维生素D受体在妊娠期肝内胆汁淤积症中的异常表达

目的通过研究维生素D受体（VDR）在妊娠期肝内胆汁淤积症（intrahepatic cholestasis of pregancy,ICP）孕妇外周血、脐血及胎盘中的表达,探讨VDR与ICP发病的关系。方法采用荧光定量PCR法检测ICP组和正常对照组外周血、脐血及胎盘组织中的VDR的mRNA表达,ICP组和正常对照组均为52例。两组孕妇胎盘中VDR蛋白表达水平采用免疫组化法检测。结果 （1）ICP组外周血、脐血及胎盘组织中VDR的mRNA表达水平均明显低于对照组,差异有统计学意义（P值均〈0.05）,ICP组中VDR mRNA在脐血中的表达明显高于在外周血及胎盘中的表达,差异有统计学意义（P值均〈0.05）;（2）ICP组胎盘中VDR的蛋白阳性表达率明显低于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 VDR在ICP孕妇外周血、脐血及胎盘中的表达均低于正常孕妇,可能在ICP发病中起一定的作用。     

熊去氧胆酸治疗妊娠期肝内胆汁淤积症对脐静脉血总胆汁酸等的影响

目的评价熊去氧胆酸(UDCA)治疗妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)对孕妇静脉血及胎儿静血总胆汁酸水平的影响。方法30例患者,随机分成两组。治疗组15例,采用UDCA250mg,Po,tid,对照组15例,给予维生素C,肌苷等加入10%葡萄糖溶液中静滴口服,均从孕25周开始直至分娩,检测分娩前两组孕妇静脉血总胆汁酸及两组孕妇分娩的胎儿脐静脉经总胆汁酸水平,结果(1)UDCA治疗ICP安全有效。(2)治疗组孕妇分娩的胎儿脐血总汁酸水平明显低于对照组。(P<0.05)结论UDCA治疗ICP安全有效并改善母、胎之间胆酸的运输。     

MDR3(ABCB4)、BSEP(ABCB11)和FIC1(ATP8B1)基因在人绒毛和正常妊娠胎盘组织表达的研究

目的 检测肝脏胆盐载体FIC1(ATP8B1)、BSEP(ABCB11)和MDR3(ABCB4)在正常绒毛和胎盘组织中转录水平和蛋白水平的表达情况,探讨肝脏胆盐载体在人类胎盘胆汁酸排泌过程中的作用和功能.方法 选择正常妊娠6～12周的孕妇(早孕组)15例和妊娠38～40周的孕妇(晚孕组)20例,采用实时定量逆转录-聚合酶链反应技术(real time RT-PCR)检测绒毛和胎盘组织中上3种载体的mRNA,采用免疫组织化学(S-P)法分别榆测后两种载体蛋白在上述35例胎盘组织中的表达,并通过免疫印迹技术分析这两种载体在胎盘组织中的含量.结果 在所有绒毛和胎盘组织中均检测到3种载体的mRNA.MDR3mRNA在正常绒毛中的表达量较低为(0.15±0.04),正常晚期妊娠胎盘中表达量为(0.58±0.06),两者比较有显著性差异(P<0.05).与早孕组相比,HC1 mRNA表达水平明显由(0.65 ±0.03)下降至(0.23±0.04),差别有非常显著意义(P<0.01).而BSEP mRNA表达无改变(0.06 ±0.01和0.05 ±0.01)(P>0.05).MDR3蛋白、BSEP蛋白在正常绒毛和胎盘组织中均有表达,且两种载体在正常早孕绒毛及晚期妊娠胎盘分布范围基本一致,主要分布在绒毛合体滋养细胞母体面游离缘.MDH3、BSEP蛋白在绒毛和晚期妊娠胎盘中的表达趋势与其mRNA相似,MDR3蛋白Western印迹条带的光密度值为(11 357±3618)(早孕组)和(46 753±2834)(晚孕组),两组比较有显著性差异(P<0.05).BSEP蛋白早孕组Western印迹条带的光密度值为(1 296±436),晚孕组为(1 798 ±575),两组比较差异无显著性(P>0.05).结论 3种肝脏胆盐载体FIC1、MDR3和BSEP在正常绒毛和胎衙组织中均有表达,可能参与了胎盘胆汁酸的排泌功能.妊娠期间MDR3、FIC1和BSEP mRNA和蛋白表达发生变化,可能与胎儿生长发育的需要有关.     

小于胎龄儿胎盘11β-HSD2及脐血皮质醇的研究

目的检测小于胎龄儿(SGA)的胎盘11-β羟基类固醇脱氢酶2型及脐血皮质醇水平,初步探讨足月小于胎龄儿的发生机制。方法足月SGA新生儿20例(其中母亲正常妊娠的SGA新生儿10例为SGA1组,母亲有妊高症、或羊水少、或胆汁淤积症妊娠的SGA新生儿10例为SGA2组),正常妊娠的足月AGA新生儿10例为对照组。采用RT-PCR法检测人胎盘组织11β-HSD2基因mRNA的表达水平,采用化学发光法检测脐血皮质醇浓度。结果 1)胎盘11β-HSD2mRNA的表达水平与新生儿出生体重具有显著正相关(r=0.554,P<0.01);2)SGA组11β-HSD2 mRNA表达水平显著低于对照组(0.054±0.016 vs 0.082±0.026);SGA1组与SGA2组胎盘11β-HSD2 mRNA表达水平无差异;3)SGA组脐血皮质醇含量显著低于对照组(169.05±83.77nmol/l vs 327.90±179.19)nmol/l,P<0.05;SGA1组与SGA2组脐血皮质醇含量有差异。结论足月小样儿的发生与胎盘11β-HSD2活性下降有关,足月小样儿妊娠晚期脐血皮质醇浓度较适于胎龄儿低,与胎盘11β-HSD2的活性无关,可能主要与小于胎龄儿的HPA轴未成熟有关。     

一氧化氮与胎儿宫内窘迫的关系

目的 探讨一氧化氮(NO)与胎儿宫内窘迫的关系。方法 用格瑞氏法和硝酸酶还原法对40例正常妊娠孕妇(对照组)及23例胎窘孕妇(胎窘组)血及脐血中NO代谢产物亚硝酸基/硝酸基(NO2-/NO3-)进行测定。结果 胎窘组母血和脐血NO2-/NO3水平显著低与对照组(P<0.01);脐血NO2/NO3水平与pH、PO2显著正相关,与PCO2显著负相关(P<0.01)。结论 胎儿宫内窘迫的发生发展与NO的减少密切相关。     

妊娠期糖尿病母婴血清及胎盘抵抗素变化及其与胎儿生长发育的相关性研究

目的探讨妊娠期糖尿病母婴血清抵抗素水平、胎盘及皮下脂肪组织抵抗素基因表达及其与胎儿生长发育的关系。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定40例妊娠期糖尿病及55例正常孕妇母血清及新生儿脐血血清中抵抗素水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测两组胎盘及皮下脂肪组织抵抗素m RNA的表达。结果 1GDM组孕妇产前BMI、孕期体重增长、新生儿出生体重高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。2GDM组孕妇血清抵抗素水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);GDM组新生儿脐血血清抵抗素水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。组内比较,脐血抵抗素水平显著高于母血抵抗素水平,差异有统计学意义(P0.05)。3GDM组和对照组胎盘组织抵抗素m RNA表达有显著差异,双△Ct法进行相对定量分析,GDM组抵抗素m RNA表达量是对照组的3.784倍。两组皮下脂肪组织抵抗素m RNA表达无明显差异。结论 GDM孕妇血清及脐血抵抗素水平的升高可能参与了GDM的发生发展以及胎儿的宫内发育的调节,循环中抵抗素的变化主要来自于胎盘抵抗素基因表达的变化。     

围产期脐血瘦素水平与胎儿体格发育的关系

目的　了解脐血瘦素的来源及其对胎儿发育的影响。方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)检测 6 7例胎盘组织瘦素的相对水平 ,采用DSLELISA法检测血清瘦素水平 ,采用体脂含量 [F % =0 .884 8×SFT4+0 .0 2 2 ]估测新生儿营养状态 ,并根据出生体重分为小于胎龄儿 (SGA)组 2 3例 ,适于胎龄儿 (AGA)组 4 4例。结果　 (1)脐血瘦素水平与新生儿体重、身长、头围、上臂围及体脂含量成极显著正相关 (r =.4 95、.4 0 9、.36 1、.4 4 2、.4 4 7,P均≤ 0 .0 1) ,与母血、胎盘瘦素水平无明显相关性。 (2 )SGA组的脐血瘦素水平显著低于AGA组 (t=3.5 2 4 ,P <0 .0 0 1)。 (3)脐血瘦素水平具有性别差异 ,男婴明显低于女婴 (t =2 .0 2 6 ,P<0 .0 5 )。结论　胎儿脂肪组织的发育和脂肪量的累积是胎儿血清瘦素水平的主要决定因素 ;胎儿体重与瘦素之间可能存在一个负反馈自控环路直接调控胎儿体重。     

miR-129-5p通过调控ABCB1影响紫杉醇治疗乳腺癌的耐药性

目的：研究miR-129-5p对紫杉醇治疗乳腺癌耐药性作用。方法：抽取25例乳腺癌患者（病例组）和25例健康志愿者（对照组）的外周血,通过qRT-PCR、Western blot检测两组miR-129-5p、ABCB1 mRNA和蛋白的表达;利用生物信息学网站预测miR-129-5p与ABCB1的关系。培养乳腺癌MCF-7细胞系并利用转染技术使miR-129-5p过表达,经一定浓度的紫杉醇干预后,CCK-8法观察细胞增殖和流式细胞术、细胞荧光染色检测凋亡情况推断耐药性;在miR-129-5p过表达时,qRT-PCR、Western blot法检测紫杉醇对ABCB1 mRNA和蛋白的影响。结果：miR-129-5p在病例组血清中为高表达（P<0.05）,ABCB1mRNA和蛋白在病例组中的表达略低于对照组（P<0.05）,经生物信息学网站预测发现,ABCB1为miR-129-5p的靶基因。在过表达miR-129-5p和紫杉醇干预后,细胞出现增殖减慢以及凋亡现象（P<0.05）;过表达miR-129-5p以及紫杉醇干预后,ABCB1mRNA和蛋白表达出现持续下降（P<...     

转化生长因子β1及其受体1在妊娠肝内胆汁淤积症患者胎盘绒毛组织中的表达及其意义

目的探讨妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体1(TGF-βR1)表达的变化.方法采用S-P免疫组化方法.结果 (1)光镜下发现ICP患者绒毛水肿、绒毛间隙狭窄,绒毛血管密度降低.(2)两组孕妇胎盘绒毛滋养层细胞均有TGF-β1的表达,但研究组胎盘的水平低于对照组(P<0.01).两组孕妇胎盘绒毛滋养层细胞及血管内皮细胞均有TGF-βR1分布, 研究组胎盘的水平低于对照组(P<0.01) .结论 ICP患者胎盘TGF-β1及TGF-βR1的低表达可能导致ICP胎儿早产、胎膜早破及宫内窘迫的发生.     

新疆维吾尔族妊娠期肝内胆汁淤积症者血清指标检测及意义

目的分析血清甘胆酸(CG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TBIL)测定对新疆维吾尔族妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的诊断价值及意义。方法采用化学发光法检测血清甘胆酸浓度、乳酸脱氢酶法测定谷丙转氨酶、采用苹果酸脱氢酶法测定谷草转氨酶、采用循环酶法检测的总胆汁酸浓度、采用钒酸盐氧化法测定血清总胆红素。结果妊娠期肝内胆汁淤积症维吾尔族患者的血清甘胆酸、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆汁酸、总胆红素测定结果均显著高于正常对照组,差异具有统计学意义(P0.01)。通过对不同分组围产儿结局比较,ICP组产妇早产、羊水胎粪污染、新生儿窒息、胎儿窘迫发生率分别为25%、36.538%、15.385%、44.231%,均高于正常对照组的健康人群,差异具有统计学意义(P0.05)。结论血清肝胆酸、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆汁酸、总胆红素的测定对妊娠期肝内胆汁淤积症的诊断是密切相关的,同时监测上述指标对于诊疗ICP患者,保护母婴健康具有重要意义。     

Caspase与妊娠期肝内胆汁淤积症的相关性研究

目的 探讨细胞凋亡因子Caspases（半胱天冬氨酸蛋白酶）增加是否与妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）的发病具有相关性。方法 采取剖宫产分娩的27例ICP孕妇（研究组）和30例正常孕妇（对照组）的胎盘组织。①用TUNEL原位标记术精确测定ICP孕妇（研究组）和正常孕妇（对照组）胎盘组织细胞凋亡指数。②用免疫组化法检测ICP孕妇（研究组）和正常孕妇（对照组）胎盘组织中Caspase-3，Caspase-9的表达情况。结果 研究组中合体滋养细胞中的凋亡指数高于对照组（P〈0．05），研究组促凋亡蛋白Caspase-3，Caspase-9在合体滋养细胞的阳性表达率高于对照组（P〈0．05）。结论 合体滋养细胞中的细胞凋亡增加与妊娠期肝内胆汁淤积症的发病具有相关性，可能在ICP的发病发展过程中具有一定作用。     

Expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) under hypoxia in placenta with intrahepatic cholestasis of pregnancy and its clinically pathological significance

The expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) under hypoxia in the placenta with intrahepatic cholestasis of pregnancy (ICP) was observed, and mechanisms of ICP fetal distress were discussed. Methods: Different culturing times were established in hypoxia incubator, and protein expressions of VEGF in placental tissue were observed using immunohistochemical S-P method. Results: After 4 h hypoxic culture, VEGF protein expression in ICP group was higher than the normal group with significant difference (P < 0.05). With the extension of hypoxic exposure, VEGF protein expression in both groups was suppressed, but no distinction in-between. Regression analyses indicated a noticeable effect of CG on VEGF expression, the higher the CG was, the lower the VEGF protein expression was (P < 0.05). Conclusions: Short term hypoxia induces up-regulation of VEGF expression in ICP placenta, and this adaptive change is probably a protective mechanism of fetus in ICP.     

妊娠期肝内胆汁淤积症中ABCB4基因点突变的研究

目的:探讨ABCB4基因点突变与妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）发病的关系。 方法:采用聚合酶链反应单链构象多态性（PCR-SSCP）方法对31例妊娠期肝内胆汁淤积症患者进行ABCB4基因外显子6和外显子14的点突变筛查。对疑有点突变的病例，进行DNA序列测定，以明确其具体的突变性质。 结果:31例妊娠期肝内胆汁淤积症患者的血样品，均扩增出ABCB4基因的外显子6及外显子14的靶基因片段，未发现外显子6及外显子14的缺失。对所有外显子6及外显子14的PCR产物进行SSCP筛查，无异常发现。为验证实验结果，随机挑选7例样品测定外显子6及外显子14的DNA序列，未发现点突变。 结论:这2个突变热点可能与ICP的发生无关，ABCB4基因点突变与ICP发病的相关性，仍应进行更大样本量的研究及其它突变热点的筛查。     

妊娠肝内胆汁淤积症患者胎盘瘦素的表达及意义

目的探讨妊娠肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘瘦素表达的变化.方法采用S-P免疫组化方法.结果 (1)光镜下发现ICP患者胎盘绒毛水肿、绒毛间隙狭窄、绒毛血管合体膜增厚.(2)两组孕妇胎盘绒毛滋养层细胞胞浆内均有瘦素的表达,但研究组胎盘瘦素的水平高于对照组(P<0.05),并且随着ICP组分度的加重,表达增强.结论 ICP患者胎盘瘦素的高表达可能导致ICP的发生.     

妊娠期肝内胆汁淤积症围生儿缺氧机理的研究

目的探讨妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)围生儿缺氧的可能机理.方法分别用放免法、生化法及原子吸收法测定ICP组及对照组母儿血甘胆酸(CG)、红细胞膜三磷酸腺苷酶(ATPase)活性及细胞内离子浓度,统计各组围生儿缺氧率.结果 ICP组母儿CG水平显著高于对照组(P＜0.01),母血CG值显著高于新生儿血;红细胞膜ATPase活性明显低于对照组(P＜0.01),并与CG水平呈负相关 (Na -K -ATPase:rs=-0.498,P＜0.01;Ca2 -ATPase:rs=-0.443,P＜0.05);红细胞内Na 、Ca2 浓度明显高于对照组(P＜0.01);围生儿缺氧的发生率明显高于对照组(P＜0.05).结论 ICP围生儿血清内高浓度的胆汁酸影响其红细胞的结构与功能,可能是ICP围生儿缺氧的机理之一.     

妊娠肝内胆汁淤积症患者胎盘血管PECAM-1的表达及意义

目的 :探讨妊娠肝内胆汁淤积症 (ICP)患者胎盘血管血小板 -内皮细胞粘附分子 (PECAM 1)表达的变化。方法 :采用S P免疫组化方法。结果 :(1)光镜下发现ICP患者胎盘绒毛水肿、绒毛间隙狭窄、绒毛血管合体膜增厚。 (2 )ICP患者胎盘和正常孕妇胎盘血管内皮上均有PECAM 1的表达 ,但ICP组胎盘血管表达PECAM 1的平均血管密度值以及强度显著大于正常孕妇组 (P <0 0 1) ,并且随着ICP组分度的加重 ,表达增强。结论 :ICP患者胎盘粘附分子PECAM 1表达的异常可能是导致ICP胎盘病理改变的一个原因。     

妊娠期肝内胆汁淤积症中ABCB4基因外显子12突变的研究

目的探讨ABCB4基因外显子12的突变与妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）发病的关系。方法从31名ICP患者外周血标本中提取出基因组DNA,聚合酶链反应（PCR）扩增ABCB4基因外显子12,PCR产物经DNA序列测定检测突变情况。结果31名ICP患者均扩增出ABCB4基因外显子12的靶基因片断,未见外显子12的缺失,随机挑选20例标本测定外显子12的DNA序列,未发现突变。结论ABCB4基因外显子12的突变与中国皖南地区的ICP发生无关或关联很小,皖南地区ICP患者中可能存在其他的ABCB4基因突变热点。ABCB4基因的突变与中国人ICP发病的相关性仍应进行更大样本量的研究和更多外显子的筛查。     

探讨VEGF在妊娠期糖尿病胎盘组织中的表达及其对新生儿神经行为的影响

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在妊娠期糖尿病(gestational diabetesmellitus,GDM)胎盘组织中的表达以及其与GDM胎盘病理改变、新生儿神经行为的关系。方法在妊娠期糖尿病孕妇中,按分娩前血糖值的高低选取血糖控制欠佳的孕妇50例为控制欠佳组和选取血糖控制较好的孕妇50例为控制较好组,正常妊娠孕妇50例为对照组。于胎儿、胎盘娩出后,在胎盘的中央带取材,经固定、脱水、包埋、切片后,行VEGF免疫组织化学染色。新生儿行头颅超声检查,并作新生儿神经行为评分。结果 VEGF在GDM血糖控制欠佳组胎盘中表达阳性率明显高于正常对照组(84.6%vs30.6%,P<0.01);而血糖控制较好组的VEGF阳性表达率与对照组比较无统计学意义。VEGF在胎盘呈高阳性表达率所分娩的新生儿行神经行为评分低于VEGF呈低表达率所分娩的新生儿,P<0.01;VEGF在胎盘呈高阳性表达率所分娩的新生儿头颅超声发现室管膜下囊性改变、脉络丛囊性改变等异常的机率升高,与对照组相比P<0.01。结论 GDM孕妇血糖控制欠佳时,VFGF在胎盘组织中呈高阳性率表达,所分娩的新生儿,神经行为评分欠理想,陈旧性颅内出血的发生率升高。     

IGF-1在妊娠期糖尿病胎盘组织中的表达及其对新生儿心功能影响的探讨

目的探讨胰岛素样生长因子-1(Insulin-like growth factor-1,IGF-1)在妊娠期糖尿病(gestational dia-betes mellitus,GDM)胎盘组织中的表达以及其与GDM胎盘病理改变、新生儿心功能异常的关系。方法在妊娠期糖尿病孕妇中,前瞻性按照病例入选标准收集血糖控制欠佳的孕妇80例作为控制欠佳组,收集血糖控制良好的孕妇80例作为控制良好组,随机选取正常妊娠孕妇80例为对照组。于胎儿、胎盘娩出后,在胎盘的中央带取材,经固定、脱水、包埋、切片后,行IGF-1免疫组织化学染色。新生儿行超声心动图测量心脏相关指标,并抽血查心肌酶五项。结果 IGF-1在GDM血糖控制欠佳组胎盘中阳性细胞表达强度明显高于正常对照组及血糖控制良好组(P<0.05);而血糖控制良好组的IGF-1阳性细胞表达强度与对照组比较无统计学意义。胎盘IGF-1阳性表达强度高的孕妇所分娩的新生儿出现心肌酶五项升高的发生率高于IGF-1阳性表达强度低的孕妇所分娩的新生儿,P<0.001;胎盘IGF-1阳性表达强度高的孕妇所分娩的新生儿超声心动图表现为室间隔的肥厚、心室和大动脉收缩血量的增加、心室舒张功能的受损,与对照组相比P<0.001。结论 GDM孕妇血糖控制欠佳时,IGF-1在胎盘组织中呈高阳性表达,所分娩的新生儿出现心肌酶谱受损的发生率升高,心脏解剖和功能异常的发生率升高。