2-shRNA3,酶切鉴定和测序无误后,将该质粒转染MDA—MB一231细胞,以G418加压筛选,对转染细胞行单克隆化,稳定转染细胞行RT—PCR和Westernblot检测,确定其对OPG基因表达抑制作用。统计分析采用单因素方差分析和SLD分析法。结果成功构建了pGenesil-1．1—1．2-1．3-shRNA1-shRNA2-shRNA3重组质粒;以该质粒稳定转染MDA—MB-231细胞后其OPGmRNA和蛋白表达均较对照差异有统计学意义（P〈0．05）,RNAi对OPGmRNA和蛋白的表达抑制率分别为91％和73％。结论本研究构建了针对OPG的一个载体编码3条shRNA的真核表达质粒,通过RNAi抑制了MDA—MB-231细胞OPG基因表达,为进一步深入探讨肿瘤细胞自身OPG表达在乳腺癌骨转移发生发展中的作用提供了相关实验基础。     

APE1shRNA重组质粒的构建及对人乳腺癌细胞生长的影响

目的设计构建靶向脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶1（APE1/ref-1）特异性短发卡RNA的真核表达载体,并转染人乳腺癌T47D细胞。方法设计、合成针对APE1的特异性的短链寡核苷酸,构建APE1特异性shRNA的重组质粒,稳定转染人乳腺癌T47D细胞;采用聚合酶链反应和免疫印迹法检测转染前后T47D细胞中APE1的表达。采用四甲基偶氮唑盐法观察T47D细胞的生长情况。结果经酶切和测序鉴定,成功构建APE1特异性shRNA的重组质粒,并能够转染T47D细胞。转染后,APE1在mRNA和蛋白水平表达分别下降约53.1%和60.5%,T47D细胞增殖活性受到抑制。结论运用pGenesil-1.1质粒载体构建的靶向APE1特异性shRNA的重组质粒可以成功转染T47D细胞,有效抑制APE1的表达,并抑制肿瘤细胞的生长。