Toll样受体4/核因子-κB对哮喘大鼠气道炎症和重构的影响

目的: 探讨TLR4/NF-κB对哮喘大鼠气道炎症和气道重构的影响。方法: 将18只SD大鼠随机分成3组:对照组、哮喘4周组和哮喘8周组,每组6只。造模成功后,利用HE染色、免疫组织化学方法及病理图像分析系统分析大鼠气道平滑肌的嗜酸性粒细胞(EOS)浸润情况、气道壁厚度以及增殖细胞核抗原(PCNA)和Bcl-2的蛋白表达量。利用RT-PCR和Western blotting检测ASM中TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达。结果: 哮喘4周组和哮喘8周组的气道壁EOS计数、气道壁厚度、气道反应性均较正常对照组显著增加(P<0.01);哮喘4周组和哮喘8周组的TLR4及NF-κB的mRNA水平和蛋白表达与对照组比较均显著增加(P<0.01);TLR4及NF-κB的mRNA水平随哮喘天数的增加而显著增加(P<0.01);哮喘4周组、哮喘8周组PCNA和Bcl-2的蛋白表达量均显著高于正常对照组(P<0.01);哮喘两组间上述指标差异显著(P<0.05或P<0.01)。结论: TLR4/NF-κB可能参与哮喘大鼠气道炎症和气道重构的调控。     

PolyI:C介导气道平滑肌细胞TLR3和IL-8、Eotaxin的表达

目的:观察PolyI:C对大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)Toll样受体3(TLR3)及炎性细胞因子表达的影响,探讨ASMCs内TLR3表达与气道炎症间的关系。方法:体外培养大鼠ASMCs,传代培养后分为正常对照组和PolyI:C刺激组,PolyI:C刺激组又分为不同的时间点。用RT-PCR法检测细胞TLR3mRNA的表达;Western blot法检测ASMCs中核因子κB(NF-κB)的蛋白含量;ELISA法检测细胞培养上清Eotaxin和IL-8的浓度。结果:与正常对照组相比较,PolyI:C刺激组ASMCs内TLR3mRNA和NF-κB蛋白表达增加(P0.05);ASMCs培养上清液中IL-8和Eotaxin浓度增加(P0.05),并存在时间依赖性。结论:PolyI:C可以上调ASMCs内TLR3的表达,活化NF-κB,增加趋化因子Eotaxin和IL-8的浓度,参与哮喘的气道炎症反应。     

TLR4/NF-κB在烟雾暴露大鼠肺血管重塑中的表达及意义

目的:观察烟雾暴露环境下肺血管Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)亚基P65蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,探讨TLR4及NF-κB信号通路在大鼠肺血管重塑中的可能作用机制。方法:SPF级健康雄性SD大鼠48只,随机分为对照组(control组)、烟雾暴露4周组(S4组)、烟雾暴露8周组(S8组)和烟雾暴露12周组(S12组),每组各12只。制备烟雾暴露大鼠模型,HE染色法观察肺血管形态学变化,并测量各组大鼠肺血管管壁面积/血管总面积(WA%)和血管壁厚度/血管外径(WT%)。免疫组织化学染色法检测肺血管TLR4、P65和PCNA的表达,蛋白含量用平均积分吸光度来表示。RT-q PCR检测肺血管TLR4的mRNA表达,并分析各组肺血管WA%、WT%、TLR4蛋白和TLR4 mRNA、P65蛋白、PCNA蛋白与肺血管重塑的相关性及TLR4蛋白与WA%、WT%、P65蛋白、PCNA蛋白之间的相关性。结果:与对照组比,烟雾暴露组大鼠肺血管WA%及WT%都明显增高,且WA%及WT%与烟雾暴露时间呈正相关关系(P0.05);烟雾暴露组肺血管TLR4蛋白、P65蛋白、PCNA蛋白和TLR4 mRNA的表达量较对照组比显著增加,且与烟雾暴露时间呈正相关关系(P0.05)。结论:烟雾暴露上调大鼠肺血管TLR4蛋白的表达,TLR4和NF-κB P65蛋白的表达量与肺血管重塑程度呈正相关性。肺血管重塑可能与TLR4/NF-κB信号通路激活有关。     

磷脂酰肌醇3激酶促进支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)在支气管哮喘大鼠气道重构中的作用。方法将24只SD大鼠随机分为3组:正常对照组,哮喘4周组和6周组,每组8只。测定气道反应性并观察气道壁嗜酸性粒细胞的浸润情况;图像分析软件测定支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数量;用免疫组织化学染色方法检测PI3K蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PI3KmRNA表达。结果PI3K P85α主要在气道上皮细胞、气道平滑肌细胞表达。哮喘4周和6周组PI3K P85α蛋白及mRNA表达显著高于对照组(P<0.01),且6周组高于4周组(P<0.05,P<0.01);哮喘4周和6周组支气管壁厚度、支气管平滑肌厚度及平滑肌细胞核数量均较对照组明显增加(P<0.01),且6周组高于4周组(P<0.01);哮喘4周和6周组的气道反应性均高于对照组(P<0.01),且6周组高于4周组(P<0.05)。结论PI3K信号通路可能通过促进气道平滑肌细胞增殖参与哮喘气道高反应性及气道重构过程。     

核因子-κB对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡及TGF-β1表达的影响

目的: 探讨核因子-κB(NF-κB)对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖、凋亡和转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达的影响。方法: 体外培养ASMCs，以肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)作为工具药,将ASMCs分为对照组、TNF-α组和TNF-α+PDTC组。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β₁ mRNA表达，Western blotting检测NF-κB、TGF-β₁的表达，免疫细胞化学染色法检测PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位，四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定ASMCs增殖，Annexin V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡。结果: （1）TNF-α组ASMCs的NF-κB活性显著高于对照组(P<0.01),TNF-α+PDTC组NF-κB活性显著低于TNF-α组 (P<0.01)。（2）TNF-α组ASMCs增殖显著高于对照组(P<0.01),TNF-α＋PDTC组的增殖反应显著低于TNF-α组(P<0.01)；TNF-α+PDTC组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组(P<0.01)。（3）TNF-α组ASMCs的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.01)，TNF-α+PDTC组的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著低于TNF-α组(P<0.01)。（4）TNF-α组ASMCs的TGF-β₁的mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α＋PDTC组（P<0.01）。结论: NF-κB活化可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β₁的表达和分泌。     

卡介苗经TLR4介导对膀胱癌细胞株T739 NF-κB p65活性影响

目的:探讨卡介苗(BCG)对膀胱癌细胞株T739 经Toll样受体介导的NF-κB p65活性影响.方法:采用SYBR Green嵌合荧光定量Real Time-PCR,观察BCG(0.25 g/L)刺激T739后不同时间点各个mRNA相对表达量(Ratio),设LPS和空白组作对照;采用转录因子结合DNA的ELISA方法检测NF-κB p65活性.结果:BCG刺激后T739细胞TLR2、 CD14和MD-2 mRNA表达均明显增加,Max.Ratio分别为5.3(2 h),2.6 (4 h),7.4(2 h),TLR4 mRNA增加不显著,Max.Ratio为1.6(6 h);BCG作用T739细胞后NF-κB p65活性显著增加,阻断TLR4后,NF-κB p65活性受到显著抑制(P<0.05);阻断TLR2后NF-κB p65活性却显著性增强(P<0.01).结论:BCG作用T739后TLR2、 CD14、 MD-2 和TLR4 mRNA表达均不同程度增加,BCG可经TLR4使T739细胞NF-κB p65活性增强,不是经TLR2使T739细胞NF-κB p65活化.     

核因子κB在蛋白激酶C诱导哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的:探讨核因子κB(NF-κB)在蛋白激酶C(PKC)致哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用。方法:16只Wistar大鼠随机分为哮喘组(8只)和对照组(8只)。应用PKC激动剂PMA和NF-κB抑制剂PDTC干预哮喘组和对照组大鼠ASMCs。采用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫荧光技术等方法检测ASMCs增殖;免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NF-κB活性。结果:PMA干预哮喘组ASMCs后S期细胞比例、A值、PCNA表达率、NF-κBp65阳性率及结合带的灰度值均显著高于未干预的哮喘组ASMCs(均P<0.05),PDTC预处理后再给予PMA上述指标均低于仅用PMA干预及未干预者(均P<0.05)。仅用PDTC处理的哮喘组ASMCs上述指标均低于未干预的ASMCs(均P<0.05)。结论:NF-κB参与哮喘大鼠ASMCs增殖,在其增殖中存在着PKC-NF-κB信号途径。     

匹诺塞林缓解大鼠肝细胞系BRL-3A低氧/复氧损伤

目的探讨匹诺塞林(PIN)对低氧/复氧(H/R)诱导的大鼠肝细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法将大鼠肝细胞(BRL-3A细胞系)分为正常对照组、PIN实验组、低氧复氧损伤模型组和PIN预处理组。CCK-8检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞计量术检测细胞凋亡;检测细胞培养液中谷丙转氨酶(ALT)活性;ELISA检测TNF-α和IL-1β含量;Western blot检测细胞中TLR4、IκB-α和NF-κB P65蛋白水平;RT-q PCR检测细胞中TLR4、IκB-α和NF-κB P65mRNA表达。结果在H/R条件下细胞存活率明显降低(P0.01),细胞凋亡率增高(P0.001),ALT活性升高(P0.01),IL-1β和TNF-α含量增多(P0.01),TLR4和NF-κB P65蛋白与mRNA表达水平显著提高(P0.01)而IκB-α降低(P0.05);经PIN预处理后,细胞存活率显著提高(P0.01),细胞凋亡率显著减小(P0.001),ALT活性降低(P0.01),IL-1β和TNF-α含量降低(P0.01),TLR4和NF-κB P65蛋白与mRNA表达水平明显降低(P0.01)而IκB-α升高(P0.05)。结论 PIN对H/R诱导的BRL-3A肝细胞的损伤具有保护作用,且该作用可能是通过TLR4/NF-κB信号通路实现的。     

豚鼠哮喘模型核因子-κB的表达特点及灯盏花素对其作用的研究

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)在豚鼠哮喘模型中的表达特点以及蛋白激酶C(PKC)抑制剂灯盏花素对其表达的影响。方法:将48只豚鼠随机分为正常对照组、哮喘即刻激发组、哮喘发作1周组、哮喘发作2周组、灯盏花素治疗1周组和治疗2周组等6组,每组8只,测定肺功能并观察气道壁嗜酸性粒细胞(EOS)浸润情况;用免疫组织化学染色方法观察NF-κB在豚鼠肺组织中的表达变化。结果:NF-κB主要表达于气道上皮细胞,哮喘各组NF-κB的表达水平均显著高于正常对照组(P＜0101),治疗2周组NF-κB的表达水平显著低于哮喘各组(P＜0.01)。NF-κB的表达水平与气道阻力及气道壁EOS计数均呈显著正相关(P＜0101)。结论:哮喘豚鼠气道上皮细胞NF-κB的表达水平显著高于正常豚鼠,提示NF-κB可能参与哮喘的发病过程;PKC抑制剂灯盏花素能显著降低哮喘豚鼠气道上皮细胞NF-κB的表达水平,提示PKC可能通过NF-κB的作用参与哮喘的发病机制。     

白藜芦醇调控NF-κB/RIP2信号缓解大鼠膀胱癌的作用

目的研究白藜芦醇(Resveratrol,RES)通过调节NF-κB/RIP2信号通路来治疗和缓解大鼠膀胱癌的保护作用。方法大鼠构建膀胱癌模型后,白藜芦醇(20 mg/kg)和生理盐水连续灌胃14 d。HE染色法观察膀胱组织形态;Western blot法和实时PCR检测NF-κB、RIP2、Caspase 3和Bcl-2蛋白含量和mRNA含量的表达。结果与对照组相比,模型组和实验组大鼠NF-κB、RIP2和Caspase 3 m RNA和蛋白含量显著升高,Bcl-2 m RNA和蛋白含量显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,实验组大鼠NF-κB、RIP2和Caspase 3 m RNA和蛋白含量显著降低,Bcl-2 m RNA和蛋白含量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 b白藜芦醇能够有效缓解和抑制膀胱癌细胞的生长,且NF-κB/R1P2信号通路在此过程中发挥重要作用。     

NF-κB介导的促凋亡蛋白Bak表达在溃疡性结肠炎发病中的作用研究

目的:探讨核因子-κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)介导的促凋亡蛋白Bak(Bcl-2 associated K protein gene,Bak)及TNF-α的表达在溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)发病中的作用机制。方法:选购80只清洁级SD大鼠,分为模型组和对照组。UC大鼠模型制造采用"三硝基苯磺酸+乙醇"方法,模型制造成功后观察、评估结肠黏膜的大体形态及组织学变化。用免疫组织化学及RT-PCR法检测模型组与对照组中的NF-κB、Bak、TNF-α的表达水平,并分析相互之间关系。结果:UC大鼠模型制造成功率为97%。模型组固有层和黏膜层内炎性细胞浸润较对照组明显增多(P0.01);NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达水平模型组较对照组明显升高(P0.01);Bak蛋白在模型组的炎细胞中表达明显低于对照组(P0.01),而在结肠黏膜上皮细胞中的水平与对照组无明显差异(P0.05)。NF-κB、TNF-α蛋白阳性细胞百分数及mRNA水平随模型组的组织学等级升高而增强,而Bak蛋白阳性细胞百分数是减弱的(P0.05);且模型组中NF-κB与Bak蛋白的表达水平呈负相关(r=-0.793,P0.01),NF-κB与TNF-α蛋白表达成正相关(r=0.892,P0.01)。结论:NF-κB介导的促凋亡蛋白Bak的表达参与了UC的发生、发展。     

白藜芦醇抑制肾移植大鼠肾损伤

目的探究白藜芦醇对肾移植大鼠肾损伤的改善作用及作用机制。方法将40只大鼠分为假手术组、模型组(同种异体肾移植手术)、白藜芦醇高和低剂量组[40和20 mg/(kg·d),腹腔注射,连续7 d]。术后24 h,检测血清Cr、BUN、SOD和MDA水平,RT-qPCR检测肾组织Bax和Bcl-2 mRNA表达,Western blot检测IKKα、p-IκBα和NF-κB p65蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组血清Cr、BUN和MDA含量增高,SOD活性降低,肾组织Bax mRNA表达增加,Bcl-2 mRNA表达降低,IKKα、p-IκBα和NF-κB p65蛋白表达增加(P0.05);与模型组比较,白藜芦醇显著降低血清Cr、BUN和MDA含量,提高SOD活性,降低Bax mRNA、IKKα、p-IκBα和NF-κB p65蛋白表达,提高Bcl-2 mRNA表达(P0.05)。结论白藜芦醇对肾移植大鼠肾损伤具有保护作用,其作用机制与抑制NF-κB信号通路的活化有关。     

白藜芦醇对惊厥持续状态大鼠海马Toll样受体4、核因子-κB、Caspase-3表达的影响

目的观察大鼠惊厥持续状态(SC)后脑组织海马中Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)和半胱氨酸门冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的表达及神经细胞凋亡的变化,并探讨白藜芦醇(Res)对三者的影响。方法 106只SD大鼠随机分为对照组(A)、SE组(B)和白藜芦醇干预组(C),其中B组再随机分为B1~B4组(分别于惊厥后4h、24h、48h和72h处死),B组和C组采用氯化锂-匹罗卡品法制作大鼠SC模型,C组在大鼠惊厥终止后30min,给予30 mg/kg白藜芦醇腹腔注射,每天1次,连用3d,于惊厥后72 h处死。免疫组织化学法检测海马TLR4、NF-κB/p65蛋白的表达变化;RT-PCR技术检测海马TLR4、Caspase-3 mRNA表达的动态改变;TUNEL法检测神经细胞凋亡数的变化。结果免疫组织化学显示,B组各时间点TLR4蛋白的表达均明显高于A组(P0.05),并随时间延长明显增高;C组TLR4蛋白表达较B4组显著降低(P0.01)。B组可见NF-кB/p65蛋白在胞核内有不同程度表达,与A组比较差异有统计学意义(P0.05)。C组与B4组比较,NF-κB/p65蛋白表达水平明显降低(P0.01)。RT-PCR显示,B组各时间点TLR4、Caspase-3 mRNA的表达均较A组高(P0.05),且随时间延长逐步升高,惊厥后72h达高峰;C组海马TLR4、Caspase-3mRNA的表达明显低于B4组(P0.05)。B组在惊厥24h后海马CA1区TUNEL阳性细胞数已显著高于A组(P0.01),72h达高峰,而C组TUNEL阳性细胞数较B4组显著下降(P0.01)。结论 SC后大鼠海马TLR4、NF-κB/p65和Caspase-3的表达增强。白藜芦醇可下调匹罗卡品致惊厥持续状态大鼠海马TLR4、NF-κB/p65和Caspase-3的表达,并使神经细胞凋亡减少;提示白藜芦醇对SC引起的脑损伤可能有保护作用。     

核因子κB在蛋白激酶C诱导哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的： 探讨核因子κB（NF-κB）在蛋白激酶C（PKC）致哮喘模型大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖中的作用。方法： 16只Wistar大鼠随机分为哮喘组（8只）和对照组（8只）。应用PKC激动剂PMA和NF-κB抑制剂PDTC干预哮喘组和对照组大鼠ASMCs。采用流式细胞术、MTT法及增殖细胞核抗原（PCNA）免疫荧光技术等方法检测ASMCs增殖；免疫荧光技术及电泳迁移率改变分析(EMSA)检测NF-κB活性。 结果： PMA干预哮喘组ASMCs 后S期细胞比例、A值、PCNA表达率、NF-κBp65阳性率及结合带的灰度值均显著高于未干预的哮喘组ASMCs (均P<0.05)，PDTC预处理后再给予PMA上述指标均低于仅用PMA干预及未干预者(均P<0.05)。仅用PDTC处理的哮喘组ASMCs上述指标均低于未干预的ASMCs (均P<0.05)。结论： NF-κB参与哮喘大鼠ASMCs增殖，在其增殖中存在着PKC－NF-κB信号途径。     

熊果酸通过抑制TLR4/NF-κB通路以及Caspase-3蛋白的表达对慢阻塞疾病大鼠的影响

目的探究熊果酸(UA)通过Toll样受体//核转录因子κB(TLR4/NF-κB)通路对慢阻塞疾病(COPD大鼠Caspase-3蛋白表达的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、COPD组、COPD+UA组和COPD+EVP4593组。通过烟雾暴露+脂多糖建立COPD模型。比较各组大鼠肺功能、肺组织苏木精-伊红(HE)染色情况。检测和比较各组大鼠血清炎性因子和TLR4、NF-κB p65和Caspase-3蛋白表达水平。结果建模后COPD组大鼠的FEV0.3%/FVC和MMEF均显著低于对照组(P0.01),的COPD+UA组和COPD+EVP4593组FEV0.3%/FVC和MMEF显著高于COPD组(P0.01)。COPD组肺泡结构紊乱,肺泡间隙明显增厚,肺组织浸润大量炎症细胞,间质出血出现充血和出血改变。COPD组和COPD+EVP4593组的肺泡结构较正常,炎症浸润很少。COPD组的血清炎性因子显著升高(P0.01),COPD+UA组和COPD+EVP4593组的TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著低于COPD组(P0.01)。COPD组的TLR4、NF-κB p65和Caspase-3蛋白水平显著升高,COPD+UA组和COPD+EVP4593组的TLR4、NF-κB p65和Caspase-3蛋白水平显著低于COPD组(P0.01)。结论 UA可能通过抑制TLR4/NF-κB通路,减少炎性因子的表达和Caspase-3蛋白的水平,减少COPD大鼠肺损伤,保护肺功能。     

牛蒡子苷元抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响北大核心CSCD

目的研究牛蒡子苷元抑制Toll样受体4(TLR4)/肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF6)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响。方法构建急性哮喘大鼠模型,随机分为5组(每组12只模型大鼠):模型组、牛蒡子苷元低、高剂量组、脂多糖(LPS,TLR4激活剂)组、牛蒡子苷元+LPS组,以12只Wistar正常大鼠作为对照组。分组处理后,观察各组大鼠哮喘症状并做评分、分类计数各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞、检测各组大鼠肺组织病理变化、血清IgE水平、BALF和血清中白细胞介素(IL)-4、干扰素γ(IFN-γ)水平、IFN-γ/IL-4及肺组织TLR4/TRAF6/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠肺组织产生严重病理损伤,哮喘症状评分、WAt/Pbm、WAm/Pbm、BALF中巨噬细胞及淋巴细胞计数、血清IgE水平、BALF与血清中IL-4水平、肺组织TLR4、TRAF6表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05),BALF与血清中Th1型细胞因子IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4降低(P<0.05);与模型组相比,各牛蒡子苷元处理组中模型鼠的上述改变均被扭转,且高剂量牛蒡子苷元作用更强;LPS组大鼠各指标变化与牛蒡子苷元处理组相反,另外LPS可逆转高剂量牛蒡子苷元对大鼠各指标的作用。结论牛蒡子苷元可通过抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号激活而阻止哮喘大鼠气道炎症,促使Th1/Th2免疫平衡向Th1转移,改善大鼠气道重塑和肺损伤。     

栀子苷减轻幼年哮喘小鼠气道炎性反应并下调TLR4/NF-κB活性

目的探讨栀子苷(Gen)对幼年哮喘小鼠气道炎性反应和平滑肌细胞(ASMCs)损伤的保护作用。方法将小鼠分为对照组、哮喘组(Ova)和Gen组(Ova+Gen,80 mg/kg)(每组n=10)。苏木精-伊红(HE)和阿辛兰-过碘酸雪夫(AB-PAS)染色观察肺组织病理变化(细胞浸润和杯状黏液细胞分泌);观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性反应细胞嗜酸粒细胞、中性粒细胞和巨噬细胞数目;ELISA检测BALF中TLR4及Th2型细胞因子IL-4,IL-5及IL-13表达。体外分离和培养ASMCs,分为对照组、哮喘组(Ova)、低剂量Gen组(20 mg/L)、中剂量Gen组(50 mg/L)和高剂量Gen组(100 mg/L)(每组n=8)。qRT-PCR和Western blot检测TLR4和NF-κB P65表达;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测ASMCs增殖。结果体内实验发现,Gen可显著降低肺部细胞浸润和杯状黏液细胞分泌;减少炎性反应细胞增多(P0.01);降低TLR4和Th2型细胞因子表达(P0.01)。体外实验发现,Gen可抑制TLR4/NF-κB表达;抑制ASMCs增殖。结论 Gen可能通过抑制TLR4/NF-κB活化减轻幼年哮喘小鼠气道炎性反应和SMCs损伤。     

磷酸二酯酶抑制剂对慢性阻塞性肺疾病患者PBMC中IL-8mRNA表达的影响

目的:探讨磷酸二酯酶(PDE)抑制剂对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)IL-8mRNA表达的影响及机制。方法:采集20例急性发作期COPD患者(A组)和15例正常人(B组)的PBMC。A组的每份PBMC分4组培养:A1组为空白对照,A2组和A3组分别加入100μmol/L及1mmol/L的非选择性PDE抑制剂茶碱,A4组加入选择性PDEⅣ抑制剂Rolipram。应用RT-PCR检测IL-8mRNA的表达,以免疫组化法检测NF-κB阳性细胞的百分率,用Westernblot检测I-κB蛋白的含量。结果:(1)A1组PB-MC中IL-8mRNA的表达及NF-κB阳性细胞的百分率,均显著高于B组;IκB的水平显著低于B组(P<0.01)。(2)与A1组比较,A2组和A3组的PB-MC中IL-8mRNA的表达无显著差异(P>0.05);A4组IL-8mRNA的表达明显下降(P<0.01)。(3)与A1组比较,A2组NFκB阳性细胞的百分率及IκB的水平无显著差异(P>0.05);而A3组的PBMC中NFκB阳性细胞的百分率下降(P<0.05),IκB蛋白的水平无显著变化(P>0.05)。A4组PB-MC中,NF-κB阳性细胞的百分率较A1组明显下降,I-κB蛋白的水平明显增加(P<0.01)。结论:COPD患者PBMC中IL-8mRNA的表达较正常增高,提示IL-8参与了COPD的发病过程;选择性PDEⅣ抑制剂Roli-pram可抑制IL-8基因的表达,其作用机制可能与NF-κB阳性细胞百分率的下降有关。非选择性PDE抑     

芍药苷对大鼠脊髓损伤的神经保护机制

目的研究芍药苷对大鼠脊髓损伤(SCI)的神经保护机制。方法将大鼠随机分成对照组(假手术)、模型组(Allen’s打击法制备SCI模型)、治疗组1(术后每天腹腔注射芍药苷30 mg/kg)、治疗组2(芍药苷60 mg/kg),每组16只。手术当天为第1天,分别在第0、1、4、7、14天时采用BBB评分法对大鼠后肢运动功能进行测试。第4天和第14天每组分别处死8只大鼠,q PCR检测受损脊髓中TLR4和NF-κB p65 m RNA的表达;酶联免疫吸附实验测定检测受损脊髓中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;Western blot检测TLR4、NF-κB p65、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧酶2(COX-2)、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组BBB评分明显降低(P0.05);与模型组相比,治疗组评分升高(P0.05),且治疗组2中评分较高。在第4天时,与对照组相比,模型组中TLR4、NF-κB p65、IL-1β、IL-6、TNF-α、i NOS、COX-2和Caspase-3的表达均增加(P0.05),Bcl-2的表达降低(P0.05);与模型组相比,治疗组中TLR4、NF-κB p65、IL-1β、IL-6、TNF-α、i NOS、COX-2和Caspase-3的表达均降低(P0.05),Bcl-2的表达升高(P0.05),这些变化均呈现剂量依赖性。第14天时,IL-1β、i NOS、COX-2、Caspase-3和Bcl-2的变化趋势与第4天时相同,但是各组中TLR4、NF-κB p65、IL-6和TNF-α表达均变化不大。结论芍药苷在大鼠脊髓损伤中的神经保护功能可能与TLR4/NF-κB信号通路介导的抗炎和抗凋亡作用相关。     

miR-27a调节NF-κB2的表达并抑制哮喘小鼠气道炎症反应

目的探究miR-27a对哮喘小鼠气道炎症的作用及机制。方法将雄性Balb/c小鼠随机分成正常对照组(control组)、哮喘模型组(OVA组)、哮喘+miR-27a模拟物组(miR-27a组)、哮喘+anti-miR-27a组(anti-miR-27a组)和哮喘+miR-27a对照组(scramble),每组8只。除正常对照组外,其余各组小鼠用卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘模型;3组哮喘模型处理组通过鼻滴的方式从激发前1 d开始给予4 mg/kg相应的药物干预。实验第28天时检测气道高反应性和肺灌洗液(BALF)中细胞总数及分类计数,HE和PAS染色检测肺组织病理学变化,real-time PCR检测肺组织中miR-27a、NF-κB2、白细胞介素(interleukin,IL)-4、IL-13和干扰素(interferon,IFN)-γmRNA的表达,Western blot检测肺组织中NF-κB2蛋白的表达,ELISA检测BALF中细胞因子的表达。结果哮喘模型组中miR-27a的表达降低,miR-27a模拟物增加了miR-27a的表达,anti-miR-27a明显降低了miR-27a的表达。与OVA组相比,miR-27a模拟物处理后,小鼠的气道高反应性和BALF中炎性细胞总数、分类计数均明显降低(P0.05),肺组织病理学变化减轻,NF-κB2 mRNA的表达无明显变化,但其蛋白表达明显减少(P0.05),IL-4和IL-13 mRNA和蛋白表达均降低(P0.05),IFN-γ的表达升高(P0.05);与OVA组相比,anti-miR-27a组中NF-κB2 mRNA表达也无显著变化,其余检测指标的变化与miR-27a模拟物的作用相反。结论 miR-27a抑制OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症可能与其靶向NF-κB2的表达进而影响NF-κB信号通路的激活相关。